專利名稱：葉酸靶向的抗癌藥物peg修飾的脂質(zhì)體及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供了一種葉酸靶向的抗癌藥物PEG修飾的脂質(zhì)體，同時(shí)還提供了該脂質(zhì)體的制備方法與用途，屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
脂質(zhì)體作為抗腫瘤藥物載體具有改變藥物在組織中的分布，提高治療指數(shù)和生物利用度，增加療效同時(shí)減小毒副作用的特點(diǎn)。本研究制備了抗癌藥物脂質(zhì)體，脂質(zhì)體能夠降低毒性，它還可被用作抗菌藥物的載體，以及DNA和蛋白質(zhì)大分子的傳遞載體。其作用機(jī)理在于脂質(zhì)體與細(xì)胞膜(生物膜)結(jié)構(gòu)相似，脂質(zhì)體的主要成份磷脂等類脂也是細(xì)胞膜的主要成份，所以脂質(zhì)體與細(xì)胞膜之間有很強(qiáng)的親合力。脂質(zhì)體的膜與生物膜融合，脂質(zhì)體所包含的活性成份被釋放而進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，或者整個(gè)脂質(zhì)體被細(xì)胞吞噬，活性成份在細(xì)胞內(nèi)被吸收。PEG化的脂質(zhì)體被稱為空間穩(wěn)定脂質(zhì)體，又稱隱性脂質(zhì)體或長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體，PEG作為一種極性分子，阻礙了免疫系統(tǒng)對(duì)其識(shí)別，減少單核-吞噬細(xì)胞系統(tǒng)攝取，顯著延長(zhǎng)了脂質(zhì)體的循環(huán)時(shí)間，從而增強(qiáng)藥物的口服生物利用度和血腦屏障轉(zhuǎn)運(yùn)效率。葉酸是一種分子結(jié)構(gòu)中含有喋呤環(huán)的小分子維生素，在生理?xiàng)l件下很難自由透過(guò)細(xì)胞膜，必須進(jìn)行內(nèi)化才能被人體所吸收；兩種內(nèi)化機(jī)制一是低親和力跨膜蛋白，轉(zhuǎn)運(yùn)四氫葉酸、二氫葉酸進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)；二是高親和力的葉酸受體，可吸收葉酸進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。葉酸受體有兩個(gè)GPI (糖基磷脂酰肌醇錨)錨定形式，α和β，它在大多數(shù)組織中是缺失的。FR-α在表皮癌中頻繁地被放大，而FR-β的表達(dá)只存在于粒細(xì)胞性白血病和與慢性炎癥性疾病相關(guān)的激活的巨噬細(xì)胞中。葉酸的衍生物和抗葉酸受體的抗體可通過(guò)受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用被癌癥細(xì)胞吸收，這樣就提供了一種靶向傳遞到FR+細(xì)胞的機(jī)制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種葉酸靶向的抗癌藥物PEG化脂質(zhì)體，其目的就是可有效地運(yùn)載藥物到達(dá)靶部位，提高藥物的生物利用度，同時(shí)有效減小細(xì)胞毒性。本發(fā)明還公開了上述脂質(zhì)體的制備方法，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明提供的葉酸靶向的抗癌藥物PEG化脂質(zhì)體，其特征在于結(jié)構(gòu)如下所述PEG 兩端分別連接葉酸和包有親水性抗癌藥物的脂質(zhì)體。本發(fā)明的葉酸靶向的抗癌藥物PEG化脂質(zhì)體制備方法，包括以下步驟
I)葉酸活化酯的制備:按照(165 175) :(65 75) (300 350) ( 1650 1750) (I 5)的摩爾比先后將葉酸、無(wú)水二甲基亞砜、二環(huán)己基碳二亞胺、N-羥基琥珀酰亞胺及三乙胺混合在一起，在室溫條件下反應(yīng)12-15小時(shí)，過(guò)濾除去二環(huán)己基脲，得到葉酸活化酯溶液，反應(yīng)式如下
權(quán)利要求
1.一種葉酸靶向的抗癌藥物PEG修飾的脂質(zhì)體，其特征在于結(jié)構(gòu)如下所述PEG兩端分別連接葉酸和包有親水性抗癌藥物的脂質(zhì)體。
2.如權(quán)利要求I所述葉酸靶向的抗癌藥物PEG修飾的脂質(zhì)體的制備方法，包括以下步驟I)葉酸活化酯的制備:按照(165 175) :(65 75) (300 350) ( 1650 1750) (I 5)的摩爾比先后將葉酸、無(wú)水二甲基亞砜、二環(huán)己基碳二亞胺、N-羥基琥珀酰亞胺及三乙胺混合在一起，在室溫條件下反應(yīng)12-15小時(shí)，過(guò)濾除去二環(huán)己基脲，得到葉酸活化酯溶液，反應(yīng)式如下
3.如權(quán)利要求I所述的葉酸靶向的抗癌藥物PEG修飾的脂質(zhì)體，其特征在于制備方法包括以下步驟I)葉酸活化酯的制備將葉酸與N-羥基丁二酰胺形成活化酯，即首先將葉酸溶于二甲基亞砜中，再按照葉酸、N-羥基丁二酰胺、二環(huán)己基碳二亞胺的摩爾比為I : 2 2的比率混合，在攪拌條件下反應(yīng)20 h，該反應(yīng)在氮?dú)獗Ｗo(hù)的條件下進(jìn)行；將所得混懸物10 000 r/ min離心40 min,除去白色不溶物，取黃色上清液；2)葉酸-PEG的合成將NH2-PEg-COOH溶于DMSO，NH2-PEG-C00H與上述葉酸活化酯摩爾比為I : (9 8)，在氮?dú)獾谋Ｗo(hù)下，NH2-PEg-COOH溶液與葉酸活化酯反應(yīng)5 h，于4°C條件下，將所得產(chǎn)物在DMSO中透析72 75h，然后在超純水中透析48 55h，將最終產(chǎn)品在一 20°C冷凍干燥；3)復(fù)乳法制備葉酸靶向的抗癌藥物脂質(zhì)體緩慢將40g/L的水溶性抗癌藥物溶液(用O.lmol/L HCl調(diào)節(jié)pH值為I. 2)加至等體積的氯仿溶液中，該氯仿溶液中含有質(zhì)量比為 (10 15) :(1· 25 5) : (7. 5 10) : (I 3)的大豆卵磷脂、二棕櫚酰磷脂酰甘油、膽固醇和三油酸甘油酯；以10000 Xg高速剪切5min制成W/0型初乳；吸取該初乳注入5倍體積的含有5%葡萄糖注射液和40mmol/L賴氨酸游離堿的混合溶液的外水相中，以4000Xg剪切 25s形成W/0/W型復(fù)乳；4)抗癌藥物與葉酸的連接在55°C下，向制得的W/Ο/ff的復(fù)乳中通入氮?dú)?，揮去有機(jī)相，得多囊泡脂質(zhì)體的混懸液，將所得多囊泡脂質(zhì)體加到10%葉酸-PEG溶液，二者體積比為 I : (3 2)，靜置35min，使多囊泡脂質(zhì)體與葉酸-PEG溶液結(jié)合，以4 000 r · min—1離心30 min，傾去上清液，得到葉酸連接的多囊泡脂質(zhì)體，再用pH為4. 6、濃度為5. 5 g · Γ1的精氨酸溶液調(diào)整抗癌藥物質(zhì)量濃度至5. 5 g · L—1，即得。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種葉酸靶向的抗癌藥物PEG修飾的脂質(zhì)體的制備方法及用途，該脂質(zhì)體用下述方法制成首先合成葉酸-聚乙二醇，然后用復(fù)乳法制得葉酸連接的抗癌藥物脂質(zhì)體，最后將二者進(jìn)行連接，從而得到葉酸靶向的抗癌藥物PEG修飾的脂質(zhì)體。其用途在于靶向治療卵巢癌、肝癌、乳腺癌等癌癥，是一種很有效的抗生素類抗腫瘤藥。
文檔編號(hào)A61K47/34GK102579353SQ201210088800
公開日2012年7月18日 申請(qǐng)日期2012年3月30日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月30日
發(fā)明者劉丹平, 吳麗艷, 張瑤, 楊東生, 楊明智, 滕利榮, 王立英, 王艷珍, 王貞佐, 金元寶 申請(qǐng)人:吉林大學(xué)