專(zhuān)利名稱(chēng)：川芎嗪在制備治療造影劑腎病藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥單體的應(yīng)用，具體地說(shuō)，是中藥單體川芎嗪在制備治療造影劑腎病藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
造影劑腎病(contrast-inducednephropathy, CIN)是指由碘造影劑(contrast media, CM)的使用而引起的腎病，主要表現(xiàn)為急性腎功能衰竭(acute renal failure, ARF)。在高風(fēng)險(xiǎn)人群，如慢性腎病、糖尿病、高血壓病或70歲以上的老年人，CIN發(fā)生率最高可達(dá)50%研究顯示CIN是目前醫(yī)院內(nèi)獲得性ARF的第三位誘因，約30%患者腎功能不能恢復(fù)而成為慢性腎功能衰竭(chronic renal failure, CRF)。按照CIN防治指南，CIN確切的分子機(jī)制尚未明確，并且尚缺乏能有效防治CIN 的藥物。近年研究表明氧化應(yīng)激、腎小管上皮細(xì)胞凋亡參與了 CIN病理過(guò)程。川芎嗪 (tetramethylpyrazine, TMP)是常用活血化瘀中藥川芎的活性成分，除具有擴(kuò)血管和抗血小板集聚效應(yīng)外，還有抗R0S、清除自由基、阻滯鈣離子通道、抗間質(zhì)纖維化等作用。目前尚不清楚TMP的上述藥理效應(yīng)能否有效阻斷造影劑的腎實(shí)質(zhì)損傷。中國(guó)專(zhuān)利文獻(xiàn)CN1555803A公開(kāi)了一種阿魏酸川芎嗪在制藥中的應(yīng)用，阿魏酸川芎嗪具有抗血小板聚集，擴(kuò)張微血管，接觸血管痙攣，改善微循環(huán)，活血化瘀作用，并對(duì)已聚集的血小板有解聚作用，用于治療各種原因所致的腎小球疾病，如腎炎、慢性腎炎，腎病綜合癥和尿毒癥等，還用于治療閉塞性以及閉塞性心腦血管疾病如冠心病、脈管炎、腦供血不全、腦血栓形成、腦栓塞、腦血管病、腦卒中等。中國(guó)專(zhuān)利文獻(xiàn)CN1217663C公開(kāi)了川芎嗪在制備用于治療陰莖勃起功能障礙的藥物中的應(yīng)用。但是關(guān)于中藥單體川芎嗪在制備治療造影劑腎病藥物中的應(yīng)用目前還未見(jiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種川芎嗪在制備治療腎病的藥物中的應(yīng)用。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是川芎嗪在制備治療腎病的藥物中的應(yīng)用，所述的腎病是造影劑腎病。所述的川芎嗪的用量為80mg/kg。所述的藥物的劑型為膠囊劑、顆粒劑、片劑、丸劑、糖漿劑或注射劑。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于
本發(fā)明提供了一種中藥單體川芎嗪的新用途，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，TMP能有效保護(hù)CIN模型大鼠的腎功能，表現(xiàn)出較好的防治CIN的效應(yīng)，機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)TMP能通過(guò)抑制CaSpaSe3而拮抗造影劑iohexol誘導(dǎo)的大鼠腎小管上皮細(xì)胞凋亡。本發(fā)明為造影劑腎病提供了一種新的治療藥物，具有很好的應(yīng)用前景。


附圖1是光鏡下各組大鼠腎臟病理形態(tài)學(xué)改變(HE，X200),A 正常組，B 模型組， C =NAC 組，D =TMP 組。附圖2是各組大鼠腎小管上皮細(xì)胞電鏡(X 4200)、TUNEL (X 400)染色結(jié)果，A 正常組電鏡，B 模型組電鏡，C 正常組TUNEL染色，D 模型組TUNEL染色，E =NAC組TUNEL染色，F(xiàn) =TMP組TUNEL染色，G 各組凋亡指數(shù)(Al)分析。附圖3是免疫組化法測(cè)定各組大鼠腎組織CaSpaSe3蛋白表達(dá)，A 正常組，B 模型組，C =NAC 組，D =TMP 組。附圖4是western印跡法測(cè)定各組大鼠腎組織CapaSe3蛋白表達(dá)，A 正常組，B 模型組，C =NAC組，D =TMP組。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明提供的具體實(shí)施方式
作詳細(xì)說(shuō)明。實(shí)施例1 一、材料和方法
1.動(dòng)物和試劑雄性SD大鼠32只，體重200士20g，由中科院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。夕肖炎痛、L—NAME (L—NAME，艮口 #u_Nitro_L_arginine methyl ester hydrochloride, 分子式為 C7H15N5O4 · HCl，是 NOS (nitric oxide synthase)的非選擇性抑制物)、TMP、NAC (N-acetylcysteine)均購(gòu)自Sigma公司，造影劑Iohexol購(gòu)自通用電氣藥業(yè)(上海)公司。 TUNEL試劑盒為美國(guó)Roche產(chǎn)品，Caspase3多克隆抗體購(gòu)自Cell Signaling公司。2.動(dòng)物模型的建立及分組隨機(jī)分為4組，每組8只A組為正常組，B組為模型組，C組為NAC組，D組為T(mén)MP組。其中B-C-D三組均按照文獻(xiàn)制備CIN模型(詳見(jiàn)=Yukiyo Yokomaku, Toshiro Sugimoto, Shinji Kume, et al. Asialoerythropoietin Prevents Contrast-Induced Nephropathy. J Am Soc Nephrol 2008,19: 321 - 328.)，具體方法如下尾靜脈注射10 mg/kg消炎痛；15min后注射10 mg/kg L-NAME ;15min后注射2g iodine/ kg Wiohexol (350 mg iodine/ml) ；A組注射等量PBS液。C-D兩組分別于造模前3天每日腹腔注射 150 mg/kg NAC、80mg/kg TMP。3.腎功能和組織形態(tài)學(xué)檢測(cè)
3. 1.腎功能檢測(cè)造模后24h處死動(dòng)物，尾靜脈采血，分離血清，由全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清肌酐、尿素氮、Cystatin C。3.2.腎組織形態(tài)學(xué)檢測(cè)大鼠乙醚麻醉，腹正中切開(kāi)，取雙腎，左腎分別戊二醛+ 鋨酸固定及放入-80°C冰箱，用于電鏡檢測(cè)及western印跡檢測(cè)；右腎經(jīng)多聚甲醛固定后， 乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，切片，用于HE染色及免疫組化和TUNEL檢測(cè)。3.3.細(xì)胞凋亡檢測(cè)按照美國(guó)羅氏公司(Roche)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，步驟包括腎組織常規(guī)固定，石蠟包埋后切片5 μ m，常規(guī)脫蠟、水合，Proteinase K工作液處理，加TUNEL 反應(yīng)液，加converter-POD，加底物DAB顯色系統(tǒng)，光鏡下觀察，細(xì)胞核呈棕黃色的為凋亡細(xì)胞。在細(xì)胞凋亡區(qū)域，隨機(jī)選取5個(gè)視野(X200)，以腎小管上皮細(xì)胞凋亡陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占腎小管上皮細(xì)胞總數(shù)的百分比作為腎小管上皮細(xì)胞凋亡指數(shù)(Al)。同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照。3. 4.免疫組織化學(xué)檢測(cè)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)腎組織Caspase-3的表達(dá)石蠟切片常規(guī)脫蠟、水化，微波抗原修復(fù)，室溫孵育15 min，消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，滴加 Caspase-3兔抗鼠多克隆抗體(1 :40)，再滴加相應(yīng)的生物素標(biāo)記的二抗，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，DAB顯色，陽(yáng)性表達(dá)呈棕黃色著色，光鏡觀察陽(yáng)性信號(hào)。每張切片隨機(jī)選取10個(gè)不重疊視野，應(yīng)用北航圖像分析系統(tǒng)計(jì)算其積分光密度(integrated optical density, I0D)。3. 5. western印跡檢測(cè)caspasd蛋白表達(dá)組織塊稱(chēng)重、粉碎，裂解液裂解，考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白濃度。上樣、電泳、轉(zhuǎn)膜(IOOmA 40分鐘)，放入到麗春紅染色劑中染色5 min，觀察蛋白轉(zhuǎn)移效果，將轉(zhuǎn)移成功的轉(zhuǎn)移膜浸入5%脫脂奶粉封閉液中，37°C封閉池；加一抗4°C過(guò)夜，加辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記的二抗室溫反應(yīng)lh，用ECL化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)，χ線片顯影成像，將顯色條帶掃描至計(jì)算機(jī)中，以beta-actin為內(nèi)參，Gel-Pro凝膠分析軟件半定量分析。4.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析計(jì)量資料數(shù)據(jù)以 士 s表示，組間差異用單因素方差分析。用
SPSS15. 0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。二、結(jié)果
1. TMP預(yù)處理對(duì)CIN大鼠腎功能、Cystatin C的影響如表1所示造模后MhB組大鼠出現(xiàn)了腎損傷，表現(xiàn)為Scr、BUN、Cystatin-C均較A組明顯升高(p<0. 01);而TMP預(yù)處理能有效防止造模導(dǎo)致的腎損傷發(fā)生，表現(xiàn)為與B組相比Scr、BUN、Cystatin-C的明顯回落 (ρ<0· 01)，其腎保護(hù)效應(yīng)與NAC (C組)相近(ρ>0. 05)。表1腎功能檢查G 士 S)
權(quán)利要求
1.川芎嗪在制備治療腎病的藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述的腎病是造影劑腎病。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的川芎嗪的用量為80mg/kg。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物的劑型為膠囊劑、顆粒劑、片劑、丸劑、糖漿劑或注射劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及川芎嗪(TMP)在制備治療腎病的藥物中的應(yīng)用，所述的腎病是造影劑腎病(CIN)。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于本發(fā)明提供了一種中藥單體TMP的新用途，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，TMP能有效保護(hù)CIN模型大鼠的腎功能，表現(xiàn)出較好的防治CIN的效應(yīng)，機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)TMP能通過(guò)抑制Caspase3而拮抗造影劑iohexol誘導(dǎo)的大鼠腎小管上皮細(xì)胞凋亡。本發(fā)明為CIN提供了一種新的治療藥物，具有很好的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)A61P13/12GK102552267SQ20121003595
公開(kāi)日2012年7月11日 申請(qǐng)日期2012年2月17日 優(yōu)先權(quán)日2012年2月17日
發(fā)明者龔學(xué)忠 申請(qǐng)人:上海市中醫(yī)醫(yī)院