專利名稱：一種從微孔草籽粕中分離純化黃酮類化合物的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種黃酮類化合物的制備方法，尤其涉及一種從微孔草籽柏中分離純化黃酮類化合物的制備方法。
背景技術：
黃酮類化合物廣 泛分布于植物界，在花果葉中含量十分豐富。黃酮類化合物藥理作用顯著，例如抗微生物、抗氧化、抗炎以及細胞毒性等作用，這些作用賦予了其潛在的防治心血管疾病、神經(jīng)衰弱和某些癌癥的功能。因此，黃酮類化合物和人類健康有著密切的關系。微孔草(Microula sikkimenis Hemsl )屬紫草科年生草本植物，主要分布于我國甘肅、西藏、青海等地。據(jù)估算，青海省一年野生微孔草籽產(chǎn)量就有I. 4萬噸，資源豐富，為本發(fā)明提供了資源保證。超臨界CO2流體萃取技術，操作方便，且CO2無毒、無味、價廉易得、不易燃，既可以保證提取的天然產(chǎn)物中無溶劑殘留，又可充分保持其活性，已廣泛應用于醫(yī)藥、食品、化工等領域。膜分離技術是一門多學科交叉的分離純化技術，適于處理熱敏性和生物活性物質，且膜分離裝置簡單，操作方便，易于實現(xiàn)自動控制。目前，已廣泛應用于食品、醫(yī)藥、生物、環(huán)保、化工、冶金、能源、石油、水處理、電子、仿生等領域，產(chǎn)生了巨大的經(jīng)濟效益和社會效益，已成為當今分離科學中最重要的手段之一。本發(fā)明將超臨界萃取技術與膜分離技術運用到一起來分離純化微孔草籽柏中的黃酮類化合物，操作簡單、方便，且避免了傳統(tǒng)分離純化技術中高溫對樣品活性的破壞，為分離純化技術上的一大創(chuàng)新。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種簡便、快速、成本低廉的從微孔草籽柏中分離純化黃酮類化合物的制備方法。為解決上述問題，本發(fā)明所述的一種從微孔草籽柏中分離純化黃酮類化合物的制備方法，包括以下步驟
⑴將微孔草籽經(jīng)粉碎、過1(T80目篩后，得到草籽粉；
⑵將所述草籽粉在萃取溫度為25 50°C、分離溫度為35 55°C、壓力15 35 MPa、時間為30^120 min條件下進行超臨界CO2萃取，得到籽油；
⑶所述草籽粉提取籽油后得到籽柏；
⑷將所述籽柏在萃取溫度為25 50°C、分離溫度為35 55°C、壓力15 35 MPa、時間為3(T120 min、夾帶劑為無水乙醇、夾帶劑流速為f 10L/h的條件下進行超臨界CO2萃取，得到含有黃酮類化合物的萃取物；
(5)將所述萃取物在2(T70°C溫度下減壓揮干乙醇，得到黃酮粗提物；該黃酮粗提物按I =5^1:20的料液質量體積比溶解在質量濃度為5 50%的乙醇溶液中，得到萃取物乙醇溶液
(6)將所述萃取物乙醇溶液在壓力為0.005 3MPa、流速為f300 mL/min、溫度為15 45°C、時間為2(Tl20min的條件下采用陶瓷膜進行微濾，得到除雜溶液；
(7)將所述除雜溶液在壓力為2 20MPa、溫度為15 45°C、流速為l(T300mL/min、時間為2(Tl20min的條件下采用超濾膜進行分離，得到透過液；所述透過液在2(T70°C溫度下干燥至恒重，即得棕黃色粉末黃酮類化合物。所述步驟(6)中陶瓷膜的孔徑為0. OflO Um0所述步驟(7)中超濾膜的截留分子量為500 10000。本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比具有以下優(yōu)點
I、本發(fā)明將超臨界CO2萃取技術與膜分離技術運用到一起來分離純化微孔草籽柏中的黃酮類化合物，操作簡單、方便，避免了傳統(tǒng)分離純化技術中高溫對樣品活性的破壞，且CO2無毒、無味、價廉易得、不易燃，既可以保證提取的天然產(chǎn)物中無溶劑殘留，又可充分保持其活性。2、本發(fā)明采用陶瓷膜除雜，可有效去除萃取物中的顆粒物、細菌等雜質。3、本發(fā)明采用超濾有機膜分離純化，得到的黃酮類化合物性質穩(wěn)定，純度高(可達到30%以上)，適合開發(fā)醫(yī)藥保健品。4、本發(fā)明采用超濾有機膜分離純化，工藝簡單，具有省時、能耗低、設備投資小等優(yōu)點。5、本發(fā)明所用原料資源量豐富，有效地降低了生產(chǎn)成本。
具體實施例方式實施例I 一種從微孔草籽柏中分離純化黃酮類化合物的制備方法，包括以下步驟
⑴將5kg微孔草籽經(jīng)粉碎、過10目篩后，得到草籽粉。⑵將草籽粉在萃取溫度為25°C、分離溫度為35°C、壓力15MPa、時間為30 min條件下進行超臨界CO2萃取，得到籽油。⑶草籽粉提取籽油后得到4. 5kg籽柏。⑷將籽柏在萃取溫度為25°C、分離溫度為35°C、壓力15MPa、時間為30 min、夾帶劑為無水乙醇、夾帶劑流速為lL/h的條件下進行超臨界CO2萃取，得到0. 7 L含有黃酮類化合物的萃取物。(5)將萃取物在20°C溫度下減壓揮干乙醇，得到黃酮粗提物；該黃酮粗提物按I :5的料液質量體積比(kg/L)溶解在質量濃度為5%的乙醇溶液中，得到萃取物乙醇溶液。(6)將萃取物乙醇溶液在壓力為0. 005MPa、流速為lmL/min、溫度為15°C、時間為20min的條件下采用孔徑為0. 01 Um的陶瓷膜進行微濾，除去懸浮物，得到除雜溶液。(7)將除雜溶液在壓力為2MPa、溫度為15°C、流速為10mL/min、時間為20min的條件下采用截留分子量為500的超濾膜進行分離，得到透過液；透過液在20°C溫度下干燥至恒重，即得0.05 kg棕黃色粉末黃酮類化合物。該黃酮類化合物經(jīng)蘆丁比色法測試，其黃酮類化合物的含量為30%。實施例2 —種從微孔草籽柏中分離純化黃酮類化合物的制備方法，包括以下步驟
⑴將5kg微孔草籽經(jīng)粉碎、過80目篩后，得到草籽粉。⑵將草籽粉在萃取溫度為50°C、分離溫度為55°C、壓力35MPa、時間為120 min條件下進行超臨界CO2萃取，得到籽油。⑶草籽粉提取籽油后得到3. 4 kg籽柏。⑷將籽柏在萃取溫度為50°C、分離溫度為55°C、壓力35MPa、時間為120 min、夾帶劑為無水乙醇、夾帶劑流速為10L/h的條件下進行超臨界CO2萃 取，得到21L含有黃酮類化合物的萃取物。(5)將萃取物在70°C溫度下減壓揮干乙醇，得到黃酮粗提物；該黃酮粗提物按I :20的料液質量體積比(kg/L)溶解在質量濃度為50%的乙醇溶液中，得到萃取物乙醇溶液。(6)將萃取物乙醇溶液在壓力為3MPa、流速為300 mL/min、溫度為45°C、時間為120min的條件下采用孔徑為10 y m的陶瓷膜進行微濾，得到除雜溶液。(7)將除雜溶液在壓力為20MPa、溫度為45°C、流速為300mL/min、時間為120min的條件下采用截留分子量為10000的超濾膜進行分離，得到透過液；透過液在70°C溫度下干燥至恒重，即得0. 35kg棕黃色粉末黃酮類化合物。該黃酮類化合物經(jīng)蘆丁比色法測試，其黃酮類化合物的含量為50%。實施例3 —種從微孔草籽柏中分離純化黃酮類化合物的制備方法，包括以下步驟
⑴將5kg微孔草籽經(jīng)粉碎、過20目篩后，得到草籽粉。⑵將草籽粉在萃取溫度為45V、分離溫度為50°C、壓力30MPa、時間為120 min條件下進行超臨界CO2萃取，得到籽油。⑶草籽粉提取籽油后得到3. 3 kg籽柏。⑷將籽柏在萃取溫度為30°C、分離溫度為40°C、壓力20MPa、時間為60 min、夾帶劑為無水乙醇、夾帶劑流速為5L/h的條件下進行超臨界CO2萃取，得到10. 5L含有黃酮類化合物的萃取物。(5)將萃取物在60°C溫度下減壓揮干乙醇，得到黃酮粗提物；該黃酮粗提物按I :10的料液質量體積比(kg/L)溶解在質量濃度為40%的乙醇溶液中，得到萃取物乙醇溶液。(6)將萃取物乙醇溶液在壓力為2. 5MPa、流速為100mL/min、溫度為30°C、時間為100 min的條件下采用孔徑為5 u m的陶瓷膜進行微濾，得到除雜溶液。(7)將除雜溶液在壓力為15MPa、溫度為30°C、流速為300mL/min、時間為IOOmin的條件下采用截留分子量為1000的超濾膜進行分離，得到透過液；透過液在60°C溫度下干燥至恒重，即得0. 27kg棕黃色粉末黃酮類化合物。該黃酮類化合物經(jīng)蘆丁比色法測試，其黃酮類化合物的含量為40%。實施例4 一種從微孔草籽柏中分離純化黃酮類化合物的制備方法，包括以下步驟
⑴將5kg微孔草籽經(jīng)粉碎、過30目篩后，得到草籽粉。⑵將草籽粉在萃取溫度為40°C、分離溫度為40°C、壓力25MPa、時間為90 min條件下進行超臨界CO2萃取，得到籽油。 ⑶草籽粉提取籽油后得到3. 9 kg籽柏。
(4)將籽柏在萃取溫度為30°C、分離溫度為40°C、壓力25MPa、時間為90 min、夾帶劑為無水乙醇、夾帶劑流速為8L/h的條件下進行超臨界CO2萃取，得到12. 3L含有黃酮類化合物的萃取物。(5)將萃取物在50°C溫度下減壓揮干乙醇，得到黃 酮粗提物；該黃酮粗提物按I :15的料液質量體積比(kg/L)溶解在質量濃度為30%的乙醇溶液中，得到萃取物乙醇溶液。(6)將萃取物乙醇溶液在壓力為0. 5MPa、流速為5 mL/min、溫度為35°C、時間為90min的條件下采用孔徑為4 y m的陶瓷膜進行微濾，得到除雜溶液。(7)將除雜溶液在壓力為lOMPa、溫度為35°C、流速為100mL/min、時間為90min的條件下采用截留分子量為1000的超濾膜進行分離，得到透過液；透過液在50°C溫度下干燥至恒重，即得0. 29kg棕黃色粉末黃酮類化合物。該黃酮類化合物經(jīng)蘆丁比色法測試，其黃酮類化合物的含量為70%。實施例5 —種從微孔草籽柏中分離純化黃酮類化合物的制備方法，包括以下步驟
⑴將5kg微孔草籽經(jīng)粉碎、過40目篩后，得到草籽粉。⑵將草籽粉在萃取溫度為30°C、分離溫度為45°C、壓力20MPa、時間為60 min條件下進行超臨界CO2萃取，得到籽油。⑶草籽粉提取籽油后得到4. 3 kg籽柏。⑷將籽柏在萃取溫度為30°C、分離溫度為40°C、壓力25MPa、時間為60 min、夾帶劑為無水乙醇、夾帶劑流速為6L/h的條件下進行超臨界CO2萃取，得到6. IL含有黃酮類化合物的萃取物。(5)將萃取物在50°C溫度下減壓揮干乙醇，得到黃酮粗提物；該黃酮粗提物按I :15的料液質量體積比(kg/L)溶解在質量濃度為20%的乙醇溶液中，得到萃取物乙醇溶液。(6)將萃取物乙醇溶液在壓力為0. 08MPa、流速為120 mL/min、溫度為35°C、時間為60min的條件下采用孔徑為5 u m的陶瓷膜進行微濾，得到除雜溶液。(7)將除雜溶液在壓力為15MPa、溫度為30°C、流速為150mL/min、時間為60min的條件下采用截留分子量為5000的超濾膜進行分離，得到透過液；透過液在40°C溫度下干燥至恒重，即得0. 5kg棕黃色粉末黃酮類化合物。該黃酮類化合物經(jīng)蘆丁比色法測試，其黃酮類化合物的含量為40%。實施例6 —種從微孔草籽柏中分離純化黃酮類化合物的制備方法，包括以下步驟
⑴將5kg微孔草籽經(jīng)粉碎、過60目篩后，得到草籽粉。⑵將草籽粉在萃取溫度為35°C、分離溫度為40°C、壓力18MPa、時間為120 min條件下進行超臨界CO2萃取，得到籽油。⑶草籽粉提取籽油后得到4. 0 kg籽柏。⑷將籽柏在萃取溫度為35°C、分離溫度為40°C、壓力25MPa、時間為120 min、夾帶劑為無水乙醇、夾帶劑流速為10L/h的條件下進行超臨界CO2萃取，得到20. 5L含有黃酮類化合物的萃取物。(5)將萃取物在40°C溫度下減壓揮干乙醇，得到黃酮粗提物；該黃酮粗提物按I :8的料液質量體積比(kg/L)溶解在質量濃度為15%的乙醇溶液中，得到萃取物乙醇溶液。
(6)將萃取物乙醇溶液在壓力為0. 2MPa、流速為150mL/min、溫度為30°C、時間為90min的條件下采用孔徑為5 u m的陶瓷膜進行微濾，得到除雜溶液。(7)將除雜溶液在壓力為lOMPa、溫度為30°C、流速為150mL/min、時間為60min的條件下采用截留分子量為8000的超濾膜進行分離，得到透過液；透過液在40°C溫度下干燥至恒重，即得0. 67kg棕黃色粉末黃酮類化合物。該黃酮類化合物經(jīng)蘆丁比色法測試，其黃酮類化合物的含量為35%。實施例7 —種從微孔草籽柏中分離純化黃酮類化合物的制備方法，包括以下步驟
⑴將5kg微孔草籽經(jīng)粉碎、過30目篩后，得到草籽粉。⑵將草籽粉在萃取溫度為45°C、分離溫度為50°C、壓力25MPa、時間為120min條件下進行超臨界CO2萃取，得到籽油。⑶草籽粉提取籽油后得到3. 2 kg籽柏。⑷將籽柏在萃取溫度為45°C、分離溫度為50°C、壓力25MPa、時間為120min、夾帶劑為無水乙醇、夾帶劑流速為5L/h的條件下進行超臨界CO2萃取，得到10. 5L含有黃酮類化合物的萃取物。(5)將萃取物在50°C溫度下減壓揮干乙醇，得到黃酮粗提物；該黃酮粗提物按I :20的料液質量體積比(kg/L)溶解在質量濃度為15%的乙醇溶液中，得到萃取物乙醇溶液。(6)將萃取物乙醇溶液在壓力為0. 2MPa、流速為200mL/min、溫度為30°C、時間為90min的條件下采用孔徑為5 的陶瓷膜進行微濾，得到除雜溶液。(7)將除雜溶液在壓力為13MPa、溫度為30°C、流速為200mL/min、時間為90min的條件下采用截留分子量為8000的超濾膜進行分離，得到透過液；透過液在50°C溫度下干燥至恒重，即得0. 26kg棕黃色粉末黃酮類化合物。該黃酮類化合物經(jīng)蘆丁比色法測試，其黃酮類化合物的含量為75%。權利要求
1.一種從微孔草籽柏中分離純化黃酮類化合物的制備方法，包括以下步驟 ⑴將微孔草籽經(jīng)粉碎、過1(Γ80目篩后，得到草籽粉； ⑵將所述草籽粉在萃取溫度為25 50°C、分離溫度為35 55°C、壓力15 35 MPa、時間為3(T120 min條件下進行超臨界CO2萃取，得到籽油； ⑶所述草籽粉提取籽油后得到籽柏； ⑷將所述籽柏在萃取溫度為25 50°C、分離溫度為35 55°C、壓力15 35 MPa、時間為3(T120 min、夾帶劑為無水乙醇、夾帶劑流速為f 10L/h的條件下進行超臨界CO2萃取，得到含有黃酮類化合物的萃取物； (5)將所述萃取物在2(T70°C溫度下減壓揮干乙醇，得到黃酮粗提物；該黃酮粗提物按I =5^1:20的料液質量體積比溶解在質量濃度為5 50%的乙醇溶液中，得到萃取物乙醇溶液； (6)將所述萃取物乙醇溶液在壓力為O.005 3MPa、流速為f300 mL/min、溫度為15 45°C、時間為2(Tl20min的條件下采用陶瓷膜進行微濾，得到除雜溶液； (7)將所述除雜溶液在壓力為2 20MPa、溫度為15 45°C、流速為l(T300mL/min、時間為2(Tl20min的條件下采用超濾膜進行分離，得到透過液；所述透過液在2(T70°C溫度下干燥至恒重，即得棕黃色粉末黃酮類化合物。
2.如權利要求I所述的一種從微孔草籽柏中分離純化黃酮類化合物的制備方法，其特征在于所述步驟(6)中陶瓷膜的孔徑為O. 0Γ10 μ m。
3.如權利要求I所述的一種從微孔草籽柏中分離純化黃酮類化合物的制備方法，其特征在于所述步驟⑴中超濾膜的截留分子量為50(Γ10000。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從微孔草籽粕中分離純化黃酮類化合物的制備方法，該方法包括以下步驟⑴將微孔草籽經(jīng)粉碎、過篩后，得到草籽粉；⑵將草籽粉進行超臨界CO2萃取，得到籽油；⑶草籽粉提取籽油后得到籽粕；⑷將籽粕進行超臨界CO2萃取，得到含有黃酮類化合物的萃取物；⑸將萃取物經(jīng)減壓揮干得到黃酮粗提物；該黃酮粗提物溶解在乙醇溶液中，得到萃取物乙醇溶液；⑹將萃取物乙醇溶液進行微濾，得到除雜溶液；⑺將除雜溶液采用超濾膜進行分離，得到透過液；該透過液干燥至恒重，即得黃酮類化合物。本發(fā)明將超臨界CO2萃取技術與膜分離技術運用到一起來分離純化微孔草籽粕中的黃酮類化合物，操作簡單、方便，避免了傳統(tǒng)分離純化技術中高溫對樣品活性的破壞。
文檔編號A61P9/00GK102626434SQ201210121950
公開日2012年8月8日 申請日期2012年4月25日 優(yōu)先權日2012年4月25日
發(fā)明者岳會蘭, 張琳, 趙曉輝, 陳濤, 韓發(fā) 申請人:中國科學院西北高原生物研究所