專利名稱：纖細(xì)薯蕷皂苷的用途以及含有纖細(xì)薯蕷皂苷的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及菝葜活性成分纖細(xì)薯蕷皂苷的用途，以及含有纖細(xì)薯蕷皂苷的藥物組合物。
背景技術(shù)：
菝葜，是百合科植物菝葜Smilax chinaL.的根莖,在我國(guó)主要分布于長(zhǎng)江以南地區(qū)，資源豐富。《中國(guó)藥典》2005年版I部有收載，為較常用中藥材，具有祛風(fēng)利濕，解毒散瘀之功效，主要用于婦科多種炎癥，療效顯著。中藥制劑“金剛藤膠囊”，臨床用于治療婦科炎癥疾患，療效顯著。但該中藥制劑為傳統(tǒng)生產(chǎn)工藝制備，其抗炎物質(zhì)基礎(chǔ)尚不清楚。有研究通過比較菝葜總皂苷和總黃酮的血液流變學(xué)結(jié)果和大鼠子宮炎癥評(píng)價(jià)，證明菝葜中的皂苷類成分是菝葜治療慢性盆腔炎的有效部位之一；而黃酮類成分的治療效果并不顯著。隨著對(duì)菝葜研究的深入，越來越多的研究致力于將菝葜的有效活性部位或活性成分進(jìn)行提取、 分離、純化，減少無效雜質(zhì)，以期達(dá)到提高生物利用度和藥效的目的。但是，菝葜的確切有效部位或有效成分至今仍未有定論。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是分離純化菝葜的有效成分、驗(yàn)證其活性，并制備含有其有效成分的藥物組合物。本發(fā)明還涉及其有效成分的分離純化方法。本發(fā)明的一個(gè)方面涉及纖細(xì)薯蕷皂苷用于制備預(yù)防和/或治療急性或慢性炎癥或者鎮(zhèn)痛的藥物的用途。在本發(fā)明中，所述炎癥可以為變質(zhì)性炎、滲出性炎或增生性炎。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述炎癥為急性炎癥。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述炎癥為慢性炎癥。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述炎癥為婦科炎癥，例如為盆腔炎、附件炎或附件炎性包塊。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述婦科炎癥為盆腔炎，例如為慢性盆腔炎。本發(fā)明的第二方面涉及纖細(xì)薯蕷皂苷作為菝葜有效活性成分的用途。在本發(fā)明中，所述有效成分是指具有一定生物活性，具有治療作用，可以用分子式和結(jié)構(gòu)式表示，并具有一定物理常數(shù)(如熔點(diǎn)，沸點(diǎn)，旋光度，溶解度等)的單體化合物。本發(fā)明的第三方面涉及一種藥物組合物，其包括治療有效量的纖細(xì)薯蕷皂苷，任選地，以及一種或多種藥用輔料。在本發(fā)明中，所述藥用輔料包括但不限于粘附劑、分散劑或表面活性劑等。在本發(fā)明中，纖細(xì)薯蕷皂苷可以作為單一有效成分做成制劑，也可以與其他藥用或非藥用成分配合使用。將纖細(xì)薯蕷皂苷利用粘附劑、潤(rùn)濕劑和分散劑等合適的藥劑學(xué)輔料使其在體液中可以高效的潤(rùn)濕、分散，從而得到纖細(xì)薯蕷皂苷的制劑等技術(shù)均在本發(fā)明申請(qǐng)保護(hù)的范圍內(nèi)。在實(shí)際應(yīng)用中，還可以根據(jù)需要加入其他常規(guī)輔料及成型劑，比如淀粉、糊精、預(yù)膠化淀粉、微晶纖維素、羥丙基纖維素、殼聚糖、卡波姆、羧甲基纖維素鈉、聚維酮、聚乙二醇、交聯(lián)聚維酮、微粉硅膠、枸櫞酸、甘露醇等。在本發(fā)明中，粘附劑優(yōu)選淀粉漿、聚維酮和干淀粉，對(duì)于不溶于體液的藥物不僅具有良好的粘附作用而且聚維酮不僅溶于水而且易溶于乙醇，易于纖細(xì)薯蕷皂苷的溶出。表面活性劑可以使用殼聚糖、泊洛沙姆和卵磷脂，因其對(duì)纖細(xì)薯蕷皂苷有表面潤(rùn)濕作用，降低表面張力，可以增加脂溶性成分纖細(xì)薯蕷皂苷的溶解度，促進(jìn)其分散吸收，利于纖細(xì)薯蕷皂苷更好的發(fā)揮藥效。微晶纖維素、微粉硅膠、聚乙二醇等作為分散劑，本身具有親水性，利于纖細(xì)薯蕷皂苷的潤(rùn)濕、分散，可以增強(qiáng)藥物的穩(wěn)定性。將本發(fā)明的纖細(xì)薯蕷皂苷與上述輔料配合使用，充分混合均勻，制成的片劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑，可以增強(qiáng)纖細(xì)薯蕷皂苷的分散性，潤(rùn)濕性，提高其生物利用度。在本發(fā)明的藥物組合物中，纖細(xì)薯蕷皂苷的含量大于等于60% (重量百分比)。在本發(fā)明的實(shí)施方案中，所述的藥物組合物的組成為(重量份)
纖細(xì)薯蕷皂苷 60-80重量份泊洛沙姆5-10重量份
聚維酮2.5-5重量份
卵鱗脂2.5-5重量份
微晶纖維素S-IO重量份
10%淀粉漿5-10重量份。本發(fā)明的第四方面涉及纖細(xì)薯蕷皂苷的制備方法，其包括以下步驟(I)菝葜生藥以60% 80%乙醇提取I 3次，收集提取液；(2)步驟(I)得到的提取液合并后上聚酰胺柱，流速約3 8BVh，以水洗柱，并收集水洗液；(3)將步驟(2)的水洗液調(diào)pH值至4 5，加氯化鈉至l_2mol/L，上非極性大孔吸附樹脂柱(例如D101)，水洗至洗出液為中性；以60% 80%乙醇，流速約3 8BVh沖洗，收集洗脫液，回收后得總皂苷；(4)將步驟(3)得到的總皂苷進(jìn)行硅膠柱色譜，以氯仿-甲醇-水梯度洗脫，分份收集，得到纖細(xì)薯蕷皂苷。發(fā)明的有益效果本發(fā)明分離純化得到菝葜的有效成分纖細(xì)薯蕷皂苷，并制得以纖細(xì)薯蕷皂苷為活性成分并包括其它藥用輔料的組合物，用實(shí)驗(yàn)證明其治療婦科炎癥效果確切，是菝葜的有效成分之一。由于纖細(xì)薯蕷皂苷的脂溶性較強(qiáng)，難溶于水，因而將其制劑應(yīng)用于人體后，主要藥效成分纖細(xì)薯蕷皂苷不易被潤(rùn)濕和溶出，如果不能解決這一問題，會(huì)影響纖細(xì)薯蕷皂苷的吸收。根據(jù)纖細(xì)薯蕷皂苷的這一特點(diǎn)，本發(fā)明將藥劑學(xué)輔料的應(yīng)用考慮到其中。通過添加粘附劑、潤(rùn)濕劑、分散劑、表面活性劑等輔料，增強(qiáng)了纖細(xì)薯蕷皂苷的分散性，潤(rùn)濕性，提高了其生物利用度。菝葜具有軟化組織，減輕粘連及包塊，利尿，解毒等藥理作用，臨床上多用于治療外科急性感染、婦科炎癥、治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病，本發(fā)明證明纖細(xì)薯蕷皂苷是菝葜的有效活性部位，為纖細(xì)薯蕷皂苷用于治療上述疾病提供了依據(jù)，具有良好的應(yīng)用前景。
具體實(shí)施例方式下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解，下列實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限定本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市購(gòu)獲得的常規(guī)產(chǎn)品。實(shí)施例I纖細(xì)薯蕷皂苷、薯蕷皂苷和原薯蕷皂苷的制備菝葜生藥Ikg以75%乙醇水浴回流2h，收集醇提液。經(jīng)3次醇提后，合并醇提液?；厥找掖己笊暇埘０分?30 60目)，流速約5BV(聚酰胺的體積)h。以蒸餾水洗柱，并收集水洗液。然后以95%乙醇，流速約2. 5BVh。沖洗聚酰胺柱，收集洗脫液。將上述收集的水洗液用NaHC03調(diào)pH值至4 5，加氯化鈉至1.5mol / L，上大孔樹脂柱(D101，天津農(nóng) 藥股份有限公司樹脂分公司，批號(hào)20020407)，水洗至洗出液至中性。以75%乙醇，流速約2. 5BVh。沖洗，收集洗脫液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收乙醇得總皂苷。取總皂苷進(jìn)行硅膠柱(青島海洋化工廠生產(chǎn))色譜，氯仿一甲醇一水梯度(50:1:0. I —5:1:0. I —5:1:0. I —60:35:10 —5:5:2)洗脫，分份收集，每份100ml，共160份分別合并93-94，98-99流份，減壓回收溶劑，無水乙醇重結(jié)晶，得到無色結(jié)晶薯蕷皂苷390mg (93-94流份)，和纖細(xì)薯蕷皂苷504mg(98_99流份)。其中薯蕷皂苷的結(jié)構(gòu)為薯蕷皂苷元一3 — O— {〔α — L 一吡喃鼠李糖基(1 — 2)〕a -L 一吡喃鼠李糖基(I — 4)} 一 β — D —吡喃葡萄糖苷；纖細(xì)薯蕷皂苷的化學(xué)結(jié)構(gòu)為薯菌阜苷兀-3 — O — {〔 α — L 一卩比喃鼠李糖基(I — 3)〕一 β — D 一卩比喃葡萄糖基(I — 3)} — β — D —吡喃葡萄糖苷。將122-125流分經(jīng)制備高效液相色譜分離(50%乙腈水溶液作流動(dòng)相)，得化合物原薯蕷皂苷98mg。以上化合物經(jīng)過紅外光譜/液質(zhì)聯(lián)用鑒定。實(shí)施例2含有纖細(xì)薯蕷皂苷制劑的制備(I)取按照實(shí)施例I方法制備的纖細(xì)薯蕷皂苷80g，加入泊洛沙姆5g，聚維酮2. 5g，卵磷脂2. 5g，微晶纖維素5g。將以上成分充分混勻，加入粘合劑10%淀粉漿5g，然后制粒，干燥，整粒，共制備200片，包衣。實(shí)施例3含有纖細(xì)薯蕷皂苷制劑的制備(2)取按照實(shí)施例I方法制備的纖細(xì)薯蕷皂苷60g，加入泊洛沙姆10g，聚維酮5g，卵磷脂5g，微晶纖維素10g。將以上成分充分混勻，加入粘合劑10%淀粉漿10g，然后制粒，干燥，整粒，壓200片，包衣。實(shí)施例4含有纖細(xì)薯蕷皂苷制劑的制備(3)取按照實(shí)施例I方法制備的纖細(xì)薯蕷皂苷90g，加入殼聚糖lg，卡波姆lg，泊洛沙姆lg，卵磷脂lg，聚維酮lg，將以上藥材充分混合均勻，加入10%淀粉漿5g，然后制粒，干燥，整粒，最后分裝成200粒膠囊。實(shí)施例5纖細(xì)薯蕷皂苷的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)本試驗(yàn)中纖細(xì)薯蕷皂苷組的藥物為實(shí)施例2中的制劑，由南方醫(yī)院藥學(xué)部實(shí)驗(yàn)室制備。模型的建立按向海燕在《金剛藤分散片對(duì)大鼠慢性盆腔炎的藥效學(xué)研究》(“中藥材” 2007年第4期)中的方法。以液化苯酚5mL，西黃耆膠1L，甘油4mL，加蒸餾水至20mL，配成25%的苯酹膠衆(zhòng)。大鼠按45mg / kg腹腔注射4%水合氯醒(300mg/kg)進(jìn)行麻醉,腹部常規(guī)消毒，在下腹正中切口 3cm，暴露子宮，用4號(hào)針頭在大鼠子宮右側(cè)進(jìn)針，向卵巢方向注入苯酚膠漿O. 05mL，誘發(fā)慢性盆腔炎模型，最后分層縫合腹壁及皮膚。目前，建立慢性盆腔炎模型的方法一般分為兩種化學(xué)性燒傷致炎和生物性因子致炎?；瘜W(xué)性燒傷致炎一般采用苯酚膠漿，生物性因子致炎一般采用大腸桿菌。本實(shí)驗(yàn)選擇化學(xué)性燒傷致炎的造模方法。其原因之一是盆腔炎患者無論急性還是慢性，其血液均處于高凝狀態(tài)。我們從預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看，以苯酚膠漿致炎，大鼠在全血粘度各項(xiàng)指標(biāo)的改變均較大腸桿菌致炎的大鼠顯著。原因之二是治療慢性盆腔炎目前一般采用中西醫(yī)結(jié)合或者物理化學(xué)結(jié)合的方法。這是因?yàn)榕枨宦匝装Y導(dǎo)致組織增厚，疤痕粘連，阻礙了抗生素的進(jìn)入，不能徹底消滅殘余的致病菌，令病情反復(fù)，難以根治。菝葜的作用應(yīng)該在于軟化組織，減輕粘連及包塊。因此，選擇化學(xué)性燒傷致炎所致的大鼠盆腔水腫、粘連更適合用于篩選菝葜的有效部位。在炎癥時(shí)血液處于高凝狀態(tài)，因此血液粘度的改變可以作為評(píng)價(jià)盆腔炎的指標(biāo)之一 O 實(shí)驗(yàn)方法按前述的模型建立方法進(jìn)行造模7天后將48只模型大鼠按體重隨機(jī)分為生理鹽水組(即模型組)、金剛藤膠囊組(湖北福人藥業(yè)股份有限公司)、總皂苷組、纖細(xì)薯蕷皂苷組、薯蕷皂苷組、原薯蕷皂苷組(其中總皂苷、薯蕷皂苷和原薯蕷皂苷按照實(shí)施例I方法制備)，每組8只。分別以生理鹽水、金剛藤膠囊混懸液(O. 54g / kg)、總皂苷、纖細(xì)薯蕷皂苷、薯蕷皂苷、原薯蕷皂苷溶液(以上四種成分的使用劑量均為O. 065g / kg)灌胃，每天I次，連續(xù)14天。正常對(duì)照組(8只正常大鼠)給予等量生理鹽水，其他條件與前面六組一致。第15天，腹主靜脈取血，送南方醫(yī)院檢驗(yàn)科檢測(cè)血粘度，處死大鼠取其子宮，除去脂肪，左右兩側(cè)子宮分別用分析天平稱重。統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS 13. O的單因素方差分析(One-WayANOVA)，以及配對(duì)t檢驗(yàn)。兩者檢驗(yàn)水準(zhǔn)均為O. 05。實(shí)驗(yàn)結(jié)果I.血液流變學(xué)結(jié)果在對(duì)各組樣本進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)(Levene檢驗(yàn))后，發(fā)現(xiàn)各方差齊性。隨后進(jìn)行方差分析，發(fā)現(xiàn)各樣本均數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P〈0.000)，遂應(yīng)用LSD檢驗(yàn)進(jìn)行多重比較。模型組與正常對(duì)照組比較，全血高切、中切、低切均有差異(P〈0.001);金剛藤膠囊組作為陽性對(duì)照藥，其全血粘度的各項(xiàng)指標(biāo)較模型組均有顯著差異(P〈0. 05)。模型組、正常對(duì)照組和陽性對(duì)照組，三者在全血粘度指標(biāo)上的改變，說明了全血粘度作為指標(biāo)能夠客觀、明顯的反映出血液在不同生理?xiàng)l件下的改變，同時(shí)也說明了模型建立的可靠性?？傇碥战M、纖細(xì)薯蕷皂苷組、薯蕷皂苷組和原薯蕷皂苷組的大鼠經(jīng)過治療，與模型組比較，血瘀狀態(tài)得到顯著改善，各項(xiàng)指標(biāo)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P〈0. 05)。多重比較結(jié)果顯示，在全血中切(lOOmps / s)時(shí)，纖細(xì)薯蕷皂苷組和金剛藤膠囊組同正常對(duì)照組均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0. 05)，在全血中切(30mps / s)時(shí)，纖細(xì)薯蕷皂苷組同正常對(duì)照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0. 05)?？梢?在全血中切(30mps / s)時(shí),纖細(xì)薯菌阜苷組療效最明顯,而全血中切(lOOmps / s)時(shí)，纖細(xì)薯蕷皂苷組和金剛藤膠囊組的療效相同。除在全血高切情況下，總皂苷組與薯蕷皂苷組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0. 05)外，金剛藤膠囊組、總皂苷組、纖細(xì)薯蕷皂苷組、薯蕷皂苷組和原薯蕷皂苷組兩兩比較均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。其中，金剛藤膠囊組和纖細(xì)薯蕷皂苷組相比，所有血液流變狀態(tài)下均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P〈0. 05)，且所有全血粘度指標(biāo)后者均小于前者，由此推斷在改善血瘀狀態(tài)效果上，后者優(yōu)于前者；纖細(xì)薯蕷皂苷組和總皂苷組相比，所有血液流變狀態(tài)下均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P〈0. 05)，說明兩者在改善血瘀狀態(tài)上有差異，從全血粘度指標(biāo)來看，纖細(xì)薯蕷皂苷組的效果整體優(yōu)于皂苷組。薯蕷皂苷組、原薯蕷皂苷組分別和纖細(xì)薯蕷皂苷組相比，所有血液流變狀態(tài)下均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P〈0. 05)，且所有全血粘度指標(biāo)纖細(xì)薯蕷皂苷組均小于薯蕷皂苷組(或原薯蕷皂苷組)，由此推斷，在改善血瘀狀態(tài)效果上，纖細(xì)薯蕷皂苷組效果優(yōu)于前兩組(P〈0. 05)(結(jié)果見表I)。表I試驗(yàn)藥物對(duì)大鼠血粘度的影響
權(quán)利要求
1.纖細(xì)薯蕷皂苷用于制備預(yù)防和/或治療急性或慢性炎癥或者鎮(zhèn)痛的藥物的用途。
2.權(quán)利要求I的用途，其中所述的炎癥為婦科炎癥。
3.權(quán)利要求2的用途，其中所述的婦科炎癥為盆腔炎、附件炎或附件炎性包塊。
4.纖細(xì)薯蕷皂苷作為菝葜有效活性成分的用途。
5.藥物組合物，其包括治療有效量的纖細(xì)薯蕷皂苷，任選地，以及一種或多種藥用輔料。
6.權(quán)利要求5的藥物組合物，其中所述藥用輔料包括分散劑、潤(rùn)濕劑、粘附劑和表面活性劑。
7.權(quán)利要求5或6的藥物組合物,其中纖細(xì)薯菌阜苷的含量大于等于60%(重量百分比)。
8.纖細(xì)薯蕷皂苷的制備方法，其包括以下步驟 (1)菝葜生藥以60% 80%乙醇提取I 3次，收集提取液； (2)步驟(I)得到的提取液合并后上聚酰胺柱，流速約3 8BVh，以水洗柱，并收集水洗液； (3)將步驟(2)的水洗液調(diào)pH值至4 5，加氯化鈉至l-2mol/L，上非極性大孔吸附樹脂柱(例如D101)，水洗至洗出液為中性；以60% 80%乙醇，流速約3 8BVh沖洗，收集洗脫液，回收后得總皂苷； (4)將步驟(3)得到的總皂苷進(jìn)行硅膠柱色譜，以氯仿-甲醇-水梯度洗脫，分份收集，得到纖細(xì)薯蕷皂苷。
全文摘要
本發(fā)明涉及纖細(xì)薯蕷皂苷的用途以及含有纖細(xì)薯蕷皂苷的藥物組合物。所述用途包括纖細(xì)薯蕷皂苷用于制備預(yù)防和/或治療急性或慢性炎癥的用途，例如可用于治療婦科炎癥。本發(fā)明還涉及纖細(xì)薯蕷皂苷作為菝葜有效活性成分的用途。本發(fā)明還涉及纖細(xì)薯蕷皂苷的制備方法。
文檔編號(hào)A61K31/7048GK102784157SQ20121015720
公開日2012年11月21日 申請(qǐng)日期2012年5月18日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月18日
發(fā)明者侯連兵, 李曉, 楊西曉, 王春霞, 馬云, 黃嗣航 申請(qǐng)人:南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院