專利名稱：一種從肝素副產(chǎn)物分離舒洛地特原料的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種舒洛地特原料的制備方法，尤其涉及一種從肝素副產(chǎn)物中分離舒洛地特原料的方法。
背景技術：
舒洛地特，商品名為“偉素”，是1973年意大利的Alfa Wassermann公司上市的一種低分子肝素類藥物，與肝素同屬糖胺聚糖類藥物。藥物中同時含有的硫酸乙酰肝素和硫酸皮膚素可以協(xié)同發(fā)揮作用，使該藥具有與肝素不同的特征。與肝素相比，舒洛地特的抗血栓作用強，而引起出血的可能性小。舒洛地特可以口服的特點尤使其適合抗血栓的長期治療。舒洛地特是通過抗凝作用、纖溶作用、血液流變學作用、抗增殖作用及維持膜通透選擇性作用發(fā)揮其藥理作用。這使得舒洛地特能夠用于防治血栓性疾?。欢溲毫髯儗W作用、 抗增殖作用和維持膜通透選擇性作用是舒洛地特能夠阻遏動脈粥樣硬化進展的基礎。舒洛地特對于糖尿病腎病的治療作用源于其抗增殖作用和維持膜通透選擇性作用。舒洛地特中硫酸乙酰肝素的含量為70.00 %，硫酸皮膚素的含量為 (20. 00%，傳統(tǒng)的生產(chǎn)方式是將硫酸乙酰肝素和硫酸皮膚素按照一定比例混合，使得最終符合規(guī)定要求即可。但是由于單純的硫酸乙酰肝素很難分離并且儲量相對較少，使得舒洛地特的原料很難獲得，價格也很高；并且簡單的將兩種原料混合，工藝很難控制，使得最終得到的原料不符合要求規(guī)定。從豬小腸粘膜經(jīng)過離子交換以及分級沉淀生產(chǎn)肝素的過程中產(chǎn)生了大量的副產(chǎn)物，其中主要組成是硫酸乙酰肝素、硫酸皮膚素和少量殘留肝素。但是由于其中的有效物質分離困難，故生產(chǎn)肝素后一般將這些副產(chǎn)物丟棄或存儲，目前為止沒有可繼續(xù)利用的報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是為了提供一種從肝素副產(chǎn)物分離舒洛地特原料的方法。本發(fā)明的目的可以通過以下措施達到—種從肝素副產(chǎn)物分離舒洛地特原料的方法，其包括如下步驟(I)將肝素副產(chǎn)物溶解為5% 20%質量分數(shù)的溶液，向其中加入醋酸鉀使質量分數(shù)增加至10% 60%,再用醋酸調節(jié)溶液的pH值至5 7,然后沉淀I 5天,收集上清液；(2)向步驟(I)收集的上清液中加入班氏試劑和飽和氫氧化鈉溶液，攪拌后沉淀， 分離出上清液；(3)向步驟(2)得到的上清液中加入氯化鈉，溶解后再加入乙醇進行沉淀，分離出沉淀物，將其用水稀釋為質量分數(shù)10% 15%的沉淀物溶液，再加入EDTA，攪拌溶解后繼續(xù)加入陰離子交換樹脂進行攪拌吸附；吸附后先用O. I O. 6M的氯化鈉溶液攪拌洗滌樹脂，然后采用2 4M氯化鈉溶液攪拌洗脫樹脂，收集洗脫液并用無水乙醇沉淀，得到舒洛地特原料。
本發(fā)明中的肝素副產(chǎn)物是從豬小腸粘膜經(jīng)過離子交換至分級沉淀生產(chǎn)肝素的過程中產(chǎn)生的副產(chǎn)物，其中主要含有硫酸乙酰肝素、硫酸皮膚素和少量殘留肝素。步驟⑴中，肝素副產(chǎn)物優(yōu)選先溶解為6% 10%質量分數(shù)的溶液(水溶液)，進一步優(yōu)選溶解至8% ;濃度過高則會導致沉淀不單是殘留肝素，也可能混有硫酸皮膚素。步驟(I)中，加入醋酸鉀后優(yōu)選使溶液的質量分數(shù)增加至30% 50%。加入醋酸鉀后可進一步攪拌使溶解。步驟(I)中，用醋酸調節(jié)溶液的pH值時優(yōu)選調節(jié)至6。調節(jié)pH值之后的沉淀進一步在溫度5 25°C下進行。沉淀后可采用常規(guī)的固液分離方式，如離子心分離的方式，收集上清液。該上清液為清除肝素后的硫酸多糖溶液。步驟(2)中，班氏試劑的體積優(yōu)選為上清液體積的O. 5 2倍，進一步優(yōu)選為O. 8 倍；飽和氫氧化鈉溶液的體積優(yōu)選為上清液體積的O. 05 O. 3倍，進一步優(yōu)選為O. I倍。 班氏試劑和飽和氫氧化鈉溶液的用量變化均會影響最終產(chǎn)品中兩物質的比例。步驟(2)中，攪拌后的沉淀在常溫下進行，進一步在20 25°C下進行，沉淀時間優(yōu)選為10 60分鐘。沉淀后的分離方法可采用現(xiàn)有常規(guī)固液分離方式，如離心分離等。步驟(3)中，所述氯化鈉的加入量優(yōu)選為上清液質量的1% 3% ;加入氯化鈉并溶解后，采用上清液體積I 2倍的無水乙醇進行沉淀。步驟(3)中，所述EDTA的加入量優(yōu)選為沉淀物溶液質量的1% 3% ;所述陰離子交換樹脂體積與沉淀物溶液的體積相同；用陰離子交換樹脂體積進行攪拌吸附的時間為 6 24小時。所述陰離子交換樹脂優(yōu)選為丙烯酸類強堿性陰離子交換樹脂，如FPA98CL丙烯酸類強堿性陰離子交換樹脂(以下簡稱FPA98型陰離子交換樹脂)。步驟(3)中，用O. I O. 6M的氯化鈉溶液攪拌洗滌樹脂的時間優(yōu)選為2 4小時； 采用2 4M氯化鈉溶液攪拌洗脫樹脂的時間優(yōu)選為3 12小時；收集得到的洗脫液用洗脫液體積I 2倍的無水乙醇進行沉淀。吸附和洗脫時間減少會在一定程度上影響吸附和洗脫效果，最終產(chǎn)率降低。本發(fā)明建立了一種新的分離純化工藝，從肝素副產(chǎn)物中分離舒洛地特原料，即硫酸乙酰肝素和硫酸皮膚素的混合物，本方法利用肝素、硫酸乙酰肝素和硫酸皮膚素的溶解度差異，以及和班氏試劑的特殊反應最終成功得到舒洛地特原料。所得到的舒洛地特原料經(jīng)檢測各項指標均符合舒洛地特原料的要求，下表為實施例I得到的硫酸乙酰肝素和硫酸皮膚素的混合物的具體測試結果
權利要求
1.一種從肝素副產(chǎn)物分離舒洛地特原料的方法，其特征在于包括如下步驟(1)將肝素副產(chǎn)物溶解為5% 20%質量分數(shù)的溶液，向其中加入醋酸鉀使質量分數(shù)增加至10% 60%，再用醋酸調節(jié)溶液的pH值至5 7，然后沉淀I 5天，收集上清液；(2)向步驟(I)收集的上清液中加入班氏試劑和飽和氫氧化鈉溶液，攪拌后沉淀，分離出上清液；(3)向步驟(2)得到的上清液中加入氯化鈉，溶解后再加入乙醇進行沉淀，分離出沉淀物，將其用水稀釋為質量分數(shù)10% 15%的沉淀物溶液，再加入EDTA，攪拌溶解后繼續(xù)加入陰離子交換樹脂進行攪拌吸附；吸附后先用O. I O. 6M的氯化鈉溶液攪拌洗滌樹脂，然后采用2 4M氯化鈉溶液攪拌洗脫樹脂，收集洗脫液并用無水乙醇沉淀，得到舒洛地特原料。
2.根據(jù)權利要求I所述的方法，其特征在于所述肝素副產(chǎn)物是從豬小腸粘膜經(jīng)過離子交換至分級沉淀生產(chǎn)肝素的過程中產(chǎn)生的副產(chǎn)物。
3.根據(jù)權利要求I所述的方法，其特征在于步驟(I)中，肝素副產(chǎn)物先溶解為6% 10%質量分數(shù)的溶液；加入醋酸鉀后使溶液的質量分數(shù)增加至30% 50%。
4.根據(jù)權利要求I所述的方法，其特征在于步驟(I)中，用醋酸調節(jié)溶液的PH值至6; 調節(jié)PH值之后的沉淀在5 25°C下進行；沉淀后采用離子心分離的方式收集上清液。
5.根據(jù)權利要求I所述的方法，其特征在于步驟(2)中，所述班氏試劑的體積為上清液體積的O. 5 2倍，所述飽和氫氧化鈉溶液的體積為上清液體積的O. 05 O. 3倍。
6.根據(jù)權利要求5所述的方法，其特征在于步驟(2)中，所述班氏試劑的體積為上清液體積的O. 8倍，所述飽和氫氧化鈉溶液的體積為上清液體積的O. I倍；攪拌后的沉淀在 20 25°C下進行，沉淀時間為10 60分鐘。
7.根據(jù)權利要求I所述的方法，其特征在于步驟(3)中，所述氯化鈉的加入量為上清液質量的1% 3% ;加入氯化鈉并溶解后，采用上清液體積I 2倍的無水乙醇進行沉淀。
8.根據(jù)權利要求I所述的方法，其特征在于步驟(3)中，所述EDTA的加入量為沉淀物溶液質量的1% 3% ;所述陰離子交換樹脂體積與沉淀物溶液的體積相同；用陰離子交換樹脂體積進行攪拌吸附的時間為6 24小時。
9.根據(jù)權利要求I或8所述的方法，其特征在于步驟(3)中，所述陰離子交換樹脂為丙烯酸類強堿性陰離子交換樹脂。
10.根據(jù)權利要求I所述的方法，其特征在于步驟(3)中，用O.I O. 6M的氯化鈉溶液攪拌洗滌樹脂的時間為2 4小時；采用2 4M氯化鈉溶液攪拌洗脫樹脂的時間為3 12小時；收集得到的洗脫液用洗脫液體積I 2倍的無水乙醇進行沉淀。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從肝素副產(chǎn)物分離舒洛地特原料的方法，將肝素副產(chǎn)物溶解為溶液，加入醋酸鉀使質量分數(shù)增加，再用醋酸調節(jié)溶液的pH值，然后沉淀，收集上清液；再加入班氏試劑和飽和氫氧化鈉溶液，攪拌后沉淀，分離出上清液；向上清液中加入氯化鈉，溶解后再加入乙醇進行沉淀，分離出沉淀物，將其用水稀釋，加入EDTA，攪拌溶解后繼續(xù)加入陰離子交換樹脂進行攪拌吸附；吸附后先氯化鈉溶液攪拌洗滌樹脂，然后用氯化鈉溶液攪拌洗脫樹脂，收集洗脫液并用無水乙醇沉淀，得到舒洛地特原料。本方法有效解決了存儲或丟棄大量肝素副產(chǎn)物所需財力和物力，并變廢為寶，將副產(chǎn)物再次利用，既節(jié)約了大量成本，又創(chuàng)造了價值。
文檔編號A61P9/10GK102603924SQ20121006400
公開日2012年7月25日 申請日期2012年3月12日 優(yōu)先權日2012年3月12日
發(fā)明者王春華, 王玎瑋 申請人:南京健友生化制藥股份有限公司