專利名稱：白藜蘆醇的制藥用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及白藜蘆醇用于預(yù)防急性心肌梗死患者發(fā)生心臟破裂并發(fā)癥的新用途，提出白藜蘆醇具有減少急性心肌梗死后心臟破裂發(fā)生的療效。
背景技術(shù)：
心臟破裂是急性心肌梗死的致命性并發(fā)癥，文獻報道左心室游離壁的破裂最常見，發(fā)生率為1% -3%，是乳頭肌斷裂和室間隔穿孔的8-10倍。國內(nèi)外文獻報道，心臟破裂占院內(nèi)急性心肌梗死總死亡人數(shù)的15. 8% -30%。急性心肌梗死患者發(fā)生心臟破裂后病情進展快，迅速出現(xiàn)循環(huán)衰竭甚至死亡，病死率高，臨床救治手段非常有限，且成功率很低。因此，尋找有效的預(yù)防措施尤為重要。為了找到合適的治療靶點，急性心肌梗死后心臟破裂的發(fā)生機制已成為研究熱點。研究發(fā)現(xiàn)人體抑癌基因P53的缺失、糖原合成酶激酶 _3α (glycogen synthase kinase-3 α , GSK-3 α )的激活、蛋白聚糖 4 (Syndecan-4)等能夠抑制心肌梗死小鼠發(fā)生心臟破裂的發(fā)生，而炎癥浸潤則促進心臟破裂。另外促進急性心肌梗死的心肌細(xì)胞膠原蛋白合成、增強其穩(wěn)定性的生物制劑的研究也在進行中，有望提供新的治療靶點，但是目前還在動物實驗階段，距臨床應(yīng)用還有較長的時間。白藜蘆醇存在于葡萄科、百合科、豆科等70多種植物中，在葡萄中的含量尤為豐富。每克新鮮的葡萄皮中約含白藜蘆醇50-100 μ g。而在紅葡萄酒中的濃度高達I. 5-30mg/L。它屬于非黃酮類多酚化合物，化學(xué)結(jié)構(gòu)如下
OH分子式為C14H1203，化學(xué)名為3，4'，5_三羥基二苯乙烯。白藜蘆醇為無色針狀結(jié)晶，易溶于丙二醇、乙醚、氯仿、甲醇、乙醇、乙酸乙酯等，可制備成用于口服的片劑、膠囊和用于靜脈注射的針劑。人口服白藜蘆醇1.5mg/kg可在30分鐘內(nèi)達到血藥濃度達到高峰，并在120分鐘內(nèi)恢復(fù)。人的有效口服劑量是4mg/kg。小鼠白藜蘆醇口服的半數(shù)致死量是1000mg/kg。白藜蘆醇可制成含量10-300mg的片劑，也可制成IO-IOOmg的粉針劑。隨著對白藜蘆醇研究的深入，其廣泛的藥理作用逐漸被發(fā)現(xiàn)，如抗腫瘤、抗抗炎、免疫調(diào)節(jié)、抗菌、抗病毒、抗衰老(抗氧化和抗自由基)及雌激素樣活性等，它還能減輕多種因素造成的組織器官損傷及保護肝細(xì)胞的作用。白藜蘆醇在心血管系統(tǒng)方面的作用包括抗氧化、清除自由基作用、抗細(xì)胞凋亡、抑制血小板聚集、調(diào)節(jié)血脂、防止動脈粥樣硬化等多種藥理作用。動物實驗研究證實白藜蘆醇能夠劑量依賴性地降低大鼠心肌冠脈結(jié)扎后ST段抬高，降低肌酸激酶和乳酸脫氫酶活力，縮小心肌梗死面積，降低心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)，抑制凋亡蛋白Fas、Bax的表達，增強抑凋亡蛋白Bcl_2的表達，抑制左室短軸縮短率的下降和心室重塑，改善心功能。一項隨機雙盲安慰劑對照的臨床研究也證實心肌梗死后患者每天服用白藜蘆醇膠囊10mg，連續(xù)3個月，能夠明顯改善左室功能和內(nèi)皮功能，降低低密度脂蛋白膽固醇水平。此外，目前還沒有關(guān)于高劑量攝人白藜蘆醇的安全性和副作用的報道。白藜蘆醇在普通劑量范圍內(nèi)沒有發(fā)現(xiàn)有任何值得注意的不良作用被報道。由此認(rèn)為，白藜蘆醇對于心肌梗死后患者的治療是安全的。但是白藜蘆醇制劑抑制心臟破裂的藥理作用目前并無報道，我們的研究發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇可以抑制心肌梗死小鼠的急性期死亡率，減少心臟破裂的發(fā)生，可以用于預(yù)防心梗后心臟破裂。與國內(nèi)外現(xiàn)有報道不同，而具有用途的新穎性。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明人使用白藜蘆醇(美國sigma公司生產(chǎn))進行了治療實驗性急性心肌梗死小鼠的研究。結(jié)果表明白藜蘆醇可以抑制心肌梗死小鼠的急性期死亡率，減少心臟破裂的發(fā)生。


圖I.顯示小鼠心肌梗死的心電圖特征，符合診斷標(biāo)準(zhǔn)。圖2.小鼠總生存率分析，顯示白藜蘆醇治療組(MI+RES)生存率明顯高于不治療的心肌梗死組(MI)，且死亡主要集中在前10天。圖3.心臟破裂示例圖，顯示了冠狀動脈結(jié)扎位置和心臟破裂的位置。圖4.心臟破裂的發(fā)生率，心肌梗死未治療組(A)和白藜蘆醇治療組(B)的發(fā)生率分別為48. 6%和15. 8%。圖5.免疫組化結(jié)果，發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇治療組小鼠心肌的Fractalkine及ICAM-I的表達較未治療組顯著下調(diào)(MI =心肌梗死，RES =白藜蘆醇，Sham =假手術(shù)組)
具體實施例方式白藜蘆醇藥物制劑腹腔注射預(yù)防小鼠急性心肌梗死心臟破裂。I實驗?zāi)康挠^察白藜蘆醇對預(yù)防急性心肌梗死后心臟破裂并發(fā)癥發(fā)生的治療作用。2受試藥物白藜蘆醇(美國sigma公司生產(chǎn))粉針劑，用丙二醇溶解。3實驗動物C57BL/6雄性小鼠(11-12周齡)，體重約25_30g，共85只。由南方醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，合格證號scxk粵2006-0015。4實驗方法小鼠急性心肌梗死模型的建立采用11-12周齡C57BL/6雄性小鼠，體重約25-30g，戊巴比妥鈉(50mg/kg)腹腔注射麻醉實驗小鼠。麻醉后，將小鼠仰臥位固定四肢于操作臺上。胸前區(qū)脫毛，手術(shù)區(qū)消毒，經(jīng)口明視下氣管插管，呼吸機輔助呼吸(潮氣量O. 5ml、呼吸頻率130次/min)。經(jīng)胸骨左側(cè)第四肋間開口，鈍性分離皮下肌肉，暴露心臟。以8號尼龍線穿過左心耳下緣1-2_處的2/3心肌層，結(jié)扎左側(cè)冠脈(小鼠部分前降支和左旋支)。實驗過程中心電圖實時監(jiān)測，以小鼠心肌顏色變白且心電圖ST段持續(xù)弓背抬高(> 1/2R波)呈單峰曲線作為模型成功標(biāo)志(圖I)。逐層關(guān)胸，拔出氣管插管，術(shù)后小鼠保溫護理。5白藜蘆醇藥物制劑的投用方法實驗分為4組假手術(shù)+丙二醇組；假手術(shù)+白藜蘆醇組；心肌梗死+丙二醇組；心肌梗死+白藜蘆醇組。心肌梗死術(shù)后12h存活小鼠隨機給予白藜蘆醇治療或溶劑丙二醇。白藜蘆醇按照20mg/kg/日的劑量給予腹腔注射。治療和觀察時間為6周。6觀察指標(biāo)小鼠的生存情況和死亡原因，白藜蘆醇治療對促炎因子的影響。7實驗結(jié)果DKaplan-Meier生存分析，結(jié)果顯示白藜蘆醇的治療可以明顯改善小鼠的生存狀況(Log-rank P = O. 022)，累積生存率從55%增加至80% (圖2 :MI =心肌梗死，RES =白藜蘆醇，Sham=假手術(shù)組)。2)心臟破裂是小鼠心肌梗死急性期(圖3顯示梗死心肌的破裂處)死亡的主要原因(占90%以上)，心肌梗死組心臟破裂發(fā)生率為48. 6% (圖4A)，心肌梗死+白藜蘆醇組的心臟破裂發(fā)生率為15.8% (圖4B)，兩者之間差異顯著(P <0.01)，表明白藜蘆醇治療能有效減少心肌梗死后的心臟破裂發(fā)生。3)免疫組化發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇治療組小鼠心肌的Fractalkine及ICAM-I的表達較未治療組顯著下調(diào)(圖5 :MI =心肌梗死，RES =白藜蘆醇，Sham =假手術(shù)組)。實驗結(jié)果表明心臟破裂 是小鼠心肌梗死急性期(心肌梗死發(fā)生后的10天內(nèi))死亡的主要原因，白藜蘆醇治療能有效提高急性心肌梗死小鼠的生存率，減少心臟破裂的發(fā)生。白藜蘆醇還使促炎因子Fractalkine及ICAM-I的表達水平下降。實驗結(jié)論白藜蘆醇治療能有效抑制急性心肌梗死小鼠發(fā)生心臟破裂，提高生存率。本發(fā)明的積極意義急性心肌梗死后的心臟破裂，病死率高，臨床搶救和治療手段非常有限，且成功率很低。本發(fā)明提出了白藜蘆醇能夠有效預(yù)防急性心肌梗死后的心臟破裂發(fā)生，有利于降低患者的病死率，具有積極的臨床意義。尤其是白藜蘆醇已經(jīng)用于臨床治療心臟破裂之外的其他疾病，并被證明是安全的。以此為基礎(chǔ)，可望大大縮短本發(fā)明作為臨床防治急性心肌梗死心臟破裂的新適應(yīng)癥。
權(quán)利要求
1.白藜蘆醇在制備預(yù)防心肌梗死后心臟破裂的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供白藜蘆醇的新適應(yīng)癥。提供證據(jù)表明白藜蘆醇具有預(yù)防急性心肌梗死后發(fā)生心臟破裂并發(fā)癥的新用途。提出白藜蘆醇具有抑制促炎因子-不規(guī)則趨化因子和細(xì)胞間粘附分子的作用，從而達到降低心肌炎癥、減少急性心肌梗死后心臟破裂發(fā)生率的療效。
文檔編號A61K31/05GK102871990SQ20121026591
公開日2013年1月16日 申請日期2012年7月30日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月30日
發(fā)明者廖禹林, 禤婉玲, 賓建平, 吳冰 申請人:南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院