專利名稱：氧化石墨烯-血根堿復(fù)合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明具體涉及ー種氧化石墨烯-血根堿復(fù)合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
惡性腫瘤是當(dāng)前嚴(yán)重影響人類健康、威脅人類生命的主要疾病之一，其診斷和治療一直是眾多生物學(xué)家和醫(yī)療工作者的工作重點(diǎn)和難點(diǎn)。目前，癌癥的治療方法主要有手術(shù)治療、放射治療、化學(xué)治療以及生物治療等等。這些治療方法都對(duì)人體有明顯的毒副作用。因此篩選出治療效果好、毒副作用低的抗癌藥物，是人類共同關(guān)心的科學(xué)難題。以中草藥為原料，提取具有抗腫瘤活性的新藥物是抗癌醫(yī)藥研究的熱點(diǎn)之一。借助現(xiàn)代化的提取技術(shù)，從中草藥中提取有效抗癌成分，通過(guò)選擇合適的藥物載體輸送，可以大大提高惡性腫瘤的治療效果。血根堿主要存在于博落回的果實(shí)以及血水草的根莖中。近年來(lái)的研究表明，血根堿(SAN)對(duì)于人類上皮癌(A431)，人前列腺癌細(xì)胞(LNCaP，DU-145,PC3)，人類宮頸癌(HeLa細(xì)胞)，人類卵巢癌(SK0V-3細(xì)胞)，人黑色素瘤(M4Beu)，人結(jié)腸腺癌(DLD-I)，非小細(xì)胞肺癌(A549)，人葡萄膜黑色素瘤(OCM- I )，組織淋巴瘤(U937)，髓性白血病細(xì)胞(ML-la)，人紅白血病(K562，JMl)細(xì)胞系，人永生性角質(zhì)細(xì)胞(HaCaT)等多種腫瘤均具有非常好的抗腫瘤活性。但是由于血根堿水溶性差，難以被機(jī)體吸收，導(dǎo)致生物利用度較差，限制了其在臨床上的使用。因此，如何發(fā)展出ー種能有效改善血根堿溶解度和穩(wěn)定性的高性能運(yùn)載體系已經(jīng)成為業(yè)界的研究熱點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提出一種能有效提升血根堿于水性體系中的溶解度和穩(wěn)定性的氧化石墨烯-血根堿復(fù)合物及其制備方法，從而克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足。為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用了如下技術(shù)方案
ー種氧化石墨烯-血根堿復(fù)合物，包括氧化石墨烯載體及通過(guò)非共價(jià)作用負(fù)載于載體表面的血根堿(SAN)，所述氧化石墨烯載體的徑向尺寸在200nm以下，厚度在I nm以上。優(yōu)選的，SAN與載體的質(zhì)量比約在25 :100以上，尤其優(yōu)選的25 100-29: IOO0優(yōu)選的，所述氧化石墨烯載體表面還修飾有聚こニ醇分子(PEG)，以提高氧化石墨烯的生物相容性。當(dāng)然，亦可采用其它材料可以代替，但是PEG毒性較低，安全性高。更為優(yōu)選的，所述氧化石墨烯載體的徑向尺寸優(yōu)選為IOOnm 200nm，厚度優(yōu)選為
Inm 2nm。如上所述的氧化石墨烯-血根堿復(fù)合物是通過(guò)如下方法制備的取徑向尺寸在200nm以下，厚度在I nm以上的氧化石墨烯進(jìn)行表面處理，從而在氧化石墨烯表面形成活性連接基團(tuán)，其后經(jīng)由所述活性連接基團(tuán)在氧化石墨烯表面上連接具有疏水性基團(tuán)的高分子材料形成氧化石墨烯載體，再將氧化石墨烯載體浸潰于溶有血根堿的有機(jī)溶劑中，至氧化石墨烯載體上飽和吸附血根堿后，分離獲得目標(biāo)產(chǎn)物；所述有機(jī)溶劑對(duì)血根堿的溶解能力大于水。作為優(yōu)選的方案之一，前述方法中是通過(guò)對(duì)氧化石墨烯表面羧基化處理，從而在氧化石墨烯表面形成羧基，其后藉所述羧基將疏水性基團(tuán)連接在氧化石墨烯表面，從而形成氧化石墨烯載體，所述疏水性基團(tuán)包括聚六臂聚こニ醇分子。ー種氧化石墨烯-血根堿復(fù)合物的制備方法
取徑向尺寸在200nm以下，厚度在I nm以上的氧化石墨烯進(jìn)行表面處理，從而在氧化石墨烯表面形成活性連接基團(tuán)，其后經(jīng)由所述活性連接基團(tuán)在氧化石墨烯表面上連接具有疏水性基團(tuán)的高分子材料形成氧化石墨烯載體，再將氧化石墨烯載體浸潰于溶有血根堿的有機(jī)溶劑中，至氧化石墨烯載體上飽和吸附血根堿后，分離獲得目標(biāo)產(chǎn)物。進(jìn)ー步的，該方法具體為
對(duì)徑向尺寸在200nm以下，厚度在I nm以上的氧化石墨烯表面進(jìn)行羧基化處理；將羧基化的氧化石墨烯在PH值為8. 0-9. O的水性體系中與具有活性胺基及疏水性基團(tuán)的高分子材料在室溫下充分反應(yīng)，而后透析處理，從而制得氧化石墨烯載體，
將氧化石墨烯載體浸潰于溶有血根堿的有機(jī)溶劑中，至氧化石墨烯載體上飽和吸附血根堿后，再經(jīng)分離、洗滌，獲得目標(biāo)產(chǎn)物；
所述高分子材料優(yōu)選采用聚こニ醇，所述有機(jī)溶劑優(yōu)選采用DMS0。更具體的講，作為ー種優(yōu)選的方案，該方法包括如下步驟
(1)制備徑向尺寸在IOOnm 200nm,厚度在Inm 2nm的氧化石墨烯；
(2)將氧化石墨烯加入含強(qiáng)堿和氧化劑的水溶液中于常溫下反應(yīng)至反應(yīng)混合物由棕紅色轉(zhuǎn)變?yōu)辄\色，再離心分離出反應(yīng)混合物中的固態(tài)物，而后將固態(tài)物分散于水中形成分散液，并調(diào)節(jié)該分散液的PH值至中性，其后再次將固態(tài)物從該分散液中離心分離出來(lái)，并重新分散于水中，再以8000-14000 Da的透析袋透析處理后，制得羧基化的氧化石墨烯；
所述氧化劑包括氯こ酸鈉，所述強(qiáng)堿至少選自氫氧化鈉和氫氧化鉀，所述離心分離的條件為轉(zhuǎn)速在13000 rpm以上，時(shí)間在15 min以上；
(3)將羧基化的氧化石墨烯分散于水中，并調(diào)節(jié)分散液的pH值為8.0-9. 0，再加入聚こニ醇和EDAC反應(yīng)12h以上，而后以50 kDa透析袋透析72 h以上，獲得氧化石墨烯載體；
(4)將氧化石墨烯載體充分分散于水中，并加入含SAN的溶液，至形成的混合反應(yīng)物中DMSO的濃度在50%以上，攪拌過(guò)夜，而后超濾除去未被吸附的SAN，再將超濾液以25%的DMSO溶液及水反復(fù)洗滌至顏色不再改變，而后以水分散后，并以4000 rpm的速度離心30min以上,保留上清液,獲得目標(biāo)產(chǎn)物。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)至少在于提供了ー種基于氧化石墨烯的高性能SAN運(yùn)載體系，其能大幅改善血根堿的溶解度和穩(wěn)定性，還可使其具有靶向性，從而有望作為ー種潛力巨大的液體制劑特別是注射劑在癌癥的治療中被廣泛應(yīng)用。


圖Ia是本發(fā)明一優(yōu)選實(shí)施例中所制得納米氧化石墨烯(NGO)的AFM照片；
圖Ib是本發(fā)明一優(yōu)選實(shí)施例中所制得納米氧化石墨烯(NGO)的厚度分布測(cè)試圖；
圖2是本發(fā)明一優(yōu)選實(shí)施例中所制得氧化石墨烯載體(GO-PEG)的紅外光譜 圖3a是本發(fā)明一優(yōu)選實(shí)施例中氧化石墨烯-血根堿復(fù)合物的紫外-可見(jiàn)光譜圖；圖3b是本發(fā)明一優(yōu)選實(shí)施例中氧化石墨烯-血根堿復(fù)合物的熒光光譜 圖4a是血根堿濃度-吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線 圖4b是本發(fā)明一優(yōu)選實(shí)施例中氧化石墨烯載體對(duì)血根堿復(fù)合物的吸附曲線 圖5是本發(fā)明一優(yōu)選實(shí)施例中在不同pH值下SAN從氧化石墨烯載體上的釋放曲線圖。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合一優(yōu)選實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)ー步的說(shuō)明。本優(yōu)選實(shí)施例所述及的氧化石墨烯-血根堿復(fù)合物的制備エ藝、表征方法及性能測(cè)試方法具體如下所述 一、氧化石墨烯載體(GO-PEG)的制備 1.1制備氧化石墨烯(GO)
I.I. I天然石墨預(yù)氧化
預(yù)氧化石墨取I g天然石墨薄片(市售，如可采用Alfa Aesar公司出品的天然石墨薄片)、1. 5 ml濃硫酸、O. 5 g過(guò)硫酸鉀及O. 5 g五氧化ニ磷混合加熱至80°C,孵育6 h。將得到的氧化石墨用蒸餾水反復(fù)過(guò)濾，直至濾液為中性，在室溫下晾干。I. I. 2氧化石墨的制備
將I g預(yù)氧化的石墨與23 ml濃硫酸混合，在冰水混合物攪拌條件下緩慢加入3 g高錳酸鉀(在此過(guò)程中控制溫度在20°C以下)。然后將溫度升至35°C，保溫?cái)嚢? h。加入46ml蒸懼水,繼續(xù)攪拌15 min,最后加入140 ml蒸懼水。接著,往反應(yīng)液中加入30%雙氧水
2ml，此時(shí)，溶液的顏色變成了明顯的亮綠色。將混合物用10%鹽酸250 ml離心清洗以除去多余的金屬離子。得到的沉淀用蒸餾水反復(fù)離心清洗至溶液呈中性。I. I. 3氧化石墨的剝離及純化
為了剝離得到片狀G0，往裝有氧化石墨的離心管中加入40 ml蒸餾水，細(xì)胞粉碎儀400W超聲30 min。將其13000 rpm離心15 min,收集上清液,沉淀再次加入蒸懼水后,反復(fù)超聲剝離，最后將獲得的GO用超純水透析48 h (透析袋為8000-14000 Da),以除去剰余的無(wú)機(jī)離子，最終獲得GO分散液。I. 2納米級(jí)氧化石墨烯(NGO)的制備
將已經(jīng)制備的GO分散液超聲I h，使其進(jìn)ー步分散，然后將分散的GO用直徑為O. 22μ m過(guò)濾膜過(guò)濾，取濾液，用8000到14000 Da的透析袋透析24 h，進(jìn)ー步除去分散液中少量的無(wú)機(jī)離子得到NG0。利用原子力顯微鏡(AFM)以及透射電子顯微鏡(TEM)對(duì)NGO的形貌進(jìn)行觀測(cè)，參見(jiàn)圖la，NGO的大小基本在200 nm以下，而本案發(fā)明人經(jīng)長(zhǎng)期研究發(fā)現(xiàn)，藥物遞送載體最佳的大小通常是在10(T200 nm，有利于細(xì)胞的攝取。若體系太小(〈30 nm)容易從腎臟排出，不利于體系在靶部位的聚集；體系太大，不利于細(xì)胞的攝取。參閱圖lb，制備的GO的厚度為f 2 nm,由于已知單層石墨烯的厚度約為I nm，據(jù)此推定其層數(shù)為f 2層，而層數(shù)越少，比表面積越大，則吸附能力越強(qiáng)，有利于后續(xù)工作的開(kāi)展。因此，本實(shí)施例制備的NGO應(yīng)可作為ー種理想的SAN遞送載體。I. 3羧基化氧化石墨烯(G0-C00H)的制備
石墨烯表面含有大量的羥基和環(huán)氧基，為了增加NGO表面的羧基含量，采用在強(qiáng)堿條件下，使其與氯こ酸鈉發(fā)生親核取代反應(yīng)，最終將NGO表面的羥基和環(huán)氧基團(tuán)轉(zhuǎn)變成羧甲氧基。
稱取5. O g氫氧化鈉,用5 ml水充分溶解并冷卻至室溫,再往其中加入氯こ酸鈉5.0 g，充分溶解后定容至10 ml，將此溶液加入到40 ml (50 mg)NG0水分散液，充分混合，常溫超聲3 ho反應(yīng)完畢后，反應(yīng)液顏色由棕紅色轉(zhuǎn)變?yōu)楹谏?，將反?yīng)液在13000 rpm下離心15 min,棄去上清液,沉淀加入50 ml蒸懼水分散,并用鹽酸調(diào)pH值至中性,再次離心，并棄去上清液，沉淀再次用水分散，并用8000-14000 Da透析袋透析，以除去殘余的無(wú)機(jī)離子。但是，需要說(shuō)明的是，前述氧化石墨烯(G0)、納米級(jí)氧化石墨烯(NGO)及羧基化氧化石墨烯(G0-C00H)的制備エ藝僅系本案發(fā)明人經(jīng)長(zhǎng)期研究和大量實(shí)踐所探知的一種最優(yōu)選的方案，但本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)還可很容易的采用其它習(xí)見(jiàn)エ藝達(dá)成相同之目標(biāo)。I. 4G0-PEG 的制備
雖然G0-C00H具有優(yōu)良的水溶性，但生物相容性較差。為了提高其生物相容性，將制備的NGO進(jìn)ー步使用具有疏水性基團(tuán)的高分子材料進(jìn)行修飾。本實(shí)施例中優(yōu)選采用了六臂PEG進(jìn)行修飾。取G0-C00H 9 ml (0.9 mg/ml )，水浴超聲30 min，充分分散后，使用三こ胺調(diào)pH至8. 0-9. 0，加入PEG水溶液取O. 5 ml (50 mg/ml )，室溫?cái)嚢柘?，加入EDAC O. 15 ml (80mg/ml),繼續(xù)攪拌30 min,再次加入EDAC O. 35 ml (80 mg/ml),繼續(xù)攪拌過(guò)夜。12 h后使用 50 kDa 透析袋透析 72 h，得到 10 ml GO-PEG (O. 8 mg/ml)。該步驟中，本案發(fā)明人為了進(jìn)一步提高NGO的穩(wěn)定性，通過(guò)將PEG上的氨基與NG0-C00H表面的羧基進(jìn)行EDC反應(yīng)交聯(lián)，制得G0-PEG，使得NGO可以穩(wěn)定的分散在生理溶液中。參見(jiàn)圖2，G0-C00H和GO-PEG分別在 1600 cnT1出現(xiàn)吸收峰，歸屬于羧基的C=O伸縮振動(dòng)；接枝PEG后，在在 2850 cnT1和 1100 cnT1處出現(xiàn)了兩個(gè)明顯的吸收峰，分別對(duì)應(yīng)于PEG上的C-H鍵和C-O鍵。另外，在1635 cnT1出現(xiàn)的新峰為酰胺鍵的吸收峰，證明PEG成功的接枝到GO上。但是，同樣需要說(shuō)明的是，對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在前述實(shí)施例的啟示下，亦可很容易的想到采用其它安全、無(wú)毒的高分子材料替換PEG來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)NGO的修飾，從而提高其生物相容性。ニ、氧化石墨烯-血根堿復(fù)合物(GO-SAN)的制備、表征及性能測(cè)定 2. I GO-PEG 裝載 SAN
不同濃度的SAN溶液(溶劑為DMS0)加入到NGO-PEG分散液中，最終DMSO濃度為50%，攪拌過(guò)夜，用IOOkDa的超濾管超濾，除去未被吸附的SAN。用25%DMS0溶液洗滌數(shù)次，再用蒸餾水反復(fù)洗滌，直至超濾液顏色不再發(fā)生改變，最終將截留部分用蒸餾水超聲分散，4000rpm離心30 min除去不溶部分，上清即為GO-PEG與SAN的復(fù)合物，將其稀釋以后使用紫外分光光度法測(cè)定，以SAN、GO-PEG為對(duì)照，觀察紫外圖譜的變化；在326 nm處激發(fā)測(cè)定熒光光譜，，以SAN為對(duì)照，觀察熒光光譜的變化，從而證實(shí)SAN成功吸附到GO-PEG上。該步驟中，通過(guò)物理吸附將SAN吸附到GO-PEG上，并通過(guò)紫外光譜和熒光光譜，確定GO-PEG對(duì)血根堿的有效吸附。參閱圖3a，與GO-PEG相比，吸附SAN后的GO-PEG在 326 nm以及 273 nm處有明顯的吸收峰，這對(duì)應(yīng)于SAN的紫外吸收，表明SAN成功的吸附在GO-PEG上。同樣的，參閱圖3b,GO-SAN的復(fù)合體系導(dǎo)致SAN的熒光被猝滅，當(dāng)往復(fù)合體系中加入こ醇時(shí)，可以使得熒光恢復(fù)，這主要是由于こ醇加入導(dǎo)致SAN從石墨烯表面脫落下來(lái)，因此也進(jìn)一步證實(shí)SAN的成功吸附。2. 2 SAN承載率測(cè)定 2.2.1 SAN標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
準(zhǔn)確稱取SAN標(biāo)準(zhǔn)品Img,溶于IOOml容量瓶中,得到10ug/ml的標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液。分別精密吸取不同體積的血根堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液，補(bǔ)足至Iml，使?jié)舛确謩e為1、2、4、6、8、10 g/ml。在326nm處測(cè)定其OD值，做標(biāo)準(zhǔn)曲線。2. 2. 2 測(cè)定 GO-SAN 中 SAN 濃度
取 10mlG0-PEG( lmg/ml),隨后加入 5mlDMS0，再加入 5ml 溶于 DMSO 的 SAN(2. 3mg/ml),攪拌過(guò)夜，用超濾管去除游離的SAN，使用紫外分光光度法測(cè)定GO-SAN的紫外光譜，通過(guò)扣除GO-PEG的吸光度值測(cè)定SAN的濃度。2. 2. 3測(cè)定SAN承載率
分別取 100 ul GO-PEGC400 ug/ml)，加入 400 ul 水，隨后加入 20、30、40、60、80 ul 溶于DMSO的血根堿(I mg/ml),用DMSO補(bǔ)足至I ml,攪拌過(guò)夜,用超濾管去除游離的SAN,使用紫外分光光度法計(jì)算最終的SAN承載率。本案發(fā)明人使用紫外光譜法對(duì)GO-SAN進(jìn)行了測(cè)定，通過(guò)GO-PEG的吸光度值，然后根據(jù)SAN的標(biāo)準(zhǔn)曲線(參閱圖4a)，計(jì)算最終的SAN承載率(參閱圖4b)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在一定的SAN濃度范圍內(nèi)，GO-PEG對(duì)SAN的吸收率隨著SAN的濃度上升而增加，呈現(xiàn)線性相關(guān)，直到載體對(duì)SAN的吸附達(dá)到飽和。因此通過(guò)控制投入SAN的濃度就可以控制載體GO-PEG對(duì)SAN的吸附量。又及，藥物的溶解性是影響藥物生物利用度的重要因素之一，SAN因在水中的溶解度小(〈O. 3 mg/ml)，難以被機(jī)體吸收，導(dǎo)致生物利用度較差，從而限制了其在臨床上充分發(fā)揮療效。本案發(fā)明人還測(cè)定了 NGO-SAN復(fù)合物的溶解度，發(fā)現(xiàn)其有良好的水溶性，等效SAN濃度高達(dá) 2. O mg/ml (計(jì)算方法如下),極大地提高了 SAN的水溶性。例GO-PEG (8 ug/ml)G0-SAN (稀釋 100 倍)
326nmO.408 (Al)O.708 (A3)
700nm0.074 (A2)O.Ill (A4)
Δ =Α3-Α1*Α4/Α2=0. 096 代入標(biāo)準(zhǔn)曲線
O.096=0. 0611x-0. 0203χ=1· 7398 ug/ml乘以稀釋倍數(shù)得 c=1000x=1903. 4 ug/ml=l. 9 mg/ml
2.3 GO-SAN體外釋放
一般來(lái)說(shuō)，藥物從納米載體上的釋放是抗腫瘤藥物發(fā)揮作用所必須的條件，理想的納米藥物應(yīng)可實(shí)現(xiàn)藥物的控制釋放。而本領(lǐng)域技術(shù)人員習(xí)知，一般腫瘤組織的環(huán)境呈弱酸性，PH約為6. 75，明顯低于正常組織的7. 23。此外，當(dāng)納米載體進(jìn)入腫瘤細(xì)胞內(nèi)部后，會(huì)遇到pH值更低的溶酶體和內(nèi)涵體(pH =5.0-5. 5)。因此，本案發(fā)明人測(cè)定了該GO-SAN中SAN在中性和酸性條件下的釋放，具體操作如下(I)酸性條件下釋放取2 ml SAN-GO溶液溶于8ml pH=5的PBS緩沖液中，將其裝入透析袋(8000-14000 Da)，然后將透析袋放在透析的燒、杯中，加入pH=5的PBS緩沖液80ml，分別于12 h、24 h、36 h、48 h從燒杯中吸取I ml透析液，并立即在燒杯中補(bǔ)充Iml的新鮮PBS，使其總體積保持80ml不變。將取出的Iml透析液采用紫外分光光度法測(cè)定于326 nm激發(fā)波長(zhǎng)處的OD值，并計(jì)算其釋放量。(2)中性條件下釋放取2 ml SAN-GO溶液溶于8 ml pH=7的PBS緩沖液中，將其裝入透析袋(8000-14000Da)，然后將透析袋放在透析的燒杯中，加入pH=7的PBS緩沖液80ml，分別于12 h、24 h、36h、48 h從燒杯中吸取I ml透析液，并立即在燒杯中補(bǔ)充Iml的新鮮PBS，使其總體積保持80ml不變。將取出的Iml透析液采用紫外分光光度法測(cè)定于326 nm激發(fā)波長(zhǎng)處的OD值，并計(jì)算其釋放量。測(cè)試結(jié)果表明該GO-SAN中的SAN在中性條件下48 h不會(huì)產(chǎn)生明顯的釋放，而在偏酸性條件下，釋放明顯加快，48 h釋放率為47%，參閱圖5，這證明，該GO-SAN是極有希望被作為新型的高效抗腫瘤藥物廣泛應(yīng)用的。應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明可用其他的不違背本發(fā)明的精神或主要特征的具體形式來(lái) 概述。因此，無(wú)論從哪一點(diǎn)來(lái)看，本發(fā)明的上述實(shí)施例只能認(rèn)為是對(duì)本發(fā)明的說(shuō)明而不能限制本發(fā)明，權(quán)利要求書(shū)指出了本發(fā)明的范圍，而上述的說(shuō)明并未指出本發(fā)明的范圍，因此在與本發(fā)明的權(quán)利要求書(shū)相當(dāng)?shù)暮x和范圍內(nèi)的任何改變，都應(yīng)認(rèn)為是包括在權(quán)利要求書(shū)的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種氧化石墨烯-血根堿復(fù)合物，其特征在于，它包括氧化石墨烯載體及通過(guò)非共價(jià)π-π作用負(fù)載于載體表面的血根堿，且所述血根堿與氧化石墨烯載體的質(zhì)量比在25:100以上，同時(shí)，所述氧化石墨烯載體的徑向尺寸在200nm以下，厚度在I nm以上。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的氧化石墨烯-血根堿復(fù)合物，其特征在于，所述血根堿與氧化石墨烯載體的質(zhì)量比在25:100-29:100。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的氧化石墨烯-血根堿復(fù)合物，其特征在于，所述氧化石墨烯載體表面還修飾有具有疏水性基團(tuán)的高分子材料。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的氧化石墨烯-血根堿復(fù)合物，其特征在于，所述高分子材料優(yōu)選采用聚乙二醇分子。
5.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的氧化石墨烯-血根堿復(fù)合物，其特征在于，所述氧化石墨烯載體的徑向尺寸優(yōu)選為IOOnm 200nm,厚度優(yōu)選為I nm 2nm。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的氧化石墨烯-血根堿復(fù)合物，其特征在于，它是通過(guò)如下方法制備的取徑向尺寸在200nm以下，厚度在I nm以上的氧化石墨烯進(jìn)行表面處理，從而在氧化石墨烯表面形成活性連接基團(tuán)，其后經(jīng)由所述活性連接基團(tuán)在氧化石墨烯表面上連接具有疏水性基團(tuán)的高分子材料形成氧化石墨烯載體，再將氧化石墨烯載體浸潰于溶有血根堿的有機(jī)溶劑中，至氧化石墨烯載體上飽和吸附血根堿后，分離獲得目標(biāo)產(chǎn)物； 并且，在同等溫度條件下，血根堿在所述有機(jī)溶劑中的溶解度大于其在水中的溶解度。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的氧化石墨烯-血根堿復(fù)合物，其特征在于，所述方法中是通過(guò)對(duì)氧化石墨烯表面羧基化處理從而在氧化石墨烯表面形成羧基，其后藉所述羧基將高分子材料連接在氧化石墨烯表面，從而形成氧化石墨烯載體，所述高分子材料包括聚乙二醇分子。
8.一種氧化石墨烯-血根堿復(fù)合物的制備方法，其特征在于，該方法為取徑向尺寸在200nm以下，厚度在I nm以上的氧化石墨烯進(jìn)行表面處理，從而在氧化石墨烯表面形成活性連接基團(tuán)，其后經(jīng)由所述活性連接基團(tuán)在氧化石墨烯表面上連接具有疏水性基團(tuán)的高分子材料形成氧化石墨烯載體，再將氧化石墨烯載體浸潰于溶有血根堿的有機(jī)溶劑中，至氧化石墨烯載體上飽和吸附血根堿后，分離獲得目標(biāo)產(chǎn)物； 在同等溫度條件下，血根堿在所述有機(jī)溶劑中的溶解度大于其在水中的溶解度。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的氧化石墨烯-血根堿復(fù)合物的制備方法，其特征在于，該方法具體為 對(duì)徑向尺寸在200nm以下，厚度在I nm以上的氧化石墨烯表面進(jìn)行羧基化處理； 將羧基化的氧化石墨烯在PH值為8. 0-9. O的水性體系中與具有活性胺基及疏水性基團(tuán)的高分子材料在室溫下充分反應(yīng)，而后透析處理，從而制得氧化石墨烯載體， 將氧化石墨烯載體浸潰于溶有血根堿的有機(jī)溶劑中，至氧化石墨烯載體上飽和吸附血根堿后，再經(jīng)分離、洗滌，獲得目標(biāo)產(chǎn)物。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的氧化石墨烯-血根堿復(fù)合物的制備方法，其特征在于，所述高分子材料優(yōu)選采用聚乙二醇。
11.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的氧化石墨烯-血根堿復(fù)合物的制備方法，其特征在于，所述有機(jī)溶劑優(yōu)選采用DMSO。
12.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的氧化石墨烯-血根堿復(fù)合物的制備方法，其特征在于，該方法具體包括如下步驟 (1)制備徑向尺寸在IOOnm 200nm,厚度在Inm 2nm的氧化石墨烯； (2)將氧化石墨烯加入含強(qiáng)堿和氧化劑的水溶液中于常溫下反應(yīng)至反應(yīng)混合物由棕紅色轉(zhuǎn)變?yōu)楹谏?，再離心分離出反應(yīng)混合物中的固態(tài)物，而后將固態(tài)物分散于水中形成分散液，并調(diào)節(jié)該分散液的PH值至中性，其后再次將固態(tài)物從該分散液中離心分離出來(lái)，并重新分散于水中，再以8000-14000 Da的透析袋透析處理后，制得羧基化的氧化石墨烯； 所述氧化劑包括氯乙酸鈉，所述強(qiáng)堿至少選自氫氧化鈉或氫氧化鉀，所述離心分離的條件為轉(zhuǎn)速在13000 rpm以上，時(shí)間在15 min以上； (3)將羧基化的氧化石墨烯分散于水中，并調(diào)節(jié)分散液的pH值為8.0-9. 0，再加入聚乙二醇和EDAC反應(yīng)12h以上，而后以50 kDa透析袋透析72 h以上，獲得氧化石墨烯載體； (4)將氧化石墨烯載體充分分散于水中，并加入含血根堿的飽和DMSO溶液，至形成的混合反應(yīng)物中DMSO的濃度在50V/V%以上，攪拌過(guò)夜，而后超濾除去未被吸附的血根堿，再 將超濾液以25 V/V %的01^0溶液及水反復(fù)洗滌至顏色不再改變，而后以水分散，并以4000rpm以上的速度離心30 min以上，保留上清液，獲得目標(biāo)產(chǎn)物。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種氧化石墨烯-血根堿復(fù)合物及其制備方法。該復(fù)合物包括氧化石墨烯載體及通過(guò)非共價(jià)π-π作用負(fù)載于載體表面的血根堿，該氧化石墨烯載體的徑向尺寸≤200nm，厚度≤1nm，且表面還優(yōu)選修飾有六臂PEG；該制備方法為對(duì)氧化石墨烯進(jìn)行表面處理，從而在氧化石墨烯表面形成活性連接基團(tuán)，其后經(jīng)由活性連接基團(tuán)在氧化石墨烯表面上連接具有疏水性基團(tuán)的高分子材料形成氧化石墨烯載體，再將氧化石墨烯載體浸漬于溶有血根堿的有機(jī)溶劑中，至氧化石墨烯載體上飽和吸附血根堿后，分離獲得目標(biāo)產(chǎn)物。本發(fā)明能大幅改善血根堿的溶解度和穩(wěn)定性，還可使其具有靶向性，并有望作為一種潛力巨大的抗癌制劑被廣泛應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61K47/48GK102631682SQ20121003864
公開(kāi)日2012年8月15日 申請(qǐng)日期2012年2月21日 優(yōu)先權(quán)日2012年2月21日
發(fā)明者崇羽, 張智軍 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院蘇州納米技術(shù)與納米仿生研究所