專利名稱：一種人參二醇組皂苷的制備技術(shù)及方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一項用堿醇法裂解人參總皂苷，用混合型大孔樹脂吸附皂苷，用離子交換樹脂去除重金屬的方法。其主要質(zhì)量特征是人參二醇組皂苷總含量為86. 8 93. 6%HPLC，其中 Rbl 含量為 48. I 52. 4%HPLC。
背景技術(shù)：
人參根皂苷來源于五加科植物人參或西洋參根的提取物，已發(fā)現(xiàn)的人參、西洋參活性成分主要有皂苷、人參多糖、揮發(fā)油、氨基酸和多肽等幾大類。具有提高機體免疫力、抗衰老、促進學習與記憶功能、解毒、抗菌等多種生理作用，對心血管疾病、腫瘤、炎癥以及消化道潰瘍等疾病具有良好功效。人參皂苷又分人參二醇苷(A型)、人參三醇苷(B型)及齊墩果酸型皂苷(C型)，其中人參二醇苷主要包括詘1、詘2、詘3、此、1 (1、1^3、1^2等單體皂苷。其中Rbl具有增強膽堿 系統(tǒng)的功能，增加乙酰膽堿的合成和釋放以及改善記憶力作用；Rb2具有抑制中樞神經(jīng)，促進DNA、RNA合成作用；降低細胞內(nèi)鈣,抗氧化,清除體內(nèi)自由基和改善心肌缺血再灌注損傷等作用；促進刺激副腎皮荷爾蒙分泌作用；Rb3可增強心肌功能，保護人體自身免疫系統(tǒng)，可用于治療各種不同原因引起的心肌收縮性衰竭；Rc有抑制中樞神經(jīng)，抑制DNA合成作用，促進血清蛋白質(zhì)合成作用；Rd具有促進副腎皮質(zhì)荷爾蒙分泌作用；Rg3對腫瘤細胞的抑制，先通過抑制腫瘤新血管生成，此作用在小劑量應(yīng)用時即可產(chǎn)生，最適合預防腫瘤的發(fā)生、復發(fā)和轉(zhuǎn)移，并且無其他抗癌藥常見的毒副作用，完全可以長期服用，在較大劑量時還能抑制腫瘤細胞的增增殖、浸潤、誘導腫瘤細胞凋亡。因此，Rg3常和放療、化療藥同時使用，可明顯增強放、化療效果，大大減輕其毒副作用，提高患者生活質(zhì)量；Rh2具有抑制癌細胞向其它器官轉(zhuǎn)移，增強機體免疫力，快速恢復體質(zhì)的作用；對癌細胞具有明顯的抗轉(zhuǎn)移作用，可配合手術(shù)服用增強手術(shù)后傷口的愈合及體力的恢復。人參二醇苷A型皂苷元為20 (S)-原人參二醇；其分子中有3個羥基，其中C3-0H，C29-0H可能與糖結(jié)合成苷，由于C-20羥基是叔羥基，結(jié)合的糖與50%乙酸共熱即被水解，而C3 -OH與糖形成的苷鍵必須在較強的酸性條件下才能水解。近年來，隨著癌癥發(fā)病率的增高，人參皂苷Rg3的抗腫瘤功效越來越被人們所重視，人們不斷地研究將人參皂苷Rg3應(yīng)用做保健食品及藥品的原料，并用于抗癌藥物的輔助治療。人參皂苷二醇是人參總皂苷中的一部分，必須先將人參總皂苷成分從人參或西洋參中采用醇提法提取出來，再根據(jù)人參二醇苷的結(jié)構(gòu)特點將其從總皂苷中分離出來。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是采用堿醇法結(jié)合混合型大孔樹脂吸附皂苷及離子交換樹脂去重金屬方法將人參二醇苷從人參總皂苷中分離出來的一種方法。實用本發(fā)明所采用的技術(shù)方案，其詳細制備工藝如下
取人參根或西洋參根總皂苷，用乙醇溶解得醇溶解液，溶解液用0. 2微米濾膜抽濾得濾液，將濾液加入0. I 10%堿醇溶液中，攪拌混合均勻，靜置沉降18 24小時，用0. 2 0. 4微米濾膜抽濾，取濾渣固形物，向濾渣中再加入0. I 10%堿醇溶液攪拌使濾渣全部溶解，靜置沉降18 24小時，用0. 2 0. 4微米濾膜抽濾，取濾渣固形物，將濾渣加入純化水攪拌使之完全溶解，用管式離心機離心，取清液，清液通過DlOl型樹脂和DMl30型樹脂組成的混合樹脂柱，吸附量為樹脂體積的廣50倍量，控制流速為2 4BV/小時，先用純化水洗脫至清亮無色，再用10 30%的乙醇洗脫至清亮無色，最后用60 80%的乙醇溶液洗脫至清亮無色，收集最后段洗脫液，洗脫液通過離子型交換樹脂柱去除重金屬，收集走柱液，用0.2微米濾膜抽濾，濾液進行減壓濃縮，真空干燥，即得人參二醇組皂苷。其質(zhì)量特征人參二醇苷總含量86. 8 93. 6%HPLC，其中Rbl含量為48. I 52. 4%HPLC。一種人參二醇組皂苷的制備技術(shù)及方法包括
步驟I、取人參或西洋參根總皂苷，溶解于60 100%的乙醇溶液中，溶解液用0. 2
0.4微米濾膜抽濾得抽濾液。 步驟2、用60 100%的乙醇配制0. I 10%的堿醇溶液，將I步抽濾液緩慢加入
堿醇溶液中攪拌混合均勻，靜置沉降，沉降液再次用0. 2 0. 4微米濾膜抽濾，得濾渣固形物。步驟3、再次用步驟，2方法配制堿醇溶液，并將堿醇溶液加入2步固形物中攪拌至完全溶解，靜置沉降，沉降液再次用0. 2 0. 4微米濾膜抽濾，得濾渣固形物。步驟4、將3步濾渣固形物加入純化水攪拌至完全溶解，溶解液用管式離心機離心，收集清液上混合大孔樹脂柱，先用水洗脫，再用不同濃度的乙醇進行梯度洗脫，收集最后段洗脫液。步驟5、4步最后段洗脫液上離子交換樹脂柱，收集走柱液，用微米濾膜抽濾，抽濾液減壓濃縮，真空干燥即得人參二醇組皂苷。步驟6、制備的人參二醇苷采用高效液相色譜法檢測含量人參二醇苷總含量86. 8 93. 6%HPLC，其中 Rbl 含量為 48. I 52. 4%HPLC。本發(fā)明是以人參或西洋參根總皂苷為原料，采用堿醇溶液使人參總皂苷發(fā)生側(cè)鏈裂解，將人參二醇苷充分分離出來，采用DlOl型樹脂和DM130型樹脂組成的混合樹脂進行純化，采用離子交換樹脂去除重金屬制備技術(shù)，提高人參二醇苷的含量。優(yōu)選的，溶解人參或西洋參根總皂苷的乙醇溶液濃度為80%。優(yōu)選的，配制的堿醇溶液濃度為1%，配制用乙醇濃度為80%，配制用堿為氫氧化鈉或氫氧化鉀。優(yōu)選的，梯度洗脫用的乙醇溶液濃度為20%和80%。優(yōu)選的，混合大孔樹脂為DlOl型樹脂和DM130型樹脂。
具體實施方案本發(fā)明實施例公開了一種人參二醇苷的制備技術(shù)及方法。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當改進工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法已經(jīng)通過較佳實施例進行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對本文所述的方法進行改動或適當變更與組合，來實現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。為實現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案
實施例I :取人參根皂苷100克，緩慢的倒入1000毫升80%乙醇內(nèi)，攪拌2個小時至全部溶解，0. 2膜抽濾得濾液(濾渣廢棄)，將濾液緩慢加入以1000ml80%乙醇與10克氫氧化鈉及10克純化水配制的1%醇堿溶液中，攪拌均勻，靜置沉降18小時，用0. 2微米濾膜抽濾，得固形物，加入IOOml純化水攪拌至全部溶解，得450毫升溶解液，將溶解液再次緩慢加入上訴配制的堿醇溶液中攪拌均勻，靜置沉降24小時，用0. 2微米濾膜抽濾，得固形物，將固形物加入3000ml純化 水攪拌至全部溶解，溶解液用管式離心機離心,去清液上DlOl型大孔樹脂柱，控制流速，為2 4BV/小時，先用純化水洗脫至清亮無色，再用20%的乙醇洗脫至清亮無色，最后用60%的乙醇溶液洗脫至清亮無色，收集最后段洗脫液，洗脫液通過離子型交換樹脂柱去除重金屬，收集走柱液，用0. 2微米濾膜抽濾，濾液進行減壓濃縮，真空干燥，得人參二醇苷45. 7克，收率為45. 7%。高效液相色譜法檢測含量二醇苷總含量86. 8 %，Rbl: 48. I %。實施例2 :取人參根皂苷100克，緩慢的倒入1000毫升90%乙醇內(nèi)，攪拌2個小時
至全部溶解，0. 2膜抽濾得濾液(濾渣廢棄)，將濾液緩慢加入以1000ml90%乙醇與15克氫氧化鈉及10克純化水配制的I. 5%醇堿溶液中，攪拌均勻，靜置沉降18小時，用0. 2微米濾膜抽濾，得固形物，加入IOOml純化水攪拌至全部溶解，得450毫升溶解液，將溶解液再次緩慢加入上訴配制的堿醇溶液中攪拌均勻，靜置沉降24小時，用0. 2微米濾膜抽濾，得固形物，將固形物加入3000ml純化水攪拌至全部溶解，溶解液用管式離心機離心，去清液上DM130型大孔樹脂柱，控制流速，為2 4BV/小時，先用純化水洗脫至清亮無色，再用20%的乙醇洗脫至清亮無色，最后用80%的乙醇溶液洗脫至清亮無色，收集最后段洗脫液，洗脫液通過離子型交換樹脂柱去除重金屬，收集走柱液，用0. 2微米濾膜抽濾，濾液進行減壓濃縮，真空干燥，得人參二醇苷40. 6克，收率為40. 6%。高效液相色譜法檢測含量二醇苷總含量90. 9%, Rbl :50. 3%o實施例3 :取人參根皂苷100克，緩慢的倒入1000毫升95%乙醇內(nèi)，攪拌2個小時至全部溶解，0. 2膜抽濾得濾液(濾渣廢棄)，將濾液緩慢加入以1000ml85%乙醇與I克氫氧化鈉及10克純化水配制的0. 1%醇堿溶液中，攪拌均勻，靜置沉降18小時，用0. 2微米濾膜抽濾，得固形物，加入IOOml純化水攪拌至全部溶解，得450毫升溶解液，將溶解液再次緩慢加入上訴配制的堿醇溶液中攪拌均勻，靜置沉降24小時，用0. 2微米濾膜抽濾，得固形物，將固形物加入3000ml純化水攪拌至全部溶解，溶解液用管式離心機離心，去清液上DlOl型與DM130型大孔樹脂組成的混合樹脂柱(混合體積比為I: I )，控制流速，為2 4BV/小時，先用純化水洗脫至清亮無色，再用71%的乙醇溶液洗脫至清亮無色，收集最后段洗脫液，洗脫液通過離子型交換樹脂柱去除重金屬，收集走柱液，用0. 2微米濾膜抽濾，濾液進行減壓濃縮，真空干燥，得人參二醇苷39. 6克，收率為39. 6%。高效液相色譜法檢測含量二醇苷總含量89. 3%，Rbl: 49.3%。實施例4 :取人參根皂苷100克，緩慢的倒入1000毫升95%乙醇內(nèi)，攪拌2個小時至全部溶解，0. 2膜抽濾得濾液(濾渣廢棄)，將濾液緩慢加入以1000ml95%乙醇與I. 5克氫氧化鈉及10克純化水配制的0. 15%醇堿溶液中，攪拌均勻，靜置沉降24小時，用0. 2微米濾膜抽濾，得固形物，加入IOOml純化水攪拌至全部溶解，得450毫升溶解液，將溶解液再次緩慢加入上訴配制的堿醇溶液中攪拌均勻，靜置沉降24小時，用0. 2微米濾膜抽濾，得固形物，將固形物加入3000ml純化水攪拌至全部溶解，溶解液用管式離心機離心，去清液上DlOl型與DM130型大孔樹脂組成的混合樹脂柱(混合體積比為I: I )，控制流速，為2 4BV/小時，先用純化水洗脫至清亮無色，再用15%的乙醇洗脫至清亮無色，最后用71%的乙醇溶液洗脫至清亮無色，收集最后段洗脫液，洗脫液通過離子型交換樹脂柱去除重金屬，收集走柱液，用0. 2微米濾膜抽濾，濾液進行減壓濃縮，真空干燥，得人參二醇苷40. 7克，收率為40. 7%。高效液相色譜法檢測含量二醇苷總含量93. 6%，Rbl :52. 4%。以上實施例的說明只是用于幫助理解本發(fā)明的方法及其核心思想。應(yīng)當指出，對 于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以對本發(fā)明進行若干改進和修飾，這些改進和修飾也落入本發(fā)明權(quán)利要求的保護范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種人參二醇組皂苷的制備技術(shù)及方法， 取人參根或西洋參根總皂苷，用乙醇溶解得醇溶解液，溶解液用0. 2微米濾膜抽濾得濾液，將濾液加入0. I 10%堿醇溶液中，攪拌混合均勻，靜置沉降18 24小時，用0. 2微米濾膜抽濾，取濾渣，向濾渣中再加入0. I 10%堿醇溶液攪拌使濾渣全部溶解，靜置沉降18 24小時，用0. 2微米濾膜抽濾，取濾渣，將濾渣加入純化水攪拌使之完全溶解，用管式離心機離心，取清液，清液上DlOl型樹脂和DM130型混合樹脂組成的混合樹脂柱，吸附量為樹脂體積的廣50倍量，控制流速為2 4BV/小時，先用純化水洗脫至清亮無色，再用10 30%的乙醇洗脫至清亮無色，最后用60 80%的乙醇溶液洗脫至清亮無色，收集最后段洗脫液，洗脫液通過離子型交換樹脂柱去除重金屬，收集走柱液，用0. 2微米濾膜抽濾，濾液進行減壓濃縮，真空干燥，即得人參二醇組皂苷。
2.權(quán)利要求I制備二醇組的原料為人參或西洋參根總皂苷，所制備的人參二醇組包含如下單體(Ginsenoside-Ral、Ginsenoside_Ra2、Ginsenoside_Ra3、Ginsenoside-Rbl、Ginsenoside-Rb2 、 Ginsenoside-Rb3 、 Ginsenoside-Rc 、 Ginsenoside-Rd 、20(S) -Ginsenoside-Rg3、20 (R)-Ginsenoside_Rg3 Ginsenoside_F2、Ginsenoside_Rh2、20 (R) -Ginsenoside- Rh2 Quinquenoside-Rl、Ginsenoside-Rsl、Ginsenoside_Rs2、Ginsenoside-Rs3malonyl-ginsenosides-Rblmalonyl-ginsenosides-Rb2malonyl-ginsenosides-Rc、malonyl-ginsenosides-Rd、Notoginsenoside-R4)。
3.權(quán)利要求I所述的堿醇液為0.I 10%氫氧化鈉或氫氧化鉀乙醇溶液。
4.權(quán)利要求I所述的堿醇溶液中的醇為乙醇，其含水量為0 30%，靜置沉降時間為18 24小時。
5.權(quán)利要求I所述的樹脂為含有苯乙烯或二乙烯苯或其類似物之一種或幾種有機高分子聚合物制成的，如DlOl和DM130樹脂，及離子交換樹脂。
6.權(quán)利要求I所述的樹脂為DlOl型大孔樹脂和DM130型大孔樹脂的脂混合樹脂，其混合比例按體積比為1: 1，上柱流速為2 4BV/小時，吸附量為樹脂體積的f 50倍量。
7.權(quán)利要求I所述的梯度洗脫液為乙醇，其含水量為20 90%。
8.權(quán)利要求I所述的人參二醇苷用高效液相色譜法檢測含量為權(quán)利要求I所述的人參二醇苷用高效液相色譜法檢測含量為86. 8 93. 6%HPLC，其中Rbl含量為48. I .52.4%HPLC。
全文摘要
本發(fā)明涉及一項采用人參或西洋參總皂苷為原料，采用混合型大孔樹脂吸附法及離子交換樹脂去重金屬的方法。其主要質(zhì)量特征是人參二醇組皂苷含量為86.8～93.6%HPLC，其中Rb1含量為48.1～52.4%HPLC。
文檔編號A61P25/00GK102716162SQ20121022611
公開日2012年10月10日 申請日期2012年7月3日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月3日
發(fā)明者馮濤, 白鳳英, 金愛玉 申請人:吉林省宏久生物科技股份有限公司