專利名稱：抗豬圓環(huán)病毒2型卵黃抗體及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種卵黃抗體，尤其涉及一種抗豬圓環(huán)病毒2型卵黃抗體及其制備方法，本發(fā)明還涉及由該抗豬圓環(huán)病毒2型卵黃抗體制備而成的制劑以及它們在制備預防、治療或診斷由豬圓環(huán)病毒2型所導致的各種疾病的藥物或試劑中的用途，屬于卵黃抗體的制備和應用領域。
背景技術：
豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)是近幾年來發(fā)現(xiàn)的一種DNA病毒，是圓環(huán)病毒科圓環(huán)病毒屬的成員之一，無囊膜，呈20面體對稱，直徑為17nm，是目前獸醫(yī)學上發(fā)現(xiàn)的最小的動物病毒。豬圓環(huán)病毒能引起仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征、豬呼吸疾病綜合征、豬皮膚和腎病綜合征等多種疾病(總稱為豬圓環(huán)病毒病，PCVDs)。該病毒在豬的淋巴系統(tǒng)增殖，可引起免疫細胞的凋亡，造成免疫抑制，導致機體抵抗力下降，誘發(fā)多種病毒和細菌的混合感染和繼發(fā)感染， 死亡率多為10% -30%，嚴重時高達40%。PCV包括兩種基因型，PCVl和PCV2，其中PCVl沒有致病性，但廣泛存在于豬體內，PCV2具有致病性，而且感染非常普遍，幾乎所有的豬群都感染了 PCV2。PCV2可以與多種病原混合感染，造成多系統(tǒng)、多組織的損傷，與PCV2感染相關的疾病有斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)、豬呼吸道疾病綜合癥(PRDC)、豬皮炎與腎炎綜合征(PDNS)、PCV2相關繁殖障礙等。PCV2相關疾病最主要的是PMWS，被感染仔豬表現(xiàn)為衰弱、生長緩慢、呼吸困難、淋巴結腫大等癥狀。豬群中PMWS的發(fā)病率通常在4% -30%之間，死亡率在50% -90%之間，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經濟損失。自1991年首次在加拿大發(fā)生PMWS以來，現(xiàn)在全世界大多數(shù)國家都報道過該病。據估計，歐洲每年因為PMWS造成的損失高達6億歐元。PCV2對中國造成的損失目前還沒有權威的統(tǒng)計，但是，中國自2000年報道豬群中出現(xiàn)PCV2感染以來，各地陸續(xù)出現(xiàn)被感染案例，PCV2流行范圍已經波及全國。近年來，人們致力于PCV2疫苗的開發(fā)應用研究，國外的部分產品已經進行注冊，并投入了應用，中國農業(yè)部也于2010年注冊通過了圓環(huán)病毒疫苗，并且投入生產，PCV2疫苗已經在預防豬圓環(huán)病毒病上發(fā)揮了顯著的效果。但是該病毒在體外培養(yǎng)不產生細胞病變，病毒繁殖能力低，難于獲得高產量的病毒，使疫苗的制備存在一定的限制。卵黃抗體是禽類的一種免疫球蛋白，IgY的形成和免疫作用受腔上囊控制，當機體受到外界特異性抗原的刺激，誘發(fā)一系列的免疫應答反應，刺激B細胞分化成能分泌特異性抗體的漿細胞，分泌大量的特異性抗體進入血液中。在產蛋禽體內，血液中的特異性抗體逐步移行到卵巢和輸卵管中，并在卵黃中蓄集形成卵黃免疫球蛋白。特異性卵黃抗體(IgY)具有來源廣泛、無毒副作用、易采集及穩(wěn)定性好、經消毒還能保持力較高活性等特點，被廣泛應用于疾病的診斷和防治。目前，國內應用IgY防治禽類疾病的種類很多，主要有傳染性法氏囊病、小鵝瘟、雞新城疫、鵝病毒性肝炎、蕃鴨細小病毒病、雞減蛋綜合癥、禽腦脊髓炎、雞傳染性喉氣管炎及鴨疫李氏桿菌病等。卵黃抗體是通過對蛋雞注射抗原獲得。但是，免疫蛋雞產生的免疫應答卻并不能被預測。因為有很多因素影響免疫效果，最主要的影響因素有抗原(包括劑量和分子量)、佐劑的種類、免疫程序、免疫次數(shù)和免疫間隔等(Schade R，Calzado E G，Sarmiento R, Chacana P A, Porankiewicz-Asplund J, Terzolo H R. Chicken egg yolkantibodies(IgY-technology) a re view of progess in production and use inresearch and human and veterinary medicine. ATLA. 2005,33 :129-154)。在豬病防治方面，研究和應用比較成熟的是仔豬的大腸桿菌性腹瀉卵黃抗體，卵黃抗體因其制備簡單、易提取、性質均一等優(yōu)點，在免疫技術、免疫臨測、人畜疾病治療方面有著很大的發(fā)展?jié)摿Α５菄鴥韧怅P于抗豬圓環(huán)病毒卵黃抗體的制備相關研究還未見報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的之一是提供一種抗豬圓環(huán)病毒2型卵黃抗體；本發(fā)明目的之二是提供一種制備抗豬圓環(huán)病毒2型卵黃抗體的方法；為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術方案如下一種抗豬圓環(huán)病毒卵黃抗體，其制備方法包括以下步驟(I)用豬圓環(huán)病毒疫苗免疫非免疫產蛋母雞；(2)收集免疫產蛋母雞所產雞蛋；(3)從所收集的雞蛋中提取并純化卵黃抗體。其中，步驟(I)中所述的免疫方式為胸肌注射；優(yōu)選的，所述的胸肌注射的次數(shù)為五次；其中，五次免疫的間隔時間優(yōu)選為首免后間隔兩周二免，二免后間隔兩周三免，三免后間隔四周四免，四免后間隔兩周五免。本發(fā)明通過實驗發(fā)現(xiàn)，前四次免疫注射由滅活的豬圓環(huán)病毒和佐劑乳化成的疫苗，第五免注射豬圓環(huán)病毒活病毒，所獲得的抗豬圓環(huán)病毒卵黃抗體效價相對較高；其中，所述的佐劑優(yōu)選為弗氏佐劑。更優(yōu)選的，首次免疫注射由滅活的豬圓環(huán)病毒和弗氏完全佐劑乳化成的疫苗，第二次至第四次免疫注射由滅活的豬圓環(huán)病毒和弗氏不完全佐劑乳化成的疫苗。本發(fā)明通過大量的試驗進一步發(fā)現(xiàn)，在免疫過程中免疫劑量和佐劑對豬圓環(huán)病毒卵黃抗體的產生水平有著非常顯著的影響本發(fā)明通過實驗首先發(fā)現(xiàn)，在進行免疫時僅注射圓環(huán)病毒(未加佐劑)，在首免后卵黃抗體水平會迅速升高，但隨后下降也較快，再次免疫后，抗體水平又迅速升高，但是很快又降下來，波動較大，而且整體上抗體水平較低，相較而言，注射圓環(huán)病毒疫苗組(圓環(huán)病毒加佐劑)抗體水平持續(xù)而穩(wěn)定，在五免之后，效價可達I : 640，并且至試驗結束時，效價依然保持穩(wěn)定，而僅注射圓環(huán)病毒組效價最高只能達到I : 320，抗體效價始終低于注射圓環(huán)病毒疫苗組(圓環(huán)病毒加佐劑)。本發(fā)明還比較了免疫劑量變化與等量加強免疫產生抗體水平的變化趨勢，發(fā)現(xiàn)免疫劑量變化產生的抗體水平較高，這可能是由于等量加強免疫，降低了蛋雞對于疫苗的敏感性，而免疫劑量的變化，有助于抗體的激發(fā)。本發(fā)明通過大量的試驗最終發(fā)現(xiàn)，采用下述的免疫方案進行免疫，所產生的抗豬圓環(huán)病毒的抗體水平為最高，且能夠持續(xù)、穩(wěn)定的表達將滅活的豬圓環(huán)病毒抗原與等體積的弗氏完全佐劑混合乳化后得到首免用滅活疫苗，用Iml該滅活疫苗胸肌注射產蛋母雞；將滅活的豬圓環(huán)病毒抗原與等體積的弗氏不完全佐劑混合乳化后得到二免、三免和四免用的滅活疫苗；首免后間隔兩周二免，用2ml滅活疫苗胸肌注射產蛋母雞；二免后間隔兩周三免，用4ml滅活疫苗胸肌注射產蛋母雞；三免后間隔四周四免，用2m滅活疫苗胸肌注射廣蛋母雞；四免后間隔兩周五免，用2ml豬圓環(huán)病毒活病毒胸肌注射產蛋母雞。本發(fā)明采用不同的免疫方案免疫產蛋母雞，血清中均產生了特異性的抗體。不同的免疫方案在首免后的兩周均已產生抗體，在二免(第四周)后抗體水平明顯升高，隨著三免(第六周)、四免(第十周)等加強免疫后，抗體的水平可持續(xù)長達12周不下降?？傮w來看，采用上述最優(yōu)選的免疫方案，抗體水平較高，并且持續(xù)穩(wěn)定，波動較小，到第12周時，卵黃抗體效價最高可達I : 640，并且能夠持續(xù)8周以上不下降。步驟⑵中三免后采用ELISA檢測抗體效價，當卵黃抗體效價達到I : 256時，收集免疫產蛋母雞所產雞蛋。卵黃中含有大量的蛋白質和脂肪，其中大部分的蛋白質和脂肪以脂蛋白的形式存在，不溶于水。這些物質增加了卵黃的粘稠度，未經處理的卵黃抗體，注射到動物體內吸收慢，可能會造成肌肉壞死，而且產生的刺激較大，為了避免這些缺點，需要采取一定的方法提取出純度較高的卵黃抗體，也就是水溶性的Y卵黃球蛋白。從卵黃中得到卵黃抗需要經過分離、提取和純化等步驟。至于如何從所收集的雞蛋中分離、提取并純化卵黃抗體，這些方式均為本領域所屬技術人員所通曉，例如，可以采用水稀釋、硫酸銨鹽析、透析、濃縮等手段從雞蛋中提取并純化卵黃抗體；本發(fā)明采用上述提取和純化方法，最終卵黃抗體的回收率為5. 17mg/ml卵黃。分離就是將卵黃中的脂肪和蛋白質除去，得到水溶性成分。其中水稀釋法最為簡單，符合相似相溶原理。水溶性組分溶于水中，而不溶于水的脂蛋白則以沉淀的形式分離出來，加鹽酸調整PH至5. 2左右，可以將不溶性組分完全分離開來，經離心，全部沉淀下來(Akita et al. , 1992)。本試驗即采用了這種方法。提取是將Y卵黃球蛋白從水溶性組分中分離出來，常用的方法有無機物沉淀法和有機物沉淀法。蛋白質在中性鹽溶液中的溶解度很低，不同的蛋白質在相同的溶液中溶解度不同，根據這個原理，我們選擇合適的濃度，將卵黃抗體分離出來，本試驗采用了硫酸銨兩步鹽析法，提取出了卵黃抗體。本試驗為了獲得大量的卵黃抗體，采用水稀釋法對IgY進行粗提，然后又用硫酸銨兩步鹽析提純，透析袋除鹽，之后進行濃縮獲得卵黃抗體，取得了良好的效果，最終獲得卵黃抗體的量為5. 17mg/ml，較張文俊等人的提取量低，可能是由于硫酸銨飽和度不同引起的。從電泳結果來看，水稀釋兩步硫酸銨鹽析法提純的卵黃抗體雜帶較少，純度較高，并且在涼凍干燥后，抗體效價沒有降低。作為參考，本發(fā)明的一個從所收集的雞蛋中分離、提取和純化卵黃抗體的整體技術方案如下將所收集的雞蛋消毒后，收集卵黃液，用蒸餾水稀釋后，用0. IM鹽酸調pH至5. 2，攪勻后過夜；離心，取上清，用飽和硫酸銨鹽析沉淀，加飽和硫酸銨溶液至55%飽和度，混勻，待完全溶解后過夜；離心，棄去上清，沉淀用含雙抗200單位的生理鹽水溶解，恢復至原卵黃液體積，再加入飽和硫酸銨至33 %飽和度，混勻，置室溫過夜；離心，除去上清液，將沉淀透析、濃縮，冷凍干燥即得。本發(fā)明還可以進一步將所制備得到的抗豬圓環(huán)病毒卵黃抗體按照常規(guī)的獸用藥的制劑方法制備成各種制劑，例如注射劑或口服制劑等，優(yōu)選為注射劑。作為參考，例如，可以將所制備的抗豬圓環(huán)病毒卵黃抗體用注射用生理鹽水溶解后，調整IgY的濃度分裝，該注射劑內含有效價> 256的抗豬圓環(huán)病毒的卵黃抗體，即得抗豬圓環(huán)病毒卵黃抗體注射劑。本發(fā)明方法所制備的抗豬圓環(huán)病毒卵黃抗體水平高，卵黃抗體表達持續(xù)穩(wěn)定、波動小，卵黃抗體效價最高可達I : 640，并且能夠持續(xù)8周以上不下降。體外和體內中和試驗證實，本發(fā)明所制備的抗豬圓環(huán)病毒卵黃抗體能夠有效抑制豬圓環(huán)病毒，具有良好的免疫保護效力，能將其制備成用于預防或治療由豬圓環(huán)病毒所引起的各種疾病的藥物或制劑。


圖I蛋白含量測定標準曲線。圖2不同免疫方案免疫后血清抗體水平。圖3不同免疫方案免疫后IgY水平。圖4不同免疫方案免疫后血清抗體效價。圖5不同免疫方案免疫后IgY水平。圖6分離純化組分聚丙烯酰受凝膠電泳圖。圖7PCR 檢測結果；M. DL 2000DNA Marker ；1.胸腺；2.心；3.肝；4.脾；5.肺；
6.腎；7.淋巴結；8.陽性對照；9.陰性對照。
具體實施例方式下面結合具體實施例來進一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點和特點將會隨著描述而更為清楚。但這些實施例僅是范例性的，并不對本發(fā)明的范圍構成任何限制。本領域技術人員應該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對本發(fā)明技術方案的細節(jié)和形式進行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護范圍內。實施例I抗豬圓環(huán)病毒卵黃抗體及注制劑的制備I.試驗材料I. I主要試劑PCV2WH株購自國家獸醫(yī)微生物菌種保藏中心；編號CAU0673 ；牛血清白蛋白(BSA):購自北京鼎國昌盛生物技術有限公司弗氏完全佐劑購自武漢鼎國生物技術有限公司弗氏不完全佐劑購自武漢鼎國生物技術有限公司四甲基聯(lián)苯胺二鹽酸(TMB):購自華美生物工程公司辣根過氧化物酶標記的羊抗雞IgY :購自北京鼎國昌盛生物技術有限公司
蛋白marker :購自北京鼎國昌盛生物技術有限公司I. 2試驗動物及分組選取32只22周齡海蘭褐蛋雞，分為四組，對照組和三個處理組，各8只，均單籠飼養(yǎng)，試驗前預飼一個月，自由采食和自由飲水，定期清理衛(wèi)生和消毒，待產蛋量達到穩(wěn)定開始試驗。2試驗方法2. I 免疫原制備PCV2 PCV2WH株(購自國家獸醫(yī)微生物菌種保藏中心；編號CAU0673)與細胞液按I : 10的體積比例接種到新消化的細胞懸液中，37°C培養(yǎng)24h，待細胞長成單層后，按Tischer法加入300mmoI D-氨基葡萄糖處理,37°C 30min,棄去D-氨基葡萄糖,加入含3%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)48h，收獲病毒，_20°C保存?zhèn)溆?。PCV2弗氏完全佐劑疫苗取PCV2 (病毒量為107TCID5(l/ml)，加入0. 3 %的甲醛，放置于37°C恒溫培養(yǎng)箱24h進行滅活，期間搖動數(shù)次。加入等量的弗氏完全佐劑，用玻璃注射器進行乳化，制備成首免滅活疫苗，4°C保存?zhèn)溆?。PCV2弗氏不完全佐劑疫苗將滅活PCV2與等量弗氏不完全佐劑乳化得到，制備好疫苗后于4°C保存?zhèn)溆谩?. 2蛋雞的免疫產蛋雞隨機分成3個處理組和I個對照組，免疫方式均為胸肌注射，共免疫5次，首免后間隔兩周二免，二免后間隔兩周三免，三免后間隔四周四免，四免后間隔兩周五免，具體免疫情況如下對照組注射生理鹽水，分別為1ml、2ml、4ml、2ml、2ml。試驗組I (免疫方案I):首免Iml (弗氏完全佐劑滅活苗)，二免、三免、四免分別為2ml、4ml、2ml (弗氏不完全佐劑滅活苗)，五免2ml (PCV2)。試驗組2 (免疫方案2):首免2ml(弗氏完全佐劑滅活苗)，二免、三免、四免均為2ml (弗氏不完全佐劑滅活苗)，五免2ml (PCV2)。試驗組3(免疫方案3):首免、二免、三免、四免、五免分別為lml、2ml、4ml、2ml、2ml(PCV2)。2. 3樣品的采集首免后每隔兩周對試驗組和對照組的蛋雞米血，從翼靜脈米2ml血液，直于4 C冰箱過夜，之后放恒溫箱lh，4000r離心5min，收集上清，置于-20°C冰箱備用。每隔兩周收集雞蛋，檢測抗體效價，待卵黃抗體出現(xiàn)陽性，開始收集雞蛋。2. 4IgY的分離、提取、純化收集對照組和處理組的雞蛋，采用水稀釋、硫酸銨鹽析和透析袋透析方法純化卵黃抗體。具體的過程如下(I)水稀釋取出要進行處理的雞蛋，用水沖洗干凈，然后用0. 5%的新潔爾滅浸泡20min，自然晾干。用卵黃分離器分離蛋黃和蛋清，將蛋黃放在濾紙上滾動，將殘留的蛋清去除，接著倒入燒杯中，挑破卵黃膜，收集卵黃，加入9倍卵黃體積的蒸餾水，用IOOmM HCL調整pH至
5.2，磁力攪拌器混勻后4°C過夜，4°C 10000r/min離心30min，收集上清，即為WSF。(2)硫酸銨鹽析在收集的上清液中加入飽和硫酸銨溶液至55%飽和度，邊加邊攪拌混勻，上清液會從最初的清亮變?yōu)榘咨鞚?，之后隨著硫酸銨的加入再轉為清亮，待完全混勻后4°C過夜，10000r/min離心15min,充去上清,保留沉淀,用生理鹽水重懸至原體積,再加入飽和硫酸銨溶液至33%飽和度，攪拌混勻，4°C過夜，10000r/min離心15min，棄去上清，沉淀用生理鹽水重懸至原體積，為二次鹽析組分。
(3)透析袋除鹽把二次鹽析獲取的蛋白溶液裝入透析袋內，將透析袋放入10倍體積的去離子水中進行透析72h，期間多次換水，用1% Bacl2檢測透析液中的硫酸銨，1% AgNO3檢測Nacl，判定透析是否完成，無沉淀代表透析完成，透析完成后用PEG 20000濃縮，提高抗體濃度，4°C保存?zhèn)溆茫騙20°C冰箱凍存一晚上后，進行冷凍干燥，制備成卵黃粉，保存待用。 2. 5抗體效價的檢測每隔兩周用間接ELISA和膠體金兩種方法檢測血清抗體和卵黃抗體的效價。膠體金檢測步驟(I)在檢測卡的加樣孔內加入2滴(100 U I)待檢血清或血液樣品(2)將檢測卡平放于桌面上，在室溫下靜置20min內判定結果。超過20min的結果只能作為參考。2. 6抗原最佳包被濃度的確定用完整的PCV2病毒顆粒作為抗原包被酶標板，采用方陣滴定法，包被前用BCA蛋白測定試劑盒測定病毒蛋白濃度為2.805mg/ml。陰陽性血清均用稀釋液從I : 40倍開始稀釋，稀釋成5個梯度，抗原用抗原包被液從I : 50倍開始稀釋，稀釋成8個梯度。2. 7各提取步驟卵黃抗體蛋白含量測定采用BCA蛋白含量測定試劑盒測定蛋黃中總蛋白質含量，具體步驟如下根據試劑盒步驟，稀釋一系列蛋白標準品，用酶標儀在562nm波長下測定OD值，以OD值為縱坐標，蛋白質濃度為橫坐標，繪制標準曲線，待測樣品適當稀釋，使樣品的濃度在標準曲線的線性范圍內，同樣方法測定OD值，根據標準曲線，計算蛋白質濃度。標準曲線見圖I。3試驗結果3. I血清抗體方陣滴定結果表I包被抗原和血清稀釋度的確定(OD45tl)
權利要求
1.一種抗豬圓環(huán)病毒卵黃抗體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟(1)用豬圓環(huán)病毒疫苗免疫非免疫產蛋母雞；(2)收集免疫產蛋母雞所產雞蛋；(3)從所收集的雞蛋中提取并純化卵黃抗體。
2.按照權利要求I所述的方法，其特征在于步驟(I)中所述的免疫方式為胸肌注射。
3.按照權利要求2所述的方法，其特征在于所述的胸肌注射的次數(shù)為五次。
4.按照權利要求3所述的方法，其特征在于所述的五次胸肌注射的間隔時間為首免后間隔兩周二免，二免后間隔兩周三免，三免后間隔四周四免，四免后間隔兩周五免。
5.按照權利要求4所述的方法，其特征在于所述五次胸肌注射中前四次免疫注射由滅活的豬圓環(huán)病毒和佐劑乳化成的疫苗，第五次免疫注射豬圓環(huán)病毒活病毒。
6.按照權利要求5所述的方法，其特征在于前四次免疫注射的方式為首次免疫注射由滅活的豬圓環(huán)病毒和弗氏完全佐劑乳化成的疫苗，第二次至第四次免疫注射由滅活的豬圓環(huán)病毒和弗氏不完全佐劑乳化成的疫苗。
7.按照權利要求5所述的方法，其特征在于 所述的前四次免疫注射的方法如下將滅活的豬圓環(huán)病毒抗原與等體積的弗氏完全佐劑混合乳化后得到首免用滅活疫苗，用Iml該滅活疫苗胸肌注射產蛋母雞；將滅活的豬圓環(huán)病毒抗原與等體積的弗氏不完全佐劑混合乳化后得到二免、三免和四免用的滅活疫苗；首免后間隔兩周~■免，用2ml滅活疫苗胸肌注射廣蛋母雞；_■免后間隔兩周二免，用4ml滅活疫苗胸肌注射產蛋母雞；三免后間隔四周四免，用2m滅活疫苗胸肌注射產蛋母雞； 所述的第五次免疫注射方式如下四免后間隔兩周五免，用2ml豬圓環(huán)病毒活病毒胸肌注射產蛋母雞。
8.按照權利要求I所述的方法，其特征在于步驟(3)中從所收集的雞蛋中提取并純化卵黃抗體的方法包括水稀釋、硫酸銨鹽析、透析或/和濃縮。
9.由權利要求1-8任何一項方法所制備得到的抗豬圓環(huán)病毒卵黃抗體。
10.權利要求9所述的抗豬圓環(huán)病毒卵黃抗體在制備預防、治療或診斷由豬圓環(huán)病毒所導致疾病的藥物或試劑中的用途。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種抗豬圓環(huán)病毒卵黃抗體及其制備方法和應用。本發(fā)明的抗豬圓環(huán)病毒卵黃抗體包括以下方法制備得到(1)用豬圓環(huán)病毒疫苗免疫非免疫產蛋母雞；(2)收集免疫產蛋母雞所產雞蛋；(3)從所收集的雞蛋中提取并純化卵黃抗體。本發(fā)明方法所制備的抗豬圓環(huán)病毒卵黃抗體水平高，卵黃抗體表達持續(xù)穩(wěn)定、波動小，卵黃抗體效價最高可達1∶640，并且能夠持續(xù)8周以上不下降。體外和體內中和試驗證實，本發(fā)明所制備的抗豬圓環(huán)病毒卵黃抗體能夠有效抑制豬圓環(huán)病毒，具有良好的免疫保護效力，能將其制備成用于預防或治療由豬圓環(huán)病毒所引起疾病的藥物或制劑。
文檔編號A61P31/20GK102617731SQ201210115618
公開日2012年8月1日 申請日期2012年4月19日 優(yōu)先權日2012年4月19日
發(fā)明者何啟蓋, 許銀平, 馬立保 申請人:華中農業(yè)大學