專利名稱：聚酰胺胺型樹枝狀大分子在制備抗細菌生物被膜形成的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及高分子化合物的新用途，特別涉及聚酰胺胺型樹枝狀大分子在制備抗細菌生物被膜形成的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
細菌生物被膜(或稱細菌生物膜Bacterial biofilm，BF)，是指細菌粘附于接觸表面，分泌多糖基質(zhì)、纖維蛋白、脂質(zhì)蛋白等，將其自身包繞其中而形成的大量細菌聚集膜樣物。多糖基質(zhì)通常是指多糖蛋白復(fù)合物，也包括由周邊沉淀的有機物和無機物等。在特定的條件下，細菌可以形成生物被膜，包被有生物被膜的細菌稱為被膜菌。被膜菌無論其形態(tài)結(jié)構(gòu)、生理生化特性、致病性還是對環(huán)境因子的敏感性等都與浮游細菌有 顯著的不同，尤其對抗生素和宿主免疫系統(tǒng)具有很強的抵抗力，從而導(dǎo)致嚴重的臨床問題，引起許多慢性和難治性感染疾病的反復(fù)發(fā)作。細菌生物被膜粘附在各種醫(yī)療器械及導(dǎo)管上極難清除，以至引發(fā)大量的醫(yī)源性感染?？股厥侵委熂毦腥咀罱?jīng)典的藥物，然而幾乎所有抗生素在治療細菌感染時都會不可避免地誘導(dǎo)細菌耐藥。近半個世紀以來，抗生素研發(fā)策略仍局限于傳統(tǒng)抗生素結(jié)構(gòu)改造和修飾，新抗生素用于臨床后細菌又會很快產(chǎn)生耐藥；而且，傳統(tǒng)的抗生素對細菌生物被膜的形成沒有抑制作用。因此，新型抗生素的研制并不能從根本上解決細菌耐藥問題。而且抗生素耐藥菌株的出現(xiàn)速度已經(jīng)遠遠超過了新抗生素研發(fā)的速度，臨床有效的抗菌藥物日趨減少。為了有效對抗日益嚴重的耐藥細菌，必須突破傳統(tǒng)思路，尋找具有新型結(jié)構(gòu)且不誘導(dǎo)耐藥的抗菌藥物。聚酰胺-胺(polyamidoamine, PAMAM)是ー種人工合成的納米級大分子化合物，由于具有單分散性、內(nèi)部空腔及表面豐富的可修飾基團等獨特結(jié)構(gòu)優(yōu)勢，PAMAM在生物醫(yī)藥領(lǐng)域，如基因藥物載體、助溶劑、高效催化劑及納米材料等方面，有非常廣泛的應(yīng)用和研究。PAMAM-NH2合成方法成熟，目前市售有Gl. 0-G10. O等數(shù)十種，隨著代數(shù)的增加，PAMAM納米尺寸、末端氨基數(shù)目、形狀和結(jié)構(gòu)特征也會隨之變化。由于PAMAM-NH2的種類繁多，耐藥菌的種類更是變化多祥，PAMAM-NH2是否具有抑制細菌生物被膜形成的活性？以及特定的PAMAM-NH2對哪些種類的耐藥菌具有抑制生物被膜形成的活性？這些技術(shù)問題在現(xiàn)有技術(shù)中沒有報道過。因此，針對PAMAM-NH2的抗被膜菌活性研究對于新藥開發(fā)而言顯得尤為重要。

發(fā)明內(nèi)容
鑒于現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于通過大量試驗對聚酰胺胺型樹枝狀大分子(PAMAM-NH2)進行體外活性研究，提供一種聚酰胺胺型樹枝狀大分子在制備抗細菌生物被膜形成的藥物中的新用途。本發(fā)明創(chuàng)造性地通過試驗將G2. 0-G4. O PAMAM-NH2分別與ESBLs-EC和MRSA共培養(yǎng)7天，通過銀染法檢測PAMAM-NHJi生物被膜形成的影響；結(jié)果得出20 μ g/mL G2. 0_G4. OPAMAM均可減少黑色棉絮樣膜狀物，可抑制ESBLs-EC和MRSA生物被膜的形成。因此，根據(jù)上述研究結(jié)果，發(fā)明人提供了聚酰胺胺型樹枝狀大分子在制備抗細菌生物被膜形成的藥物中的應(yīng)用，所述的聚酰胺胺型樹枝狀大分子為2. 0-4. O代聚酰胺胺型樹枝狀大分子。優(yōu)選地，所述細菌為耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌MRSA或/和產(chǎn)超廣譜β -內(nèi)酰胺酶的大腸桿菌ESBLs-EC。進ー步優(yōu)選地，所述的聚酰胺胺型樹枝狀大分子為2. O代聚酰胺胺型樹枝狀大分子。本發(fā)明通過銀染法得出了 PAMAM-NH2可以抑制ESBLs-EC和MRSA生物被膜的形成， 顯著優(yōu)于抗生素，為臨床上耐藥菌的徹底殺滅增加了候選藥物，豐富了現(xiàn)有技木。


圖I細菌ESBLs-EC和MRSA培養(yǎng)7天后生物被膜的銀染色照片(放大倍數(shù)，X200);其中(A)空白對照組；(B) ESBLs-EC 對照組；(C) MRSA 對照組；(D-F) 20 μ g/mL G2. O,G3. O 或 G4. O PAMAM-NH2 處理的 ESBLs-EC 實驗組；(G-I) 20 μ g/mL G2. O, G3. O 或 G4. OPAMAM-NH2處理的MRSA實驗組。
具體實施例方式本發(fā)明創(chuàng)造性地通過試驗對聚酰胺胺型樹枝狀大分子(PAMAM-NH2)進行體外活性研究，為PAMAM-NH2開發(fā)成新一代的臨床抗菌藥物奠定了基礎(chǔ)。以下是G2. 0-G4. OPAMAM-NH2體外抑制細菌生物被膜形成的效果實施例。實施例I G2. 0-G4. O PAMAM-NH2體外抑制細菌生物被膜形成的考察研究 I，材料和方法
1.1，實驗菌株
ESBL-EC和MRSA菌株(見表I)用于本部分實驗。表I試驗所用的11株標準菌株和6株耐藥菌株
權(quán)利要求
1.聚酰胺胺型樹枝狀大分子在制備抗細菌生物被膜形成的藥物中的應(yīng)用，所述的聚酰胺胺型樹枝狀大分子為2. 0-4. O代聚酰胺胺型樹枝狀大分子。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述聚酰胺胺型樹枝狀大分子在制備抗細菌生物被膜形成的藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述細菌為耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌MRSA或/和產(chǎn)超廣譜β -內(nèi)酰胺酶的大腸桿菌ESBLs-EC。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述聚酰胺胺型樹枝狀大分子在制備抗細菌生物被膜形成的藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的聚酰胺胺型樹枝狀大分子為2. O代聚酰胺胺型樹枝狀大分子。
全文摘要
本發(fā)明公開了聚酰胺胺型樹枝狀大分子在制備抗細菌生物被膜形成的藥物中的應(yīng)用，所述的聚酰胺胺型樹枝狀大分子為2.0-4.0代聚酰胺胺型樹枝狀大分子。本發(fā)明通過銀染法得出了PAMAM-NH2可以抑制ESBLs-EC和MRSA生物被膜的形成，顯著優(yōu)于抗生素，為臨床上耐藥菌的徹底殺滅增加了候選藥物，豐富了現(xiàn)有技術(shù)。
文檔編號A61K31/785GK102846654SQ201210257399
公開日2013年1月2日 申請日期2012年7月25日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月25日
發(fā)明者羅曉星, 薛小燕, 李治, 周穎, 孟靜茹, 侯征 申請人:中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)