專利名稱：佐劑配制的包含細(xì)胞因子誘導(dǎo)劑的流感疫苗的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于用佐劑配制疫苗來提供保護以抵御流感病毒感染的領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
目前常規(guī)使用的流感疫苗一般不含佐劑。參考文獻I的第17和18章詳細(xì)描述了這些疫苗。它們基于活病毒或滅活的病毒，滅活疫苗可以基于完整的病毒、“裂解(split)” 病毒或純化的表面抗原(包括血凝素和神經(jīng)氨酸酶)。血凝素(HA)是滅活流感疫苗中的主要免疫原，參考HA水平標(biāo)準(zhǔn)化疫苗劑量，疫苗通常含有約15 μ gHA/毒株。流感爆發(fā)期需要大量流感疫苗，但難以增加疫苗供應(yīng)從而滿足如此巨大的需求。因此，除了生產(chǎn)更多疫苗抗原，有人提出可以使用較低含量的抗原/毒株，同時使用佐劑來彌補減少的抗原劑量。還有人提出在流行間期采用相同的方案，從而例如能覆蓋更多人群而無需提高生產(chǎn)水平。有人提出可將鋁鹽佐劑用于流感疫苗(例如，見參考文獻2-5)。利用MF59水包油乳液也已見報道[6]，希龍疫苗公司(Chiron Vaccines)的商品化FLUAD 產(chǎn)品中也用了該乳液。本發(fā)明的目的是提供佐劑配制的其它改進流感疫苗(對于流行期和流行間期使用)和它們的制備方法。

發(fā)明內(nèi)容
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)雖然水包油乳液是流感疫苗的優(yōu)良佐劑，但仍可通過額外加入一種或多種其它免疫刺激劑來提高它們的效率。所述其它試劑不僅增加血凝滴度或抗-血凝素ELISA滴度(二者衡量免疫應(yīng)答的數(shù)量)，其還起到提高應(yīng)答質(zhì)量的作用。具體地說，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)所述其它試劑能改善流感疫苗引發(fā)的細(xì)胞因子應(yīng)答，例如干擾素-Y應(yīng)答，改善水平遠(yuǎn)勝于只使用佐劑或該試劑時所見的。已知細(xì)胞因子應(yīng)答涉及宿主抵御流感(病毒)感染的防御早期和決定階段[7]。因此，本發(fā)明提供包含⑴流感病毒抗原；(ii)水包油乳液佐劑；和(iii)細(xì)胞因子誘導(dǎo)劑的免疫原性組合物。本發(fā)明還提供制備免疫原性組合物的方法，所述方法包括混合(i)流感病毒抗原；(ii)水包油乳液佐劑；和(iii)細(xì)胞因子誘導(dǎo)劑的步驟。本發(fā)明提供裝有以下組分的試劑盒(i)包含流感病毒抗原的第一試劑盒組分；和(ii)包含水包油乳液佐劑的第二試劑盒組分，其中(a)所述第一組分和所述第二組分包含細(xì)胞因子誘導(dǎo)劑，或(b)所述試劑盒裝有包含細(xì)胞因子誘導(dǎo)劑的第三試劑盒組分。
水包油乳液佐劑已發(fā)現(xiàn)水包油乳液特別適用于佐劑配制的流感病毒疫苗中。已知各種這樣的乳液，它們通常包含至少一種油和至少一種表面活性劑，其中一種或多種油和一種或多種表面活性劑是生物可降解(可代謝)和生物相容的。乳液中的油滴通常直徑低于5 μ m，甚至可具有亞微米直徑，用微流化儀可實現(xiàn)這些小尺寸，從而能提供穩(wěn)定的乳液。優(yōu)選尺寸小于220nm的油滴，因為能對它們進行過 濾滅菌。本發(fā)明可使用諸如動物來源(例如魚)或植物來源的油。植物油來源包括堅果、種子和谷物。堅果油的例子是最常購得的花生油、大豆油、椰油和橄欖油。例如，可利用從霍霍巴豆(jojoba bean)獲得的霍霍巴油。種子油包括紅花油、棉籽油、葵花籽油、芝麻油等。在谷物油中，玉米油是最易購得的，但其它谷物如小麥、燕麥、黑麥、大米、畫眉草(teff)、黑小麥等的油也可利用。通過水解、分離和酯化合適的堅果和種子油起始物質(zhì)可制備種子油中天然不存在的甘油和1，2-丙二醇的6-10碳脂肪酸酯。哺乳動物乳汁的脂肪和油類是可代謝的，因此可用于實施本發(fā)明。本領(lǐng)域熟知從動物來源獲得純油所需的分離、純化、皂化和其它方法。大多數(shù)魚含有不難回收的可代謝油。例如，本發(fā)明可用的幾種魚油的例子是鱈魚肝油、鯊魚肝油和鯨油，如鯨蠟。可以5-碳異戊二烯單位通過生物化學(xué)方法合成許多支鏈油，這些支鏈油通常稱為類萜。鯊魚肝油含有稱為角鯊烯(2，6，10，15，19，23-六甲基-2，6，10, 14, 18，22-二十四己烯(tetracosahexaene))的支鏈不飽和類職,這是本發(fā)明特別優(yōu)選的。角鯊?fù)槭墙酋徬┑娘柡皖愃莆?，其也是?yōu)選的油。包含角鯊烯和角鯊?fù)榈聂~油不難從商業(yè)來源購得，或可通過本領(lǐng)域已知的方法獲得。其它優(yōu)選的油是生育酚(參見下文)。可利用油的混合物。可根據(jù)表面活性劑的“HLB” (親水/親油平衡)將其分類。優(yōu)選的本發(fā)明表面活性劑的HLB至少為10，優(yōu)選至少15，更優(yōu)選至少16。本發(fā)明可用的表面活性劑包括但不限于聚氧乙烯失水山梨糖醇酯表面活性劑(通常稱為吐溫)，特別是聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80 ;環(huán)氧乙烷(EO)、環(huán)氧丙烷(PO)和/或環(huán)氧丁烷(BO)的共聚物，以D0WFAX 為商品名出售，例如線形Ε0/Ρ0嵌段共聚物；重復(fù)的乙氧基(氧-1，2-乙二基)基團數(shù)目可能不同的辛苯聚醇，其中特別感興趣的是辛苯聚醇_9(曲通X-100或叔辛基苯氧基聚乙氧基乙醇)；(辛基苯氧基)聚乙氧基乙醇(IGEPAL CA-630/NP-40);磷脂，例如磷脂酰聚膽堿(卵磷脂)；壬基苯酚乙氧基化物，例如Tergit0lTMNP系列；衍生自月桂醇、鯨蠟醇、硬脂醇和油醇的聚氧乙烯脂肪醚(稱為Brij表面活性劑)，例如三乙烯乙二醇單月桂基醚(triethyleneglycol monoIauryI ether) (Brij30);聚氧乙烯-9-月桂基醚；和失水山梨糖醇酯(通常稱為SPAN)，例如失水山梨糖醇三油酸酯(司盤85)和失水山梨糖醇單月桂酸酯。優(yōu)選非離子型表面活性劑。乳液中所含的優(yōu)選表面活性劑是吐溫80 (聚氧乙烯失水山梨糖醇單油酸酯)、司盤85 (失水山梨糖醇三油酸酯)、卵磷脂和曲通X-100?？衫帽砻婊钚詣┑幕旌衔铮缤聹?0/司盤85混合物。聚氧乙烯失水山梨糖醇酯，例如聚氧乙烯失水山梨糖醇單油酸酯(吐溫80)和辛苯聚醇，例如叔辛基苯氧基聚乙氧基乙醇(曲通X-100)的混合物也適用。另一有用的混合物包含月桂醇聚醚9加上聚氧乙烯失水山梨糖醇酯和/或辛苯聚醇。表面活性劑的優(yōu)選用量(重量％)是聚氧乙烯失水山梨糖醇酯(例如，吐溫80)0. 01-1%，特別是約0. 1% ;辛基-或壬基苯氧基聚氧乙醇(例如曲通X-100或曲通系列的其它洗滌劑)0. 001-0. 1%，特別是O. 005-0. 02% ;聚氧乙烯醚(例如月桂醇聚醚9)0. 1-20%,優(yōu)選O. 1_10%，特別是O. 1-1%或約O. 5%。本發(fā)明所用的具體水包油乳液佐劑包括但不限于 角鯊烯、吐溫80和司盤85的亞微米乳液。以體積計，所述乳液的組成可以是約5%角鯊烯，約O. 5%聚山梨醇酯80和約O. 5%司盤85。以重量計，這些比例可以是4. 3%角鯊烯，O. 5%聚山梨醇酯80和O. 48%司盤85。該佐劑稱為“MF59” [8_10]，如參考文獻11的第10章和參考文獻12的第12章所詳述的。MF59乳液優(yōu)選包含檸檬酸離子，例如IOmM檸檬酸鈉緩沖液。 角鯊烯、生育酚和吐溫80的乳液。該乳液可包含磷酸緩沖鹽 水。其還可包含司盤85 (例如，1%)和/或卵磷脂。這些乳液可具有2-10%角鯊烯、2-10%生育酚和O. 3-3%吐溫80，角鯊烯生育酚的重量比優(yōu)選彡1，因為這能提供更穩(wěn)定的乳液。角鯊烯和吐溫80的體積比可以約為5:2?？蓪⑼聹?0溶解于PBS中獲得2%的溶液，然后將90ml該溶液與(5g DL-α-生育酚和5ml角鯊烯)的混合物混合，隨后微流化該混合物來制備這樣一種乳液。得到的乳液可具有亞微米油滴，例如平均直徑在100-250nm之間，優(yōu)選約180nm。 角鯊烯、生育酚和曲通洗滌劑(例如，曲通X-100)的乳液。該乳液還可包含3d-MPL(見下文)。該乳液可包含磷酸緩沖液。 含有聚山梨醇酯(例如，聚山梨醇酯80)、曲通洗滌劑(例如，曲通X-100)和生育酚(例如，α-生育酚琥珀酸酯)的乳液。該乳液所包含的這三種組分的質(zhì)量比約為75:11:10(例如，750 μ g/ml 聚山梨醇酯 80，110 μ g/ml 曲通 X-100 和 100 μ g/ml α -生育酚琥珀酸酯)，這些濃度應(yīng)包括這些組分與抗原的任何比例。該乳液還可包含角鯊烯。該乳液還可包含3d-MPL(見下文)。水相可含有磷酸緩沖液。 角鯊?fù)?、聚山梨醇?0和泊洛沙姆401(〃PluroniCTML121 ")的乳液?？梢杂昧姿峋彌_鹽水，PH7.4配制該乳液。該乳液是一種有用的胞壁酰二肽遞送載體，已與用"SAF-I"佐劑(O. 05-l%Thr-MDP、5% 角鯊烯烷、2. 5%Pluronic L121 和 O. 2% 聚山梨醇酯 80)配制的蘇氨酰-MDP聯(lián)用[13]。也可不與Thr-MDP聯(lián)用，例如用"AF "佐劑(5%角鯊?fù)椤?br> I.25%PluronicL121和O. 2%聚山梨醇酯80)配制[14]。優(yōu)選微流體化。 乳液可具有O. 5-50%的油、O. 1-10%磷脂和O. 05_5%非離子表面活性劑。如參考文獻15所述，優(yōu)選的磷脂組分是磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油、磷脂酸、鞘磷脂和心磷脂。優(yōu)選亞微米液滴大小。 不可代謝的油(例如，輕質(zhì)礦物油)和至少一種表面活性劑(例如，卵磷脂、吐溫80或司盤80)的亞微米水包油乳液?？砂砑觿鏠uilA皂苷、膽固醇、皂苷-親脂偶聯(lián)物(例如，參考文獻16所述的GPI-0100，)、二甲基二(十八烷基)溴化銨和/或N，N- 二(十八烷基)-N，N- 二(2-羥乙基)丙二胺。 其中皂苷(例如，QuilA或QS21)和固醇(例如，膽固醇)結(jié)合成螺旋狀膠束的乳液[17]。 包含礦物油、非離子親脂性乙氧基化脂肪醇和非離子親水性表面活性劑(例如，乙氧基化脂肪醇和/或聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物)的乳液[18]。 包含礦物油、非離子親脂性乙氧基化脂肪醇和非離子親脂性表面活性劑(例如，乙氧基化脂肪醇和/或聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物)的乳液[18]。
這些乳液優(yōu)選在遞送之時與抗原臨時混合。因此，在包裝或分發(fā)的疫苗中，佐劑和抗原通常分開存放，最后在使用時即時配制。抗原一般存在水性形式，從而最終可通過混合兩種液體來制備疫苗。用于混合的兩種液體的體積比可以不同(例如，在5:1和1:5之間)，但通常是約1:1?？乖妥魟┗旌虾?，血凝素抗原通常維持在水溶液中，但其自身可能分配在油/水界面附近。進入乳液的油相的血凝素通常極少(如果有的話)。如果組合物包含生育酚，α、β、Υ、δ、ε或ξ生育酚均可用，但優(yōu)選α -生育酚。生育酚可采取幾種形式，例如不同的鹽和/或異構(gòu)體。鹽包括有機鹽，例如琥珀酸鹽、乙酸鹽、煙酸鹽等等。D-α-生育酚和DL-α-生育酚均可用。老年患者(例如，60歲或更大)所用的疫苗中優(yōu)選包含生育酚，因為據(jù)報道維生素E在該患者組中對免疫應(yīng)答有正面影響。它們還具有抗氧化特性，從而有助于穩(wěn)定溶液[21]。優(yōu)選的α-生育酚是DL-α-生育酚，該生育酚的優(yōu)選鹽是琥珀酸鹽?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)琥珀酸鹽在體內(nèi)能與TNF-相關(guān)的配體協(xié)作。此外，已知α-生育酚琥珀酸鹽與流感疫苗相容，是替代汞化合物的有用防腐劑[88]。 細(xì)胞因子誘導(dǎo)劑本發(fā)明組合物可包含細(xì)胞因子誘導(dǎo)劑，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)該試劑與水包油乳液混合能得到出乎意料有效的免疫原性組合物，對T細(xì)胞應(yīng)答有協(xié)同作用。有報道說，就耐受流感病毒抗原性漂移而言，T細(xì)胞應(yīng)答優(yōu)于抗體應(yīng)答。此外，T細(xì)胞效應(yīng)機理可能是老年患者中疫苗誘導(dǎo)抵御嚴(yán)重疾病的保護作用的重要決定因素[22]，還可能通過更強的干擾素-Y應(yīng)答來降低對流感的年齡相關(guān)易感性[23]。給予患者時，本發(fā)明組合物中所包含的細(xì)胞因子誘導(dǎo)劑能引發(fā)免疫系統(tǒng)釋放細(xì)胞因子，包括干擾素和白介素。優(yōu)選的細(xì)胞因子誘導(dǎo)劑能引發(fā)以下一種或多種細(xì)胞因子的釋放干擾素-Y ;白介素-I ;白介素-2 ;白介素-12 ;TNF-a JNF-β ;和GM-CSF。優(yōu)選的細(xì)胞因子誘導(dǎo)劑引發(fā)與Th-I型免疫應(yīng)答有關(guān)的細(xì)胞因子釋放，例如干擾素-Y、TNF_ a、白介素-2。優(yōu)選刺激干擾素-Y和白介素_2。因此，接受本發(fā)明組合物使得患者的T細(xì)胞在用流感抗原刺激時能以抗原特異性方式釋放所需細(xì)胞因子。例如，從他們的血液純化的T細(xì)胞在體外接觸流感病毒血凝素時會釋放Y-干擾素。本領(lǐng)域已知檢測外周血單核的細(xì)胞(PBMC)中這種應(yīng)答的方法，包括ELISA、ELISP0T、流式細(xì)胞術(shù)和實時PCR。例如，參考文獻24報道了一項研究，該項研究監(jiān)測了針對破傷風(fēng)類毒素的抗原特異性T細(xì)胞介導(dǎo)免疫應(yīng)答，特別是Y -干擾素應(yīng)答，發(fā)現(xiàn)ELISP0T是區(qū)分抗原特異性TT誘導(dǎo)應(yīng)答與自發(fā)應(yīng)答的最靈敏方法，但采用流式細(xì)胞術(shù)檢測胞質(zhì)內(nèi)細(xì)胞因子是檢測再刺激作用(re-stimulating effect)的最有效方法。合適的細(xì)胞因子誘導(dǎo)劑包括但不限于 免疫刺激性寡核苷酸，例如含CpG基序的寡核苷酸(含有通過磷酯鍵與鳥嘌呤連接的非甲基化胞嘧啶的二核苷酸序列)，或雙鏈RNA，或含回文序列的寡核苷酸或含聚(dG)序列的寡核苷酸?！?3-0-脫?；鶈瘟柞Ｖ|(zhì) A ( “3dMPL”，也稱為 “MPL ” ) [25-28]。 咪唑并喹啉化合物，例如咪喹莫特(“R837”)[29、30]、瑞喹莫德(“R-848”)和它們的類似物；和它們的鹽(例如，鹽酸鹽)。免疫刺激性咪唑并喹啉的其它細(xì)節(jié)見參考文獻32-36。
縮氨基硫脲化合物，例如參考文獻37披露的那些。參考文獻37還描述了配制、制造和篩選活性化合物的方法?？s氨基硫脲在刺激人外周血單核的細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子如TNF-α方面特別有效。 色胺酮化合物，例如參考文獻38披露的那些。參考文獻38還描述了配制、制造和篩選活性化合物的方法?？s氨基硫脲在刺激人外周血單核的細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子如TNF-α方面特別有效。 核苷類似物，例如(a)艾沙托拉濱(Isatorabine) (ANA-245 ;7_硫雜_8_氧代鳥
苷)及其前藥
N N lJj
o^°iH
H
OO(b) ΑΝΑ975 ； (c) ANA-025-1 ； (d) ANA380 ； (e)參考文獻 39-41 所述的化合物；(f)下
式所示化合物
R1
JL
R2-^N R4
Ra式中R1和R2各自獨立為H、鹵素、_NRaRb、-OH、C1^6烷氧基、取代的C^6烷氧基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、C6_10芳基、取代的c6_1(l芳基、CV6烷基或取代的Cu烷基；R3不存在，或是H、CV6烷基、取代的Cu烷基、C6_10芳基、取代的C6,芳基、雜環(huán)基或取代的雜環(huán)基；R4和R5各自獨立為H、鹵素、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、-C (O) -RdX1^6烷基、取代的C1^
燒基，或結(jié)合在一起形成5元環(huán)，如R4_5
)尸rS
Kf 在_ 所示鍵處實現(xiàn)結(jié)合。X1和X2各自獨立為N、C、O或S ;R8 是 H、鹵素、-OHXh 烷基、C2_6 烯基、C2_6 炔基、_0H、-NRaRb、-(CH2)n-O-Rc'-0-((^燒基)、-S (O) pRe 或-C (O) -Rd ；R9是H、CV6烷基、取代的Cu烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基或R9a，其中R9a是
R1fl R”
在^所示鍵處實現(xiàn)結(jié)合。R10和R11各自獨立為H、鹵素、CV6烷氧基、取代的Cu烷氧基、-NRaRb或-OH ；Ra和Rb各自獨立為H、C1^6烷基、取代的Cp6烷基、-C (O) Rd、C6_10芳基；Rc各自獨立為H、憐酸酷基、_■憐酸酷基、二憐酸酷基、CV6燒基或取代的Cu燒基；Rd各自獨立為H、齒素、C1^燒基、取代的Cu燒基、C1^燒氧基、取代的CV6燒氧基、-NH2、-NH((V6烷基)、-NH(取代的C1^烷基)、-N(C1^6烷基)2、-N(取代的C^6烷基)2、C6,芳基或雜環(huán)基；Re各自獨立為H、(V6烷基、取代的Cu烷基、C6,芳基、取代的C6_1(l芳基、雜環(huán)基或取代的雜環(huán)基；Rf各自獨立地為H、C1^6烷基、取代的Cp6烷基、-C(O) Rd、磷酸酯基、二磷酸酯基或
三磷酸酯基；η各自獨立為0、1、2或3 ;P各自獨立為0、1或2 ;或者(g) (a)-(f)中任一項的藥學(xué)上可接受的鹽，(a)-(f)中任一項的互變異構(gòu)體，或該互變異構(gòu)體的藥學(xué)上可接受的鹽?；n羅唑利賓(Loxoribine) (7_烯丙基_8_氧代鳥苷)[42]。 參考文獻43披露的化合物，包括酰基哌嗪化合物、吲哚二酮(Indoledione)化合物、四氫異喹啉(THIQ)化合物、苯并環(huán)二酮(Benzocyclodione)化合物、氨基氮雜乙烯基(Aminoazavinyl)化合物、氨基苯并咪唑喹啉酮(Aminobenzimidazole quinolinone)(ABIQ)化合物[44、45]、輕鄰苯二甲酰胺(Hydrapthalamide)化合物、二苯甲酮化合物、異曙唑化合物、固醇化合物、喹唑酮(Quinazilinone)化合物、批咯化合物[46]、蒽醌化合物、喹喔啉化合物、三嗪化合物、卩比唑卩密唳(Pyrazalopyrimidine)化合物和氮卻(Benzazole)化合物[47]?！?polyoxidonium聚合物[48、49]或其它N-氧化的聚乙烯-哌嗪衍生物。 參考文獻50披露的化合物。 式I、II或III所示化合物，或它們的鹽
權(quán)利要求
1.一種免疫原性組合物，其包含(i)流感病毒抗原；(ii)水包油乳液佐劑；(iii)細(xì)胞因子誘導(dǎo)劑，其中細(xì)胞因子誘導(dǎo)劑是人TLR4的激動劑。
2.如權(quán)利要求I所述的組合物，其特征在于，所述流感病毒抗原 (a)是滅活病毒；或 (2)包含完整的病毒、裂解病毒或純化的表面抗原。
3.如權(quán)利要求I或2所述的組合物，其特征在于，所述流感病毒是從 (a)用卵培養(yǎng)的流感病毒；或 (b)從用細(xì)胞培養(yǎng)物培養(yǎng)的流感病毒制備的。
4.如權(quán)利要求1、2或3任一項所述的組合物，其特征在于，所述組合物 (a)不含卵白蛋白、卵類黏蛋白和雞DNA;和/或 (b)包含少于IOng細(xì)胞培養(yǎng)宿主的細(xì)胞DNA;和/或 (c)包含的100個核苷酸或更長的DNA少于10ng。
5.以上任一項權(quán)利要求所述的組合物，其特征在于， (a)從具有A/PR/8/34流感病毒一個或多個RNA區(qū)段的流感病毒制備所述流感病毒抗原；和/或 (b)從通過反向遺傳學(xué)技術(shù)獲得的流感病毒制備所述流感病毒抗原。
6.如權(quán)利要求4或5所述的組合物，其特征在于，所述細(xì)胞培養(yǎng)物是 (a)微載體培養(yǎng)物、貼壁培養(yǎng)物或懸浮培養(yǎng)物；和/或 (b)不含血清；和/或其中所述細(xì)胞培養(yǎng)物是MDCK細(xì)胞培養(yǎng)物。
7.以上任一項權(quán)利要求所述的組合物，其特征在于，所述組合物包含O.1-20 μ g血凝素/病毒毒株。
8.以上任一項權(quán)利要求所述的組合物，其特征在于，所述乳液中的一種或多種油和一種或多種表面活性劑是生物可降解和生物相容的。
9.以上任一項權(quán)利要求所述的組合物，其特征在于，所述乳液的液滴具有亞微米直徑。
10.以上任一項權(quán)利要求所述的組合物，其特征在于，所述乳液包含 (a)類萜；和/或 (b)角鯊烯；和/或 (C)生育酌■，例如DL- α -生育酌·；和/或 (d)聚氧乙烯失水山梨糖醇酯表面活性劑、辛苯聚醇表面活性劑和/或失水山梨糖醇酯。
11.以上任一項權(quán)利要求所述的組合物，其特征在于，所述細(xì)胞因子誘導(dǎo)劑 (a)引發(fā)干擾素-Y的釋放；和/或 (b)選自免疫刺激性寡核苷酸；3-0-脫?；鶈瘟柞Ｖ|(zhì)A(3dMPL);咪唑并喹啉化合物；和/或氨基烷基氨基葡糖苷磷酸鹽衍生物。
12.如權(quán)利要求11所述的組合物，其特征在于，所述細(xì)胞因子誘導(dǎo)劑)是3dMPL，并且 (a)以重量計，至少10%的3dMPL是六?；溞问?；和/或 (b)所述3dMPL為直徑<150nm的顆粒形式；和/或 (c)所述3dMPL位于乳液的水相中。
13.以上任一項權(quán)利要求所述的組合物，其特征在于，所述組合物(a)基本上不含汞物質(zhì)；和/或 (b)包含l-20mg/ml氯化鈉；和/或 (c)重量克分子滲透濃度在200-400m0sm/kg之間；和/或 (d)pH在5.0-8. I之間；和/或 (e)含有〈I內(nèi)毒素單位；和/或 (f)不含谷蛋白；和/或 (g)包含一種或多種緩沖液，所述ー種或多種緩沖液包括磷酸緩沖液；Tris緩沖液；硼酸緩沖液；琥珀酸緩沖液；組氨酸緩沖液；或檸檬酸緩沖液。
14.以上任一項權(quán)利要求所述的組合物，其特征在于，所述組合物包含兩種甲型流感毒株和一種こ型流感毒株，其中所述組合物是抵御流行性流感病毒毒株的單價疫苗。
15.一種制備免疫原性組合物的方法，所述方法包括混合以下組分的步驟(i)流感病毒抗原；(ii)水包油乳液佐劑；和(iii)細(xì)胞因子誘導(dǎo)劑，其中細(xì)胞因子誘導(dǎo)劑是人TLR4的激動劑。
16.一種裝有以下組分的試劑盒(i)包含流感病毒抗原的第一試劑盒組分；和(ii)包含水包油乳液佐劑的第二試劑盒組分，其中(a)所述第一組分和所述第二組分包含細(xì)胞因子誘導(dǎo)劑，或(b)所述試劑盒裝有包含細(xì)胞因子誘導(dǎo)劑的第三試劑盒組分，其中細(xì)胞因子誘導(dǎo)劑是人TLR4的激動劑。
17.如權(quán)利要求16所述的試劑盒，其特征在于，所述第一組分和所述第二組分裝在不同容器中；例如所述第一組分和所述第二組分裝在小瓶中，或其中所述第一組分和所述第ニ組分之一裝在注射器中，另ー組分裝在小瓶中，其中所述小瓶任選由玻璃或塑料材料制成和/或用無乳膠的塞子密封所述小瓶。
18.(i)流感病毒抗原；(ii)水包油乳液佐劑；(iii)細(xì)胞因子誘導(dǎo)劑的組合的用途，其中細(xì)胞因子誘導(dǎo)劑是人TLR4的激動劑，其特征在于，用于制備在患者體內(nèi)產(chǎn)生免疫應(yīng)答的藥物。
全文摘要
雖然水包油乳液是流感疫苗的有效佐劑，但仍可通過額外加入其它免疫刺激劑來增強細(xì)胞因子應(yīng)答，例如γ-干擾素應(yīng)答而提高其效力。因此，疫苗包含(i)流感病毒抗原；(ii)水包油乳液佐劑；(iii)細(xì)胞因子誘導(dǎo)劑。
文檔編號A61K47/22GK102755645SQ20121022612
公開日2012年10月31日 申請日期2006年11月6日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月4日
發(fā)明者D·奧黑根, G·德爾古迪斯, R·拉普奧里 申請人:諾華疫苗和診斷有限公司