專利名稱：一種包載難溶性藥物的泊洛沙姆/兩親性多糖混合膠束的制備和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物制劑領(lǐng)域，涉及一種針對(duì)難溶性藥物的泊洛沙姆/兩親性多糖混合膠束的制備方法及其在口服給藥方面的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
口服給藥是眾多給藥途徑中最普遍的一種給藥方式，因?yàn)樗煤蛿y帶方便，容易為一般患者所接受，特別是對(duì)那些需要長(zhǎng)期或者每天用藥的患者來(lái)說(shuō)，藥物口服的順應(yīng)性大大優(yōu)于其他給藥途徑。此外，為了減少毒副作用，細(xì)胞毒性劑類藥物的口服比注射給藥更適合長(zhǎng)期用藥，可以達(dá)到更好的疾病治療效果。

能夠口服給藥的藥物，其活性成分應(yīng)該首先溶解在人體胃腸道的液體中，才有可能被人體吸收。然而，低水溶性卻是很多活性治療物質(zhì)所固有的特質(zhì)(如抗癌活性化合物中，很多為多環(huán)化合物，例如喜樹堿、紫杉醇或他莫昔芬等)，近半數(shù)經(jīng)過(guò)高通量篩選出的、具有良好治療潛力的候選化合物，因?yàn)樗苄圆涣迹唤K止了進(jìn)一步的研發(fā)。聚合物膠束以其性質(zhì)穩(wěn)定、生物相容性好、增溶能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，受到越來(lái)越多的關(guān)注。多糖是所有生命有機(jī)體的重要組成部分，在控制細(xì)胞分裂，誘導(dǎo)細(xì)胞分化以及維持生命體正常代謝方面有著重要的意義。此外，由于多糖具有優(yōu)良的生物相容性和生物降解性，主鏈結(jié)構(gòu)易于化學(xué)修飾(如酯化、接枝與交聯(lián)等)而改善其理化性質(zhì)等優(yōu)點(diǎn)，被越來(lái)越多的研究者修飾成兩親性多糖，用于制備成聚合物膠束。CN101791411A和CN101745119A公開了這些制備兩親性多糖偶聯(lián)物的技術(shù)。將聚合物膠束開發(fā)為口服給藥系統(tǒng)有助于減少藥物對(duì)胃腸道的刺激性，增加吸收部位的藥物濃度，提高藥物在胃腸道中的穩(wěn)定性，又由于胃腸道擁有巨大的吸收面積，溶解后的疏水性藥物很容易被吸收，再加上膠束粒徑較小，可以通過(guò)EPR效應(yīng)和內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞，從而提高了載藥聚合物膠束的生物利用度。但是由于胃腸道中復(fù)雜的環(huán)境以及一些膜蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)的作用，如P-糖蛋白外排系統(tǒng)和細(xì)胞色素P450酶的代謝作用，使得聚合物膠束的口服生物利用度的提高仍然受到的很大的限制。泊洛沙姆是由親水段聚氧乙烯(PEO)和疏水段聚氧丙烯(PPO)按照ΡΕ0-ΡΡ0-ΡΕ0的結(jié)構(gòu)形成的，具有較好的生物相容性，較低的毒性。泊洛沙姆聚合物膠束既可以增加難溶藥物的溶解性又能夠減少P-糖蛋白介導(dǎo)的藥物外排作用，并且能夠抑制細(xì)胞色素P450酶的代謝作用，從而能夠提高藥物的口服生物利用度。然而,泊洛沙姆膠束的包封率和載藥量低，臨界膠束濃度(CMC)高，使得其膠束的穩(wěn)定性降低，從而使其的應(yīng)用受到限制。針對(duì)以上問(wèn)題，本專利制備了一種包載難溶性藥物的泊洛沙姆/兩親性多糖混合膠束，并將其應(yīng)用在口服給藥系統(tǒng)中。這種混合膠束兼具了兩親性多糖偶聯(lián)物膠束和泊洛沙姆膠束的優(yōu)點(diǎn)，彌補(bǔ)了這兩種膠束單獨(dú)應(yīng)用時(shí)的缺陷，為聚合物膠束用于口服給藥系統(tǒng)提供了新的思路。該混合膠束不僅提高了難溶性藥物的溶解度，在疏水作用、立體絡(luò)合作用、靜電作用、氫鍵作用和化學(xué)交聯(lián)作用下，具有良好的動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定性。兩親性多糖偶聯(lián)物的引入降低了泊洛沙姆的CMC，提高了混合膠束的熱力學(xué)穩(wěn)定性，并且大大提高了膠束的載藥能力；同時(shí)，該混合物兼具兩親性多糖偶聯(lián)物介導(dǎo)的內(nèi)吞作用和泊洛沙姆介導(dǎo)的抑制P-糖蛋白外排系統(tǒng)的作用和細(xì)胞色素P450酶的代謝作用，從而能夠明顯提高藥物的口服生物利用度，延長(zhǎng)藥物在體內(nèi)的循環(huán)作用時(shí)間
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種包載有難溶性藥物的泊洛沙姆/兩親性多糖混合膠束。該混合膠束通過(guò)化學(xué)鍵之間的相互作用或者物理包裹作用包載難溶性藥物，改善了藥物的溶解性，載藥量高，穩(wěn)定性好，毒副作用降低，口服生物利用度提高。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述包載難溶性藥物的泊洛沙姆-兩親性多糖混合膠束的制備方法。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述包載難溶性藥物的泊洛沙姆-兩親性多糖混合膠束在口服給藥中的應(yīng)用。本發(fā)明中，兩親性多糖和泊洛沙姆對(duì)難溶性藥物均有增溶作用。兩親性多糖應(yīng)用于混合膠束克服了泊洛沙姆臨界膠束濃度高，載藥量低的問(wèn)題；混合膠束中的泊洛沙姆又能夠抑制P-糖蛋白的外排作用和細(xì)胞色素P450酶的代謝作用，提高了難溶性藥物的口服生物利用度。所述的包載難溶性藥物的泊洛沙姆-兩親性多糖混合膠束的制備方法，其特征包括如下步驟兩親性多糖偶聯(lián)物與水按重量比為3 50 : 1000的比例溶解，泊洛沙姆與水按重量比為I 50 : 1000的比例溶解，得到泊洛沙姆/兩親性多糖混合膠束；將治療有效量的難溶或微溶與水的藥學(xué)活性或藥理活性分子用藥學(xué)上可接受溶劑溶解，與上述混合膠束混合后，經(jīng)超聲或高壓均質(zhì)處理，溶液用透析法或超濾法或柱分離法除去有機(jī)溶劑和小分子，凍干制得粒徑為10 IOOOnm的納米膠束。所述的泊洛沙姆/兩親性多糖混合膠束，是指泊洛沙姆與兩親性多糖按照重量比為O. 05 10 I的比例混合。所述的泊洛沙姆，其特征為親水鏈聚氧乙烯占60% 80%的泊洛沙姆。所述的兩親性多糖偶聯(lián)物，選自下述親水端和疏水端的組合，所述親水端選自未分級(jí)肝素、低分子量肝素、脫硫酸化肝素、透明質(zhì)酸、軟骨素、多硫酸化軟骨素、海藻酸和原本不具有羧基但引入羧基的多糖殼聚糖、羧甲基殼聚糖、琥珀酰殼聚糖、葡聚糖、真菌多糖；所述的疏水基團(tuán)為選自全反式維甲酸、9-順式維甲酸、甲氨蝶呤、氨基蝶呤、齊墩果酸、藤黃酸、甘草次酸、熊果酸、黃芩苷、2-羥基苯甲酸、2-(乙酰氧基)苯甲酸、水楊酸、吲哚美辛、布洛芬、萘普生、雙氯芬酸、酮洛芬、芬布芬、甲芬那酸、吡洛芬、氟比洛芬、苯丁酸氮芥、美法侖、膽燒酸、長(zhǎng)鏈燒基。所述的難溶性藥物，是指每Iml水中溶解度小于Img或I μ L且屬于下列類別的物質(zhì)紫杉醇/烷類、喜樹堿類、長(zhǎng)春堿類、阿霉素類、環(huán)孢菌素類、黃酮類、二氫吡啶類、抗生素類、維A酸類、他丁類、依托泊苷、揮發(fā)油類物質(zhì)或上述物質(zhì)的衍生物。所述的包載難溶性藥物的泊洛沙姆/兩親性多糖混合膠束的應(yīng)用，其特征在于可應(yīng)用于口服給藥，劑型選自片劑、膠囊劑、丸劑、糖漿劑、顆粒劑、口服溶液劑。本發(fā)明所制備的混合膠束在凍干時(shí)可加入凍干保護(hù)劑，凍干保護(hù)劑可選自右旋糖酐、甘露醇、葡萄糖、乳糖、蔗糖、海藻糖中的一種或幾種。凍干保護(hù)劑的量按照膠束溶液體積計(jì)算，每份膠束溶液優(yōu)選加入O. 01-0. I % (w/v)的凍干保護(hù)劑，過(guò)濾后冷凍干燥。本發(fā)明的有益效果一、本發(fā)明將兩親性多糖偶聯(lián)物與泊洛沙姆相結(jié)合制備成混合膠束，兩親性多糖降低了泊洛沙姆的臨界膠束濃度，提高了載藥量和膠束的穩(wěn)定 性，具有良好的增溶作用，并且能夠延長(zhǎng)體內(nèi)循環(huán)、減少網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞的吞噬，增加藥物的靶向性，提高安全性。二、本發(fā)明提供的包載難溶性藥物的泊洛沙姆/兩親性多糖混合膠束，泊洛沙姆能夠抑制P-糖蛋白的外排作用和細(xì)胞色素P450酶的代謝作用，從而可以在膠束作用的基礎(chǔ)上進(jìn)一步提高難溶性藥物的口服生物利用度。三、本發(fā)明制備的混合膠束不含有任何有機(jī)溶劑，安全性高，粒徑在10 IOOOnm范圍內(nèi)可控，溶解性好，穩(wěn)定性好，制備方法簡(jiǎn)單，工藝成熟，產(chǎn)率高，可制備成片劑，膠囊劑，丸劑、糖漿劑等制劑用于口服給藥。


附圖I :泊洛沙姆/低分子量肝素-全反式維甲酸混合膠束的粒徑圖譜附圖2 :包載紫杉醇的泊洛沙姆/低分子量肝素-全反式維甲酸混合膠束的腸吸收實(shí)驗(yàn)結(jié)果
具體實(shí)施例方式下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明加以進(jìn)一步的說(shuō)明，但下述實(shí)施例并不限制本專利的權(quán)利范圍。實(shí)施例I :泊洛沙姆/兩親性多糖偶聯(lián)物的CMC值測(cè)定I、臨界膠束濃度(CMC):采用熒光探針?lè)y(cè)定CMC。以芘為熒光探針，芘是一種疏水性芳香化合物，對(duì)環(huán)境極性變化極為敏感。當(dāng)泊洛沙姆/兩親性多糖偶聯(lián)物的濃度低于CMC時(shí)，溶液中不會(huì)形成膠束，芘溶解在極性的水中；當(dāng)其濃度高于CMC時(shí)，膠束形成，芘向膠束內(nèi)核的疏水部分分配，從而進(jìn)入非極性環(huán)境，繼而在其熒光譜中可以觀察到一系列變化，如熒光強(qiáng)度將增強(qiáng)，放射光譜中振動(dòng)精細(xì)結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，激光光譜中(0，0)波段紅移。因此，通過(guò)以芘的發(fā)射光譜中的I1A3比(在固定的激發(fā)波長(zhǎng)下掃描，I1, I3分別代表發(fā)射光譜中第一和第三強(qiáng)峰的熒光強(qiáng)度比)或激發(fā)光譜中1338/1333比，(激發(fā)光譜中波長(zhǎng)分別為338nm和333nm的熒光強(qiáng)度比)對(duì)泊洛沙姆/兩親性多糖偶聯(lián)物的濃度作圖即得其表觀CMC,結(jié)果見表I、表2、表3。表I泊洛沙姆F127 (A) /兩親性多糖偶聯(lián)物⑶的CMC (mg/ml)A:B
0:1 0.05:1 0.25:1 0.5:1 1:1 10:1 1:0 B_
低分子量肝素-全反式維甲酸0.040 0.0420.0490.0880.3760.4850.985
硫酸軟骨素-甘草次酸0.066 0.0690.0710.0970.4420.5420.985
竣甲基殼聚糖-黃芩苷0.072 0.0750.0790.1150.4970.5720.985
透明質(zhì)酸-藤黃酸0.068 0.0690.0720.1080.4770.5650.985
N-辛基-N-精氨酸殼聚糖0.070 0.0730.0790.0990.4900.5690.985表2泊洛沙姆/兩親性多糖偶聯(lián)物(0.25 l,w w)的CMC (mg/ml)
低分子量肝素-全硫酸軟骨素-甘草葡聚糖-甲氨蝶呤真菌多糖-齊墩果竣甲基殼聚糖-黃 反式維甲酸次酸酸芩苷
F680.0550.0770.0720.0900.086
F770.0690.0540.0750.0680.077
F870.0470.0720.0650.0810.078表3泊洛沙姆/兩親性多糖偶聯(lián)物(0.30 l,w w)的CMC (mg/ml)
透明質(zhì)酸-藤黃酸殼聚糖-膽烷酸』m 肝素-布洛芬十六烷基殼聚糖
F880.0650.0900.0790.0970.093
F980.0800.0530.0800.0700.086
F1080.0750.0430.0690.0620.074實(shí)施例2 :包載紫杉醇的泊洛沙姆/低分子量肝素-全反式維甲酸混合膠束的制備和表征I、制備工藝(I)透析法18mg低分子量肝素-全反式維甲酸溶于3ml蒸餾水，20mg泊洛沙姆溶于Iml的蒸餾水，分別攪拌30min。低分子量肝素-全反式維甲酸溶液與不同重量比的泊洛沙姆P188混合。紫杉醇IOmg溶解在乙醇中。在混合溶液中，加入紫杉醇/乙醇溶液，室溫?cái)嚢?5min后，冰浴探頭超聲30min,蒸懼水透析Id (MWCO = 3500),透析后產(chǎn)物離心3000rpm, IOmin,上清液用O. 8 μ m濾膜過(guò)濾，冷凍干燥即得包載紫杉醇的泊洛沙姆/低分子量肝素-全反式維甲酸混合膠束。(2)乳化溶劑蒸發(fā)法18mg低分子量肝素-全反式維甲酸溶于3ml蒸餾水，20mg泊洛沙姆溶于Iml的蒸餾水，分別攪拌30min。低分子量肝素-全反式維甲酸溶液與不同重量比的泊洛沙姆混合。紫杉醇IOmg溶解在二氯甲烷中。在混合溶液中，加入紫杉醇/ 二氯甲烷溶液，室溫?cái)嚢?5min，冰浴探頭超聲30min，室溫敞口攪拌過(guò)夜，使二氯甲烷揮發(fā)，離心3000rpm，15min，用O. 8 μ m濾膜過(guò)濾，冷凍干燥即得包載紫杉醇的泊洛沙姆/低分子量肝素-全反式維甲酸混合膠束。2、包載紫杉醇的低分子量肝素-全反式維甲酸混合膠束中紫杉醇的含量測(cè)定用HPLC(LC_2010C, Shimadzu, Japan)方法進(jìn)行含量測(cè)定。流動(dòng)相為甲醇水=75 : 25 (v/v),色譜柱為 Lichrospher C18 (150 X 4. 6 μ m),柱子粒徑為 5 μ m。流速為 I. OmL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為 227nm(SF1D-IOA, UV detector, Shimadzu, Japan),柱溫為 30°C,注射樣品體積為20μ1。以公式(I)計(jì)算樣品的載藥量。結(jié)果見表3。
權(quán)利要求
1.一種包載難溶性藥物的泊洛沙姆/兩親性多糖混合膠束的制備和應(yīng)用，其特征在于泊洛沙姆和兩親性多糖偶聯(lián)物作為載體形成混合膠束，將難溶性藥物包裹在疏水性內(nèi)核內(nèi)。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的包載難溶性藥物的泊洛沙姆/兩親性多糖混合膠束的制備方法，其特征包括如下步驟兩親性多糖偶聯(lián)物與水按重量比為3 50 1000的比例溶解，泊洛沙姆與水按重量比為I 50 1000的比例溶解，得到泊洛沙姆/兩親性多糖混合膠束；將治療有效量的難溶或微溶與水的藥學(xué)活性或藥理活性分子用藥學(xué)上可接受溶劑溶解，與上述混合膠束混合后，經(jīng)超聲或高壓均質(zhì)處理，溶液用透析法或超濾法或柱分離法除去有機(jī)溶劑和小分子，凍干制得粒徑為10 IOOOnm的納米膠束。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的泊洛沙姆/兩親性多糖混合膠束，泊洛沙姆與兩親性多糖按照重量比為0. 05 10 I的比例混合。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的泊洛沙姆，其特征為親水鏈聚氧乙烯占60% 80 %的泊洛沙姆。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的兩親性多糖偶聯(lián)物，選自下述親水端和疏水端的組合，所述親水端選自未分級(jí)肝素、低分子量肝素、脫硫酸化肝素、透明質(zhì)酸、軟骨素、多硫酸化軟骨素、海藻酸和原本不具有羧基但引入羧基的多糖殼聚糖、羧甲基殼聚糖、琥珀酰殼聚糖、葡聚糖、真菌多糖；所述的疏水端選自全反式維甲酸、9-順式維甲酸、甲氨蝶呤、氨基蝶呤、齊墩果酸、藤黃酸、甘草次酸、熊果酸、黃芩苷、2-羥基苯甲酸、2-(乙酰氧基)苯甲酸、水楊酸、 吲哚美辛、布洛芬、萘普生、雙氯芬酸、酮洛芬、芬布芬、甲芬那酸、吡洛芬、氟比洛芬、苯丁酸氮芥、美法侖、膽烷酸、長(zhǎng)鏈烷基。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的難溶性藥物，是指每Iml水中溶解度小于Img或Iill且屬于下列類別的物質(zhì)紫杉醇/烷類、喜樹堿類、長(zhǎng)春堿類、阿霉素類、環(huán)孢菌素類、黃酮類、二氫吡啶類、抗生素類、維A酸類、他丁類、依托泊苷、揮發(fā)油類物質(zhì)或上述物質(zhì)的衍生物。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的包載難溶性藥物的泊洛沙姆/兩親性多糖混合膠束的應(yīng)用， 其特征在于可應(yīng)用于口服給藥，劑型選自片劑、膠囊劑、丸劑、糖漿劑、顆粒劑、口服溶液劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種包載有難溶性藥物的泊洛沙姆/兩親性多糖混合膠束制劑的制備和應(yīng)用。通過(guò)透析法或溶劑揮發(fā)法制備難溶性藥物的泊洛沙姆/兩親性多糖混合膠束，該混合膠束臨界膠束濃度低，能明顯延長(zhǎng)穩(wěn)定時(shí)間，載藥量高，并具有納米膠束的長(zhǎng)循環(huán)作用和抑制P-糖蛋白及細(xì)胞色素P450酶的代謝的雙重作用，提高了口服給藥的生物利用度。該混合膠束制備方法簡(jiǎn)單，工藝成熟，產(chǎn)率高，可制備成片劑，膠囊劑，丸劑、糖漿劑等制劑用于口服給藥。
文檔編號(hào)A61K47/48GK102626518SQ20121014110
公開日2012年8月8日 申請(qǐng)日期2012年5月9日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月9日
發(fā)明者劉宏盼, 周建平, 姚靜, 楊暉, 法蒂瑪 申請(qǐng)人:中國(guó)藥科大學(xué)