專利名稱：一種可用于人體局部減肥和美體的原位脂肪細胞系復合抑制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)學美容保健產(chǎn)品領(lǐng)域，特別地涉及一種可用于人體局部減肥和美體的原位脂肪細胞系復合抑制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
肥胖一直是人們高度重視、關(guān)注及擔憂的問題。因為，過度的肥胖不僅會嚴重影響人體身體健康和生理功能以及肥胖代謝綜合征(如冠心病、高血壓、糖尿病、腫瘤等諸多疾病)，還會因為其導致人們生活、行動的不便及影響外在形象和體態(tài)美觀而引起患者心理上的自卑和痛苦，并進一步導致其心理障礙、精神抑郁和社會適應(yīng)能力下降而加重病情。 而且，隨著社會文明程度的不斷提高，人們對生活質(zhì)量和外在儀表的要求也隨之提高，一些人盡管沒有明顯的肥胖體態(tài)，但仍然存在著外周組織及局部脂肪不斷增多或逐步堆積的現(xiàn)象，進而開始出現(xiàn)整體肥胖的一些早期癥狀和臃腫外表等。而正是肥胖所帶來的一系列生理和心理健康問題、以及人們對身體健康和完美曲線的追求，一些減肥產(chǎn)品和技術(shù)方法因此應(yīng)運而生，并成為當今世界上最受關(guān)注和追捧、也是醫(yī)學美容和整形美容開展最多、最常見的項目之一。目前減肥的方法主要非手術(shù)方法和手術(shù)方法兩大類，非手術(shù)方法主要包括化學減肥方法和物理減肥方法，手術(shù)方法指整形外科手術(shù)療法?；瘜W減肥方法主要是通過醫(yī)藥的控制得以實現(xiàn)，目前用于減肥的藥物可以分為四類食欲抑制類藥物(如嗎吲哚、甲苯丙胺，胃腸道YY)，增加能量消耗的藥物(如茶堿，甲狀腺素)，抑制腸道消化吸收的藥物(脂肪酶抑制劑)，中草藥及其復方制劑(麻黃、黃連素、苦丁茶)，這些藥物雖能起到一定的減肥療效，但多數(shù)藥物具有不良的副反應(yīng)、甚至會引發(fā)諸如營養(yǎng)不良、厭食癥及其它嚴重的合并癥和后遺癥。例如有文獻報道西布曲明(含鹽酸西布曲明)的不良反應(yīng)涉及神經(jīng)、心血管等多個系統(tǒng)，還會引起脂溶性維生素(維生素A，D，E和K)的吸收不良，奧利司他會引起腸胃產(chǎn)氣、大便油膩、胰腺炎、腹瀉、大小便失禁、草酸鹽腎病等。甲狀腺激素如T3、T4也可以增加生熱，但是若劑量超過生理計量時會發(fā)生多種不良反應(yīng)，例如骨質(zhì)疏松、心血管毒性等。目前已研發(fā)出現(xiàn)已合成的甲狀腺激素β受體選擇性抑制劑ΚΒ2141，它在產(chǎn)生較少不良反應(yīng)的同時能降低膽固醇并顯著減輕體重。然而許多人認為中草藥及復方制劑中的成分來自于天然，但是它同其它藥物一樣需要經(jīng)過人體新陳代謝，影響人體消化吸收功能，同樣具有副作用，例如麻黃中的麻黃堿和假麻黃堿會引起手足麻痹、血壓升高、精神緊張等。除此之外，人們對減肥還存在一種錯誤的理解，認為減肥等于減肥體重，因此采用利尿劑、瀉藥等將人體中60% -70%的水分轉(zhuǎn)移出去，然而一旦停用此類藥物，體重就會發(fā)生反彈。物理的方法包括飲食的調(diào)整、運動加飲食控制療法、針刺、心理療法以及儀器療法等。其中飲食的控制的原理主要在于通過控制食物的攝入量和食物攝入的成分使其即無饑餓感又不產(chǎn)生過多熱量。由于存在個體的差異，采用此種方法需要在科學的指導下，制定詳細的飲食計劃，避免飲食的控制引起的營養(yǎng)吸收不良，精神狀態(tài)不佳，同時需要減肥者有毅力、耐心按計劃進行。運動療法中的有氧運動是主要是通過增強脂肪酸的運用和促進甘油三酯水解來減少脂肪的堆積，同飲食療法一樣需要在指導下進行，而且在實施之前需對身體進行全面的體檢，確保安全第一，且應(yīng)注意補水和無機鹽。在目前的減肥產(chǎn)品中，人們研發(fā)出了一種緊身內(nèi)衣，只是通過使用塑料制成的緊身衣包裹身體引起身體流汗，它只是通過物理方式的壓迫塑形和增加水分的丟失，并沒有減少脂肪。同樣，某些廠家生產(chǎn)的某些減肥電療按摩器，在直接消耗脂肪能量方面的作用較小，可能只是促進了能量轉(zhuǎn)換和代謝及肌肉的結(jié)實，也并未使脂肪減少。整形美容手術(shù)中的外科手術(shù)療法先后開展了腸道分流手術(shù)(包括空回腸分流術(shù)、 膽腸分流術(shù)、膽胰分流術(shù))、胃容量縮減術(shù)(包括切除部分胃、胃減容術(shù)、胃捆扎術(shù)等)、胃旁路術(shù)、腹腔鏡技術(shù)(包括腹腔鏡胃旁路術(shù)、腹腔鏡袖套胃切除術(shù)和腹腔鏡可調(diào)節(jié)胃束帶術(shù)， 這些手術(shù)方法雖然能縮短減肥的療程，手術(shù)的目標直接、簡單且有效，但外科手術(shù)在施行過程中仍然存在一定的風險性，且術(shù)后也有并發(fā)癥，例如早期并發(fā)癥有感染、出血，晚期并發(fā)癥有營養(yǎng)不良、膽道或泌尿系統(tǒng)結(jié)石等。除此之外，針對無過敏史和凝血障礙的存在局限性脂肪堆積現(xiàn)象的患者，臨床整形手術(shù)開展了吸脂術(shù)，是一種通過透過真空吸管，把表皮和真皮間的脂肪細胞吸走的快速減肥法。可以快速減少脂肪堆積，但不適宜用于病態(tài)型肥胖患者，且可能造成術(shù)后皮膚松弛、瘢痕、表皮移位等后遺癥，反而會影響人體美觀，進一步導致受術(shù)人的心理狀態(tài)。然而，肥胖是由于脂肪組織堆積過多，而脂肪細胞或前脂肪細胞的不斷增殖造成脂肪細胞的體積增大，其分化導致脂肪細胞的數(shù)量增多，最終形成了脂肪組織的堆積，因此，抑制脂肪細胞增殖或分化的材料或相關(guān)蛋白基因也可作為實現(xiàn)減肥的途徑之一。目前研究表明脂肪細胞在分化過程會伴隨一系列的標志因子的表達，并受到視黃酸X受體a (RXRa )、過氧化物酶體增殖物激活受體Y (PPARy)、CAATs增強子結(jié)合蛋白家族(C/EBPs)和脂肪細胞決定與分化因子I(ADDl)等轉(zhuǎn)錄因子的復雜調(diào)控。因此，人們開始考慮采用某些激動劑或拮抗劑的作用影響靶基因的表達，從而促進或抑制前脂肪細胞或脂肪細胞的分化、脂滴的形成。例如LG100641、BADGE和SR-202、GW9662等作為PPAR的拮抗劑可阻止前脂肪細胞的分化。研究表明多種脂肪細胞因子與肥胖之間存在一定的關(guān)系，表現(xiàn)在能夠誘導脂肪細胞或前脂肪細胞的凋亡或抑制其增殖分化。其中，腫瘤壞死因子 (TNF- α )能抑制C/EBP δ來抑制PPAR Y的轉(zhuǎn)錄表達從而抑制脂肪細胞的分化，并可能導致人類皮下脂肪組織的前脂肪細胞和脂肪細胞凋亡。然而，這些制劑涉及到反義基因、肽類或非肽類合成等諸多高技術(shù)，其制備技術(shù)復雜、操作難度過大、制劑成本過高、且不易產(chǎn)業(yè)化和規(guī)?；a(chǎn)，而且，通過此方法調(diào)控上述成脂基因的表達，大多只能控制前體脂肪細胞增殖和分化，但無法使原位脂肪細胞數(shù)量減少和脂肪合成終止，因此，既難以普及和推廣應(yīng)用、也難以取得明顯的減肥美體效果。瘦素(Leptin，LP)是脂肪細胞分泌的一種脂肪因子，通過在下丘腦的作用來降低一些能刺激攝食的神經(jīng)肽的水平(在這些神經(jīng)肽中就包括有NPY)，而增加一些抑制攝食行為的物質(zhì)的分泌。瘦素通過這些作用來降低體質(zhì)量。在體內(nèi)，瘦素可通過胰島素增加、葡萄糖的利用，通過氧化作用而降低脂肪的儲存。瘦素能增加交感神經(jīng)介導的能量消耗及解耦聯(lián)蛋白1、2、3的表達。在外周組織，瘦素可通過增加脂肪酸的氧化來降低甘油三脂濃度、降低酯化作用及脂肪生成酶的活性，促進脂類的分解，也能降低胰島素的生脂活性。最終，瘦素通過減少脂肪的儲存來維持苗條的身材。有研究者將LP注入鼠的腦室后發(fā)現(xiàn)其攝食明顯減少，另有學者在小鼠下丘腦發(fā)現(xiàn)了具有受體特征的瘦素結(jié)合位點。用原位雜交的方法發(fā)現(xiàn)LP受體在下丘腦弓狀核濃集分布，而其他腦組織則明顯分布稀少，說明下丘腦是LP作用的關(guān)鍵區(qū)域。研究者發(fā)現(xiàn)腦內(nèi)緩慢注入Lp可減少NPYmRNA的表達，這說明NPY在LP的信號傳遞過程中起重要的作用。另有研究者將LP注入小鼠下丘腦弓狀核后，發(fā)現(xiàn)NPYmRNA 表達下降，但糖尿病小鼠的表達水平卻上升。還有學者把放射性核素標記的LP輸入肥胖大鼠體內(nèi)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)高親和力地結(jié)合在大鼠下丘腦細胞膜上，LP減少下丘腦NPY mRNA表達和直接抑制NPY從正常大鼠下丘腦弓狀核、室旁核發(fā)等區(qū)域的釋放。因此，一段時間曾有人將其作為減肥制劑應(yīng)用，希望能達到理想的減肥效果。然而，瘦素作為食物攝入和體脂儲量的一個信號分子和調(diào)控因子，主要通過調(diào)控或抑制NPY神經(jīng)元而發(fā)揮其生物學效應(yīng)，而經(jīng)皮途徑給予對外周脂肪細胞增殖與分化及脂肪合成的直接作用微乎其微或者說基本無作用， 而且，瘦素過長、過多的濫用，很可能弓I起機體中的瘦素抵抗效應(yīng)，非但不能減肥，甚至可能適得其反。神經(jīng)肽Y (Neuropeptide, NPY)是最為活躍的多肽類神經(jīng)遞質(zhì),不僅具有調(diào)控整體攝食或食欲及能量代謝，而且也是最新發(fā)現(xiàn)的外周脂肪細胞的激動劑和效應(yīng)分子。NPY存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的NPY在其多樣化受體的協(xié)助下，不僅可通過神經(jīng)系統(tǒng)傳遞與L印tin、 Ghre I in > Insulin、OrexinA和OrexinB等其它調(diào)控因子的共同作用，完成其重要而又復雜的食物攝取和能量平衡的調(diào)控，以加強刺激食欲，明顯增加能量攝入，同時降低機體的熱量消耗，使能量在體內(nèi)過量蓄積，不斷刺激脂肪生成并逐步形成脂肪組織增多。到目前為止， 已發(fā)現(xiàn)了 NPY的6種受體亞型Y1、Y2、Y3、Y4、Y5、Y6它們都是7次跨膜、I個外側(cè)區(qū)的N-糖基化位點和胞內(nèi)側(cè)區(qū)的C-短氨基酸末端、與G蛋白相偶聯(lián)的刺激肽受體家族的成員，其中研究發(fā)現(xiàn)Υ1，Υ2以及Υ5受體亞型都與進食有關(guān)。不同型的受體在海馬區(qū)的分布不同，其中 Υ2受體在此區(qū)表達最為豐富，并主要分布于海馬區(qū)的多形層、錐體層及放射層。普遍認為 Υ2受體是海馬中最為豐富的NPY受休亞型。Yl受體中等量表達于腹側(cè)海馬回和齒狀回。Υ5 受體少量分布于腹側(cè)和背側(cè)海馬的多形層和錐體層，而在人體腦組織中的下丘腦和齒狀回顆粒層表達顯著，與下丘腦其他部位比較，Υ5受體在ARC中表達最顯著。整個海馬結(jié)構(gòu)中均未見Υ4受體的表達。通過利用受體敲除、特異的受體拮抗劑、肽類似物等研究表明Υ1、Υ5受體在調(diào)節(jié)攝食中起重要的作用。因此，人們已設(shè)計和研制出一些NPY受體拮抗劑、甚至有人可以設(shè)計出通過封閉NPY與其受體特異性結(jié)合位點的肽類、或非肽類、或反義基因及miRNA 或siRNA等，作為一選擇性、目標靶向性治療肥胖的新制劑和新藥物。如在NPY-Yl受體 (NPYlR)拮抗劑方面，首個合成的非肽類NPYlR拮抗劑ΒΙΒΡ3226，另有1229U91、BIB03304、 J-11581、J-104870、[d-Tyr27,36, d_Thr32]、NPY(27_36)、SR120819A、CP-617，906、LY_357897 等； NPY-Y2 受體(NPY2R)拮抗劑有 PYY3_36、BIIE0246、T4_[NPY(33_36)]4 等；NPY_Y5 受體(NPY5R) 拮抗劑有CGP71683A、GW438014A、A-972等。但上述不同的NPYR拮抗劑，目前都是經(jīng)過腹腔和大腦等部位注射給藥才可起到抑制NPY誘導的攝食及其攝食增多引起的體重增加、脂肪合成速率加快等肥胖。而將這些NPY拮抗劑應(yīng)用于經(jīng)皮途徑的局部作用對外周脂肪細胞的直接作用目前尚未見報道。理論上講，即便這些NPY拮抗劑能夠經(jīng)皮途徑應(yīng)用，但其對外周脂肪細胞的直接抑制作用也將非常有限；而且，即使這些NPY拮抗劑經(jīng)皮途徑給予，能夠抑制由NPY誘導和活化的前脂肪細胞增殖活性，但此法同樣存在只可能部分阻斷脂肪細胞的信號傳導通路及調(diào)控某些成脂基因的表達，控制前體脂肪細胞增殖和分化，卻無法迅速使原位脂肪細胞破壞及數(shù)量減少和脂肪合成終止，且這些制劑同樣涉及到一些反義基因、肽類或非肽類合成等諸多高技術(shù)，制備技術(shù)復雜、操作難度過大、制劑成本過高、且不易產(chǎn)業(yè)化和規(guī)模化生產(chǎn)，因此，此類制劑同樣難以普及和推廣應(yīng)用、也難以取得明顯的減肥美體效
果O目前還有學者使用重組人類生長激素(r-Human growth hormone, rh-HGH)用于人體減肥的報道。該項目研究者和使用者均認為，人類生長激素(h-HGH)是機體內(nèi)非常重要和關(guān)鍵的人體生長調(diào)節(jié)激素之一，具有刺激和加快脂肪細胞代謝的作用；而且，目前已有一種源于人類生長激素(h-HGH)碳端片段的合成肽類新藥A0D29604已研制成功、并已進入 II期臨床試驗階段，該課題組的臨床研究表明，人類生長激素(h-HGH)確實具有刺激和加快脂肪細胞代謝的作用，且并無明顯不良反應(yīng)、并能有效地減輕肥胖癥患者的體重。然而， 人類生長激素(h-HGH)主要是由肝臟合成與分泌之激素，其分泌主要受下丘腦-垂體等神經(jīng)內(nèi)分泌所調(diào)控，該激素主要調(diào)節(jié)是機體的生長和發(fā)育及骨骼增長等。另外，還有人將β2 腎上腺素能激動劑在脂肪細胞中能選擇性地作用于β 3受體，認為這樣可以通過對脂肪細胞線粒體的作用，加快和促進能量代謝和熱量生成，從而提高機體代謝率、減少能量儲存和轉(zhuǎn)化及減少身體白色脂肪生成，且目前已有學者成功研發(fā)出β 3受體激動劑有SR58611A， CL316243(ffyeth2Ayerst)和N25984等。不過，從理論上講，人類生長激素(rHGH)主要調(diào)節(jié)是機體的生長和發(fā)育及骨骼增長等；而β 3受體激動劑僅能促進脂肪細胞線粒體的能量代謝和熱量生成及對棕色脂肪組織的生熱作用發(fā)揮一定生物學效應(yīng)，而目前尚無科學依據(jù)和研究證實它們可經(jīng)皮途徑外用對外周脂肪細胞的調(diào)控發(fā)揮直接抑制作用，特別是人類生長激素(rHGH)的局部應(yīng)用，在某些特定生理情況或微環(huán)境條件下，甚至有可能誘導脂肪細胞的增殖和分化，從而很難達到預期的減肥和美體的效果。共軛亞油酸(CLA)是一組含有共軛雙鍵的亞油酸(LA)的同分異構(gòu)體，是天然存在的十八碳二烯酸，屬于多不飽和脂肪酸。近年來的研究證明，共軛亞油酸有多種生物學活性，包括減少動脈粥樣硬化的發(fā)展，促進動物生長，調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，改善II型糖尿病以及減少脂肪的同時增加瘦體質(zhì)等。其對脂肪代謝的影響和作用機制不是單一的，而是多方式、 多途徑共同作用的結(jié)果。有大量的實驗證實，CLA是通過調(diào)節(jié)能力代謝、細胞凋亡、脂肪酸氧化、脂解作用、細胞增殖和分化，以及脂肪形成等機制發(fā)揮降低脂肪積累的作用。另外， 二十二碳六烯酸(DHA)屬于n-3系列多不飽和脂肪酸。很多實驗也證實，飲食添加DHA能降低血液及肝臟中甘油三酯和膽固醇水平，降低肝臟中脂類合成、減少體脂沉積。DHA能抑制體內(nèi)脂肪含量、抑制內(nèi)臟脂肪堆積，認為可能與DHA增加脂肪動員、抑制肝臟內(nèi)源性脂肪合成有關(guān)。另外有研究發(fā)現(xiàn)，DHA可誘導成熟脂肪細胞凋亡，促進脂解，從而達到減肥的作用。然而，無論是共軛亞油酸(CLA)、還是二十二碳六烯酸(DHA)均屬于多不飽和脂肪酸類， 這些成分的所謂減肥作用，大多是通過在飲食中添加后進行口服才能發(fā)揮一定的作用和功效，而且，口服劑量有較為嚴格的要求，過多或過少食用均很難達到減肥的要求，有時甚至會適得其反；特別是共軛亞油酸(CLA)，其分子有不同的同分異構(gòu)體，有些同分異構(gòu)體對脂肪細胞的增殖和分化有一定作用，而有些同分異構(gòu)體對脂肪細胞的增殖和分化沒有作用， 有些同分異構(gòu)體甚至對脂肪細胞的增殖和分化還有一定的促進作用。而且，無論是共軛亞油酸(CLA)、還是二十二碳六烯酸(DHA)對機體外周脂肪細胞直接的抑制作用尚缺乏科學理論和基礎(chǔ)實驗數(shù)據(jù)，因此，其對外周脂肪細胞的抑制效果如何尚難定論。除此之外，某些天然藥物及其提取物在進行離體細胞學研究及對體外培養(yǎng)的前脂肪細胞細胞實驗中發(fā)現(xiàn)具有抑制脂肪細胞增殖和分化的功能。如從姜科姜黃屬植物姜黃根莖中提取的活性成分和脂溶性酚類化合物姜黃素，在較高濃度時對3T3-L1前脂肪細胞具有抑制增殖作用。除此之外，天然藥物中的小檗堿、大黃酸、芹黃素等對前脂肪細胞均能起到一定的抑制作用。但是，上述天然藥物及其提取物對前脂肪細胞的增殖抑制作用大多受其濃度影響，即不同濃度的天然藥物及其提取物，對前脂肪細胞的作用不僅表現(xiàn)出明顯的濃度依賴性，而且，還表現(xiàn)出一定的雙向調(diào)節(jié)作用。如姜黃素在高濃度時才能抑制脂肪細胞增殖，而在低濃度時非但不能抑制脂肪細胞增殖，還能促進脂肪細胞增殖。因此，在使用天然藥物及其提取物(如姜黃素)時，應(yīng)特別注意調(diào)控其作用濃度，而且，還應(yīng)高度注意其作用時間，即所謂的時間-劑量效應(yīng)，否則，可能事倍功半、或事與愿違、或適得其反。特別是上述任何制劑，均不可能同時實現(xiàn)既抑制前脂肪細胞增殖和控制該細胞數(shù)量增加、又可抑制前脂肪細胞分化和該細胞內(nèi)脂肪合成增加及體積增大、還可促進和加快原位脂肪組織中的脂肪細胞凋亡、破壞、溶解等。而如果不能解決原位脂肪組織中的脂肪細胞凋亡、破壞、溶解，使原位脂肪組織中脂肪細胞數(shù)目減少，即使可以抑制前脂肪細胞增殖和控制該細胞數(shù)量增加、也可抑制前脂肪細胞分化和該細胞內(nèi)脂肪合成增加及體積增大， 也只能達到控制肥胖繼續(xù)加重的目的，而原位脂肪細胞數(shù)量不能減少，就不可能從根本上實現(xiàn)真正意義上的局部減肥和美體的目的。總之，科學、合理、健康的減肥方法應(yīng)該是在不影響人體正常組織結(jié)構(gòu)和生理功能及身體健康的狀態(tài)下，通過采用某些有效方法逐步除去人體多余脂肪組織、降低體內(nèi)脂肪含量，而非單方面的體重降低等；特別是，一定要充分考慮到肥胖并非單一因素所致，而是由多種綜合因素作用的結(jié)果。對于人體外周組織及局部組織(如腹部、臀部、腿部等)的減肥，應(yīng)該特別重視諸多肥胖病因?qū)W機制學說中的外周脂肪細胞增殖分化學說，該學說的核心是外周及皮下脂肪組織中的脂肪干細胞及前脂肪細胞在一定條件下可促進增殖和誘導分化成為成熟脂肪細胞，而肥胖的產(chǎn)生，既受到成熟脂肪細胞體積及大小的影響，也受到成熟脂肪細胞數(shù)目及多少的影響。而前脂肪細胞的增殖和分化，則受到機體微環(huán)境改變的影響及脂肪細胞相關(guān)調(diào)控基因和分泌激素等綜合因素的影響。如果外周脂肪組織及其所分泌的脂肪細胞調(diào)控基因和分泌激素及成脂基因表達增多，則會加劇和加重外周或局部脂肪細胞及脂肪組織不均勻分布及代謝異常，因此，我們應(yīng)該高度重視和及時調(diào)控外周多余或積累過剩的原位脂肪組織及其相關(guān)因子，以有效減少和控制外周脂肪細胞及脂肪組織增多、 使自體脂肪組織得以重新合理分布，預防和干預其加劇或加重對整體和局部肥胖的不利影響。同時，整合現(xiàn)有技術(shù)優(yōu)勢和克服現(xiàn)有技術(shù)不足或弊端，研制或發(fā)現(xiàn)一個既可抑制前脂肪細胞增殖和控制該細胞數(shù)量增加、又可抑制前脂肪細胞分化和該細胞內(nèi)脂肪合成增加及體積增大、還可促進和加快原位脂肪組織中的脂肪細胞凋亡、破壞、溶解的復合制劑是選擇性、高效性實現(xiàn)局部減肥和美體的重要途徑之一。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對背景技術(shù)中存在的缺點和問題加以改進、創(chuàng)新，提供一種可用于人體局部減肥和美體的原位脂肪細胞系復合抑制劑及其制備方法。
一種可用于人體局部減肥和美體的原位脂肪細胞系復合抑制劑，其特征是由下述重量百分比的原料制成
抗NPY單克隆抗體I X IO 6 I X IO-2α -氨基乙磺酸I XIO 3 I X 10甘露醇I 100烯醇磷脂酰膽堿I 15脫氧膽酸鈉I 20反-10，順-12共軛亞油酸I XIO-3 5二十二碳六烯酸I ΧΙΟ·2 5小檗堿3.72 X KT4 3.72 X 10大黃酸I X ICT6 I X ICT3碳酸氫鈉I 20注射用水20 90上述原料的總重量百分比為100%。本發(fā)明所述的一種可用于人體局部減肥和美體的原位脂肪細胞系復合抑制劑，其特征是由下述優(yōu)選重量百分比的原料制成
抗NPY單克隆抗體8X10α -氨基乙磺酸0.1甘露醇5烯醇磷脂酰膽堿2.5脫氧膽酸鈉2.5反-10，順-12共軛亞油酸0.1二十二碳六烯酸0.1小檗堿大黃酸碳酸氫鈉注射用水
4.42 X IO'3
0.5 X ΙΟ.3
86.195上述原料的總重量百分比為100%。本發(fā)明的另一目的是提供一種可用于人體局部減肥和美體的原位脂肪細胞系復合抑制劑的制備方法(I)大黃酸溶液的配制取配方量的碳酸氫鈉用適量的注射用水溶解，配制碳酸氫鈉溶液；再用分析天平稱取配方量的大黃酸，加入碳酸氫鈉溶液，輕輕攪拌混勻即可；(2)水溶性成分的配制根據(jù)配方量，用分析天平稱取α -氨基乙磺酸、甘露醇、脫氧膽酸鈉溶于適量注射用水中；然后再加入步驟(I)制備的大黃酸溶液和抗NPY單克隆抗體，充分攪拌溶解，混合均勻，待用；(3)油溶性成分的配制根據(jù)配方量，用分析天平稱取反-10，順-12共軛亞油酸、 二十二碳六烯酸，并置于洗凈消毒過干燥過的三角燒瓶中；然后超聲五分鐘，使其充分混合均勻，待用；(4)將步驟(3)制備的油溶性成分加入步驟(2)制備的液體中，同時加入配方量的烯醇磷脂酰膽堿，在室溫條件下，用磁力攪拌器，以200rpm · mirT1的轉(zhuǎn)速磁力攪拌5min,最后，并將整個體系在超聲振蕩器中超聲IOmin左右；(5)向步驟⑷所得溶液中加入活性炭，室溫靜置20min過濾，濾液經(jīng)微孔濾膜濾過，得到溶液即為一種可用于人體局部減肥和美體的原位脂肪細胞系復合抑制劑。本發(fā)明組方基本原則外周及局部肥胖的細胞生理學和組織形態(tài)學主要體現(xiàn)在前脂肪細胞增殖和分化及原位成熟脂肪細胞內(nèi)脂肪蓄積增多，即前脂肪細胞數(shù)目增多和脂肪合成增加所致的成熟脂肪細胞體積增大、數(shù)量增多。因此，本發(fā)明采用同步抑制前脂肪細胞的增殖和分化，加快和促進成熟脂肪細胞中脂肪分解和轉(zhuǎn)化，同時有效減少和降低原位和新生的成熟脂肪細胞數(shù)量，并從基因水平及細胞信號傳導通路等多種途徑有效調(diào)控相關(guān)成脂基因或人體肥胖相關(guān)基因及其脂肪細胞生長因子的表達、合成及分泌，從源頭上達到控制脂肪細胞增殖代謝和脂肪合成代謝及促進多余成熟脂肪細胞凋亡和破壞之目標。具體地說，本發(fā)明根據(jù)外周脂肪細胞生理學特性及局部減肥技術(shù)特點，選擇不同作用途徑和療效機制的生物活性物質(zhì)或功效成分，科學合理組成一種可用于人體局部減肥和美體的原位脂肪細胞系復合抑制劑。本發(fā)明的這種復合抑制劑主要包括第一，能特異性抑制前脂肪細胞增殖和新生脂肪細胞分化及控制脂肪細胞數(shù)量增多和體積增大的物質(zhì)，如能中和脂肪細胞膜受體激動劑神經(jīng)肽Y(NPY)的抗NPY單克隆抗體和NPY受體拮抗劑等；第二，能促進原位脂肪細胞內(nèi)蓄積脂肪降解和分解及減少原位脂肪細胞體積的物質(zhì)，如反-10，順-12共軛亞油酸、小檗堿和大黃酸等；第三，能加快和促進新生和原位脂肪細胞凋亡、破壞和溶解及有效降低和減少外周脂肪細胞數(shù)量的物質(zhì)，如脫氧膽酸鹽和烯醇磷脂酰膽堿等。本發(fā)明將以此復合抑制劑控制外周及局部脂肪組織中脂肪細胞增殖及細胞數(shù)量增多、抑制脂肪細胞內(nèi)脂肪合成及體積增大，促進成熟脂肪細胞內(nèi)脂肪降解，降低和減少外周組織原位和新生脂肪細胞數(shù)量，從而有效實現(xiàn)和達到控制局部肥胖及外周組織減肥和美體的作用。組方中各種功效成分的作用機制，如下(I)抗NPY單克隆中和抗體的主要作用及其療效機制具有特異性中和神經(jīng)肽 Y (NPY)的作用，這不僅可有效抑制NPY與屬G蛋白偶聯(lián)受體的NPY受體結(jié)合后在G蛋白參與的脂肪增殖和分化細胞信號通路中發(fā)揮作用，即抑制了 G蛋白NPY受體被NPY活化后所激活的腺苷酸環(huán)化酶催化三磷酸腺苷(ATP)生成環(huán)磷酸腺苷(cAMP)，而cAMP作為G蛋白偶聯(lián)受體通路中的第二信使可激活蛋白激酶A(PKA)，而活化的PKA，則可通過磷酸化下游的不同信號分子，對前脂肪細胞增殖發(fā)揮調(diào)控作用，亦即環(huán)磷酸腺苷&41^)/蛋白激酶4$1(八) 通路下游區(qū)信號級聯(lián)放大，促進前脂肪細胞增殖。而且，由于NPY可加快促進成脂基因過氧化物酶體增殖活化受體(PPARr)、CCAAT/增強子結(jié)合蛋白a (C/EBPa)、脂肪合成酶(LPL)等表達，從而可加快前脂肪細胞分化和脂肪細胞體積增大。而抗NPY單克隆中和抗體特異性中和神經(jīng)肽Y(NPY)的作用，從而可有效抑制或消除能直接引起和促進外周脂肪組織及局部脂肪組織中前脂肪細胞增殖和分化的神經(jīng)肽Y(NPY)的作用。同時，NPY還可通過刺激胞外鈣離子經(jīng)細胞膜上R型鈣離子通道流入胞內(nèi)引起鈣離子濃度上升、并可通過活化磷脂酶 C(PLC)水解細胞膜上磷脂酰肌醇4，5 二磷酸(PIP2)生成IP3，IP3又可促進胞漿中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和肌漿網(wǎng)中儲存的鈣離子釋放入胞中使胞內(nèi)鈣離子水平進一步上升。而胞內(nèi)鈣離子的增加可活化鈣離子依賴性的蛋白激酶C(PKC)，也可激活另一鈣離子依賴性激酶II (CaMKII)，使這兩者所產(chǎn)生的細胞信號最終匯集到下游通路Ras-Raf-MEK-ERK，再通過特定的細胞信號傳導引起血管內(nèi)皮細胞增殖，進而使新的血管生成。除此之外，當抗NPY單克隆中和抗體特異性與其相應(yīng)的神經(jīng)肽Y(NPY)抗原結(jié)合后形成抗原-抗體復合物，此時可迅速激活補體， 而發(fā)揮促進補體對脂肪細胞的溶解作用，且兩者結(jié)合后的抗原-抗體復合物還可能誘導巨噬細胞對脂肪細胞的吞噬作用。因此，抗NPY單克隆中和抗體特異性中和神經(jīng)肽Y (NPY)的作用，還能有效抑制能引起和促進外周脂肪組織及局部脂肪組織中新生血管生成的的神經(jīng)肽Y (NPY)的作用。(2) α -氨基乙磺酸的主要作用及其療效機制α -氨基乙磺酸是一種含硫的非蛋白氨基酸，在體內(nèi)以游離狀態(tài)存在。它雖不參與蛋白質(zhì)合成，但它作為人體的一種內(nèi)源性氨基酸，具有廣泛的生理和藥理活性，它能增加脂質(zhì)和膽固醇的溶解性，能促進脂類物質(zhì)的分解、消化和吸收以及降低膽固醇含量等；胰島素可直接與胰島受體結(jié)合而引發(fā)和誘導嚴重的前脂肪細胞增殖和分化及成熟脂肪細胞數(shù)量增加和體積增大，而α-氨基乙磺酸可與依靠與胰島素受體蛋白的相互作用，干預胰島素直接與胰島受體結(jié)合而引發(fā)和誘導前脂肪細胞增殖和分化；特別是它能調(diào)節(jié)神經(jīng)組織興奮性，是重要的中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制性遞質(zhì)，并有拮抗神經(jīng)肽Y和鈣離子調(diào)節(jié)等作用，它可以調(diào)整細胞中鈣離子的濃度，使其維持生理平衡，從而能有效協(xié)同抗NPY單克隆中和抗體抑制或消除直接促進外周脂肪組織及局部脂肪組織中前脂肪細胞增殖和分化以及新生血管形成的神經(jīng)肽Y(NPY)的作用；同時，有近年來的實驗研究證明，α -氨基乙磺酸能降低前脂肪細胞3T3-L1誘導分化為成熟脂肪細胞的過程，只要加入lOmmol/La-氨基乙磺酸，就能明顯抑制前脂肪細胞3T3-L1的分化及脂肪細胞內(nèi)脂肪的增多。這說明，α-氨基乙磺酸具有抑制前脂肪細胞分化為成熟脂肪細胞的功能，從而，減少了外周及局部脂肪組織中成熟脂肪細胞數(shù)量的增多和體積增大。
(3)甘露糖醇的主要作用及其療效機制甘露糖醇(Mannitol)是一種己六醇，其為帶有六個羥基的多元醇，分子量僅為182. 17，可作為抗NPY單克隆中和抗體的很好保護劑和載體。當甘露糖醇與α-氨基乙磺酸同時存在時，能有效保護和長久維持抗NPY單克隆中和抗體的生物學活性，從而使其高效發(fā)揮抑制或消除直接促進外周脂肪組織及局部脂肪組織中前脂肪細胞增殖和分化以及新生血管形成的神經(jīng)肽Y(NPY)的作用。同時，可將外周脂肪組織及局部脂肪組織內(nèi)水分聚集后通過微血管吸收而發(fā)揮一定的組織脫水作用。(4)烯醇磷脂酰膽堿的主要作用及其療效機制烯醇磷脂酰膽堿是構(gòu)成細胞膜結(jié)構(gòu)的主要類脂成分，它主要由甘油基、脂肪酸基團、磷酸基和膽堿構(gòu)成，其分子同時具有親水性的磷酸脂?；?、膽堿或膽胺等(極性基團)和疏水性脂肪酸基(非極性基團)，是一種兩性表面活性劑，具有乳化特性、保濕作用、促進藥物透皮吸收作用等，其化學性質(zhì)主要包括乳化作用、凝聚作用、皂化反應(yīng)、水解反應(yīng)、氫化作用、硫化作用及氧化反應(yīng)、絡(luò)合作用、兩電性等。而且，烯醇磷脂酰膽堿對細胞的生長分化、細胞之間的信息交流、以及神經(jīng)系統(tǒng)的激活、傳導等都有重要作用。當磷脂在脂類代謝中起著重要的作用，它進入機體后， 可參與機體的脂肪代謝，降低膽固醇，興奮膽堿能神經(jīng)元等。而且，烯醇磷脂酰膽堿還是合成脂蛋白的原料，脂蛋白是脂肪的運轉(zhuǎn)形式，可將組織內(nèi)脂肪運到其它器官，參與機體的脂肪代謝。特別是，烯醇磷脂酰膽堿對不僅具有脂肪降解作用，而且，還有脂肪細胞溶解作用等。如將其在外周皮下脂肪層注射I次，即注射部位可見脂肪細胞出現(xiàn)皺縮、變形、失去正常形態(tài)，且部分脂肪細胞細胞膜完整性破壞，并可見到脂肪細胞間互相融合現(xiàn)象；如注射 2-3次，注射部位可見脂肪組織結(jié)構(gòu)破壞，脂肪細胞被大量吞噬破壞，甚至消失，組織切片上可見到脂肪細胞碎裂后遺留的空泡，即它可有效溶解外周及皮下脂肪細胞，使該細胞數(shù)量減少，從而達到外周及局部組織減肥和美體作用。烯醇磷脂酰膽堿的主要作用及其療效機制是它作為一種雙極性分子，同時具有親水和親脂的特性，因此，當它作用于局部脂肪組織后，可以對脂肪細胞進行乳化，從而使組織酶對脂肪細胞進行水解反應(yīng)；同時，它還可能通過促進脂肪細胞的β受體或者抑制其α-2受體從而加速脂解作用。另外，烯醇磷脂酰膽堿與脂肪細胞膜具有相似的結(jié)構(gòu)，因此，在與脂肪細胞膜接觸后，使其發(fā)生融合、溶解或破潰，從而使脂肪細胞數(shù)量減少。而且，它對脂肪細胞的誘導分化也有明顯的抑制作用，并且可以直接誘導成熟脂肪細胞發(fā)生凋亡，細胞膜破壞，細胞核固縮壞死。然而，目前5%以上的烯醇磷脂酰膽堿注射，可能出現(xiàn)明顯的皮膚紅腫、皮下組織壞死及炎癥反應(yīng)，而我們發(fā)明中設(shè)計的2. 5%烯醇磷脂酰膽堿，減緩其較強的脂肪細胞破壞作用，僅增加I次使用既可達到同樣效果，既可減輕、甚至避免了應(yīng)用部位皮膚局限性的燒灼感、水腫、紅斑、淤血、腫脹、瘙癢、皮下組織壞死及炎癥反應(yīng)等副作用發(fā)生，又提高了人體安全條件下的作用療效。(5)脫氧膽酸鈉的主要作用及其療效機制脫氧膽酸是由膽酸氧化而成，它是一種C-7上缺羥基的膽汁酸，是膽酸失去一個氧原子衍生而得的一種游離膽汁酸。脫氧膽酸鈉是脫氧膽酸的鈉鹽，是機體代謝過程中較為重要的生物活性分子之一，參與機體許多重要的生理功能，且具有增溶磷脂、脂肪酸和脂溶性維生素及促進脂溶性纖維素吸收，并且能與磷脂和膽固醇多層囊泡結(jié)構(gòu)，加快類脂及膽固醇的代謝等。本發(fā)明設(shè)計加入脫氧膽酸鈉， 不僅是將其促進烯醇磷脂酰膽堿增溶的作用，而且，它能使脂肪細胞膜的穩(wěn)定性下降、流動性增強、膜結(jié)構(gòu)的有序性降低，從而可在脂肪細胞溶解和脂肪降解作用方面發(fā)揮了較為重要而關(guān)鍵的作用，并同樣對脂肪細胞的誘導分化有抑制作用，且同樣可以直接誘導成熟脂肪細胞發(fā)生凋亡及脂肪細胞膜破壞和脂肪細胞核固縮及壞死、且具有直接裂解脂肪細胞的作用，從而可有效溶解外周及皮下脂肪細胞，使該細胞數(shù)量減少，從而達到外周及局部組織減肥和美體作用。同樣，目前所應(yīng)用的5%以上的脫氧膽酸鈉注射，具有較為明顯的刺激性， 局部應(yīng)用后亦可能出現(xiàn)明顯的皮膚紅腫、皮下組織壞死及炎癥反應(yīng)，而我們發(fā)明中設(shè)計的脫氧膽酸鈉僅為2. 5%，因此，需要它的脫氧膽酸鈉濃度亦可降低至2. 5%，這就減緩其較強的脂肪細胞破壞作用及相應(yīng)副作用的發(fā)生，提高了人體使用的安全性和有效性。(6)共軛亞油酸(CLA)是一組含有共軛雙鍵的亞油酸(LA)的同分異構(gòu)體，是天然存在的十八碳二烯酸，屬于多不飽和脂肪酸。近年來的研究證明，共軛亞油酸有多種生物學活性，包括減少動脈粥樣硬化的發(fā)展，促進動物生長，調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，改善II型糖尿病以及減少脂肪的同時增加瘦體質(zhì)等。其對脂肪代謝的影響和作用機制不是單一的，而是多方式、多途徑共同作用的結(jié)果。有大量的實驗證實，CLA是通過調(diào)節(jié)能力代謝、細胞凋亡、脂肪酸氧化、脂解作用、細胞增殖和分化，以及脂肪形成等機制發(fā)揮降低脂肪積累的作用。另外， 二十二碳六烯酸(DHA)屬于n-3系列多不飽和脂肪酸。很多實驗也證實，飲食添加DHA能降低血液及肝臟中甘油三酯和膽固醇水平，降低肝臟中脂類合成、減少體脂沉積。DHA能抑制體內(nèi)脂肪含量、抑制內(nèi)臟脂肪堆積，認為可能與DHA增加脂肪動員、抑制肝臟內(nèi)源性脂肪合成有關(guān)。另外有研究發(fā)現(xiàn)，DHA可誘導成熟脂肪細胞凋亡，促進脂解，從而達到減肥的作用。(7)其它成分作用機制大黃酸(Rhein，RH):該藥物成分屬單蒽醌類1，8_ 二羥基蒽醌衍生物，在多種中藥成分中均可找到，如大黃、虎杖、何首烏等。袁小青等研究發(fā)現(xiàn)各濃度組RH(0. 1、1、2. 5、5、10ug/ml)抑制人前體脂肪細胞增殖，作用呈劑量依賴性；RH對脂肪細胞分化的抑制作用亦呈劑量依賴性，且研究認為機制可能在于其能促進CHOP (C/EBP homology protein)的mRNA表達上調(diào)有關(guān)。而Tang QQ的研究發(fā)現(xiàn)能支撐這一觀點,其研究發(fā)現(xiàn)CHOP作為C/ΕΒΡβ的負性調(diào)節(jié)因子可抑制脂肪細胞分化。尤其值得一提的是，[Ca2+] 的濃度變化與CHOP的表達有關(guān)，而它的耗竭可能會誘發(fā)CHOP的表達。由此，可見RH能引起胞內(nèi)[Ca2+]濃度的變化。小檗堿是中藥黃蓮的主要成分，劉毅等研究表明小檗堿能夠抑制前脂肪細胞的增殖和分化，減少脂肪細胞分化過程中脂質(zhì)的堆積，機制可能與其抑制脂肪細胞分化相關(guān)基因PPAR Y、C/EBP a mRNA和蛋白表達有關(guān)。綜上所述，本發(fā)明主要具有以下有益效果I、組方創(chuàng)新單獨的任何制劑，均不可能同時實現(xiàn)既抑制前脂肪細胞增殖和控制該細胞數(shù)量增加、又可抑制前脂肪細胞分化和該細胞內(nèi)脂肪合成增加及體積增大、還可促進和加快原位脂肪組織中的脂肪細胞凋亡、破壞、溶解等。而如果不能解決原位脂肪組織中的脂肪細胞凋亡、破壞、溶解，使原位脂肪組織中脂肪細胞數(shù)目減少，即使可以抑制前脂肪細胞增殖和控制該細胞數(shù)量增加、也可抑制前脂肪細胞分化和該細胞內(nèi)脂肪合成增加及體積增大，也只能達到控制肥胖繼續(xù)加重的目的，而原位脂肪細胞數(shù)量不能減少，就不可能從根本上實現(xiàn)真正意義上的局部減肥和美體的目的。本發(fā)明組方是在不影響人體正常組織結(jié)構(gòu)和生理功能及身體健康的狀態(tài)下，通過采用局部給藥方法逐步除去人體多余脂肪組織、降低體內(nèi)脂肪含量。本發(fā)明組方，可同步抑制前脂肪細胞的增殖和分化，如抗NPY單克隆抗體和NPY受體拮抗劑等，加快和促進成熟脂肪細胞中脂肪分解和轉(zhuǎn)化，如反-10，順-12共軛亞油酸、小檗堿和大黃酸等，同時有效減少和降低原位和新生的成熟脂肪細胞數(shù)量，如脫氧膽酸鹽和烯醇磷脂酰膽堿等，并從基因水平及細胞信號傳導通路等多種途徑有效調(diào)控相關(guān)成脂基因或人體肥胖相關(guān)基因及其脂肪細胞生長因子的表達、合成及分泌，從而，從源頭上達到控制脂肪細胞增殖代謝和脂肪合成代謝及促進多余成熟脂肪細胞凋亡和破壞之目標。具體地說，本發(fā)明根據(jù)外周脂肪細胞生理學特性及局部減肥技術(shù)特點，選擇不同作用途徑和療效機制的生物活性物質(zhì)或功效成分，科學合理組成一種可用于人體局部減肥和美體的原位脂肪細胞系復合抑制劑，從而有效實現(xiàn)和達到控制局部肥胖及外周組織減肥和美體的作用。另外，很多天然藥物對前脂肪細胞的增殖和分化具有很大的作用，但這種作用表現(xiàn)出一定的雙向調(diào)節(jié)，且對前脂肪細胞的增殖抑制作用大多受其濃度影響，即不同濃度的天然藥物及其提取物，對前脂肪細胞的作用不僅表現(xiàn)出明顯的濃度依賴性，有些成分在高濃度時才能抑制脂肪細胞增殖，而在低濃度時非但不能抑制脂肪細胞增殖，還能促進脂肪細胞增殖。因此，本發(fā)明組方中的天然藥物濃度通過反復的實驗論證，才找到能達到抑制脂肪細胞增值的作用的合適濃度和劑量。2.本發(fā)明通過局部給藥，避免了食欲抑制類藥物(如嗎吲哚、甲苯丙胺，胃腸道 YY)，增加能量消耗的藥物(如茶堿，甲狀腺素)，抑制腸道消化吸收的藥物(脂肪酶抑制劑)，中草藥及其復方制劑(麻黃、黃連素、苦丁茶)引發(fā)諸如營養(yǎng)不良、厭食癥及其它嚴重的合并癥和后遺癥；避免了西布曲明(含鹽酸西布曲明)的不良反應(yīng)涉及神經(jīng)、心血管等多個系統(tǒng)，還會引起脂溶性維生素(維生素A，D，E和K)的吸收不良，奧利司他會引起腸胃產(chǎn)氣、大便油膩、胰腺炎、腹瀉、大小便失禁、草酸鹽腎病等；還避免了一些中藥成分由于全身吸收，影響人體消化吸收功能，同樣具有副作用，例如麻黃中的麻黃堿和假麻黃堿會引起手足麻痹、血壓升高、精神緊張等。而本發(fā)明通過局部給藥，藥物只限于在局部發(fā)揮作用，而且在局部作用，可大大降低劑量，進一步降低了藥物的不良反應(yīng)。3、功效協(xié)同作用強本發(fā)明從各個不同的機制抑制前脂肪細胞增殖和控制該細胞數(shù)量增加、又可抑制前脂肪細胞分化和該細胞內(nèi)脂肪合成增加及體積增大、還可促進和加快原位脂肪組織中的脂肪細胞凋亡、破壞、溶解等。同時，本發(fā)明中有些成分不僅具有功效作用，還具有保護作用，如α -氨基乙磺酸，可作為抗NPY單克隆中和抗體的很好保護劑和載體。當α-氨基乙磺酸與甘露糖醇同時存在時，能有效保護和長久維持抗NPY單克隆中和抗體的生物學活性，從而使其高效發(fā)揮抑制或消除直接促進外周脂肪組織及局部脂肪組織中前脂肪細胞增殖和分化以及新生血管形成的神經(jīng)肽Y(NPY)的作用。同時，可將外周脂肪組織及局部脂肪組織內(nèi)水分聚集后通過微血管吸收而發(fā)揮一定的組織脫水作用。本組方全方位，多層次地作用于控制脂肪細胞數(shù)量，組方協(xié)同性好。4、本發(fā)明的制備方法在室溫下制備，因此對于保護不耐熱、高溫功效成分的活性及含量、特別是保護蛋白類、肽類、酶類、細胞生長因子類等活性物質(zhì)具有重要價值，能最大限度保持其生物活性及生物學作用。5、一種可用于人體局部減肥和美體的原位脂肪細胞系復合抑制劑制備工藝簡單、 實際操作容易、制備高效快速、不需要特殊儀器設(shè)備，可節(jié)約能源和成本，又不污染環(huán)境，利于環(huán)保和產(chǎn)品工業(yè)化生產(chǎn)。


圖I. 一種可用于人體局部減肥和美體的原位脂肪細胞系復合抑制劑的制備工藝流程及技術(shù)路線。
具體實施例方式I.制備實施舉例一種可用于人體局部減肥和美體的原位脂肪細胞系復合抑制劑各原料述優(yōu)選重量百分比
抗NPY單克隆抗體8 XIO'5α -氨基乙磺酸0.1甘露醇5烯醇磷脂酰膽堿2.5脫氧膽酸鈉2.5反-10,順-12共軛亞油酸0.1二十二碳六烯酸0.1小檗堿4.42X10大黃酸0.5 Χ10·3碳酸氫鈉3.5注射用水86.195上述原料的總重量百分比為100%。一種可用于人體局部減肥和美體的原位脂肪細胞系復合抑制劑，其制備方法包括以下步驟(以配制IOOg為例)(I)大黃酸溶液的配制取配方量的碳酸氫鈉3. 5g用適量的注射用水溶解，配制碳酸氫鈉溶液；再用分析天平稱取配方量的大黃酸500ug，加入碳酸氫鈉溶液，輕輕攪拌混勻即可；(2)水溶性成分的配制根據(jù)配方量，用分析天平稱取α -氨基乙磺酸O. lg、甘露醇5g、脫氧膽酸鈉2. 5g溶于適量注射用水中；然后再加入步驟(I)制備的大黃酸溶液和抗 NPY單克隆抗體80ug，充分攪拌溶解，混合均勻，待用；(3)油溶性成分的配制根據(jù)配方量，用分析天平稱取反-10，順-12共軛亞油酸
O.lg、二十二碳六烯酸O. lg，并置于洗凈消毒過干燥過的三角燒瓶中；然后超聲5分鐘，使其充分混合均勻，待用；(4)將步驟(3)制備的油溶性成分加入步驟(2)制備的液體中，同時加入配方量的烯醇磷脂酰膽堿，在室溫條件下，用磁力攪拌器，以200rpm mirT1的轉(zhuǎn)速磁力攪拌5min,最后，并將整個體系在超聲振蕩器中超聲IOmin左右；
(5)向步驟⑷所得溶液中加入活性炭，室溫靜置20min過濾，濾液經(jīng)微孔濾膜濾過，得到溶液即為一種可用于人體局部減肥和美體的原位脂肪細胞系復合抑制劑。2.試驗實施舉例I以下通過實驗舉例進一步闡述本發(fā)明所述的一種可用于人體局部減肥和美體的原位脂肪細胞系復合抑制劑的減肥效果，但不限于本發(fā)明。健康SD大鼠60只，雌雄各半，隨機分為給藥組和空白對照組，肥胖模型組以高脂飼料喂養(yǎng)，空白對照組以正常飼料喂養(yǎng)。飼養(yǎng)兩個月后，根據(jù)實測肥胖模型組體重是否大于空白對照組大鼠體重的20%，選擇出肥胖大鼠后，隨機分為實施例I制備出的減肥復合物組，肥胖對照組。減肥復合物組除了繼續(xù)喂養(yǎng)高脂飼料，還局部給予本發(fā)明組合物，肥胖對照組繼續(xù)喂養(yǎng)高脂飼料，空白對照組繼續(xù)喂養(yǎng)正常飼料，共進行30天。30天后稱重，比較各組大鼠體重，結(jié)果如下表
權(quán)利要求
1.一種可用于人體局部減肥和美體的原位脂肪細胞系復合抑制劑，其特征是由下述重量百分比的原料制成抗NPY單克隆抗體I X 10七 I X ICTzα-氨基乙磺酸I X IO-3 I X 10甘露醇I 100烯醇磷脂酰膽堿I 15脫氧膽酸鈉I 20反-10,順-12共軛亞油酸I X 10—3 5二十二碳六烯酸I X 10—2 5小檗堿3.72 X Itr4 3.72 X 10大黃酸1X10—6 I X IO-3碳酸氫鈉I 20注射用水20 90上述原料的總重量百分比為100%。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種可用于人體局部減肥和美體的原位脂肪細胞系復合抑制劑，其特征是由下述優(yōu)選重量百分比的原料制成抗NPY單克隆抗體8 X IO.5α-氨基乙磺酸0.1甘露醇5烯醇磷脂酰膽堿2.5脫氧膽酸鈉2.5反-10,順-12共輾亞油酸0.1二十二碳六烯酸0.1小檗堿4.42 X IO-3大黃酸0.5Χ10-3碳酸氫鈉3.5注射用水86.195上述原料的總重量百分比為100%。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或權(quán)利要求2所述的一種可用于人體局部減肥和美體的原位脂肪細胞系復合抑制劑，其特征在于其制備方法包括以下步驟(1)大黃酸溶液的配制取配方量的碳酸氫鈉用適量的注射用水溶解，配制碳酸氫鈉溶液；再用分析天平稱取配方量的大黃酸，加入碳酸氫鈉溶液，輕輕攪拌混勻即可；(2)水溶性成分的配制根據(jù)配方量，用分析天平稱取α-氨基乙磺酸、甘露醇、脫氧膽酸鈉溶于適量注射用水中；然后再加入步驟(I)制備的大黃酸溶液和抗NPY單克隆抗體，充分攪拌溶解，混合均勻，待用；(3)油溶性成分的配制根據(jù)配方量，用分析天平稱取反-10，順-12共軛亞油酸、 二十二碳六烯酸，并置于洗凈消毒過干燥過的三角燒瓶中；然后超聲五分鐘，使其充分混合均勻，待用；(4)將步驟(3)制備的油溶性成分加入步驟(2)制備的液體中，同時加入配方量的烯醇磷脂酰膽堿，在室溫條件下，用磁力攪拌器，以200rpm · mirT1的轉(zhuǎn)速磁力攪拌5min,最后， 并將整個體系在超聲振蕩器中超聲IOmin左右；(5)向步驟(4)所得溶液中加入活性炭，室溫靜置20min過濾，濾液經(jīng)微孔濾膜濾過，得到溶液即為一種可用于人體局部減肥和美體的原位脂肪細胞系復合抑制劑。
全文摘要
本發(fā)明公開一種可用于人體局部減肥和美體的原位脂肪細胞系復合抑制劑及其制備方法，本發(fā)明復合物是由如下原料藥組成抗N P Y單克隆抗體、α-氨基乙磺酸、甘露醇、烯醇磷脂酰膽堿、脫氧膽酸鈉、反-10，順-12共軛亞油酸、二十二碳六烯酸、小檗堿、大黃素、碳酸氫鈉、注射用水。本發(fā)明復合物可同步抑制前脂肪細胞的增殖和分化，加快和促進成熟脂肪細胞中脂肪分解和轉(zhuǎn)化，同時有效減少和降低原位和新生的成熟脂肪細胞數(shù)量，并從基因水平等多種途徑調(diào)控相關(guān)成脂基因及脂肪細胞生長因子的表達、合成及分泌，從源頭上控制脂肪細胞增殖和脂肪合成；另外本發(fā)明是通過局部給藥，提高了所述復合物的吸收利用率，起到了快速、高效的減肥效果。
文檔編號A61K31/4375GK102580087SQ201210059898
公開日2012年7月18日 申請日期2012年3月8日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月8日
發(fā)明者丁克祥, 丁宇, 丁振華, 周芳, 左夏林, 朱曉亮, 楊永鵬, 羅迎霞, 肖長錦, 董萍 申請人:丁克祥, 董萍