專利名稱：痘病毒溶瘤載體的制作方法
技術領域：
溶瘤病毒是一類用于治療癌癥，具有腫瘤依賴性自我永續(xù)獨特性質的新型治療因子(HERMISTON. A demand for next-generation oncolytic adenoviruses. Currentopinion in molecular therapeutics. 2006，8 卷，4 號，322-30 頁 )。溶瘤病毒能夠在惡性細胞中選擇性復制，并因此提供可能遠遠超過癌癥常規(guī)治療的效力和特異性的/Jc 平(FISHER. Striking out at disseminated metastases: the systemic deliveryof oncolytic viruses. Current opinion in molecular therapeutics. 2006,8 卷，4號，301-13頁.)。使用這些病毒的好處是，當他們復制時，他們溶解其宿主細胞。癌細 胞是多種病毒的理想寄主，因為它們的抗病毒的干擾素途徑滅活或者具有突變的腫瘤抑制基因，這能使病毒復制不受阻礙地繼續(xù)下去(CHERNAJ0VSKY，等Fighting cancer withoncolytic viruses. British medical journal. 2006, 332 卷,7534 號,170-2 頁.)。一些病毒天然地可以在腫瘤細胞中選擇性地復制，但也可以通過修飾天然存在的病毒而獲得溶瘤病毒。為了這一目的，目前使用的修飾病毒的主要策略包括主要病毒基因中的功能性缺失；控制這些病毒基因的表達的腫瘤或組織特異性啟動子；向性修飾將腺病毒重定向至癌細胞表面。在不久的將來，溶瘤腺病毒需要被優(yōu)化，以充分發(fā)揮其作為重要的抗癌工具的潛力，并且從而改善惡性神經膠質瘤病人的預后(JIANG，等 Oncolyticadenoviruses as antiglioma agents. Expert review of anticancertherapy. 2006，6 卷，5 號，697-708 頁 )。例如，腺病毒0NYX-015，被選擇性的修飾從而在具有p53突變的細胞中復制并殺死細胞，其正由Onyx Pharmaceuticals開發(fā),用于各種實體瘤,包括頭部和頸部、胃腸和胰腺腫瘤的潛在治療。它是一個重組腺病毒，它在ElB座位載有功能缺失性突變，其產物是結合于P53腫瘤抑制蛋白并使其滅活的55kDa的蛋白質。因此，認為ONYX-015腺病毒應使正常細胞不受影響。P53腫瘤抑制基因突變是癌癥遺傳異常中最常見的類型，存在于一半以上的所有主要癌癥類型中。因此，這些細胞對能很容易的復制并導致細胞死亡的病毒敏感。ONYX-015正處于用于治療復發(fā)性頭部和頸部癌癥的III期臨床試驗，結直腸、卵巢、胰腺和口腔腫瘤的II期臨床試驗，以及消化疾病、食道和肝臟腫瘤的I期臨床試驗(C0HEN，等ONYX-015. Onyx Pharmaceuticals. Current opinion in investigational drugs. 2001, 2卷，12 號，1770-5 頁 )。天然的溶瘤病毒是具有復制能力的病毒，其具有選擇性感染并殺死腫瘤細胞的先天能力。盡管50年前被用于使用活病毒治療癌癥的最初嘗試，但對天然溶瘤病毒作為癌癥療法的關注已經滯后于支持改造的腺病毒和皰疹病毒作為癌癥療法。然而，最近已經對這些天然存在的物質的高效能和選擇性重新關注了(ROBERTS,等Naturally oncolyticviruses. Currentopinion in molecular therapeutics. 2006, 8 卷，4 號，314-21 頁.)。在天然溶瘤病毒中，痘苗病毒(痘病毒科)具有很多用于溶瘤病毒療法的理想病毒主鏈所必需的關鍵屬性。這些包括生命周期短、和快速的細胞間播散、裂解能力強、巨大的克隆能力和明確的分子生物學。此外，盡管它們能夠在人類細胞中復制，但并不考慮為天然的健康問題，且它們特別好地得到表征，在消滅天花的戰(zhàn)爭中已經被遞送給數(shù)百萬人。使用疫苗株或基因修飾的牛痘株的早期臨床結果已經證明了抗癌效果(TH0RNE，等Vaccinia virus and oncolytic virotherapy of cancer. Current opinion in moleculartherapeutics. 2005, 7 卷，4 號，359-65 頁.)。相比之下，痘病毒粘液瘤病毒是一種新型的溶瘤候選者，其沒有直接用于人類的歷史，因為它對兔類(兔子)有特殊的和絕對的宿主種類向性。最近已證明粘液瘤病毒也能夠選擇性的感染并殺死人類腫瘤細胞，該特有的向性聯(lián)系在大多數(shù)人類癌癥中所見的失調的細胞內信號途徑。這篇綜述概述了關于粘液瘤病毒對人類癌細胞向性的現(xiàn)有知識，以及展示其在癌癥的動物模型中感染和清除腫瘤能力的臨床前期數(shù)據(jù)(STANFORD，等Myxoma virus and oncolytic virotherapy:a new biologic weapon in the war against cancer. Expert opinion on biological therapy. 2007, 7 卷，9 號，1415-25 頁.)。技術問題注射達到抗腫瘤效果所需的高劑量的痘病毒引發(fā)了毒性的問題。不利的事件大多不嚴重，通常與痘苗病毒有關的不良反應是自限性的，包括發(fā)燒、頭痛、疲勞、肌痛、寒戰(zhàn)、局部皮膚反應、非特異性疹、多形性紅斑、淋巴結病、和種痘位置疼痛。其他反應可能需要另外的治療方法(例如，首要的治療VIG，第二線治療西多福韋)。不良反應可能需要進一步的評估或治療，包括非故意接種、全身性牛痘(GV)、牛痘性濕疹(EV)、進行性牛痘(PV)、種痘后的中樞神經系統(tǒng)疾病、和胎兒牛痘(C0N0,等Smallpox vaccination and adversereactions. Guidance for clinicians. MMWR. Recommendations and reports!Morbidityand mortality weekly report. Recommendations and reports/Centers for DiseaseControl. 2003，52 卷，RR-4 號，1-28 頁 )。因此，需要更安全的、具有與對于其天然相應物一樣好的溶瘤活性的痘病毒。
背景技術：
1994 年 11 月 15 日的美國 5364773 (VIR0GENETICS 公司(TR0Y，紐約))描述了改造的重組痘病毒，更特別是有滅活的非必要的病毒編碼遺傳功能的痘苗病毒，使重組痘病毒具有減弱的毒力和增強的安全性。特別地，通過缺失編碼毒力因子的開放閱讀框，或通過編碼毒力因子的開放閱讀框的插入失活，滅活遺傳功能。更特別的是，這項專利描述了痘苗病毒，其中J2R、B13R+B14R、A26L、A56R、C7L-K1L和I4L的開放閱讀框已被滅活。這種病毒(NYVAC)可以被改造為用于外源核酸的載體，并用作疫苗誘導宿主動物中的免疫應答。但是，NYVAC不能在大多數(shù)哺乳動物細胞中有效地復制，且不能被用作溶瘤病毒(XIANGZHI，等 Vaccinia virus KlL protein supports viral replication in human and rabbitcells through a cell-type-specific set of its ankyrin repeat residues that aredistinct from its binding site for ACAP2. Journal of Virology. 2006，353 卷，I號，220-233 頁 )。
2004年2月19日的WO 2004/014314 (KIRN DAVID (美國))描述了在其病毒基因組中包含了一個或更多突變的改變的痘苗病毒。所描述的突變是以下多肽種類中的一種或多種1)干擾素調節(jié)多肽；2)補體控制多肽；3)TNF或趨化因子調節(jié)多肽；4)絲氨酸蛋白酶抑制劑；5) IL-Ip調節(jié)多肽；6)非感染性EEV形式的多肽；和7)用作抑制傳染性病毒從細胞中釋放的病毒多肽(抗傳染病毒形式的多肽)。此外，還公開了痘苗病毒A41L或CllR中的突變。在這一申請中更特別描述了牛痘基因組區(qū)域，如A34R、A41L、A53R、B5R、B7R、B8R、B13R、B15R、B18R、B22R、B28R、B29R、CUR、E3L、K2L、NIL、vC12L,和 vCKBP。本發(fā)明的方法涉及使用任何本文中討論的痘病毒。本發(fā)明的發(fā)明人還公開 了通過給予癌細胞或患者有效量的這一改變的痘苗病毒來治療癌癥的方法。發(fā)明公開本發(fā)明的發(fā)明人吃驚地發(fā)現(xiàn)，包含缺損I4L和/或F4L基因的痘病毒具有改善的安全性，但是保持了相同的溶瘤活性(與其天然相應物相比)。本發(fā)明涉及一種包括缺損I4L和/或F4L基因的痘病毒，條件是所述痘病毒非NYVAC0在整個申請中所使用的術語“一個”和“一種”是用意為表示所引用的成分或步驟中的“至少一個”、“至少第一個”、“一個或多個”或“多種”，除非上下文清楚規(guī)定了其它的意思。例如，術語“一個細胞”包括多個細胞，包含其混合物。本文所用的術語“和/或”包括，“和”、“或”和“全部或任何其它由該詞連接的成分的組合”的含義。本文所用的術語“大約”或“約”表示在給定值或范圍的20%以內，優(yōu)選在10%以內，且更優(yōu)選在5%以內。本文所用的術語“包含”和“包括”意在表示產物、組成物和方法包括所提及的成分或步驟，但不排除其它的。當“基本上由…組成”被用于定義產物、組成物和方法時，表示不包括其他任何具顯著性的成分和步驟。因此，基本上由所述的成分組成的組合物將不排除微量污染物和可藥用的載體?！坝伞M成”意味著排除其它不止是微量成分的成分或步驟。本文所用的術語“包括缺損基因的痘病毒”指的是痘病毒，其在所述缺損基因的一個或多個核酸中包含缺失、取代或添加，或這些可能的任何組合，其中所述修飾導致該病毒無法產生這樣的蛋白質，即具有未修改的基因所產生的蛋白質的活性的蛋白質。在本發(fā)明的優(yōu)選的實施方案中，包含基因缺損的痘病毒，是指其中整個基因序列已被刪除的痘病毒。可以通過本領域的技術人員所知道的許多方法，利用重組技術進行突變。本領域內有修飾痘病毒基因組的方法。例如，MCCART,等Systemic cancer therapy with atumor selective vaccinia virus mutant lacking thymidine kinase and vacciniagrowth factor genes. . Cancer res. . 2001，61 號，8751-57 頁.,KIM,等.Systemic armedoncolytic ans immunologic therapy for cancer with JX—594，a targeted poxvirusexpressing GM-CSF. Molecular Therapeutic. 2006，14 號，361-70 頁 ，2004 年 2 月 9 日的WO 2004/014314 (KIRN DAVID (US))和 1994 年 11 月 15 日的 US 5364773 (VIR0GENETICSCORPORATION (TR0Y，NY))所公開的方法，可以被用來生產本發(fā)明的痘病毒。在本申請的實施例中公開的方法與生產根據(jù)本發(fā)明的痘病毒特別相關。本領域內可得到各種痘病毒的基因組序列，例如，痘苗病毒(vaccinia virus)、痘苗病毒(cowpox virus)、金絲雀痘病毒、鼠痘病毒、粘液瘤病毒基因組可在Genbank中得到(登錄號分別是NC_006998、NC_003663、NC_005309、NC_004105、NC_001132)。本發(fā)明中所使用的術語“痘病毒”是指屬于痘病毒科(Poxviridae family)的病毒。根據(jù)優(yōu)選的實施方案，根據(jù)本發(fā)明的痘病毒屬于脊椎動物痘病毒亞科(Chordopoxvirinae subfamily),更優(yōu)選地屬于正痘病毒屬(Orthopoxvirus genus),更加優(yōu)選地屬于痘苗病毒種(Vaccinia virus specie)。例如，可以利用痘苗病毒株Dairen I、IHD-J、L-IPV、LC16M8、LC16M0、Lister、LIVP、Tashkent,、WR 65-16> Wyeth, Ankara> Copenhagen> Tian Tan 和 WR。根據(jù)特別優(yōu)選的實施方案，根據(jù)本發(fā)明的痘病毒是痘苗病毒株Copenhagen。 痘病毒牛痘包含大的雙鏈DNA基因組(187千堿基對)，并且是僅知的在受感染細胞的細胞質中進行復制的DNA病毒家族成員。由于被感染的細胞必須向細胞質的復制位點遞送大量的DNA前體，該病毒編碼并表達DNA代謝與合成所需的許多酶的活性，包括核糖核苷酸還原酶和脫氧尿嘧啶核苷5’ -三磷酸核苷酸水解酶(脫氧尿苷三磷酸酶，dUTPase)。核糖核苷酸還原酶(EC1. 2317. 4. I)催化核糖核苷酸還原為脫氧核糖核苷酸，該反應表示DNA生物合成中的第一實行步驟。病毒酶在亞基結構上與哺乳動物酶相似，由兩個異源命名為Rl和R2的亞基組成。編碼病毒核糖核苷酸還原酶亞基的(多個)基因已被測序，并固定于牛痘基因組的位置上，相隔thymidylate synthase. VacciniadUTPase is a 15kDaprotein encoded by the F2L gene(MCGE0GH. . Nucleic AcidsResearch. 1990, no. 1835 千喊基(SLABAUGH,等.Journal of virology. 1988,卷 62，頁 4105-10. ;BROYLES. 519-27. ;TENGELSEN,等.Virology. 19931988,編號 195164，頁863-5.). Sequence of the F2L genel21_31. ;SCHMITT,等 Journal of virology. 1988,編號62，頁1889-97.)。痘苗病毒大亞基的單體(命名為R1，由I4L基因編碼)為86-kDa的多肽，并包含核苷酸底物變構效應體的結合位點(SLABAUGH，等.Journal ofvirology. 1984,編號 52，頁 507-14. ; SLABAUGH,等 Journal of virology. 1984,編號52，頁501-6.)。小亞基(命名為R2，由F4L基因編碼)為包含兩個37_kDa的多肽的同二聚體；各多肽包含催化所需的、鐵-穩(wěn)定的、基于蛋白的自由基(H0WELL，等.Journal ofBiological Chemistry. 1992，編號 267，頁 1705-11.)。I4L 和 F4L 基因的序列及其在不同痘病毒基因組中的定位可在公共數(shù)據(jù)庫中獲得，例如通過登錄號NC_006998，DQ121394, NC_001611，AY689436, AY689437, NC_008291, DQ437594, DQ437593, DQ377804, AH015635, AY313847，AY313848, NC_006966, NC_005309, NC_003391, NC_003389, NC_001132, NC_003310, NC_002188，M35027, AY243312, AF170726, DQ011157, DQ011156, DQ011155, DQOl1154, DQ011153, X94355，Y16780, AY318871, U94848, AF198100 和 M34368X71982, AF438165, U60315, AF410153，AF380138, U86916, L22579, NC_006998, DQ121394 和 NC_008291。本文所使用的基因命名是Copenhagen牛痕株的基因命名，除非另有注明，其也被用于其他痘病毒科的同源基因。然而，基因命名可能根據(jù)痘株而不同。作為信息，Copenhage和MVA基因的對應關系可以在ANTOINE. . Virology. 1998，244號，365-396頁.的表中找到。根據(jù)優(yōu)選的實施方案，本發(fā)明的痘病毒還包含缺損的J2R基因。J2R基因編碼一種胸苷激酶(TK)，其形成嘧啶脫氧核苷酸合成補救途徑的一部分。TK催化的反應涉及將Y-磷酰基部分從ATP轉移至2’脫氧-胸苷(dThd)，以產生胸苷5’-單磷酸(dTMP)。痘苗病毒的TK是2型TK。2型TK相對于I型具有較小的多肽鏈，具有約25KDa，但形成同源四聚體。它們對反饋抑制劑dTDP或dTTP敏感，其在代謝途徑的最終生成。2型TK相對于I型TK具有窄得多的底物特異性，并且只能使2’脫氧尿苷(dU)和 / 或 dThd 憐酸化(EL OMARI,等 Structure of vaccinia virus thymidine kinase incomplex with dTTP:insights for drug design. BMC structural biology. 2006，6號，22頁)。本領域內已知J2R區(qū)域缺損的痘病毒和獲得它們的方法。例如MCCART,等Systemic cancer therapy with a tumor-selective vaccinia virus mutant lackingthymidine kinase and vaccinia growth factor genes, cancer research.2001,61卷，24 號，8751-7 頁.、PUHLMANN,等 Vaccinia as a vector for tumor-directedgene therapy:biodistribution of a thymidine kinase-deleted mutant. Cancergenetherapy. 2000,7 卷，I 號，66-73 頁 、GNANT,等 Systemic administration of arecombinant vaccinia virus expressing the cytosine deaminase gene and subsequent treatment with 5-fluorocytosine leads to tumor-specific geneexpression and prolongation of survival in mice. Cancer Research. 1999, 59 卷，14號，3396-403頁.的教導可用于產生J2R區(qū)域缺失的痘病毒。根據(jù)優(yōu)選的實施方案，根據(jù)本發(fā)明的痘病毒還包含缺損的F2L基因。脫氧尿嘧啶核苷5’ -三磷酸核苷酸水解酶(dUTPase, EC 3. 6. I. 23)在Mg離子(2+)存在下催化dUTP水解為dUMP和焦磷酸鹽。在將dUTP從dNTP池中除去并產生dUMP時，dUTPase參與維持DNA復制的保真度并參與為通過胸苷酸合酶生產TMP提供前體。牛痘脫氧尿苷三磷酸酶(dUTPase)是由F2L基因編碼的15kDa的蛋白質(MCGE0GH. .Nucleic AcidsResearch. 1990，18 號，4105-10 頁 ；BR0YLES. Virology. 1993，195 號，863-5 頁.)。痘苗病毒F2L基因的序列可以通過登錄號M25392從GenBank中得到，不同痘病毒類基因組中F2L基因的序列和位點也可以從GenBank中獲得，例如，通過登錄號NC_006998、DQl21394、NC_001611、AY689436、AY689437、NC_008291、DQ437594、DQ437593、AY313847、AY313848、NC_006966、NC_005309、NC_003391、NC_003389、NC_001132、NC_003310、NC_002188、M35027、AY243312、AF170726、DQ011157、DQ011156、DQ011155、DQ011154、DQ011153、X94355、Y16780、AY318871、U94848、AF198100 和 M34368。根據(jù)優(yōu)選的實施方案，根據(jù)本發(fā)明的痘病毒還包含目的核酸。在優(yōu)選的實施方案中，目的核酸包含至少一種目的序列，其編碼作為治療性分子的基因產物(即治療的基因)?！爸委熜苑肿印笔沁@樣的分子，其在適當?shù)厥┯糜诨颊?，尤其是患疾病或病癥的患者，或者應受保護以避免該疾病或病癥者，具有藥理學的或保護性的活性。該藥理學或保護性活性預期與對所述疾病或所述病癥的病程或癥狀產生有利的影響相關。當技術人員按本發(fā)明選擇編碼治療性分子的基因時，他通常將他的選擇與先前獲得的結果聯(lián)系起來，并可以合理地預期得到這樣的藥理學特性，而無需實施本發(fā)明所主張以外的過多實驗。根據(jù)本發(fā)明，目的序列與其被轉入其中的靶細胞可以是同源的或者異源的。有利地，所述目的序列編碼全部或部分的多肽，尤其是給出治療或預防特性的治療性或預防性多肽。多肽被理解為多核苷酸的任何翻譯產物，不論其大小、糖基化與否，且包括肽和蛋白質。作為一個首要的實例，治療性多肽包括那些可以在動物或人類有機體中補償缺損或缺陷蛋白質的多肽，或者那些通過毒性作用從機體中限制或除去有害細胞的多肽。它們也可以是賦予免疫性的多肽，其作為內源性抗原激起體液或細胞反應，或兩者兼有。由治療性基因編碼的多肽的實例包括，編碼細胞因子(a、0或Y干擾素，白細胞介素，特別是IL-2、IL-6、IL-10或IL-12，腫瘤壞死因子(TNF)，集落刺激因子GM-CSF、C-CSF, M-CSF....)、免疫刺激多肽(B7. I、B7. 2等)、凝結因子(FVIII、FIX...)、生長因子(轉化生長因子TGF、成纖維細胞生長因子FGF等)、酶(脲酶、腎素、凝血酶、金屬蛋白酶、一氧化氮合酶N0S、S0D，過氧化氫酶...)、酶抑制劑(a I-抗胰蛋白酶、抗凝血酶III、病毒蛋白酶抑制劑、纖溶酶原激活物抑制劑PAI_1)、CFTR (囊性纖維化跨膜傳導調節(jié)因子)蛋白質、胰島素、肌營養(yǎng)不良蛋白、I或II類MHC抗原、可以調節(jié)/調控細胞基因表達的多肽、能夠抑制細菌、寄生蟲或病毒感染或其發(fā)展的多肽(抗原多肽、抗原表位、通過競爭抑制天然蛋白質作用的轉顯性(transdominant)變體....)、凋亡誘導劑或抑制劑(Bax、Bcl2、BclX...)、細 胞生長抑制劑(p21、pl6、Rb...)、載脂蛋白(ApoAI、ApoAIV、ApoE.)，血管生成抑制劑(血管生成抑制素、內皮他丁(endostatin)...)、血管生成多肽(血管內皮細胞生長因子VEGF家族、FGF家族、CCN家族,包括CTGF、Cyr61和Nov)、氧自由基scaveyer、具有抗腫瘤作用的多肽、抗體、毒素，免疫毒素和標記(P -半乳糖苷酶、熒光素酶....)的基因或本領域內認為可以被用于臨床癥狀的治療或預防的任何其它目的基因。適當?shù)目鼓[瘤基因包括但不限于，那些編碼腫瘤抑制基因(如Rb、p53、DCC、NF-U腎母細胞瘤、NM23、BRUSH-1、pl6、p21、p56、p73以及它們各自的突變體)、自殺基因產物、抗體、抑制細胞分裂或轉導信號的多肽的基因。根據(jù)特別優(yōu)選的實施方案，本發(fā)明的痘病毒還包含自殺基因。自殺基因是指能將藥物前體轉化成細胞毒性化合物的蛋白質的編碼基因。自殺基因包括但不限于，編碼具有胞嘧啶脫氨酶活性、胸苷激酶活性、尿嘧啶磷酸核糖轉移酶活性、嘌呤核苷磷酸化酶活性和/或胸苷激酶活性的蛋白質的基因。下表中公開了包含一個核堿基(nuc leobase)部分的自殺基因和相應的藥物前體的例子表I
權利要求
1.用于治療增殖性疾病或與破骨細胞活性增強相關的疾病的痘病毒，其包含缺損的I4L和/或F4L基因。
2.根據(jù)權利要求I的用于治療增殖性疾病或與破骨細胞活性增強相關的疾病的痘病毒，其中所述增殖性疾病是癌癥或再狹窄。
3.根據(jù)權利要求I的用于治療增殖性疾病或與破骨細胞活性增強相關的疾病的痘病毒，其中所述與破骨細胞活性增強相關的疾病是類風濕性關節(jié)炎或骨質疏松癥。
4.根據(jù)前述權利要求任一項的用于治療增殖性疾病或與破骨細胞活性增強相關的疾病的痘病毒，其中所述痘病毒還包含缺損J2R基因。
5.根據(jù)前述權利要求任一項的用于治療增殖性疾病或與破骨細胞活性增強相關的疾病的痘病毒，其中所述痘病毒還包含缺損F2L基因。
6.根據(jù)前述權利要求任一項的用于治療增殖性疾病或與破骨細胞活性增強相關的疾病的痘病毒；其中所述痘病毒屬于脊椎動物痘病毒亞科。
7.根據(jù)權利要求6的用于治療增殖性疾病或與破骨細胞活性增強相關的疾病的痘病毒，其中所述痘病毒屬于痘苗病毒種。
8.根據(jù)權利要求7的用于治療增殖性疾病或與破骨細胞活性增強相關的疾病的痘病毒，其中所述痘病毒是痘苗病毒Copenhagen株。
9.根據(jù)權利要求7的用于治療增殖性疾病或與破骨細胞活性增強相關的疾病的痘病毒，其中所述痘病毒是痘苗病毒WR株。
10.根據(jù)前述權利要求任一項的用于治療增殖性疾病或與破骨細胞活性增強相關的疾病的痘病毒；其中所述痘病毒還包含核酸序列，其包含編碼透性酶的基因。
11.根據(jù)權利要求10的用于治療增殖性疾病或與破骨細胞活性增強相關的疾病的痘病毒，其中所述透性酶是釀酒酵母的嘌呤或胞嘧啶透性酶。
12.根據(jù)權利要求11的用于治療增殖性疾病或與破骨細胞活性增強相關的疾病的痘病毒，其中所述透性酶選自于FCY2、Fur4及其類似物。
13.根據(jù)權利要求10至12任一項的用于治療增殖性疾病或與破骨細胞活性增強相關的疾病的痘病毒，其中所述痘病毒還包含表達包含編碼透性酶的基因的核酸序列所必需的元件。
14.組合物，其包含根據(jù)權利要求I至13中任一項所述的痘病毒和可藥用的賦形劑，用于治療增殖性疾病或與破骨細胞活性增強相關的疾病。
15.根據(jù)權利要求14的用于治療增殖性疾病或與破骨細胞活性增強相關的疾病的組合物，其中所述組合物通過全身途徑施用。
16.根據(jù)權利要求14或15的用于治療增殖性疾病或與破骨細胞活性增強相關的疾病的組合物，其中還施用可藥用數(shù)量的前藥。
17.根據(jù)權利要求16的用于治療增殖性疾病或與破骨細胞活性增強相關的疾病的組合物，其中在施用所述痘病毒至少3天之后施用所述前藥。
18.根據(jù)權利要求16的用于治療增殖性疾病或與破骨細胞活性增強相關的疾病的組合物，其中在施用所述痘病毒7天之后施用所述前藥。
19.包含缺損的I4L和/或F4L基因的痘病毒在制備用于治療增殖性疾病或與破骨細胞活性增強相關的疾病的藥物中的用途。
20.根據(jù)權利要求19的用途，其中所述增殖性疾病是癌癥或再狹窄。
21.根據(jù)權利要求19的用途，其中所述與破骨細胞活性增強相關的疾病是類風濕性關節(jié)炎或骨質疏松癥。
22.根據(jù)權利要求19-21任一項的用途，其中所述痘病毒還包含缺損J2R基因。
23.根據(jù)權利要求19-22任一項的用途，其中所述痘病毒還包含缺損F2L基因。
24.根據(jù)權利要求19-23任一項的用途,其中所述痘病毒屬于脊椎動物痘病毒亞科。
25.根據(jù)權利要求24的用途，其中所述痘病毒屬于痘苗病毒種。
26.根據(jù)權利要求25的用途，其中所述痘病毒是痘苗病毒Copenhagen株。
27.根據(jù)權利要求25的用途，其中所述痘病毒是痘苗病毒WR株。
28.根據(jù)權利要求19-27任一項的用途；其中所述痘病毒還包含核酸序列，其包含編碼透性酶的基因。
29.根據(jù)權利要求28的用途，其中所述透性酶是釀酒酵母的嘌呤或胞嘧啶透性酶。
30.根據(jù)權利要求29的用途，其中所述透性酶選自于FCY2, Fu r 4及其類似物。
31.根據(jù)權利要求28至30任一項的用途，其中所述痘病毒還包含表達包含編碼透性酶的基因的核酸序列所必需的元件。
32.包含根據(jù)權利要求I至13中任一項所述的痘病毒和可藥用的賦形劑的組合物在制備用于治療增殖性疾病或與破骨細胞活性增強相關的疾病的藥物中的用途。
33.根據(jù)權利要求32的用途，其中所述組合物通過全身途徑施用。
34.根據(jù)權利要求32或33的用途，其中還施用可藥用數(shù)量的前藥。
35.根據(jù)權利要求34的用途，其中在施用所述痘病毒至少3天之后施用所述前藥。
36.根據(jù)權利要求34的用途，其中在施用所述痘病毒7天之后施用所述前藥。
全文摘要
本發(fā)明涉及包含I4L和/或F4L基因缺損的痘病毒，涉及包含該痘病毒的組合物，以及將該組合物和痘病毒用于治療目的、更具體地用于治療癌癥的方法和用途。
文檔編號A61P29/00GK102703389SQ201210160650
公開日2012年10月3日 申請日期2008年11月17日 優(yōu)先權日2007年11月19日
發(fā)明者J·弗洛派, P·厄博斯 申請人:特朗斯吉有限公司