專利名稱：重組水蛭素滴眼液及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種含透明質酸鈉的重組水蛭素滴眼液及其制備方法。
背景技術：
水蛭素是一類最初從醫(yī)用水蛭唾液腺中分離得到的由65 66個氨基酸組成的多肽物質，主要有HV1、HV2、HV3三種同源性很高的異構體(Hirudin variant)。水蛭素可以通過直接抑制凝血酶的活性而有效地抑制動脈、靜脈血栓的形成及彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)，因此，水蛭素在預防和治療深度靜脈血栓、冠狀動脈血栓、以及心絞痛等疾病方面具有極高的應用價值。目前，國外已有兩個重組水蛭素產(chǎn)品批準上市1. Desirudin (商品名 Revasc,瑞士 Novartis 產(chǎn)品)；2· Lepirudin (商品名RefIudan,英國 Pharmion 及美國BerlexLaboratories產(chǎn)品)。兩者結構上僅在N-端存在微小差異，Desirudin為Vall_Val2,而Lepirudin為Leul_Tyr2。Desirudin用于手術時深度靜脈血栓(DVT)的預防與治療，Lepirudin用于肝素誘導的血小板減少性疾病病人的抗凝治療。此外，水蛭素在防治不穩(wěn)定性心絞痛、彌散性血管內(nèi)凝血、腦凝血、血栓靜脈炎及冠狀動脈血栓等方面都具有巨大的潛在臨床應用價值。吳梧桐等(中國發(fā)明專利，專利號03132224.7)藥理試驗證明重組水蛭素對D-半乳糖及亞硒酸鈉誘導的白內(nèi)障均具有顯著防治效果，其發(fā)明的重組水蛭素滴眼液，采用殼聚糖為增稠劑，主要用于治療白內(nèi)障。然而，殼聚糖大分子具有活潑的羥基和氨基，在一定的條件下，容易發(fā)生水解、烷基化、?；?、羧甲基化、磺化、硝化、鹵化、氧化、還原、縮合和絡合等化學反應，并生成各種性質不確定的殼聚糖衍生物。增稠劑大多數(shù)以物理增稠的原理來提高藥物的生物利用度，且必須達到一定濃度才可起作用。但是，物理增稠發(fā)揮的增效作用比較有限，當粘度達到一定值時，藥效就不會隨著粘度的增大而增加。這類增稠劑常用的有泊洛沙姆、卡波姆、羥丙甲纖維素等。此外，在這些增稠劑中，有些是牛頓流體，眨眼時會有疼痛感，且對pH和/或溫度敏感，另外一些還有較多的配伍禁忌。例如，泊洛沙姆溫度敏感性凝膠，雖然在25°C以上可由液相轉變?yōu)榘牍腆w，但當回到低溫時，半固體凝膠卻很難回到液體狀態(tài)，因此用于大生產(chǎn)其工藝難以控制。另外，卡波姆凝膠由于鹽類電解質可使其粘性下降，堿土金屬離子以及陽離子聚合物等也可與之結合成不溶性的鹽，強酸也可以使其失去粘性，因此，卡波姆有較多的配伍禁忌。羥丙甲纖維素等纖維素衍生物、聚乙烯醇以及聚乙烯吡咯烷酮等作為滴眼液的增稠劑，其缺點主要是它們屬于牛頓流體，粘度隨濃度的增大而提高但不受切變力(如眨眼時的切變力)的影響，有時為了產(chǎn)生明顯的增稠作用，必須添加其至一定濃度，然而當粘度達到一定的程度時，會使眼瞼不易眨動且對敏感的眼組織產(chǎn)生刺激，令使用者難以耐受[1]。因此，需要使用另外一種增稠劑，它一方面可以使重組水蛭素長時間滯留病灶區(qū)，又不會對敏感的眼組織產(chǎn)生刺激作用，同時還可以保證重組水蛭素滴眼液的儲存穩(wěn)定性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種含有透明質酸鈉的重組水蛭素滴眼液，其中所含的透明質酸鈉具有防止藥液外溢流失、使藥物長時間滯留病灶區(qū)的特點。本發(fā)明還提供了制備上述滴眼液的方法，它包括先溶脹透明質酸鈉，然后分別溶解重組水蛭素、等滲調節(jié)劑、金屬絡合劑、防腐劑，并調節(jié)重組水蛭素滴眼液的PH值為4. O 7. 5。本發(fā)明還說明了透明質酸鈉、等滲調節(jié)劑、金屬絡合劑、防腐劑在制備滴眼液中的用途。本發(fā)明所述的透明質酸鈉(SH)為增稠劑，透明質酸鈉是透明質酸(HA)的鈉鹽形式。透明質酸又稱玻璃酸，是以N-乙酰氨基葡萄糖和葡萄糖醛酸為雙糖重復單元構成的粘 多糖類物質，通常以其鈉鹽形式存在，平均分子量可以是60 280萬。不同分子量的透明質酸鈉粘度不同，因此其用途也不同。本發(fā)明所述透明質酸鈉的分子量大約是130萬，屬于滴眼液級別。透明質酸鈉廣泛存在于動物組織細胞間質和眼玻璃體中，主要的生理功能是保持組織水分和潤滑作用等。藥學家研究發(fā)現(xiàn)，透明質酸鈉不僅具有卡波姆、泊洛沙姆、羥丙甲纖維素、殼聚糖等高分子粘性物質的優(yōu)點，還具有良好的生物相容性，在增加藥物黏度的同時，克服了眼瞼不易眨動的缺點，使其成為滴眼液的良好載體[2]。凌沛學[3]研究發(fā)現(xiàn)透明質酸鈉還能降低滴眼劑中防腐劑的不良反應。正常情況下，使用含有透明質酸鈉的滴眼液時，眼表自然存在的透明質酸鈉形成一層膜覆蓋于角膜上皮表面，角膜上皮具有與透明質酸鈉特異性結合位點，所以含透明質酸鈉的藥物可以長時間存留于眼表，有利于眼組織對藥物長久有效的吸收。因此，透明質酸鈉生物相容性極好，不但可以增粘，而且可以保濕，從而能在改善視力的同時保持眼部較長時間的濕潤，對改善視力起到了輔助作用。本發(fā)明所述的透明質酸鈉可以使用市售產(chǎn)品。本發(fā)明所述的等滲調節(jié)劑可以是本領域常用的等滲調節(jié)劑，其主要作用是調節(jié)滴眼液的滲透壓，增加患者使用的順依性，可選用氯化鈉、硼酸鹽緩沖液、磷酸鹽緩沖液中的一種或幾種。在本發(fā)明的實施例中，使用的等滲調節(jié)劑為氯化鈉和硼酸鹽緩沖液。本發(fā)明所述的金屬絡合劑是本領域中的常用組分，其主要作用是防止滴眼液配制過程中各種金屬離子的影響，其選擇和含量皆遵循本領域的常規(guī)考慮。在本發(fā)明的實施例中，使用的金屬絡合劑為乙二胺四乙酸二鈉，它是本領域制劑中的常規(guī)金屬絡合劑。本發(fā)明所述的防腐劑是本領域制劑中的常規(guī)眼用防腐劑，其選擇和含量皆遵循本領域的常規(guī)考慮，可選用對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、硫柳汞或者苯扎溴銨中的一種或幾種混合物。在本發(fā)明的實施例中使用的防腐劑為對羥基苯甲酸乙酯，它是本領域制劑中的常規(guī)眼用防腐劑。本發(fā)明所述的pH調節(jié)劑是本領域中的常用組分，其選擇和含量皆可遵循本領域中的常規(guī)考慮，可選用氫氧化鈉或者鹽酸中的一種或兩種。本發(fā)明所述的藥學上可接受的載體是指在滴眼液中常用的載體。本發(fā)明中所述藥學上可接受的載體是液體。在本發(fā)明的實施例中，所述藥學上可接受的載體選用注射用水。本發(fā)明的重組水蛭素滴眼液的制備方法十分簡單，可以采用常規(guī)的滴眼液生產(chǎn)工藝生產(chǎn)，簡單物理混合即可。
本發(fā)明的重組水蛭素滴眼液，由于加入了透明質酸鈉，它具有防止藥液外溢流失、使藥物長時間滯留病灶區(qū)的作用，同時使眼表濕潤舒適。此外，所述的滴眼液制備方法保證了滴眼液的澄明度及儲存穩(wěn)定性。
具體實施例方式下面結合實施例細說明本發(fā)明，這些實施例只是用于舉例說明的目的，并不限制本發(fā)明的范圍實施例I重組水蛭素滴眼液配方 重組水蛭素InO. 02g
透明質酸鈉O. Ig
硼酸1.116g
硼砂0.191g
氯化鈉0.22g
乙二胺四乙酸二鈉0.5g
對羥基苯甲酸乙酯0.03g
注射用水定容至IOOml制備工藝I.在60-80°C的水浴條件下，快速攪拌并緩緩將O. Ig透明質酸鈉加入到70ml注射用水中，使其完全分散，充分溶脹，勿使粘結成團，攪拌30分鐘左右即可完全溶解。2分別將硼酸、硼砂、氯化鈉、乙二胺四乙酸鈉和對羥基苯甲酸乙酯加入到上述透明質酸鈉溶液中，攪勻溶解，然后定容至100ml，即得pH7. 4的滴眼液空白基質。3.將重組水蛭素III加入到上述滴眼液空白基質中，攪勻溶解，通過O. 22um濾器過濾除菌，然后分裝，即得重組水蛭素III滴眼液。實施例2兔眼刺激實驗將實施例I中重組水蛭素III滴眼液按照新藥臨床前指導原則方法M進行刺激性考察，選擇健康新西蘭兔4只，左眼每日給重組水蛭素III滴眼液5次，右眼給生理鹽水做空白對照，在1，24，48，72h進行眼部檢查，觀察結膜、角膜、虹膜及其他可見損傷，連續(xù)觀察7d，根據(jù)眼刺激反應分值標準記錄眼部反應的分值(結果見表I)。表I各個觀察時間各組眼睛最后得分
實驗動物組Ih 24h 48h 72h 4d 5d 6d 7d
給藥一側眼睛00000000
對照一側眼睛00000000
結論重組水蛭素III滴眼液給藥一側眼睛眼角膜、虹膜和結膜未出現(xiàn)刺激性，與對照一側眼睛一樣，由此證明重組水蛭素III滴眼液無眼刺激性。實施例3穩(wěn)定性實驗重組水蛭素III滴眼液測定抗凝活力后，分別置于4°C冰箱及室溫，在放置1，2，4周和3，6，12個月后，其抗凝活力及pH值沒有變化，外觀形狀、澄明度及無菌檢查均符合中華人民共和國藥典(二部)附錄IIIA對滴眼液的要求。實施例4藥效學實驗 對D-半乳糖誘導的白內(nèi)障大鼠的治療作用實驗藥物實施例I中的重組水蛭素111滴眼液實驗動物SD大鼠，雌雄各半，130±20g實驗方法和結果I. SD大鼠白內(nèi)障模型建立取24只SD大鼠隨機分成4組，每組均為6只(雌雄各半)，分別為正常對照組、模型對照組、白內(nèi)停對照組和重組水蛭素III滴眼液(2000ATU/ml)組。除正常對照組外，其它組SD大鼠均腹腔注射O. 08%的D-半乳糖溶液25mL/kg，相當于20mg/kg，每日分2次給藥，上下午各I次，連續(xù)給14d，并飲用10% D-半乳糖溶液[5]，正常對照組按同樣方式腹腔注射同體積的生理鹽水。造模成功后，各組分別雙眼點滴給藥，各組給藥容積均為IOOuL/只/次，每日分3次給藥，連續(xù)30天。2.重組水蛭素111滴眼液對白內(nèi)障大鼠的治療作用給藥30天后，使用復方托吡卡胺滴眼液散瞳，用裂隙燈顯微鏡定期觀察大鼠晶狀體的混濁程度，觀察后記錄結果。晶狀體混濁程度按表3標準分別賦予不同分值，進行組間t檢驗。模型組大鼠未經(jīng)藥物治療，隨著時間的延長其晶狀體的混濁程度越來越高。重組水蛭素III滴眼液組與模型組晶狀體混濁程度相比，有極顯著差異(P < O. 01)，表明重組水蛭素III滴眼液可顯著緩解晶狀體混濁(見表2和圖I)。表2rHVIII滴眼液對SD大鼠晶狀體混濁程度的影響( ±S，η = 6)
權利要求
1.一種含有透明質酸鈉的重組水蛭素滴眼液，其特征在于以透明質酸鈉為增稠劑。
2.根據(jù)權利要求I所述的滴眼液除重組水蛭素、透明質酸鈉以外，還含有等滲調節(jié)劑、金屬絡合劑、防腐劑、以及藥學上可接受的載體。
3.根據(jù)權利要求1、2所述滴眼液的制備方法，其特征在于將透明質酸鈉、等滲調節(jié)劑、金屬絡合劑和防腐劑溶解于藥學上可接受的載體制成滴眼液空白基質，然后將重組水蛭素溶解于該滴眼液空白基質中，過濾除菌、分裝，制得重組水蛭素滴眼液。
4.根據(jù)權利要求1、2所述的滴眼液，其特征在于所述的等滲調節(jié)劑選自氯化鈉、硼酸鹽緩沖液或者磷酸鹽緩沖液中的一種或幾種。
5.根據(jù)權利要求1、2所述的滴眼液，其特征在于所述的金屬絡合劑為乙二胺四乙酸二鈉。
6.根據(jù)權利要求1、2所述的滴眼液，其特征在于所述的防腐劑為對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、苯扎溴銨或硫柳汞中的一種或幾種。
7.根據(jù)權利要求1、2所述的滴眼液，其特征在于所述藥學上可接受的載體是注射用水。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種以透明質酸鈉為輔料的重組水蛭素滴眼液及其制備方法。本發(fā)明的技術特征在于重組水蛭素滴眼液中包含有透明質酸鈉，它具有防止藥液外溢流失、使藥物長時間滯留病灶區(qū)的作用。本發(fā)明還公布了重組水蛭素滴眼液的制備方法，該方法保證了滴眼液的澄明度及穩(wěn)定性。本發(fā)明制備的重組水蛭素滴眼液除包含重組水蛭素、透明質酸鈉以外，還包括等滲調節(jié)劑、金屬絡合劑、防腐劑以及藥學上可接受的載體。具體制備方法是將透明質酸鈉、等滲調節(jié)劑、金屬絡合劑、防腐劑溶解于藥學上可接受的載體中形成滴眼液空白基質，然后將重組水蛭素溶解于滴眼液空白基質中，過濾除菌、分裝，制得重組水蛭素滴眼液。制得的重組水蛭素滴眼液pH值為4.0～7.5。藥效學實驗結果表明，本發(fā)明所述方法制備的重組水蛭素滴眼液具有防治白內(nèi)障的作用。
文檔編號A61K9/08GK102727874SQ20121024843
公開日2012年10月17日 申請日期2012年7月18日 優(yōu)先權日2012年7月18日
發(fā)明者王娜, 王靜, 譚樹華 申請人:中國藥科大學