專利名稱：一種肉雞用油乳劑疫苗及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種適用于肉雞的油乳劑疫苗及其制備方法，尤其是一種雞新城疫和 H9亞型禽流感疫苗及其制備方法。
背景技術(shù)：
隨著禽類養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展，疾病的發(fā)生也趨向于復(fù)雜化?，F(xiàn)代肉雞養(yǎng)殖為了追求好的生產(chǎn)性能，用于雞病防疫的疫苗越來越多，控制雞病發(fā)生的獸藥越來越新，但是雞病仍然越來越多。肉雞發(fā)病表現(xiàn)出來的特點為，肉雞發(fā)病死亡率較高，一旦發(fā)病，每天持續(xù)死雞，病程持續(xù)時間長；由于飼養(yǎng)設(shè)施和管理水平的參次不齊，多數(shù)疾病表現(xiàn)出明顯的地方差異性。細(xì)菌病、病毒病以及寄生蟲病的二重甚至多重混合感染增加了疾病發(fā)生的復(fù)雜性，給臨床診斷帶來了極大困難。隨著禽類養(yǎng)殖的日益集中化，雞病從地方流行性轉(zhuǎn)變?yōu)槌Ｔ谛詡魅拘约膊。l(fā)病后的治療效果差，抗生素和抗病毒藥效果不好，養(yǎng)殖者大量應(yīng)用生物性治療用品并已逐步轉(zhuǎn)變?yōu)橐蕾?。肉雞的飼養(yǎng)周期短、生長發(fā)育快、周轉(zhuǎn)時間快，隨著遺傳育種技術(shù)和飼料營養(yǎng)技術(shù)的進(jìn)步，現(xiàn)代肉雞的生產(chǎn)效率越來越高，一般飼養(yǎng)一批肉雞只需7周齡左右，即可出售，甚至有的肉雞從出殼約40克體重到2公斤出欄，只需40天的時間，這個時間還在逐漸縮短。 現(xiàn)代肉雞養(yǎng)殖都已規(guī)模化，高密度大群飼養(yǎng)，數(shù)千數(shù)萬只肉雞養(yǎng)在一棟雞舍內(nèi)，日常疾病的爆發(fā)會給肉雞養(yǎng)殖帶來巨大的損失。肉雞疾病的防疫要改善控制環(huán)境污染，同時疫苗防疫手段是強(qiáng)有力的預(yù)防措施。 目前養(yǎng)殖戶對肉雞的免疫程序紊亂是雞病發(fā)病復(fù)雜的重要原因，同時疫苗的選擇也非常重要，做好各種疫苗的高密度和高強(qiáng)度免疫，將雞只的抗體水平提高到一定水平才足以抵抗病毒在雞只體內(nèi)的復(fù)制。禽流感(Al)是由正粘毒科流感病毒屬A型流感病毒所引起的禽類的感染，被國際獸醫(yī)局確定為I類烈性傳染病。本病自首次發(fā)生于意大利，現(xiàn)已幾乎遍及世界各地，給養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，而且由于Al可直接感染人并導(dǎo)致死亡，給公眾衛(wèi)生安全帶來嚴(yán)重的威脅。因此，禽流感的流行狀況和防控成為世界關(guān)注的焦點。雞新城疫是禽類養(yǎng)殖業(yè)中最為常見的疾病，由副粘病毒引起的一種急性、高度接觸性和高度毀滅性的疾病。雞新城疫、禽流感是家禽的兩個重要病毒性傳染病，嚴(yán)重影響?zhàn)B禽業(yè)的健康發(fā)展。 目前，疫苗免疫接種和嚴(yán)格的生物安全措施相結(jié)合仍是預(yù)防和控制這兩種疾病的主要措施。油乳劑疫苗是以油包水的形式存在，注射到機(jī)體后，起到抗原庫的作用，疫苗經(jīng)機(jī)體降解與吸收后逐漸緩慢的釋放抗原，這樣起到少量多次的刺激作用。通常油乳劑疫苗的病毒含量是活苗的100-1000倍，含有的抗原量高，免疫原性強(qiáng)，故誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗體的水平較高，并且持續(xù)的時間長。油乳劑疫苗中的病毒已被滅活，不能在機(jī)體內(nèi)增殖，也不存在毒力過強(qiáng)等問題。油乳劑是抗原的運(yùn)載工具將乳化的抗原轉(zhuǎn)運(yùn)到機(jī)體的脾臟和各處的淋巴集合點，建立新的抗體形成灶。
油乳劑疫苗是產(chǎn)蛋雞常用的疫苗，產(chǎn)蛋雞生長周期長，接種疫苗要考慮疫苗釋放緩慢，效力持久。肉雞生產(chǎn)周期短，對疫苗的要求更高，給日常疾病的防治增加了壓力，適時適度的接種疫苗是有效避免疫情的措施。而目前對肉雞使用的疫苗大多雷同于蛋雞使用疫苗，免疫效果不理想。為了提高肉雞疫苗的功效，針對肉雞生產(chǎn)周期快的特點，急需提供一種高強(qiáng)度的免疫疫苗，便于肉雞吸收，能夠較快的產(chǎn)生抗體的肉雞專用疫苗。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于提供一種肉雞用雞新城疫和H9亞型禽流感的禽用油乳劑疫苗及其制備方法。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案為所述肉雞用油乳劑疫苗，包括油相和水相，油相選自白油、司盤-80、硬脂酸鋁，水相選自濃縮的抗原疫苗、吐溫-80。所述的適用肉雞的油乳劑疫苗的抗原為滅活的病毒，包括雞新城疫病毒和禽流感病毒的一種或組合。所述油乳劑疫苗的雞新城疫病毒為La Sota株，H9亞型禽流感病毒為HP株。所述油乳劑疫苗的水相和油相的體積比為I : 1.6-1 2。所述油乳劑疫苗的白油的運(yùn)動粘度(40°C )為4-8mm2/s。所述油相的組成中，白油、司盤-80、硬脂酸鋁的重量比為94 : 6 : 2。所述的肉雞專用油乳劑疫苗的制備方法，包括以下步驟(I)制備油相選擇優(yōu)質(zhì)白油，運(yùn)動粘度(40°C )為4-8mm2/s。按照重量份數(shù)，白油 94份，司盤-806份，混合后，加硬脂酸鋁2份，制備成透明的油狀液體，滅菌，冷卻至室溫。(2)制備水相將雞新城疫和H9亞型禽流感病毒毒種適當(dāng)稀釋后，分別接種易感雞胚，每胚接種O. Iml毒液后密封針孔,置37°C孵育96h,冷蛋后,收獲雞胚液,將含毒雞胚液濃縮，使雞新城疫和H9亞型禽流感病毒含量均達(dá)到每O. Iml病毒含量> IO80EID500經(jīng)滅活，將濃縮的雞新城疫和H9亞型禽流感病毒的一種或兩種病毒混合，加入到水相質(zhì)量4%的吐溫-80中，完全溶解，制得水相。(3)油乳劑的制備將水相按水油體積比I : 1.6-1 2的比例緩緩加入到油相中，經(jīng)乳化罐充分乳化后，制成油乳劑疫苗。本發(fā)明的有益效果通過增大了油乳劑疫苗中抗原的含量并調(diào)整疫苗的粘度，使制備出的疫苗具有易吸收，見效快，產(chǎn)生抗體水平高的特點，能滿足肉雞生長快、周期短的特點。I、本發(fā)明對疫苗的組分做了改進(jìn)，市面上的普通疫苗大多為水油比I : 3，本發(fā)明所述的肉雞專用疫苗的水油比選擇為I : 1.6-1 2，通過改變水油比，增加水相的比例，直接提高了疫苗中病毒的含量，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生的抗體水平較高，增強(qiáng)機(jī)體對抗原的特異性應(yīng)答，提高免疫效應(yīng)，提高疫苗的效力和速度，更適用于肉雞的短生長周期。2、針對肉雞的生長周期短，體重增長快的特點，篩選適合肉雞吸收的低粘度油佐劑。普通疫苗制備過程中使用白油的運(yùn)動粘度(40°C)通常為ll-13mm2/s，經(jīng)過多次試驗發(fā)現(xiàn)采用運(yùn)動粘度(40°C)為4-8mm2/s的低粘度白油，能降低油乳劑疫苗的粘度，制備出來的油乳劑疫苗，更適合肉雞的機(jī)體組織，更有利與肉雞機(jī)體組織的吸收，有利于在機(jī)體內(nèi)更早的產(chǎn)生抗體。


圖I是免疫雞新城疫-H9亞型禽流感二聯(lián)滅活疫苗后肉雞的Al (H9)抗體消長規(guī)律 (log2平均值)；圖2是免疫雞新城疫-H9亞型禽流感二聯(lián)滅活疫苗后肉雞的ND抗體消長規(guī)律 (log2平均值)；圖3是免疫雞新城疫滅活疫苗后肉雞的ND抗體消長規(guī)律(log2平均值)。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施方式
對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明本發(fā)明研制的是一種適用于肉雞的雞新城疫和H9亞型禽流感油乳劑疫苗，符合肉雞的生長快、周期短的特點。肉雞在注射后能較普通疫苗更早的產(chǎn)生抗體，誘導(dǎo)肉雞機(jī)體產(chǎn)生的抗體水平更高，能夠比常規(guī)的疫苗更好地保護(hù)雞群免受新城疫病毒(NDV)、H9型禽流感病毒(AI(H9)V)的侵襲。實施例I肉雞用雞新城疫-H9亞型禽流感二聯(lián)滅活疫苗的制備制備油相選擇優(yōu)質(zhì)白油，運(yùn)動粘度(40°C )為7. 64mm2/s。按照重量份數(shù)，白油94 份，司盤-806份，混合后，加硬脂酸鋁2份，制備成透明的油狀液體，滅菌，冷卻至室溫。制備水相(I)雞新城疫毒液的制備將生產(chǎn)用毒種雞新城疫病毒La Sota株稀釋1000倍， 接種易感雞胚，每胚尿囊腔內(nèi)接種O. 1ml，37°C孵育，每日觀察雞胚，60小時前死亡的雞胚棄去。此后,每4-6小時觀察一次，死亡的雞胚隨時取出，至96小時，不論死亡與否，全部取出，氣室向上直立，置于2-8°C冷卻4-24小時，收獲雞胚液。將含毒雞胚液濃縮，測定收獲雞胚液中的雞新城疫病毒La Sota株的含量為每O. Iml病毒含量108_3EID5tl，經(jīng)過O. 1%的甲醛溶液滅活。(2) H9亞型禽流感毒液的制備將生產(chǎn)用毒種H9亞型禽流感病毒HP株稀釋1000 倍，接種易感雞胚，每胚尿囊腔內(nèi)接種O. lml，37°C孵育，每日觀察雞胚，24小時前死亡的雞胚棄去，此后，死亡的雞胚隨時取出置于2-8°C存放，直至96h，不論死亡與否，全部取出，氣室向上直立，置于2-8°C庫冷卻12-24小時，收獲雞胚液。將含毒雞胚液濃縮，測定收獲雞胚液中的H9亞型禽流感病毒HP株的含量為每O. Iml病毒含量IO8 5EID5tl，經(jīng)過O. 1%的甲醛溶液滅活。將兩種病毒液等比例混合后制成滅活的雞新城疫-H9亞型禽流感(ND-AI (H9))混和病毒液，加入到水相質(zhì)量4%的吐溫-80中，完全溶解，即得水相。油乳劑的制備將水相按水油體積比I : I. 6的比例緩緩加入到油相中，乳化罐充分乳化后，制成油乳劑疫苗，分裝、加塞、壓蓋。實施例2肉雞用雞新城疫-H9亞型禽流感二聯(lián)滅活疫苗的制備制備油相選擇白油，運(yùn)動粘度(40°C )為4. 29mm2/s，按照重量份數(shù)，白油94份，司盤-806份，混合后，加硬脂酸鋁2份，制備成透明的油狀液體，滅菌，冷卻至室溫。制備水相(I)雞新城疫毒液的制備將生產(chǎn)用毒種雞新城疫病毒La Sota株稀釋1000倍， 接種易感雞胚，每胚尿囊腔內(nèi)接種O. 1ml，37°C孵育，每日觀察雞胚，60小時前死亡的雞胚棄去。此后,每4-6小時觀察一次，死亡的雞胚隨時取出，至96小時，不論死亡與否，全部取出，氣室向上直立，置于2-8°C冷卻4-24小時，收獲雞胚液。將含毒雞胚液濃縮，測定收獲胚液中的雞新城疫病毒La Sota株的含量為每O. Iml病毒含量108_ 1EID50,經(jīng)過O. I %的甲醛溶液滅活；(2) H9亞型禽流感毒液的制備將生產(chǎn)用毒種H9亞型禽流感病毒HP株稀釋1000 倍，接種易感雞胚，每胚尿囊腔內(nèi)接種O. lml，37°C孵育，每日觀察雞胚，24小時前死亡的雞胚棄去，此后，死亡的雞胚隨時取出置于2-8°C庫存放，直至96h，不論死亡與否，全部取出， 氣室向上直立，置于2-8°C庫冷卻12-24小時，收獲雞胚液。將含毒雞胚液濃縮，測定收獲胚液中的H9亞型禽流感病毒HP株的含量為每O. Iml病毒含量108_ 5EID50,經(jīng)過O. I %的甲醛溶液滅活；將兩種病毒液等比例混合后制成滅活的ND-AI (H9)混和病毒液，加入到水相質(zhì)量 4 %的吐溫中，完全溶解，S卩得水相。油乳劑的制備將水相按水油體積比I : 2的比例緩緩加入到油相中，乳化罐充分乳化后，制成油乳劑疫苗，分裝、加塞、壓蓋。實施例3肉雞用雞新城疫-H9亞型禽流感二聯(lián)滅活疫苗的制備制備油相選擇白油，運(yùn)動粘度(40°C )為4. 29mm2/s，按照重量份數(shù)，白油94份， 司盤-806份，混合后，加硬脂酸鋁2份，制備成透明的油狀液體，滅菌，冷卻至室溫。制備水相(I)雞新城疫毒液的制備將生產(chǎn)用毒種雞新城疫病毒La Sota株稀釋1000倍， 接種易感雞胚，每胚尿囊腔內(nèi)接種O. 1ml，37°C孵育，每日觀察雞胚，60小時前死亡的雞胚棄去。此后,每4-6小時觀察一次，死亡的雞胚隨時取出，至96小時，不論死亡與否，全部取出，氣室向上直立，置于2-8°C冷卻4-24小時，收獲雞胚液。將含毒雞胚液濃縮，測定收獲胚液中的雞新城疫病毒La Sota株的含量為每O. Iml病毒含量IO8 5EID5tl，經(jīng)過O. 1%的甲醛溶液滅活。；(2) H9亞型禽流感毒液的制備將生產(chǎn)用毒種H9亞型禽流感病毒HP株稀釋1000 倍，接種易感雞胚，每胚尿囊腔內(nèi)接種O. lml，37°C孵育，每日觀察雞胚，24小時前死亡的雞胚棄去，此后，死亡的雞胚隨時取出置于2-8°C庫存放，直至96h，不論死亡與否，全部取出， 氣室向上直立，置于2-8°C庫冷卻12-24小時，收獲雞胚液。將含毒雞胚液濃縮，測定收獲胚液中的H9亞型禽流感病毒HP株的含量為每O. Iml病毒含量108_ 5EID50,經(jīng)過O. I %的甲醛溶液滅活。將兩種病毒液等比例混合后制成滅活的ND-AI (H9)混和濃縮液，加入到水相質(zhì)量 4 %的吐溫中，完全溶解，S卩得水相。油乳劑的制備將水相按水油體積比I : I. 7的比例緩緩加入到油相中，乳化罐充分乳化后，制成油乳劑疫苗，分裝、加塞、壓蓋。
實施例4雞ND_H9AI 二聯(lián)油乳劑滅活疫苗免疫效力的試驗1試驗方法1. 1疫苗制備按照本發(fā)明實施例1-3所述的雞ND_H9AI 二聯(lián)油乳劑滅活苗的制備方法，選擇不 同的水油比和不同粘度的白油進(jìn)行試驗，對制備的疫苗進(jìn)行效價檢測，具體分組情況如表
lo表1 :雞新城疫_(dá)H9亞型禽流感二聯(lián)油乳劑滅活苗的配比、白油粘度和試驗分組
權(quán)利要求
1.一種肉雞用油乳劑疫苗，包括油相和水相，其特征在于，所述油相選自白油、司盤-80、硬脂酸鋁，水相選自濃縮的抗原疫苗、吐溫-80。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的肉雞用油乳劑疫苗，其特征在于，所述抗原疫苗為滅活的禽用病毒，選自雞新城疫病毒、H9亞型禽流感病毒的一種或組合。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的肉雞用油乳劑疫苗，其特征在于，所述的水相和油相的體積比為 I : 1.6-1 2。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的肉雞用油乳劑疫苗，其特征在于，所述油相白油、司盤-80、硬脂酸鋁的重量比為94 : 6 : 2。
5.根據(jù)權(quán)利要求I或3或4所述油乳劑疫苗，其特征在于，所述白油的運(yùn)動粘度(40°C) 為 4_8mm2/s。
6.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的肉雞用油乳劑疫苗，其特征在于，所述雞新城疫病毒為 La Sota株，H9亞型禽流感病毒為HP株。
7.根據(jù)權(quán)利要求書I至6中任一項所述的肉雞用油乳劑疫苗，其特征在于，所述禽用油乳劑疫苗包括以下制備步驟(1)制備油相選擇優(yōu)質(zhì)白油，運(yùn)動粘度(40°C)為4-8mm2/s，按照重量份數(shù)，白油94 份，司盤-806份，混合后，加硬脂酸鋁2份，制備成透明的油狀液體，滅菌，冷卻至室溫；(2)制備水相將雞新城疫病毒和H9亞型禽流感病毒毒種稀釋后，分別接種易感雞胚， 置37°C孵育，冷蛋后，收獲含毒雞胚液，將含毒雞胚液濃縮，使雞新城疫病毒和H9亞型禽流感病毒含量均達(dá)到每O. Iml病毒含量> IO8 tlEID5tl，經(jīng)滅活后，將雞新城疫和H9亞型禽流感病毒的其中一種，或?qū)煞N病毒混合后得到的病毒液，加入到水相質(zhì)量4 %的吐溫-80中， 充分?jǐn)嚢瑁耆芙?，制得水相?3)油乳劑的制備將水相按體積比I: 1.6-1 2比例緩緩加入到油相中，充分乳化后，制成油乳劑疫苗。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種肉雞用油乳劑疫苗及其制備方法，該油乳劑疫苗由水相和油相組成，水相含濃縮并滅活的ND和H9AI毒液及吐溫-80，油相含由白油、司盤-80、硬脂酸鋁組成的油佐劑，其中，水相和油相體積比為1∶1.6-1∶2，所選用白油的運(yùn)動粘度(40℃)為4-8mm2/s。本發(fā)明具有易吸收，見效快，產(chǎn)生抗體水平高的特點，適用于肉雞的生長，能有效提高肉雞的免疫水平，可有效保護(hù)雞群免受ND病毒和H9AI病毒的侵襲，在免疫期內(nèi)不發(fā)生雞新城疫和H9型禽流感。
文檔編號A61K39/145GK102579339SQ20121006235
公開日2012年7月18日 申請日期2012年3月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月12日
發(fā)明者劉建, 尤永君, 楊旭, 王永建, 陳利紅 申請人:天津瑞普高科生物藥業(yè)有限公司