專利名稱：一種治療惡性腫瘤的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種治療惡性腫瘤的藥物組合物。
背景技術(shù)：
惡性腫瘤嚴(yán)重挑戰(zhàn)人類健康和生命安全，它與心血管疾病是導(dǎo)致人類疾病和死亡的兩個(gè)最大頑疾。惡性腫瘤中肺癌、胃癌、食管癌、腸癌、肝癌、宮頸癌、乳腺癌、白血病、惡性淋巴瘤、鼻咽癌等在我國是常發(fā)性腫瘤，且以肺癌、胃癌、食管癌、肝癌、乳腺癌、宮頸癌最為多見，約占全部惡性腫瘤的70% -80%。傳統(tǒng)癌癥治療模式包括放療、化療、手術(shù)，但放療、化療在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，對(duì)人體正常細(xì)胞也有損傷，副作用大且患者生活質(zhì)量差、生存率低。因此，篩選高效低毒的抗癌藥物一直是癌癥治療的重要研究課題。設(shè)計(jì)專門針對(duì)腫瘤細(xì)胞特定信號(hào)途徑或特定癌細(xì)胞靶位點(diǎn)的藥物，近年來越來越受到人們的極大關(guān)注。近十多年來，隨著對(duì)細(xì)胞死亡現(xiàn)象的深入認(rèn)識(shí)，尤其是對(duì)細(xì)胞凋亡分子機(jī)理的闡明，使人們對(duì)抗癌藥物的篩選及其作用機(jī)理有了全新的認(rèn)識(shí)。有目的地誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡已成為一種治療腫瘤的有效手段。多藥耐藥性(MDR)是腫瘤化療的一大障礙，其機(jī)制較為復(fù)雜。目前一種觀點(diǎn)認(rèn)為主要與耐藥細(xì)胞內(nèi)多藥耐藥基因(mdr)擴(kuò)增和過度表達(dá)P2糖蛋白(P2gp)有關(guān)。P2gp為能量依賴性藥泵，能將多種抗腫瘤藥泵出細(xì)胞外，使細(xì)胞內(nèi)藥物積累減少，不能有效殺傷腫瘤細(xì)胞，從而產(chǎn)生MDR。但腫瘤細(xì)胞耐藥性的真正機(jī)制可能要比這復(fù)雜得多。研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞幾乎對(duì)所有的單獨(dú)藥物都存在不同程度的耐藥性，但多個(gè)藥物的聯(lián)合用藥能夠同時(shí)作用于癌細(xì)胞的多個(gè)靶位點(diǎn)或信號(hào)途徑，可有效的克服單藥耐藥性的缺點(diǎn)，為腫瘤的治療提供了新的方法和希望，也將成為了腫瘤治療的未來趨勢。索拉非尼(Sorafenib，分子式 C21H16ClF3N4O3,分子量 464. 83，CAS 號(hào) 475207-59-1，以下簡寫為Sof)，是人工合成的小分子化合物，已被FDA正式批準(zhǔn)用于腎癌和肝細(xì)胞癌的臨床治療藥物。索拉非尼是個(gè)典型的酪氨酸激酶抑制劑，可有效抑制Raf激酶活性，阻斷Ras/Raf/MEK/ERK和RTK信號(hào)途徑，調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖和凋亡。動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)索拉菲尼可抑制乳腺癌腫瘤細(xì)胞的增殖，減小腫瘤的體積，還可通過抑制RET磷酸化抑制HEK細(xì)胞的增殖；索拉非尼還可通過下調(diào)Mcl-I的、上調(diào)Bim水平誘導(dǎo)人白血病細(xì)胞凋亡；在肝細(xì)胞癌模型中，索拉非尼通過抑制Ras/Raf/MEK/ERK和RTK信號(hào)途徑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤血管生成。漢防己甲素(Tetrandrine，分子式C38H42N2O6,分子量 622. 75，CAS 號(hào) 518-34-3，以下簡寫Tet)，又稱粉防己堿，是從中草藥粉防己的根塊中提取的雙芐基異喹啉類生物堿。早期研究表明Tet具有消炎、鎮(zhèn)痛、降壓、抗纖維化等廣泛的藥理作用，近年研究還證實(shí)，TET對(duì)多種腫瘤細(xì)胞如人白血病細(xì)胞株HL-60、人白血病U937細(xì)胞、人肝癌細(xì)胞Mahlavu、人惡性淋巴瘤BM13674細(xì)胞、人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞U138MG、鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤Neuro 2a有抑制腫瘤細(xì)胞增生和誘導(dǎo)凋亡的作用；研究結(jié)果還表明，漢防己甲素可以通過提高細(xì)胞內(nèi)活性氧水平抑制鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤株生長，誘導(dǎo)其凋亡；在^-29細(xì)胞中漢防己甲素通過PI3K/AKT/GSK3beta途徑誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯和凋亡。Tet不僅能直接抑制腫瘤生長，并且具有放療增敏、逆轉(zhuǎn)耐藥、減輕放化療毒副反應(yīng)的作用，表明Tet在抗腫瘤治療中有著良好的臨床應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供了一種治療惡性腫瘤的藥物組合物。本發(fā)明的體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，一定比例的索拉非尼和漢防己甲素聯(lián)合用藥能有效誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡，對(duì)腫瘤治療具有顯著療效，所取得的抗腫瘤作用顯著優(yōu)于單一用藥，具有顯著的協(xié)同和增效作用，是一種高效低毒的腫瘤藥物。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取以下技術(shù)方案一種治療惡性腫瘤的藥物組合物，由索拉非尼和漢防己甲素組成，索拉非尼和漢防己甲素的摩爾比為I : 0.3 2。作為一種優(yōu)選，本發(fā)明的治療惡性腫瘤的藥物組合物，由索拉非尼和漢防己甲素組成，索拉非尼和漢防己甲素的摩爾比為I : 0.5 I. 5。治療惡性腫瘤的藥物組合物，由索拉非尼和漢防己甲素組成，索拉非尼和漢防己甲素的摩爾比為I : I。所述的惡性腫瘤為神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肺癌、肝癌、胃癌、腸癌、乳腺癌、子宮頸癌、胰腺癌、白血病等。本發(fā)明的另一個(gè)目的是在于提供了上述組合物在制備治療或預(yù)防惡性腫瘤的藥物中的應(yīng)用。
根據(jù)臨床需要，可將索拉非尼和漢防己甲素組合與藥物賦形劑或載體(包括助溶齊U、緩沖劑和穩(wěn)定劑)制成藥物，主要包括液體制劑、顆粒劑、片劑、沖劑、膠丸、膠囊、緩釋齊U、滴丸劑、口崩制劑或注射劑。所以本發(fā)明還提供了一種治療惡性腫瘤的制劑，其中包含有效劑量的組合物和輔料。本發(fā)明涉及索拉非尼和漢防己甲素聯(lián)合用于治療惡性腫瘤。組合物的有效成分為索拉非尼和漢防己甲素。索拉非尼與漢防己甲素組合物協(xié)同作用于腫瘤細(xì)胞，包括有效成分同時(shí)給藥和先后給藥。本發(fā)明可用于多種腫瘤治療，不僅限于實(shí)例中所列舉的腫瘤類型。本發(fā)明通過索拉非尼和漢防己甲素混合使用與單藥使用的比較實(shí)驗(yàn)，研究了索拉非尼和漢防己甲素聯(lián)合使用對(duì)多種人腫瘤細(xì)胞如肝癌細(xì)胞BEL-7402、乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231、腸癌細(xì)胞HCT116、宮頸癌細(xì)胞Hela、血癌細(xì)胞HL-60、神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87等細(xì)胞株生長的影響。本發(fā)明采用不同濃度漢防己甲素和索拉非尼單獨(dú)或混合作用于不同的人腫瘤細(xì)胞株，通過臺(tái)盼藍(lán)排染法檢測了抗腫瘤藥物的細(xì)胞毒作用。結(jié)果表明，不同濃度的Sof和Tet單藥均有一定程度的抑制腫瘤細(xì)胞生長作用，且呈濃度依賴效應(yīng)，2-15 u M Sof對(duì)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞生長抑制率范圍為2-27. 8%，2-15 ii M Tet對(duì)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞生長抑制率范圍為2.6-22.7%。Sof (2-15 PM)和Tet (2_15 y M)聯(lián)合作用時(shí)，細(xì)胞生長抑制率較之單藥使用時(shí)明顯升高，協(xié)同增效作用明顯，對(duì)腫瘤細(xì)胞最高抑制率達(dá)到99%。本發(fā)明證實(shí)，含索拉非尼和漢防己甲素藥物組合所取得的抗腫瘤作用顯著優(yōu)于單一的索拉非尼或漢防己甲素，具有明顯協(xié)同增效作用，為臨床聯(lián)合應(yīng)用漢防己甲素和索拉非尼組合抗腫瘤提供了依據(jù)，是一種潛在的高效低毒的腫瘤藥物。目前對(duì)惡性腫瘤的藥物治療以化學(xué)藥品為主，開發(fā)費(fèi)用昂貴，且高劑量下毒副作用大，病人常難以承受。中藥治療腫瘤已有兩千年歷史，從天然植物成分中分離出的抗腫瘤藥物具有毒副作用小、作用獨(dú)特等特點(diǎn)。將人工合成的特定靶位點(diǎn)的化療藥物與從中藥中分離的抗癌藥物以一定的比配聯(lián)合利用，既可大大降低化療藥物的用量，減小毒副作用，也可顯著增強(qiáng)藥效，克服腫瘤細(xì)胞的單藥抗性。這種協(xié)同藥物組合式的“雞尾酒藥物療法”在腫瘤治療中具有廣闊的前景。本發(fā)明聯(lián)合使用化療藥物索拉非尼和中藥漢防己甲素，從而降低了現(xiàn)有抗癌藥物的臨床用量，提高了抗癌效率，降低了毒副作用，克服了耐受性。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說明。所有實(shí)施例所用細(xì)胞的培養(yǎng)、藥品的添加以及生長抑制率的測定均按以下方法進(jìn)行。
一、材料I.細(xì)胞株肝癌細(xì)胞BEL-7402、乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231、腸癌細(xì)胞HCT116、宮頸癌細(xì)胞Hela、血癌細(xì)胞HL-60、神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87等細(xì)胞株均購自美國菌種細(xì)胞保藏?cái)?shù)據(jù)庫(American Type Culture Collection, ATCC)。2.試劑DMEM培養(yǎng)基、RPMI 1640培養(yǎng)基、胎牛血清和胰酶、乙二胺四乙酸等藥品來自GIBCO公司；索拉非尼、漢防己甲素、青霉素、鏈霉素、DMS0、臺(tái)盼藍(lán)等為Sigma公司產(chǎn)品。其余試劑均為國產(chǎn)分析純。3.儀器5% C02細(xì)胞培養(yǎng)箱(ThermoForma，美國)，細(xì)胞培養(yǎng)超凈工作臺(tái)(蘇凈集團(tuán)安泰公司)，低溫超速離心機(jī)(Haraeus公司，德國)，倒置顯微鏡(Olympus,日本)二、藥物制備將索拉非尼和漢防己甲素分別用二甲亞砜(dimethyl sulfoxide,DMS0)配制成10_2M儲(chǔ)備液，小量分裝，_20°C貯存?zhèn)溆?，臨用時(shí)用相應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋到所需終濃度。配制終濃度為(PM):
I 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
索拉非 2.5 2.5 3 3 5 7.5 7.5 10 10 10 12.5 12.5
尼
漢防己 2.5 3 2.5 3 5 5 7.5 5 7.5 10 5 7.5
甲素

權(quán)利要求
1.一種治療惡性腫瘤的藥物組合物，其特征在干，由索拉非尼和漢防己甲素組成，索拉非尼和漢防己甲素的摩爾比為I :0. 3 2。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的藥物組合物，其特征在于，索拉非尼和漢防己甲素的摩爾比為 I :0. 5 I. 5。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的藥物組合物，其特征在于，索拉非尼和漢防己甲素的摩爾比為 I :1。
4.根據(jù)權(quán)利要求f3所述的藥物組合物，其特征在于，所述的惡性腫瘤為神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肺癌、肝癌、胃癌、腸癌、乳腺癌、子宮頸癌、胰腺癌或白血病。
5.權(quán)利要求f3所述組合物在制備治療或預(yù)防惡性腫瘤的藥物中的應(yīng)用。
6.一種治療惡性腫瘤的制劑，其中包含有效劑量的權(quán)利要求I所述的組合物和輔料。
全文摘要
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種用于治療惡性腫瘤的藥物組合物，由索拉非尼和漢防己甲素組成，索拉非尼和漢防己甲素的摩爾比為10.3~2。該藥物組合物尤其適用于抗肝癌、腸癌、子宮頸癌、白血病、乳腺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤等。含索拉非尼和漢防己甲素藥物組合所取得的抗腫瘤作用顯著優(yōu)于單一的索拉非尼或漢防己甲素，具有明顯協(xié)同增效作用，為臨床聯(lián)合應(yīng)用漢防己甲素和索拉非尼組合抗腫瘤提供了依據(jù)，是一種潛在的高效低毒的腫瘤藥物。
文檔編號(hào)A61K31/4748GK102626412SQ20121008047
公開日2012年8月8日 申請(qǐng)日期2012年3月23日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月23日
發(fā)明者萬佳麗, 李文化, 梅運(yùn)軍, 龔克 申請(qǐng)人:武漢大學(xué)