專(zhuān)利名稱(chēng)：一種對(duì)酒精性肝損傷具有保護(hù)作用的小葉丁香樹(shù)皮提取物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明所屬醫(yī)藥產(chǎn)品研究開(kāi)發(fā)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明涉及一種對(duì)酒精性肝損傷具有保護(hù)作用的小葉丁香樹(shù)皮提取物。
背景技術(shù)：
小葉丁香Syringa Pubescens Turcz.又名毛(葉)丁香，雀舌花，巧玲花，是木犀科(oleaceace) 丁香屬植物,分布于遼寧、河北、河南、山西、陜西和甘肅。高約2. 5m,幼枝灰褐色，被柔毛。葉卵圓形或橢圓狀卵形，全緣，有緣毛。圓錐花序疏松，側(cè)生，淡紫紅色；花期4月下旬至5月上旬；秋季7月下旬至8月上旬。長(zhǎng)期以來(lái)，民間以其花泡茶飲用治療慢性肝炎、腸炎、食管癌、肝硬化、肝癌等病，療效顯著.但至今未被藥典收錄。目前，對(duì)丁香的研究雖然較多，但對(duì)小葉丁香的研究甚少。小葉丁香花和果實(shí)含有裂環(huán)環(huán)烯醚萜苷類(lèi)、芳醇類(lèi)，黃酮類(lèi)化合物和揮發(fā)油成分。小葉丁香主要藥理作用治愈肝疾、抗肝纖維化、有降血壓作用、抗菌作用、抗炎作用、抗病毒作用、抗氧化作用、抗腫瘤作用、降血糖作用。

發(fā)明內(nèi)容
I、一種對(duì)酒精性肝損傷具有保護(hù)作用的小葉丁香樹(shù)皮提取物，其特征在于該提取物的制備包括以下過(guò)程步驟(I):稱(chēng)取小葉丁香樹(shù)皮干燥粗粉，加入以粗粉重量為8-10倍量的水浸泡 8h-10h，煎煮I. 5h-2h，煎煮后真空抽濾，收集濾液；步驟(2):將步驟(I)中的小葉丁香樹(shù)皮干燥粗粉的濾渣再加水煎煮lh-1. 5h，然后超聲lh-1. 5h，溫度為30°C，功率為80W，真空抽濾，收集濾液；步驟⑶將步驟⑴和⑵中的濾液合并，將濾液濃縮至浸膏狀，烘干浸膏，粉碎，得到小葉丁香樹(shù)皮提取物。2、一種對(duì)酒精性肝損傷具有保護(hù)作用的小葉丁香樹(shù)皮提取物的用途，其特征在于該提取物用于制備對(duì)酒精性肝損傷具有保護(hù)作用的藥物制劑。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明所述的一種對(duì)酒精性肝損傷具有保護(hù)作用的小葉丁香樹(shù)皮提取物包括以下實(shí)施例，下面的實(shí)施例可進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。實(shí)施例I :I、一種對(duì)酒精性肝損傷具有保護(hù)作用的小葉丁香樹(shù)皮提取物，其特征在于該提取物的制備包括以下過(guò)程步驟(I):稱(chēng)取小葉丁香樹(shù)皮干燥粗粉100g，加入以粗粉重量為8倍量的水浸泡 8h,煎煮I. 5，煎煮后真空抽濾，收集濾液；步驟(2):將步驟(I)中的小葉丁香樹(shù)皮干燥粗粉的濾渣再加水煎煮lh，然后超聲lh，溫度為30°C，功率為80W，真空抽濾，收集濾液；步驟(3):將步驟(I)和(2)中的濾液合并，將濾液濃縮至浸膏狀，烘干浸膏，粉碎，得到小葉丁香樹(shù)皮提取物19. 6g。2、該提取物用于制備對(duì)酒精性肝損傷具有保護(hù)作用的藥物制劑。實(shí)施例2:I、一種對(duì)酒精性肝損傷具有保護(hù)作用的小葉丁香樹(shù)皮提取物，其特征在于該提取物的制備包括以下過(guò)程步驟(I):稱(chēng)取小葉丁香樹(shù)皮干燥粗粉200g，加入以粗粉重量為10倍量的水浸泡 IOh,煎煮2h，煎煮后真空抽濾，收集濾液；步驟(2):將步驟(I)中的小葉丁香樹(shù)皮干燥粗粉的濾渣再加水煎煮I. 5h，然后超聲I. 5h，溫度為30°C，功率為80W，真空抽濾，收集濾液；步驟(3):將步驟(I)和(2)中的濾液合并，將濾液濃縮至浸膏狀，烘干浸膏，粉碎，得到小葉丁香樹(shù)皮提取物37. 3g。2、該提取物用于制備對(duì)酒精性肝損傷具有保護(hù)作用的藥物制劑。小葉丁香樹(shù)皮提取物對(duì)小鼠酒精性肝損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)I實(shí)驗(yàn)材料、動(dòng)物、儀器和試劑I. I實(shí)驗(yàn)材料藥材采自吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)校園，由吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院胡全德教授鑒定為木樨科 (Oleaceae) 丁香屬(Syringa)植物小葉丁香(Syringa Pubescens Turcz.)的樹(shù)皮。I. 2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)動(dòng)物購(gòu)自吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物系昆明種小鼠60只，雌雄各半，體重(20 ± I) g，合格證號(hào)SCXK(吉)2011-0001。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在溫度25 °C 27 °C，濕度 55°C 60°C的條件下飼養(yǎng)。I. 3儀器與試劑LPZ5-2型離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠)，76新世紀(jì)紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)，百靈LA114型電子天平(110g/0. OOOlg，常熟市百靈天平儀器有限公司)，電子計(jì)數(shù)天平(500g/0. OOlg，金羊天平儀器廠)，KQ-250DB型超聲波清洗器 (昆山市超聲儀器有限公司)，高速冷凍離心機(jī)(GI-20B上海安亭科學(xué)儀器廠)。丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)試劑盒、丙二醛(MDA)試劑盒(南京建成生物工程研究所)； 56% (V/V)北京二鍋頭白酒(北京紅星釀酒有限公司)，冰醋酸、無(wú)水乙醇(北京化工廠)； 護(hù)肝片(吉林修正藥業(yè))。2實(shí)驗(yàn)方法2. I小葉丁香樹(shù)皮提取物的制備步驟(I):稱(chēng)取小葉丁香樹(shù)皮干燥粗粉100g，加入以粗粉重量為8倍量的水浸泡 8h,煎煮I. 5，煎煮后真空抽濾，收集濾液；步驟(2):將步驟(I)中的小葉丁香樹(shù)皮干燥粗粉的濾渣再加水煎煮lh，然后超聲 lh，溫度為30°C，功率為80W，真空抽濾，收集濾液；步驟(3):將步驟(I)和(2)中的濾液合并，將濾液濃縮至浸膏狀，烘干浸膏，粉碎，得到小葉丁香樹(shù)皮提取物19. 5g，用水溶解，使其每克溶液相當(dāng)于Ig原藥材(小葉丁香樹(shù)皮粗粉)。2. 2動(dòng)物分組及給藥2. 2. I動(dòng)物分組小鼠60只適應(yīng)性喂養(yǎng)3d后，隨機(jī)分為正常組、陰性(模型)對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組， 小葉丁香樹(shù)皮水提物高、中、低劑量組，每組10只，雌雄各半，按鼠體重給藥。2. 2. 2給藥設(shè)計(jì)A組正常組正常喂食、喂水。B組陰性(模型)對(duì)照組只給酒精，不給藥。C組陽(yáng)性對(duì)照組將陽(yáng)性藥護(hù)肝片的成人劑量，按成人體重與小鼠體重的比例折合成小鼠的劑量。每天給小鼠灌胃。D組小葉丁香樹(shù)皮低劑量組每天按5g小葉丁香樹(shù)皮提取物/kg小鼠的給藥量給
小鼠灌胃。E組小葉丁香樹(shù)皮中劑量組每天按IOg小葉丁香樹(shù)皮提取物/kg小鼠的給藥量
給小鼠灌胃。F組小葉丁香樹(shù)皮高劑量組每天按20g小葉丁香樹(shù)皮提取物/kg小鼠的給藥量給小鼠灌胃。2. 2. 3動(dòng)物給藥除正常組外，其余各組每日均于給藥Ih后灌胃56% (V/V) 二鍋頭白酒16mL/ kg(陰性對(duì)照組只給酒精，不給藥)，連續(xù)7d。自造模第I日起，每日給酒4h前灌胃相應(yīng)的水煎液I次，共7d。末次給酒24h后(禁食不禁水12h)，摘除小鼠眼球取血，靜置Ih后， 3500r/min離心IOmin分離血清，檢測(cè)血清ALT活性。小鼠脫臼處死，迅速取出肝臟，剪碎后以4°C生理鹽水制成10%肝勻漿，3500r/min離心lOmin，取肝臟上清液，測(cè)定MDA活性。2. 3指標(biāo)檢測(cè)2. 3. I動(dòng)物一般情況觀察并且記錄各組小鼠每日的飲食、體重、活動(dòng)、毛色、死亡等情況。2. 3. 2血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)的活性檢測(cè)小鼠眼球取血后，靜置lh，3500r/min離心IOmin分離血清，測(cè)定管用移液槍加入待測(cè)血清O. Iml加入試管中，對(duì)照管不加待測(cè)血清。將試劑盒中的基質(zhì)液先于37°C的水浴鍋中預(yù)熱5min后，取出O. 5ml加入測(cè)定管和對(duì)照管中，充分混勻后，于37°C水浴30min。然后測(cè)定管和對(duì)照管同時(shí)加入0.5ml的2，4-二硝基苯肼液，混勻。再取O. Iml待測(cè)血清只加入對(duì)照管中，混勻后于37°C水浴20min。最后在測(cè)定管和對(duì)照管中都加入5ml0. 4mol/l的氫氧化鈉液混勻。室溫放置IOmin,于505nm處,蒸懼水調(diào)零,測(cè)定對(duì)照管和測(cè)定管的OD值。 每組重復(fù)三次。絕對(duì)OD值=測(cè)定管OD值-對(duì)照管OD值查標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過(guò)擬合公式求得相應(yīng)的ALT活性2. 3. 3肝組織勻漿MDA的檢測(cè)各組小鼠處死后，剖腹取肝臟，在4°C生理鹽水清洗，洗去血液，濾紙拭干后，取肝右葉相同部位的一小塊肝組織約O. 5g，剪碎后以4°C生理鹽水制成10%肝勻漿，勻漿液以 3500r/min，離心lOmin，取其上清液，具體操作按試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定MDA的含量。
組織中MDA含量的計(jì)算公式組織中MDA含量=(測(cè)定管吸光度-測(cè)定空白管吸光度/標(biāo)準(zhǔn)管吸光度-標(biāo)準(zhǔn)空白管吸光度)X標(biāo)準(zhǔn)品濃度+待測(cè)樣本蛋白濃度2. 4數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 10. O軟件包進(jìn)行處理。各項(xiàng)數(shù)據(jù)以x±s表示，用方差分析及t檢驗(yàn)比較組間差異的顯著性，P < O. 05表示差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3實(shí)驗(yàn)結(jié)果3. I動(dòng)物一般情況A組小鼠活動(dòng)正常，被毛整齊、光澤，反應(yīng)靈敏，食量及大便正常，體重逐漸增減。B 組小鼠在每日給酒后，活動(dòng)明顯減少，行走不穩(wěn)，反應(yīng)遲鈍，倦臥少動(dòng)，多在30min Ih內(nèi)醉倒酣睡，隨著給酒時(shí)間的延長(zhǎng)，其醉酒時(shí)間逐漸縮短。造模3天左右，小鼠飲食減少，大便稀軟，被毛蓬松無(wú)光澤，體重?zé)o明顯增加甚至有下降。C組、D組、E組、F組小鼠每日給酒給藥后，醉酒癥狀較輕，活動(dòng)減少，反應(yīng)尚靈敏，被毛整齊，體重遞增，各組小鼠無(wú)死亡。3. 2血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)的活性檢測(cè)見(jiàn)表1。表I小葉丁香樹(shù)皮提取物對(duì)酒精性肝損傷小鼠血清ALT活性的影響
權(quán)利要求
1.一種對(duì)酒精性肝損傷具有保護(hù)作用的小葉丁香樹(shù)皮提取物，其特征在于該提取物的制備包括以下過(guò)程步驟(I):稱(chēng)取小葉丁香樹(shù)皮干燥粗粉，加入以粗粉重量為8-10倍量的水浸泡8h-10h， 煎煮I. 5h-2h，煎煮后真空抽濾，收集濾液；步驟(2):將步驟(I)中的小葉丁香樹(shù)皮干燥粗粉的濾渣再加水煎煮lh-1. 5h，然后超聲lh-1. 5h，溫度為30°C，功率為80W，真空抽濾，收集濾液；步驟(3):將步驟(I)和(2)中的濾液合并，將濾液濃縮至浸膏狀，烘干浸膏，粉碎，得到小葉丁香樹(shù)皮提取物。
2.如權(quán)利要求I中所述的一種對(duì)酒精性肝損傷具有保護(hù)作用的小葉丁香樹(shù)皮提取物的用途，其特征在于該提取物用于制備對(duì)酒精性肝損傷具有保護(hù)作用的藥物制劑。
全文摘要
本發(fā)明所屬醫(yī)藥產(chǎn)品研究開(kāi)發(fā)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明涉及一種對(duì)酒精性肝損傷具有保護(hù)作用的小葉丁香樹(shù)皮提取物。稱(chēng)取小葉丁香樹(shù)皮干燥粗粉，加入以粗粉重量為8-10倍量的水浸泡8h-10h，煎煮1.5h-2h，煎煮后真空抽濾，收集濾液；將其濾渣再加水煎煮1h-1.5h，然后超聲1h-1.5h，溫度為30℃，功率為80W，真空抽濾，收集濾液；將濾液合并，濃縮至浸膏狀，烘干浸膏，粉碎，得到小葉丁香樹(shù)皮提取物。該提取物用于制備對(duì)酒精性肝損傷具有保護(hù)作用的藥物制劑。
文檔編號(hào)A61K36/63GK102579592SQ201210046758
公開(kāi)日2012年7月18日 申請(qǐng)日期2012年2月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年2月20日
發(fā)明者侯欣池, 張崇禧, 張成城, 徐蕊, 鄭友蘭 申請(qǐng)人:山東大學(xué)威海分校