專利名稱：一種大豆異黃酮緩釋微球的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物緩釋制劑的制備方法，具體是一種大豆異黃酮緩釋微球的制備方
法
背景技術(shù)：
大豆異黃酮是一種植物化學(xué)素，屬植物黃酮類，主要來源于豆科植物的莢豆類，是多酚類混合物，其包含多種成分，主要有黃豆苷元、染料木素、黃豆黃素、染料木苷、大豆苷等物質(zhì)。大豆異黃酮是一種天然植物保健品，又具有很多的藥用功能，近年來，國(guó)內(nèi)外均出現(xiàn)了大豆異黃酮熱，紛紛研究大豆異黃酮保健品和藥物片劑、口服液等等各種功能性產(chǎn)品。其中的主要成分如染料木素(genistein, GEN),又稱金雀異黃素,臨床研究表明，其對(duì)乳腺癌、前列腺癌、心血管疾病和絕經(jīng)后綜合癥等具有很好的防治作用。染料木素是一種強(qiáng)效、特異蛋白酪氨酸激酶抑制劑，其在高劑量時(shí)可抑制乳腺腫瘤細(xì)胞的增殖、分化，可減少乳腺癌的發(fā)生率。同時(shí)，染料木素結(jié)構(gòu)與雌二醇類似，能低親和地結(jié)合雌激素受體和性激素蛋白，從而使染料木素發(fā)揮雌激素樣作用和抗雌激素作用。除此以外，GEN具有多種生物活性和藥理作用，如影響骨代謝、抗炎，抗氧化、降血脂、維持正常脈管反應(yīng)性等作用?，F(xiàn)已廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、保健食品(營(yíng)養(yǎng)制品和功能性食品)等領(lǐng)域。而目前，在醫(yī)藥產(chǎn)品的開發(fā)上，對(duì)大豆異黃酮的研究多限于口服普通劑型。如Gardner研究了富含GEN的大豆異黃酮片劑在人體的藥動(dòng)學(xué)；杜先華等(染料木素自微乳的大鼠在體腸吸收機(jī)制研究，中國(guó)中藥雜志，第33卷第12期)將染料木素與聚山梨酯80-PEG400-油酸乙酯乳化制成自微乳化制劑，提高了染料木素的口服生物利用，促進(jìn)了藥物的淋巴吸收；又如中國(guó)專利“微囊大豆異黃酮及制備工藝”(公開號(hào)CN 186108A)以β -⑶環(huán)糊精為壁材，可達(dá)到消除原料異臭味和增強(qiáng)藥物的穩(wěn)定性。但是，將染料木素等大豆異黃酮物質(zhì)制成長(zhǎng)效緩釋制劑未見有相應(yīng)報(bào)道，與普通制劑相比，將大豆異黃酮物質(zhì)制成的緩釋制劑可以緩慢釋放藥物，給藥頻率可以有所減少，且能顯著增加藥物的療效。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的就是提供一種以乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)為載體材料的大豆異黃酮緩釋微球的制備方法，其適用于制備染料木素(GEN)、黃豆苷元、黃豆黃素、染料木苷及大豆苷等大豆異黃酮物質(zhì)的緩釋微球。本發(fā)明的技術(shù)方案為一種大豆異黃酮緩釋微球的制備方法，包括如下步驟
(1)、取0.3 2.58的聚乙烯醇(PVA)溶于30 50ml的雙蒸水中，制成聚乙烯醇雙蒸水溶液；
(2)、將O.03 O. Ig的大豆異黃酮和O. 3 I. Og的PLGA加入到IOml的二氯甲烷中，混合后在常溫下超聲乳化5 15分鐘；
(3)、在轉(zhuǎn)速為800r/min的攪拌速度下，將步驟(2)超聲乳化后得到的混合溶液滴加到聚乙烯醇雙蒸水溶液中，攪拌5 15min后，將攪拌速度調(diào)為300r/min，繼續(xù)攪拌3 5h至二氯甲烷完全揮發(fā)；
(4)、將步驟(3)所得的混合物在溫度為4°C、轉(zhuǎn)速為3000r/min的離心機(jī)中離心5min,離心后混合物上層為液體，下層為固體微球，收集下層固體微球并用水洗除去其表面殘留雜質(zhì)，再經(jīng)冷凍干燥、輻射滅菌后，即得平均粒徑為20 145um的大豆異黃酮緩釋微球。上述步驟(2)中所述的大豆異黃酮的主要成分為染料木素、黃豆苷元、黃豆黃素、染料木苷、大豆苷。大豆異黃酮與PLGA的重量比為1:15 1:5。所述的PLGA的分子量為4000 40000，PVA的分子量為7000 14000。有益效果本發(fā)明以PLGA為基質(zhì)材料制備大豆異黃酮緩釋微球，通過控制PLGA與大豆異黃酮的用量比以及超聲乳化和混合攪拌的時(shí)間，延長(zhǎng)了微球在體外的釋放時(shí)間，具有優(yōu)良的緩釋性能；其中制備的染料木素緩釋微球的緩釋期可達(dá)30天，而且微球表面光 滑，顆粒圓整無粘連，粒徑可以控制，載藥量在7%以上，包封率在60%以上。


圖I為試驗(yàn)一中試驗(yàn)組按照實(shí)施例2的方法中所制得的染料木素緩釋微球血藥濃度-時(shí)間曲線圖。圖2為試驗(yàn)一中對(duì)照組普通染料木素血藥濃度-時(shí)間曲線圖。
具體實(shí)施例方式一種大豆異黃酮緩釋微球的制備方法，包括如下步驟
(1)、取0.3 2.58的聚乙烯醇(PVA)溶于30 50ml的雙蒸水中，制成聚乙烯醇雙蒸水溶液；
(2)、將O.03 O. Ig的大豆異黃酮物質(zhì)和O. 3 I. Og的PLGA加入到IOml的二氯甲烷中，混合后在常溫下超聲乳化5 15分鐘；
(3)、在轉(zhuǎn)速為800r/min的攪拌速度下，將步驟(2)超聲乳化后得到的混合溶液滴加到聚乙烯醇雙蒸水溶液中，攪拌5 15min后，將攪拌速度調(diào)為300r/min，繼續(xù)攪拌3 5h至
二氯甲烷完全揮發(fā)；
(4)、將步驟(3)所得的混合物在溫度為4°C、轉(zhuǎn)速為3000r/min的離心機(jī)中離心5min,離心后混合物上層為液體，下層為固體微球，收集下層固體微球并用水洗除去其表面殘留雜質(zhì)，再經(jīng)冷凍干燥、輻射滅菌后，即得平均粒徑為20 145um的大豆異黃酮緩釋微球。上述步驟(2)中所述的大豆異黃酮的主要成分為染料木素、黃豆苷元、黃豆黃素、染料木苷、大豆苷。大豆異黃酮與PLGA的重量比為1:15 1:5。所述的PLGA的分子量為4000 40000，PVA的分子量為7000 14000。實(shí)施例I
稱取O. 6g分子量在7000 14000之間的PVA，并將其溶于30ml雙蒸水中，制成聚乙烯醇雙蒸水溶液；稱取O. 05g的大豆異黃酮物質(zhì)和O. 5g分子量在4000 40000之間的PLGA，將二者加入到IOml的二氯甲烷中，并在常溫下超聲lOmin，使大豆異黃酮物質(zhì)和PLGA充分溶解在二氯甲烷中；然后在800r/min的攪拌速度下，將超聲后的大豆異黃酮物質(zhì)、PLGA和二氯甲烷的混合溶液滴加到聚乙烯醇雙蒸水溶液中，攪拌IOmin后，將攪拌速度調(diào)為300r/min，繼續(xù)攪拌5h至二氯甲烷完全揮發(fā)；然后將上述不含二氯甲烷的混合物在溫度為4°C、轉(zhuǎn)速為3000r/min的離心機(jī)中離心分離5min，離心分離后混合物上層為液體，下層為固體微球，收集下層固體微球并水洗3次除去其表面殘留雜質(zhì)，再經(jīng)冷凍干燥、輻射滅菌后，即得平均粒徑為90um的大豆異黃酮緩釋微球。實(shí)施例2
稱取O. 8g分子量在7000 14000之間的PVA，并將其溶于40ml雙蒸水中，制成聚乙烯醇雙蒸水溶液；稱取O. 05g的大豆異黃酮物質(zhì)和O. 5g分子量在4000 40000之間的PLGA，將二者加入到IOml的二氯甲烷中，并在常溫下超聲lOmin，使大豆異黃酮物質(zhì)和PLGA充分溶解在二氯甲烷中；然后在800r/min的攪拌速度下，將超聲后的大豆異黃酮物質(zhì)、PLGA和二氯甲烷的混合溶液滴加到聚乙烯醇雙蒸水溶液中，攪拌IOmin后，將攪拌速度調(diào)為300r/min，繼續(xù)攪拌5h至二氯甲烷完全揮發(fā)；然后將上述不含二氯甲烷的混合物在溫度為4°C、 轉(zhuǎn)速為3000r/min的離心機(jī)中離心分離5min，離心分離后混合物上層為液體，下層為固體微球，收集下層固體微球并水洗3次除去其表面殘留雜質(zhì)，再經(jīng)冷凍干燥、輻射滅菌后，即得大豆異黃酮緩釋微球。微球的平均粒徑為90um，載藥量為9%，包封率為65%。實(shí)施例3
稱取O. 6g分子量在7000 14000之間的PVA，并將其溶于30ml雙蒸水中，制成聚乙烯醇雙蒸水溶液；稱取O. Ig的大豆異黃酮和O. 5g分子量在4000 40000之間的PLGA，將二者加入到IOml的二氯甲烷中，并在常溫下超聲15min，使大豆異黃酮和PLGA充分溶解在二氯甲烷中；然后在800r/min的攪拌速度下，將超聲后的大豆異黃酮、PLGA和二氯甲烷的混合溶液滴加到聚乙烯醇雙蒸水溶液中，攪拌15min后，將攪拌速度調(diào)為300r/min，繼續(xù)攪拌5h至二氯甲烷完全揮發(fā)；然后將上述不含二氯甲烷的混合物在溫度為4°C、轉(zhuǎn)速為3000r/min的離心機(jī)中離心分離5min，離心分離后混合物上層為液體，下層為固體微球，收集下層固體微球并水洗3次除去其表面殘留雜質(zhì)，再經(jīng)冷凍干燥、輻射滅菌后，即得平均粒徑為20um的大豆異黃酮緩釋微球。實(shí)施例4
稱取O. 3g分子量在7000 14000之間的PVA，并將其溶于30ml雙蒸水中，制成聚乙烯醇雙蒸水溶液；稱取O. 03g的大豆異黃酮和O. 5g分子量在4000 40000之間的PLGA，將二者加入到IOml的二氯甲烷中，并在常溫下超聲5min，使大豆異黃酮和PLGA充分溶解在二氯甲烷中；然后在800r/min的攪拌速度下，將超聲后的大豆異黃酮、PLGA和二氯甲烷的混合溶液滴加到聚乙烯醇雙蒸水溶液中，攪拌5min后，將攪拌速度調(diào)為300r/min，繼續(xù)攪拌3h至二氯甲烷完全揮發(fā)；然后將上述不含二氯甲烷的混合物在溫度為4°C、轉(zhuǎn)速為3000r/min的離心機(jī)中離心分離5min，離心分離后混合物上層為液體，下層為固體微球，收集下層固體微球并水洗3次除去其表面殘留雜質(zhì)，再經(jīng)冷凍干燥、輻射滅菌后，即得平均粒徑為125um的大豆異黃酮緩釋微球。實(shí)施例5
稱取2. Og分子量在7000 14000之間的PVA，并將其溶于50ml雙蒸水中，制成聚乙烯醇雙蒸水溶液；稱取O. Ig的大豆異黃酮和I. Og分子量在4000 40000之間的PLGA，將二者加入到IOml的二氯甲烷中，并在常溫下超聲5min，使大豆異黃酮和PLGA充分溶解在二氯甲烷中；然后在800r/min的攪拌速度下，將超聲后的大豆異黃酮、PLGA和二氯甲烷的混合溶液滴加到聚乙烯醇雙蒸水溶液中，攪拌5min后，將攪拌速度調(diào)為300r/min，繼續(xù)攪拌3h至二氯甲烷完全揮發(fā)；然后將上述不含二氯甲烷的混合物在溫度為4°C、轉(zhuǎn)速為3000r/min的離心機(jī)中離心分離5min，離心分離后混合物上層為液體，下層為固體微球，收集下層固體微球并水洗3次除去其表面殘留雜質(zhì)，再經(jīng)冷凍干燥、輻射滅菌后，即得平均粒徑為145um的大豆異黃酮緩釋微球。實(shí)施例6
稱取2. 5g分子量在7000 14000之間的PVA，并將其溶于50ml雙蒸水中，制成聚乙烯醇雙蒸水溶液；稱取O. 03g的大豆異黃酮和O. 3g分子量在4000 40000之間的PLGA，將二者加入到IOml的二氯甲烷中，并在常溫下超聲lOmin，使大豆異黃酮和PLGA充分溶解在二氯甲烷中；然后在800r/min的攪拌速度下，將超聲后的大豆異黃酮、PLGA和二氯甲烷的混合溶液滴加到聚乙烯醇雙蒸水溶液中，攪拌IOmin后，將攪拌速度調(diào)為300r/min，繼續(xù)攪拌3h至二氯甲烷完全揮發(fā)；然后將上述不含二氯甲烷的混合物在溫度為4°C、轉(zhuǎn)速為3000r/min的離心機(jī)中離心分離5min，離心分離后混合物上層為液體，下層為固體微球，收集下層固體微球并水洗3次除去其表面殘留雜質(zhì)，再經(jīng)冷凍干燥、輻射滅菌后，即得平均粒徑為145um的大豆異黃酮緩釋微球。為說明本發(fā)明制備的大豆異黃酮緩釋微球的長(zhǎng)效緩釋性能，分別以純品染料木素(GEN)、黃豆苷元、黃豆黃素、染料木苷或大豆苷作為大豆異黃酮的組成物質(zhì)進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)一
以純品染料木素(GEN)作為大豆異黃酮的組成物質(zhì)，按照實(shí)施例2的制備方法制成載藥量為9%的GEN緩釋微球，進(jìn)行如下對(duì)照試驗(yàn)
試驗(yàn)組
挑選健康小鼠備用；將按照本實(shí)施例制得的載藥量為9%的GEN緩釋微球溶解于橄欖油中，微球濃度為350mg/ml，每只小鼠給藥量為O. 00416ml/g，腹部皮下注射；注射藥物后分別在 2h，4h，6h，8h，12h, 24h, 48h, 96h, 168h, 264h, 360h, 480h, 600h, 720h 麻醉后腹主動(dòng)脈取血；采用高效液相色譜法測(cè)定小鼠血液中GEN的濃度，GEN緩釋微球血藥濃度-時(shí)間曲線見圖I。對(duì)照組
挑選健康小鼠備用；將普通的GEN溶解于橄欖油中，濃度為50mg/ml，每只小鼠給藥量為O. 00416ml/g，腹部皮下注射;注射藥物后分別在O. 5h，lh，2h，4h，6h，8h，IOh, 12h，16h，20h，24h麻醉后腹主動(dòng)脈取血；采用高效液相色譜法測(cè)定小鼠血液中GEN的濃度，GEN血藥濃度-時(shí)間曲線見圖2。結(jié)論
對(duì)照組GEN在24h時(shí)測(cè)得的平均血藥濃度為77. 29ng/ml，而本發(fā)明實(shí)施例所制得的GEN緩釋微球在24h時(shí)測(cè)得的平均血藥濃度大于600ng/ml。720h時(shí)測(cè)得的平均血藥濃度為63. 85ng/ml，且無突釋現(xiàn)象，這表示本發(fā)明制備的GEN緩釋微球具有良好的緩釋性能。試驗(yàn)證明實(shí)施例2的實(shí)施方式為本發(fā)明的最優(yōu)方式，能夠使緩釋微球的藥物作用時(shí)間和包封率均達(dá)到最大。試驗(yàn)二
以純品黃豆苷元作為大豆異黃酮的組成物質(zhì)，按照實(shí)施例3的制備方法制成黃豆苷元緩釋微球，并按照上述試驗(yàn)方法進(jìn)行對(duì)照試驗(yàn)試驗(yàn)結(jié)果表明對(duì)照組黃豆苷元在24h時(shí)HPLC測(cè)得的平均血藥濃度為51. 20ng/ml，而本發(fā)明所制得的黃豆苷元緩釋微球在24h時(shí)HPLC測(cè)得的平均血藥濃度大于500ng/ml。720h時(shí)HPLC測(cè)得的平均血藥濃度為45. 37ng/ml，且無突釋現(xiàn)象，這表示本發(fā)明制備的黃豆苷元緩釋微球具有良好的緩釋性能。試驗(yàn)三
以純品黃豆黃素作為大豆異黃酮的組成物質(zhì)，按照實(shí)施例4的制備方法制成黃豆黃素緩釋微球，并按照上述試驗(yàn)方法進(jìn)行對(duì)照試驗(yàn)
試驗(yàn)結(jié)果表明對(duì)照組黃豆黃素在24h時(shí)HPLC測(cè)得的平均血藥濃度為48. 31ng/ml，而本發(fā)明所制得的黃豆黃素緩釋微球在24h時(shí)HPLC測(cè)得的平均血藥濃度大于400ng/ml。720h時(shí)HPLC測(cè)得的平均血藥濃度為36. 40ng/ml，且無突釋現(xiàn)象，這表示本發(fā)明制備的黃豆黃素緩釋微球具有良好的緩釋性能。
試驗(yàn)四
以純品染料木苷作為大豆異黃酮的組成物質(zhì)，按照實(shí)施例5的制備方法制成染料木苷緩釋微球，并按照上述試驗(yàn)方法進(jìn)行對(duì)照試驗(yàn)
試驗(yàn)結(jié)果表明對(duì)照組染料木苷在24h時(shí)HPLC測(cè)得的平均血藥濃度為70. 25ng/ml，而本發(fā)明所制得的染料木苷緩釋微球在24h時(shí)HPLC測(cè)得的平均血藥濃度大于450ng/ml。720h時(shí)HPLC測(cè)得的平均血藥濃度為54. 23ng/ml，且無突釋現(xiàn)象，這表示本發(fā)明制備的染料木苷緩釋微球具有良好的緩釋性能。試驗(yàn)五
以純品大豆苷作為大豆異黃酮的組成物質(zhì)，按照實(shí)施例6的制備方法制成大豆苷緩釋微球，并按照上述試驗(yàn)方法進(jìn)行對(duì)照試驗(yàn)
試驗(yàn)結(jié)果表明對(duì)照組大豆苷在24h時(shí)HPLC測(cè)得的平均血藥濃度為73. 50ng/ml，而本發(fā)明所制得的大豆苷緩釋微球在24h時(shí)HPLC測(cè)得的平均血藥濃度大于450ng/ml。720h時(shí)HPLC測(cè)得的平均血藥濃度為65. 30ng/ml，且無突釋現(xiàn)象，這表示本發(fā)明制備的大豆苷緩釋微球具有良好的緩釋性能。上述試驗(yàn)表明，本發(fā)明大豆異黃酮緩釋微球的制備方法制成的緩釋微球?qū)Υ蠖巩慄S酮的各種成分均具有明顯的緩釋作用，能有效提高大豆異黃酮類藥物的作用時(shí)間，減少用藥頻率。
權(quán)利要求
1.一種大豆異黃酮緩釋微球的制備方法，其特征在于包括如下步驟 (1)、取0.3 2.58的聚乙烯醇溶于30 50ml的雙蒸水中，制成聚乙烯醇雙蒸水溶液； (2)、將O.03 O. Ig的大豆異黃酮和O. 3 I. Og的PLGA加入到IOml的二氯甲烷中，混合后在常溫下超聲乳化5 15分鐘； 所述的大丑異黃酮與PLGA的重量比為1:15 1:5 ; (3)、在轉(zhuǎn)速為800r/min的攪拌速度下，將步驟(2)超聲乳化后得到的混合溶液滴加到聚乙烯醇雙蒸水溶液中，攪拌5 15min后，將攪拌速度調(diào)為300r/min，繼續(xù)攪拌3 5h至二氯甲烷完全揮發(fā)； (4)、將步驟(3)所得的混合物在溫度為4°C、轉(zhuǎn)速為3000r/min的離心機(jī)中離心5min,離心后混合物上層為液體，下層為固體微球，收集下層固體微球并用水洗除去其表面殘留雜質(zhì)，再經(jīng)冷凍干燥、輻射滅菌后，即得平均粒徑為20 145um的大豆異黃酮緩釋微球。
2.如權(quán)利要求I所述的一種大豆異黃酮緩釋微球的制備方法，其特征在于所述PLGA的分子量為4000 40000，PVA的分子量為7000 14000。
全文摘要
一種大豆異黃酮緩釋微球的制備方法，涉及藥物緩釋制劑的制備方法。首先準(zhǔn)備一定濃度的聚乙烯醇雙蒸水溶液，然后將重量比為1:15～1:5的大豆異黃酮和PLGA在二氯甲烷中常溫超聲乳化一段時(shí)間，然后將超聲后的混合液滴加到聚乙烯醇雙蒸水溶液中，攪拌至二氯甲烷完全揮發(fā)，再將所得的混合液離心分離即制得大豆異黃酮緩釋微球。本發(fā)明以PLGA為基質(zhì)材料制備的大豆異黃酮緩釋微球，具有優(yōu)良的緩釋性能，延長(zhǎng)了微球在體外的釋放時(shí)間；其中制備的染料木素緩釋微球的緩釋期可達(dá)30天，而且微球表面光滑，顆粒圓整無粘連，粒徑可以控制，載藥量在7%以上，包封率在60%以上。
文檔編號(hào)A61P15/12GK102652736SQ201210110299
公開日2012年9月5日 申請(qǐng)日期2012年4月16日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月16日
發(fā)明者馮笑山, 張廣平, 韓丹 申請(qǐng)人:河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院