專利名稱：一種降脂及抗脂肪肝中藥發(fā)酵液的制備的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥加工及生物發(fā)酵領(lǐng)域，特別涉及中藥山楂的發(fā)酵工藝，及通過這種方法得到的發(fā)酵產(chǎn)物的降脂及抗脂肪肝作用。
背景技術(shù)：
治療脂肪肝主要有效成分為黃酮，廣泛存在于許多中藥特別是山楂中含量較大。山楂總黃酮是山楂的主要有效成分之一，單體達30余種，其清除自由基及抗氧化作用效果明顯[1]。，并且近年來有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)山楂黃酮具有較強的抗氧化作用。ZhangZSt2]等人研究了山楂黃酮對田鼠降低膽固醇機制，實驗組每日灌胃0.5%的山楂提取物，結(jié)果顯示實驗組總膽固醇和甘油三酯的含量比對照組分別減少10%和13%。
山楂藥酒治療脂肪肝效果顯著。其作用為通過降解膽固醇并抑制膽固醇合成來降低血清膽固醇含量。也增加膽汁酸的排泄來阻止膽固醇在肝臟內(nèi)堆積[2]?？梢悦黠@增強低密度脂蛋白的活性。謝偉華、林秋實[3][4]等利用山楂黃酮治療小鼠高脂血癥，藥理證明山楂及山楂黃酮能顯著降低血清和肝中MDA含量，增加紅細胞與肝臟SOD活性。中藥是我國的瑰寶，中藥資源極其豐富，經(jīng)過千年傳承已擁有數(shù)萬種成方、驗方，但是再近些年來對中藥的現(xiàn)代化研究比較緩慢，導(dǎo)致了中藥中有效成分的提取受到限制，使中藥資源遭到浪費。利用真菌對中藥進行發(fā)酵處理是中藥現(xiàn)代化研究史上的一個重要創(chuàng)新。中藥發(fā)酵過程中，由于真菌生長代謝具有強大的分解轉(zhuǎn)化能力，可將大分子物質(zhì)分解為小分子活性物質(zhì)，在發(fā)酵過程中會產(chǎn)生新的成分或豐富的次級代謝產(chǎn)物。為中藥的開發(fā)開創(chuàng)了新空間?，F(xiàn)代中藥發(fā)酵制藥技術(shù)是在繼承傳統(tǒng)中藥發(fā)酵炮制法的基礎(chǔ)上，結(jié)合現(xiàn)代生物轉(zhuǎn)化方法包括發(fā)酵技術(shù)等，有目的地改變中藥的性能，或根據(jù)中藥之間的特性有目的有針對性進行組合[5]，利用單一菌種，或用混合菌種定向發(fā)酵。通過微生物在發(fā)酵過程中產(chǎn)生的酶系對中藥底物進行氧化、氫化、酯化、甲基化等修飾。經(jīng)過發(fā)酵后能夠給中藥帶來很多有益處，首先是對中藥中有效成分產(chǎn)生影響。微生物在代謝過程中分泌出纖維素酶、蛋白酶、木質(zhì)素酶等多種酶類，降低了中藥中有效成分浸出的傳質(zhì)阻力，使其更充分的被提取。另外，因微生物發(fā)酵是在常溫常壓下進行，條件溫和，避免了中藥活性成分遭到破壞，并且通過一些特殊酶的作用還可以對中藥中的某些成分進行修飾、轉(zhuǎn)化，降解生物大分子從而實現(xiàn)提高中藥藥效或產(chǎn)生新藥效的目的。參考文獻[I]時巖鵬，丁杏苞.山楂化學(xué)成分的研究，中草藥[J]. 2000,31 (3) :173.[2]Zhang ZS, Chang Q，Zhu M，etal. Charactenrization of antioxidantspresenting hawthornfruits[J]. Journal of Nutrional Biochemistry. 2001,12(3)144-152.[3]謝偉華，孫超，劉淑敏.山楂黃酮對高脂血模型小鼠血脂及生脂基因轉(zhuǎn)錄表達的影響[J].中國中藥雜志，1009，34 (2) =224-229.[4]林秋實，等.山楂及山楂黃酮預(yù)防大鼠脂質(zhì)代謝紊亂的分子機制研究[J].營養(yǎng)學(xué)報,2000，22 (2) :131-136.[5]葛喜珍.發(fā)酵在中藥研究中的應(yīng)用[J].時珍國醫(yī)國藥，2008，19(2) :386 387.[6]阮曉東，張惠文，蔡穎慧，等.微生物在中藥生物轉(zhuǎn)化中的應(yīng)用[J].中草藥，2009,40(1) :149-152.

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明依據(jù)現(xiàn)代科技研究成果，選用山楂作為實驗原料，其主要功效成分為黃酮。并且以同樣具有抗氧化功效成分的食藥真菌冬蟲夏草作為發(fā)酵菌種。以總黃酮成分能夠在發(fā)酵液中充分浸出為目的，篩選出山楂生物轉(zhuǎn)化的最佳發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件。具體技術(shù)內(nèi)容如下
·
I以中藥山楂為發(fā)酵底物，利用食藥真菌冬蟲夏草對其進行發(fā)酵，并考察不同時間發(fā)酵液中總黃酮含量的變化情況，確定了到第5天時，發(fā)酵液中總黃酮含量最高，為16. 9mg/g。并且通過單因素和正交試驗，以發(fā)酵液中總黃酮含量為指標,對冬蟲夏草發(fā)酵山楂的培養(yǎng)基及發(fā)酵條件進行優(yōu)化，得出最佳培養(yǎng)基為可溶性淀粉2g/100mL，硝酸鉀
0.4g/100mL，磷酸二氫鉀0. 4g/100mL，硫酸鎂0. 2/100mL，最佳發(fā)酵條件為接種量3%，山楂添加量8g/100mL，溫度30°C，初始pH值5. 5，培養(yǎng)時間為3_7d。最后采用優(yōu)化后工藝進行驗證得出發(fā)酵液中總黃酮含量為17. 4mg/g。2用山楂發(fā)酵液做小鼠藥理實驗結(jié)果顯示，山楂黃酮能較明顯降低小鼠血清中TC與TG含量，增加SOD活性。目前中藥抗脂肪肝作用研究日漸增多，但是發(fā)酵中藥開發(fā)的較少。本發(fā)明采用微生物發(fā)酵的方法，目的在于提高藥效，獲得一劑具有良好抗氧化作用效果的發(fā)酵液，為以中藥為原材料的抗脂肪肝產(chǎn)品研究開辟了一條新思路，同時在山楂的進一步應(yīng)用及提取研究上提供了理論基礎(chǔ)。
具體實施例方式實施例一山楂發(fā)酵液的制備以中藥山楂為發(fā)酵底物，利用食藥真菌冬蟲夏草對其進行發(fā)酵，采用發(fā)酵培養(yǎng)基為可溶性淀粉2g/100mL，硝酸鉀0. 4g/100mL，磷酸二氫鉀0. 4g/100mL，硫酸鎂0. 2/100mL,最佳發(fā)酵條件為接種量3%，山楂添加量8g/100mL，溫度26°C，初始pH值5. 5，培養(yǎng)時間為3-7d，得山楂發(fā)酵液，經(jīng)3500r/min離心15min，該上清液即可直接作為食品、保健品及藥品使用，或者用于制備食品、保健品及藥品的原料。實施例二 小鼠模型建立實驗動物健康的雌性昆明小鼠，18_22g，清潔級。采用高脂飲食配合CCl4注射的方法進行造模。實施例三指標檢測實驗藥物山楂發(fā)酵液
動物分組對60只造模成功的小鼠觀察一周后隨機分成3組，即模型對照組、陽性對照組、山楂發(fā)酵液組，每組20只，空白對照組20只(健康小鼠)，共80只。各試驗組分別灌服20天，每天一次。陽性對照組給予東寶甘泰液9mL/kg (!，空白對照組及模型對照組給予0. 5ml蒸餾水，第20天處死小鼠進行理化指標測定。動物實驗及實驗結(jié)果(I)山楂發(fā)酵液對脂肪肝小鼠臟器指數(shù)的影響頸椎脫臼法處死小鼠，電子大平精確稱量小鼠體重后，解剖小鼠，取肝臟、脾臟及胸腺稱重，計算臟器指數(shù)。結(jié)果如表I所
/Jn o肝指數(shù)=^^),100%脾指數(shù)=^xl00%
小鼠#S (g)小鼠體軍(g)
胸AM=^xioo%
小鼠傾(g)表I三種發(fā)酵液對小鼠臟器系數(shù)的影響(n = IOJ 士s )Table I The effect of three fermented brass on organ coefficient inrats (n = 10,^±s )
WJi肝臟系數(shù)(％)脾臟系數(shù)(％)胸腺系數(shù)(％)
空白對照組4.28 + 0.24*0.553 + 0.0630.211 + 0.016
模型對照組5. 74±0.43a0.415±0.037a0.117±0.033a
山楂發(fā)酵液組4.96±0.34**0.514±0.017*0. 136±0.034Z
陽性對照組5.04±0. 15*0.529±0.0920. 138±0_042注與模型組比較，* :P < 0. 05 ;** P < 0. 01與空白組比較，A P < 0. 05。從表I中可知，模型組與空白對照組相比肝臟系數(shù)與脾臟系數(shù)明顯增加，胸腺系數(shù)降低，均具有差異顯著性(P < 0. 05)。山楂發(fā)酵液組肝臟系數(shù)顯著性降低了(P < 0. 01)。(2)灌胃山楂發(fā)酵液后小鼠血清中TC、TG含量變化如表2所示表2 TC 和 TG 含量(n = IOJ ±s)Table2 Content of TC and TG(n = 10,x±s)
組別劑Mmg/g 按生藥汁TC/mmol.L1TG/mmol-L1
空白對照組2.04 + 0. 140.91 + 0. 13
模型對照組——3. 22±0.98''a1.68±0.43
山楂發(fā)酵液組401.34±0.45**0.91±0_25**
陽性對照組402.01 ±0.430.%±0.24*注與模型組比較，*:p < 0. 05 # p < 0. 01與空白組比較，Ap < 0. 05 AA p < 0. 01由表2中數(shù)據(jù)可以看出脂肪肝模型組TC和TG含量明顯高于空白對照組，具有極顯著性差異(P < 0. 01)。山楂發(fā)酵液高劑量組明顯降低TC和TG含量(P < 0. 01)，低劑量組也具有顯著性(P < 0. 05)。(3)灌胃山楂發(fā)酵液后小鼠肝組織勻漿中SOD和MDA含量見表3 :表3 SOD 和 MDA 含量(n = 10，； 士s )Table 3 Content of SOD and MDA(n = 10,x±s)
權(quán)利要求
1.一種山楂發(fā)酵液，其特征是以中藥山楂為發(fā)酵底物，利用食藥真菌冬蟲夏草對其進行發(fā)酵，采用發(fā)酵培養(yǎng)基為可溶性淀粉2g/100mL，硝酸鉀0. 4g/100mL,磷酸二氫鉀0.4g/100mL，硫酸鎂0. 2/100mL，最佳發(fā)酵條件為接種量3%，山楂添加量8g/100mL，溫度26°C，初始pH值5. 5，培養(yǎng)時間為3-7d，得山楂發(fā)酵液，經(jīng)3500r/min離心15min，該上清液即可直接作為食品、保健品及藥品使用，或者用于制備食品、保健品及藥品的原料。
2.—種中藥發(fā)酵液，其特征是將山楂與冬蟲夏草發(fā)酵，該發(fā)酵液具有一定抗脂肪肝作用，可以在制備抗脂肪肝藥品、食品及保健品中應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的中藥發(fā)酵液，其特征在于該發(fā)酵液可以單獨或與其它藥物配伍或加入藥學(xué)上可以接受的輔料，制備成軟膠囊、硬膠囊、片劑、分散片、顆粒劑、口服液、栓齊U，經(jīng)口服方式應(yīng)用。
4.本發(fā)明是采用搖瓶的方法進行的，如進行放大生產(chǎn)，可根據(jù)本發(fā)明的基本原理采用各種生物反應(yīng)器、發(fā)酵罐等方式進行發(fā)酵處理，另外除本發(fā)明中所用食藥真菌外，也可是其它大型食藥真菌如香菇、黑木耳、金針菇等，這是本領(lǐng)域的研究人員所能理解的。
全文摘要
本發(fā)明提供一種降脂及抗脂肪肝中藥發(fā)酵液的制備方法，涉及中藥加工及生物發(fā)酵領(lǐng)域，尤其是中藥山楂的發(fā)酵方法。本發(fā)明以食藥真菌冬蟲夏草作為發(fā)酵山楂的菌種。通過添加少量菌種生長繁殖所需的營養(yǎng)物質(zhì)，對中藥進行發(fā)酵，將此法所得發(fā)酵液進行小鼠藥理實驗。并且闡述了本發(fā)明中中藥發(fā)酵液具有明顯降脂及抗脂肪肝作用。該組方可制備藥品、保健品和食(飲)品的各種劑型。包括散劑、丸劑、膏劑、丹劑、片劑、軟膠囊、硬膠囊、沖劑、栓劑、口服液、注射液。
文檔編號A61P1/16GK102696994SQ20121019291
公開日2012年10月3日 申請日期2012年6月13日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月13日
發(fā)明者付莉莉, 姜云, 張建峰, 汪樹生, 王剛, 王莘, 董浩, 陳 光 申請人:吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)