一種中藥組合物在制備破壞細菌生物膜的藥物中的應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種中藥組合物在制備破壞細菌生物膜的藥物中的應用。該中藥組合物是由連翹、金銀花、麻黃、苦杏仁等藥味組成，實驗證實，該中藥組合物可以破壞細菌生物被膜，有利于殺滅細菌，也可以提高普通抗生素的療效。
【專利說明】一種中藥組合物在制備破壞細菌生物膜的藥物中的應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種中藥組合物的新用途，具體地，涉及一種中藥組合物在制備破壞細菌生物膜的藥物中的應用，屬中藥應用領域。
【背景技術】
[0002]超過半數(shù)的感染性疾病都是由與人類息息相關的條件致病菌引起的，如金黃色葡萄球菌aureus, 51 a )和銅綠假單胞菌aeruginosa, P.a) 等，這些致病菌常能導致極為嚴重的慢性感染性疾病，不論是在生物材料相關的感染中，還是在其他的一些慢性感染性疾病如牙周炎及相關疾病、難治性呼吸道感染、前列腺炎等，都能發(fā)現(xiàn)上皮細胞表面多聚物層層包繞的致病菌組成的膜狀物。這些膜狀物就是細菌生物被膜(Biofilm，BF)。據(jù)美國NIH的統(tǒng)計，約80%人類細菌感染性疾病是由BF的形成引起的， 雖然應用各種抗感染藥，病原菌仍持續(xù)存在，導致慢性持續(xù)性感染或感染反復發(fā)作，是臨床上一大難題。
[0003]BF是細菌為適應環(huán)境的一種生長方式，由于生物被膜的形態(tài)與正常菌落區(qū)別很大，且體外常規(guī)培養(yǎng)下生物被膜會消失，電鏡標本的制作過程又易使這些含水份的多糖基質壓縮，故人們很長時間未認識生物被膜。1978年，才有人首先提出生物被膜的相關理論。 BF附著于組織或固體表面，由細菌分泌的胞外多糖復合物將自身克隆聚集包裹于其中而形成的一層膜樣物。BF中水份含量可高達97%，除了水和細菌外，BF還含有大分子多聚物，如蛋白質，多糖，DNA, RNA，肽聚糖，脂和磷酯等，同時還 含有吸附的營養(yǎng)物質和代謝產物。
[0004]BF具有極強的耐藥性及免疫逃避性，近年來人們針對BF形成的藥物滲透屏障，采取了聯(lián)合用藥方法，即用一種藥物破壞BF，另一種藥物進入BF殺滅細菌。由于BF的頑固性，給藥劑量很難控制，如果用藥劑量低，不能完全去除BF，會誘導菌株的耐藥性，但是提高抗生素的用量又涉及藥物的毒性問題。
[0005]中國專利03143211.5公開了該中藥組合物具有抗病毒的作用，可應用于流行性感冒，但該專利未提及該中藥組合物破壞細菌生物膜的作用。
[0006]本發(fā)明是在第03143211.5號的基礎上進行的改進發(fā)明，在此全文引用該專利文件記載的內容。

【發(fā)明內容】

[0007]本發(fā)明涉及一種中藥組合物的新用途，具體地，涉及一種中藥組合物在制備破壞細菌生物膜的藥物中的應用。
[0008]本發(fā)明所述中藥可以被有相同或相似功效的中藥代替，并且這些藥材均可按照 《全國中藥炮制規(guī)范》或《中藥大辭典》進行炮制。
[0009]本發(fā)明目的是提供一種中藥組合物在制備治療破壞細菌生物膜的藥物中的應用， 所述中藥組合物由如下重量份的原料藥制成:
連翹210-280，金銀花210-280，板藍根210-280，大黃45-55，廣藿香75-100，綿馬貫眾210-280,紅景天75-100，薄荷腦5.5-8.5，麻黃75-100，苦杏仁75-100，魚腥草210-280,甘草 75-100，石膏 210-280。
[0010]優(yōu)選地，該中藥組合物由如下重量份的原料藥制成:
連翹210，金銀花280，板藍根210，大黃55，廣藿香75，綿馬貫眾280，紅景天75，薄荷腦
8.5，麻黃75，苦杏仁100，魚腥草210，甘草100，石膏210。
[0011]或:
連翹280，金銀花210，板藍根280，大黃45，廣藿香100，綿馬貫眾210，紅景天75，薄荷腦5.5，麻黃100，苦杏仁75，魚腥草280，甘草75，石膏280。
[0012]或:
連翹258，金銀花258，板藍根258，大黃50，廣藿香88，綿馬貫眾258，紅景天88，薄荷腦
7.8，麻黃88，苦杏仁88，魚腥草258，甘草88，石膏258。
[0013]優(yōu)先地，所述中藥組合物所用原料藥中，麻黃可以為蜜麻黃，苦杏仁可以為炒苦杏仁。
[0014]本發(fā)明還提供了所述中 藥組合物的活性成分由以下步驟制成:
(1)按照原料藥重量比例稱取中藥材，凈選；
(2)廣藿香碎斷，加5-10倍量水提取揮發(fā)油，提油時間4小時，收集揮發(fā)油，備用；提取液過濾后，殘洛棄去，濾液備用；
(3)連翹、麻黃、魚腥草、大黃，用6-10倍量50-90%的乙醇提取2次，每次1-3小時，提取液合并過濾，回收乙醇，濾液備用；
(4)金銀花、石膏、板藍根、綿馬貫眾、甘草、紅景天，加7-11倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁，煎煮2次，每次0.5-2.5小時，提取液合并過濾，所得濾液與步驟(2)廣藿香提油后的濾液合并，濃縮成在60°C時測定相對密度為1.10-1.15的清膏，加入乙醇，調解至醇濃度為 70%，冷藏放置，過濾，回收乙醇至無醇味，得清膏備用；
(5)將步驟(4)所得所得清膏與步驟(3)所得醇提液合并，濃縮至在60°C時測定相對密度為1.15-1.20的清膏，干燥，得干膏粉，備用；
步驟(5)所得干膏粉、步驟(2)所得揮發(fā)油與薄荷腦共同構成該中藥組合物的活性成分。
[0015]本發(fā)明藥物的劑型為膠囊劑、片劑、散劑、口服液、軟膠囊、丸劑、酊劑、糖漿劑、栓
劑、凝膠劑、噴霧劑或注射劑。
[0016]為使上述劑型能夠實現(xiàn)，需在制備這些劑型時加入藥學可接受的輔料，例如:填充劑、崩解劑、潤滑劑、助懸劑、粘合劑、甜味劑、矯味劑、防腐劑、基質等。填充劑包括:淀粉、預膠化淀粉、乳糖、甘露醇、甲殼素、微晶纖維素、蔗糖等；崩解劑包括:淀粉、預膠化淀粉、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉等；潤滑劑包括:硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉、滑石粉、二氧化硅等；助懸劑包括:聚乙烯吡咯烷酮、微晶纖維素、蔗糖、瓊脂、羥丙基甲基纖維素等；粘合劑包括，淀粉漿、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素等；甜味劑包括:糖精鈉、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矯味劑包括:甜味劑及各種香精；防腐劑包括:尼泊金類、苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸及其鹽類、 苯扎溴銨、醋酸氯乙定、桉葉油等；基質包括:PEG6000，PEG4000，蟲蠟等(范碧亭《中藥藥劑學》，上?？茖W出版社.1997年12月第I版.各劑型記載的輔料)。[0017]其中膠囊劑的制備方法，是由以下步驟制成:
(1)按照原料藥重量比例稱取中藥材，凈選；
(2)廣藿香碎斷，加5-8倍量水提取揮發(fā)油，提油時間4小時，收集揮發(fā)油，備用；提取液過濾后，殘洛棄去，濾液備用；
(3)連翹、麻黃、魚腥草、大黃，用6-10倍量50-90%的乙醇提取2次，每次1-3小時，提取液合并過濾，回收乙醇，濾液備用；
(4)金銀花、石膏、板藍根、綿馬貫眾、甘草、紅景天，加7-11倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁，煎煮2次，每次0.5-2.5小時，提取液合并過濾，所得濾液與步驟(2)廣藿香提油后的濾液合并，濃縮成在60°C時測定相對密度為1.10-1.15的清膏，加入乙醇，調解至醇濃度為 70%，冷藏放置，過濾，回收乙醇至無醇味，得清膏備用；
(5)將步驟(4)所得所得清膏與步驟(3)所得醇提液合并，濃縮至在60°C時測定相對密度為1.15-1.20的清膏，干燥，得干膏粉，備用；
(6)將步驟(5)所得干膏粉加入適當藥學上可接受的輔料制粒；
(7)將薄荷腦、步驟(2)所得揮發(fā)油加入乙醇溶解，噴入步驟(6)所得顆粒，密閉，混勻，裝入膠囊，即得。
[0018]其中顆粒劑的制備方法，是由以下步驟制成:
(1)按照原料藥重量比例稱取中藥材，凈選，酌情碎斷；
(2)廣藿香碎斷，加5-8倍量水提取揮發(fā)油，提油時間4小時，收集揮發(fā)油，備用；提取液過濾后，殘洛棄去，濾液備用；
(3)連翹、麻黃、魚腥草、大黃，用6-10倍量50-90%的乙醇提取2次，每次1-3小時，提取液合并過濾，回收乙醇，濾液備用；
(4)金銀花、石膏、板藍根、綿馬貫眾、甘草、紅景天，加7-11倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁，煎煮2次，每次0.5-2.5小時，提取液合并過濾，所得濾液與步驟(2)廣藿香提油后的濾液合并，濃縮成在60°C時測定相對密度為1.10-1.15的清膏，加入乙醇，調解至醇濃度為 70%，冷藏放置，過濾，回收乙醇至無醇味，得清膏備用；
(5)將步驟(4)所得所得清膏與步驟(3)所得醇提液合并，濃縮至在60°C時測定相對密度為1.15-1.20的清膏，干燥，得干膏粉，備用；
(6)將步驟(5)所得干膏粉加入適當藥學上可接受的輔料制粒；
(7)將薄荷腦、步驟(2)所得揮發(fā)油加入乙醇溶解，噴入步驟(6)所得顆粒，密閉，混勻，裝袋，即得。
[0019]優(yōu)選的顆粒劑的制備方法為:
(1)按照原料藥重量比例稱取中藥材，凈選，酌情碎斷；
(2)廣藿香碎斷，加6倍量水提取揮發(fā)油，提油時間4小時，收集揮發(fā)油，備用；提取液過濾后，殘渣棄去，濾液備用；
(3)連翹、麻黃、魚腥草、大黃，用8倍量70%的乙醇提取2次，第一次2小時，第二次
1.5小時，提取液合并過濾，回收乙醇,濾液備用；
(4)金銀花、石膏、板藍根、綿馬貫眾、甘草、紅景天，加9倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁、煎煮2次，第一次1.5小時，第二次I小時，提取液合并過濾，所得濾液與步驟(2)廣藿香提油后的水濾液合并，濃縮成在60°C時測定相對密度為1.10-1.15的清膏，加95%乙醇，調節(jié)至醇濃度為70%，冷藏放置，過濾，回收乙醇至無醇味，得清膏濾液；
(5)將步驟(4)所得清膏濾液與步驟(3)所得醇提液合并，濃縮至在60°C時測定相對密度為1.25-1.35的稠膏，備用；
(6)將步驟(5)所得稠膏加入適當藥學上可接受的輔料制粒；
(7)將薄荷腦、步驟(2)所得揮發(fā)油加入乙醇溶解，噴入步驟(6)所得顆粒，密閉，混勻，裝袋，即得。
[0020]本發(fā)明藥物的其他劑型按比例稱取原料藥后，采用常規(guī)的制備方法制備，例如，范碧亭《中藥藥劑學》(上?？茖W出版社1997年12月第I版)記載的制備工藝，制成藥劑學可接受的常規(guī)劑型。
[0021]該中藥組合物可以提高抗生素的抗菌療效，該中藥組合物可有效破壞細菌生物膜或者滲透入細菌生物膜殺滅細菌。
[0022]為證實本發(fā)明藥物組合物破壞細菌生物膜的作用效果，用按實施例1制得的膠囊劑 (以下稱本發(fā)明藥物)，進行了如下實驗:
實驗例1:本發(fā)明藥物破壞細菌生物膜的作用 1、材料和試劑
1.1 菌株:金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus, S.a, ATCC 25923)。
[0023]1.2 藥物
本發(fā)明藥物(按照實施例1的方法制備)內容物，由石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司提供， 每克含生藥9.78g，進行離體實驗時，配制浸膏粉濃度為12500ug/ml共10ml，靜止12小時后，取上清液，倍比稀釋，共10個濃度進行實驗；注射用青霉素鈉，由華北制藥股份有限公司生產。
[0024]1.3試劑與儀器
胰蛋白胨、酵母提取物(英國OXOID公司)，結晶紫(美國AMRESC0公司)，微生物活性檢測試劑盒(日本同仁化學研究所)，LIVE/DEAD? BacLight Bacterial Viability試劑盒(美國Molecular Probes公司)，戊二醛(上?；瘜W試劑公司)，自動洗板機(美國伯騰儀器有限公司)，恒溫恒濕培養(yǎng)箱(上海森信實驗儀器有限公司)，酶標儀(美國伯樂公司)，激光共聚焦顯微鏡(日本奧林巴斯公司)，掃描電子顯微鏡(日本日立公司)。
[0025]2、試驗方法
2.1最小抑菌濃度檢測:
將本發(fā)明藥物(200000 - 100ug/ml)和青霉素(2 - 0.001ug/ml)分別進行倍比稀釋，加 A 96孔圓底培養(yǎng)板中，使板中的細菌濃度為0D600=0.05。將96孔板置于37°C培養(yǎng)24小時，每孔取菌液，接種于LB固體培養(yǎng)基，37°C培養(yǎng)24小時，觀察無細菌生長的最小濃度即是藥物最小抑菌濃度。`
[0026]2.2藥物對S.a生物膜形成的影響:
觀察本發(fā)明藥物對S.a生物膜形成過程的作用，將本發(fā)明藥物(12500 - 24.4ug/ml)和青霉素(2 - 0.004ug/ml)分別用LB培養(yǎng)液進行倍比稀釋，加入96孔圓底培養(yǎng)板與細菌(細菌濃度為0D600=0.05)混合，陰性對照加入相同體積的LB培養(yǎng)液，終體積200ul，每個濃度 4個復孔，置于37°C培養(yǎng)24小時。用0.01M的PBS緩沖液清洗2次，去掉懸浮細菌。生物膜內所有的物質及活細菌數(shù)量分別通過結晶紫(Crastal Violet, CV)及WST染色法對每孔細菌生物膜的生物量進行測定。
[0027]2.3藥物對成熟S.a生物膜的影響:
成熟S.a生物膜的培養(yǎng):將S.a用含葡萄糖的LB培養(yǎng)液稀釋至0D600=0.05，加入96孔圓底培養(yǎng)板，每孔200ul，37°C培養(yǎng)24小時，形成S.a生物膜。
[0028]棄培養(yǎng)基，洗去懸浮細菌，將本發(fā)明藥物(12500 - 24.4ug/ml)和青霉素(20 -
0.04ug/ml)分別用含葡萄糖的LB培養(yǎng)液進行倍比稀釋，加入96孔板，陰性對照加入相同體積含葡萄糖的LB培養(yǎng)液，每孔200ul，每個濃度4個復孔，置于37°C培養(yǎng)24小時。用0.01M 的PBS緩沖液清洗2次，去掉懸浮細菌。利用CV染色和WST檢測方法對每孔細菌生物膜的生物量進行測定。
[0029]2.4用掃描電子顯微鏡觀察藥物對S.a生物膜的影響:
藥物對S.a生物膜形成的影響:本發(fā)明藥物(濃度12500ug/ml浸膏粉上清倍比稀釋)和青霉素(終濃度2ug/ml)分別與細菌(細菌濃度為0D600=0.05)混合，共培養(yǎng)于24孔板，陰性對照加入相同體積的LB培養(yǎng)液，終體積500ul，置于37°C培養(yǎng)24小時。
[0030]藥物對成熟S.a生物膜的影響:將S.a用含葡萄糖的LB培養(yǎng)液稀釋至 0D600=0.05，加入24孔培養(yǎng)板，每孔500ul，37°C培養(yǎng)24小時，形成S.a生物膜。棄上層培養(yǎng)基，洗去懸浮細菌，將本發(fā)明藥物(12500ug/ml)和青霉素(20ug/ml)分別用含葡萄糖的 LB培養(yǎng)液稀釋，加入有成熟細菌生物膜的24孔板中，空白對照加入相同體積含葡萄糖的LB 培養(yǎng)液，每孔500ul，置于37°C培養(yǎng)24小時。
[0031]各樣本經(jīng)2.5%戊二醛固定，乙醇逐級脫水，真空冷凍干燥、噴金，掃描電子顯微鏡下拍照觀察。
[0032]用激光共聚焦顯微鏡觀察藥物對S.a生物膜的影響
藥物對S.a生物膜形成的影響:本發(fā)明藥物(終濃度12500ug/ml浸膏粉上清倍比稀釋) 和青霉素(終濃度2ug/ml)分別與細菌(細菌濃度為0D600=0.05)混合，共培養(yǎng)于35mm的小皿中，陰性對照加入相同體積的LB培養(yǎng)液，終體積2000ul，置于37°C培養(yǎng)24小時。
[0033]藥物對成熟S.a生物膜的影響:將S.a用含葡萄糖的LB培養(yǎng)液稀釋至 0D600=0.05，接種于35mm的小皿中，每孔2000ul，37°C培養(yǎng)24小時，形成S.a生物膜。棄上層培養(yǎng)基，洗去懸浮細菌，將本發(fā)明藥物(12500ug/ml)和青霉素(20ug/ml)分別用含葡萄糖的LB培養(yǎng)液稀釋，加入有成熟細菌生物膜的小皿中，空白對照加入相同體積含葡萄糖的 LB培養(yǎng)液，每孔2000ul，置于37°C培養(yǎng)24小時。
[0034]各樣本用LIVE/DEAD? BacLight.Bacterial Viability Kits 染色,直接用共焦激光掃描顯微鏡進行觀察。
[0035]2.6本發(fā)明藥物與抗生素的協(xié)同作用
將本發(fā)明藥物(200000 - 100ug/ml)和青霉素(2 - 0.001ug/ml)分別進行倍比稀釋，按照藥物濃度從高到低，同時加入本發(fā)明藥物和青霉素至96孔圓底培養(yǎng)板中，使板中的細菌濃度為0D600=0.05，同時進行二者單獨的抑菌試驗和空白對照。將96孔板置于37°C培養(yǎng) 24小時，每孔取菌液，接種于LB固體培養(yǎng)基，37°C培養(yǎng)24小時，觀察無細菌生長的最小濃度既是二者協(xié)同作用的最小抑菌濃度。
[0036]3 結果
3.1本發(fā)明藥物對S.a最小抑菌濃度本發(fā)明藥物最小抑菌濃度為100mg/ml,青霉素最小抑菌濃度為2ug/ml。
[0037]3.2本發(fā)明藥物對S.a生物膜形成的影響
圖1示，CV染色本發(fā)明藥物(12500-781.25ug/ml)和青霉素(2_0.125ug/ml)可以抑制S.a生物膜的形成。圖2示，WST檢測本發(fā)明藥物(12500-1562.5ug/ml)和青霉素 (2-0.25ug/ml)可以減少形成金黃色葡萄球菌生物膜的活細菌數(shù)量。
[0038]3.3用掃描電鏡觀察藥物對細菌生物膜形成的影響
掃描電鏡圖片顯示，對照組有大量細菌密集疊加在一起，細菌形態(tài)正常，表面光滑，大小基本一致(圖3A);本發(fā)明藥物組細菌量較少，大小形態(tài)不一致，半數(shù)以上細胞腫脹，直徑增大，個別細菌塌陷萎縮(圖3B);青霉素組，細菌雖然數(shù)量較少，但大小形態(tài)規(guī)則，直徑基本一致(圖3C)。
[0039]3.4用激光共聚焦顯微鏡觀察藥物對細菌生物膜形成的影響
共聚焦顯微鏡圖片顯示，空白對照組形成細菌生物膜，細菌生物膜主要以活菌為主體， 其間散落死菌(或休眠細菌)；本發(fā)明藥物組和青霉素組，有少量細菌量散落分布，主要以死菌為主，活菌散落其間(見圖4)。
[0040]3.5藥物對成熟S.a生物膜的作用
圖5示，本發(fā)明藥物(12500-781.25ug/ml)可以顯著減少S.a生物膜的總的生物量(圖
5),而青霉素對成熟細菌生物膜作用不明顯。本發(fā)明藥物(12500-1562.5ug/ml)可以減少
S.a生物膜的活細菌數(shù)量(圖6)，而青霉素對生物膜作用不明顯。
[0041]3.6用掃描電鏡觀察藥物對成熟細菌生物膜的影響
掃描電鏡圖片顯示，空白對照組有大量細菌密集疊加在一起，細菌形態(tài)正常，表面光滑，大小基本一致(圖7A);本發(fā)明藥物組有散在細菌菌落存在，大小形態(tài)不一致，多數(shù)細菌腫脹破裂，直徑明顯增大(圖7B);青霉素組有大量細菌密集疊加在一起，細菌形態(tài)正常，個別細菌塌陷萎縮，但大體正常(圖7C)。
[0042]3.7用激光共聚焦顯微鏡觀察藥物對細菌生物膜形成的影響
共聚焦顯微鏡圖片顯示(綠色表示活菌、紅色表示死菌)，空白對照組細菌生物膜正常， 細菌生物膜主要以活菌為主體，其間散落死菌(或休眠細菌)；本發(fā)明藥物組細菌生物膜厚度顯著降低，死菌和活菌相互參雜，有大量死菌存在于膜內；青霉素組細菌生物膜未見顯著下降，以活菌為主，活菌分布在細菌生物膜上層(圖8)。
[0043]3.8 二者的協(xié)同作用
測試結果，當本發(fā)明藥物為12500ug/ml,青霉素濃度為0.125ug/ml時即可表現(xiàn)出較強的抑菌效果，二者單獨在此濃度時并沒有抑菌作用，可見本發(fā)明藥物對抗生素具有提高療效的作用，原因與本發(fā)明藥物可有效破壞細菌生物膜，使抗生素的藥效可直達細菌體而產生抗菌作用。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0044]圖1本發(fā)明藥物和青霉素對S.a生物膜形成的作用(CV染色)；與對照組比較，
林*P〈0.001。
[0045]圖2本發(fā)明藥物和青霉素對S.a生物膜形成的作用(WST檢測)；與對照組比較， *P〈0.05，**P〈0.01，***P〈0.0Olo[0046]圖3用掃描電鏡觀察藥物對細菌生物膜一廂形成的影響(X500，10kv)。
[0047]圖4用激光共聚焦顯微鏡觀察藥物對細菌生物膜形成的影響(X100 oil)。
[0048]圖5本發(fā)明藥物和青霉素對成熟S.a生物膜的作用(CV染色)；與對照組比較， *P〈0.05, **P〈0.01。
[0049]圖6本發(fā)明藥物和青霉素對成熟S.a生物膜的作用(WST染色)與對照組比較，
林*P〈0.001。
[0050]圖7用掃描電鏡觀察藥物對成熟細菌生物膜影響(X500，10kv)。
[0051]圖8用激光共聚焦顯微鏡觀察藥物對成熟細菌生物膜的影響(XIOOoil)。
【具體實施方式】
[0052]實施例1:
原料藥配方為:
連翹258g，金銀花258g，板藍根258g，大黃50g，廣藿香88g，綿馬貫眾258g，紅景天 88g,薄荷腦7.8g,麻黃88g,苦杏仁88g,魚腥草258g,甘草88g，石膏258g ；
制備方法為:
(1)按照上述處方稱取中藥材，凈選，酌情碎斷；
(2)廣藿香碎斷，加6倍量水提取揮發(fā)油，提油時間4小時，收集揮發(fā)油，備用；提取液過濾后，殘渣棄去，濾液備用；
(3)連翹、麻黃、魚腥草、大黃，用8倍量70%的乙醇提取2次，第一次2小時，第二次
1.5小時，提取液合并過濾，回收乙醇,濾液備用；
(4)金銀花、石膏、板藍根、綿馬貫眾、甘草、紅景天，加9倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁煎煮2次，第一次1.5小時，第二次I小時，提取液合并過濾，所得濾液與步驟(2)廣藿香提油后的濾液合并，濃縮成在60°C時測定相對密度為1.10-1.15的清膏，加乙醇，調節(jié)至醇濃度為70%，冷藏放置24小時，過濾，回收乙醇至無醇味，所得濾液與步驟(3)所得醇提液合并，濃縮至在60°C時測定相對密度為1.15-1.20的清膏，噴霧干燥，得干膏粉，備用；
(5)將步驟(4)所得干膏粉加入淀粉138克，用85%乙醇制粒；
(6)將薄荷腦、步驟(2)所得揮發(fā)油加入乙醇溶解，噴入步驟(5)所得顆粒，密閉，混勻，裝入1000粒膠囊，即得。
[0053]實施例2:
原料藥配方為:
連翹210g，金銀花280g，板藍根210g，大黃55g，廣藿香75g，綿馬貫眾280g，紅景天 75g,薄荷腦8.5g,麻黃75g,苦杏仁100g,魚腥草210g,甘草100g,石膏210g ;
制備方法為:
(1)按照上述處方 稱取中藥材，凈選，酌情碎斷；
(2)廣藿香碎斷，加5倍量水提取揮發(fā)油，提油時間4小時，收集揮發(fā)油，備用；提取液過濾后，殘渣棄去，濾液備用；
(3)連翹、麻黃、魚腥草、大黃，用6倍量50%的乙醇提取2次，第一次3小時，第二次I 小時，提取液合并過濾，回收乙醇，濾液備用；
(4)金銀花、石膏、板藍根、綿馬貫眾、甘草、紅景天，加7倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁煎煮2次，第一次0.5小時，第二次2.5小時，提取液合并過濾，所得濾液與步驟(2)廣藿香提油后的濾液合并，濃縮成在60°C時測定相對密度為1.10-1.15的清膏，加乙醇，調節(jié)至醇濃度為70%，冷藏放置24小時，過濾，回收乙醇至無醇味，所得濾液與步驟(3)所得醇提液合并，濃縮至在60°C時測定相對密度為1.15-1.20的清膏，噴霧干燥，得干膏粉，備用；(5)將步驟(4)所得干膏粉加入淀粉134克，用85%乙醇制粒；
(6)將薄荷腦、步驟(2)所得揮發(fā)油加入乙醇溶解，噴入步驟(5)所得顆粒，按常規(guī)制劑方法制成片劑即得。
[0054]實施例3:
原料藥配方為:
連翹280g，金銀花210g，板藍根280g，大黃45g，廣藿香100g，綿馬貫眾210g，紅景天 75g,薄荷腦5.5g,麻黃100g,苦杏仁75g,魚腥草280g,甘草75g,石膏280g ；
制備方法為:
(1)按照上述處方稱取中藥材，凈選，酌情碎斷；
(2)廣藿香碎斷，加10倍量水提取揮發(fā)油，提油時間4小時，收集揮發(fā)油，備用；提取液過濾后，殘渣棄去，濾液備用；
(3)連翹、麻黃、魚腥草、大黃，用10倍量90%的乙醇提取2次，第一次I小時，第二次 3小時,提取液合并過濾,回收乙醇,濾液備用；
(4)金銀花、石膏、板藍根、綿馬貫眾、甘草、紅景天，加11倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁煎煮2次，第一次2.5小時，第二次0.5小時，提取液合并過濾，所得濾液與步驟(2)廣藿香提油后的濾液合并，濃縮成在60°C時測定相對密度為1.10-1.15的清膏，加乙醇，調節(jié)至醇濃度為70%，冷藏放置24小時，過濾，回收乙醇至無醇味，所得濾液與步驟(3)所得醇提液合并，濃縮至在60°C時測定相對密度為1.15-1.20的清膏，噴霧干燥，得干膏粉，備用；
(5)將薄荷腦、步驟(2)所得揮發(fā)油加入乙醇溶解，噴入步驟(4)所得干膏粉，按常規(guī)制劑方法制成丸劑即得。
[0055]實施例4:
原料藥配方為:
連翹170g，金銀花170g，炙麻黃57g，炒苦杏仁57g，石膏170g，板藍根170g，綿馬貫眾 170g,魚腥草170g,廣藿香57g,大黃34g,紅景天57g,薄荷腦5.0g,甘草57g ；
制備方法:
(一)提取工藝:
(1)按照上述處方量稱取中藥材，凈選，酌情碎斷；
(2)廣藿香加6倍量水提取揮發(fā)油，提油時間4h，收集揮發(fā)油，出油率為0.33±0.05%， 提取液過濾后備用，殘渣棄去；
(3)連翹、炙麻黃、魚腥草、大黃，用8倍量70%的乙醇提取2次，第一次2小時，第二次
1.5小時，提取液過濾，濾液合并，回收乙醇至無醇味,備用；
(4)金銀花、炒苦杏仁、石膏、板藍根、綿馬貫眾、甘草、紅景天，加9倍量水煎煮至沸， 加入炒苦杏仁，煎煮2次，第一次1.5小時，第二次I小時，提取液過濾，濾液合并同時加入步驟(2)廣藿香提油后的水溶液，濃縮成60°C測定相對密度為1.10-1.15清膏，加95%乙醇，邊加邊攪拌，至醇濃度70%，冷藏放置24小時，過濾，濾液回收乙醇至無醇味，與醇提液合并，濃縮至濃縮成60°C測定相對密度為1.25-1.35稠膏，備用；
(二)制劑工藝:
(5)制劑配方為:步驟(4)所得稠膏335.5g，薄荷腦5g，步驟(2)所得廣藿香油0.2ml, 糖粉 342.58，糊精514.0g；
(6)制粒:將糖粉和糊精混合均勻，用稠膏作粘合劑制軟材，14目篩網(wǎng)制粒，60—65°C 烘干，10目篩網(wǎng)整粒；
(7)分裝:篩出細粉適量，將薄荷腦、廣藿香揮發(fā)油加入適量乙醇，溶解，噴入細粉中， 混合均勻，并與顆?；旌暇鶆颍荛]半 小時，裝袋，即得，以上處方可制成顆粒1000g。
【權利要求】
1.一種中藥組合物在制備破壞細菌生物膜的藥物中的應用，其特征在于該中藥組合物由下列重量份的原料藥制成:連翹210-280，金銀花210-280，板藍根210-280，大黃45-55，廣藿香75-100，綿馬貫眾 210-280,紅景天75-100，薄荷腦5.5-8.5，麻黃75-100，苦杏仁75-100，魚腥草210-280,甘草 75-100，石膏 210-280。
2.根據(jù)權利要求1所述的應用，其特征在于該中藥組合物由下列重量份的原料藥制成: 連翹210，金銀花280，板藍根210，大黃55，廣藿香75，綿馬貫眾280，紅景天75，薄荷腦8.5，麻黃75，苦杏仁100，魚腥草210，甘草100，石膏210。
3.根據(jù)權利要求1所述的應用，其特征在于該中藥組合物由下列重量份的原料藥制成:連翹280，金銀花210，板藍根280，大黃45，廣藿香100，綿馬貫眾210，紅景天75，薄荷腦5.5，麻黃100，苦杏仁75，魚腥草280，甘草75，石膏280。
4.根據(jù)權利要求1所述的應用，其特征在于該中藥組合物由下列重量份的原料藥制成:連翹258，金銀花258，板藍根258，大黃50，廣藿香88，綿馬貫眾258，紅景天88，薄荷腦7.8，麻黃88，苦杏仁88，魚腥草258，甘草88，石膏258。
5.根據(jù)權利要求1-4任一項所述的應用，其特征在于所述中藥組合物的活性成分由以下步驟制成:(1)按照原料藥重量比例稱取中藥材，凈選；(2)廣藿香碎斷，加5-10倍量水提取揮發(fā)油，提油時間4小時，收集揮發(fā)油，備用；提取液過濾后，殘洛棄去，濾液備用；(3)連翹、麻黃、魚腥草、大黃，用6-10倍量50-90%的乙醇提取2次，每次1-3小時，提取液合并過濾，回收乙醇，濾液備用；(4)金銀花、石膏、板藍根、綿馬貫眾、甘草、紅景天，加7-11倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁，煎煮2次，每次0.5-2.5小時，提取液合并過濾，所得濾液與步驟(2)廣藿香提油后的濾液合并，濃縮成在60°C時測定相對密度為1.10-1.15的清膏，加入乙醇，調解至醇濃度為 70%，冷藏放置，過濾，回收乙醇至無醇味，得清膏備用；(5)將步驟(4)所得所得清膏與步驟(3)所得醇提液合并，濃縮至在60°C時測定相對密度為1.15-1.20的清膏，干燥，得干膏粉，備用；步驟(5)所得干膏粉、步驟(2)所得揮發(fā)油與薄荷腦共同構成該中藥組合物的活性成分。
6.根據(jù)權利要求1-4任一項所述的應用，其特征在于所述藥物劑型為膠囊劑、片劑、散劑、顆粒劑、口服液、丸劑、酊劑、糖漿劑、栓劑、凝膠劑、噴霧劑或注射劑。
7.根據(jù)權利要求6所述的應用，其特征在于所述膠囊劑是由以下步驟制成:(1)按照原料藥重量比例稱取中藥材，凈選；(2)廣藿香碎斷，加5-8倍量水提取揮發(fā)油，提油時間4小時，收集揮發(fā)油，備用；提取液過濾后，殘洛棄去，濾液備用；(3)連翹、麻黃、魚腥草、大黃，用6-10倍量50-90%的乙醇提取2次，每次1-3小時，提取液合并過濾，回收乙醇，濾液備用；(4)金銀花、石膏、板藍根、綿馬貫眾、甘草、紅景天，加7-11倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁，煎煮2次，每次0.5-2.5小時，提取液合并過濾，所得濾液與步驟(2)廣藿香提油后的濾液合并，濃縮成在60°C時測定相對密度為1.10-1.15的清膏，加入乙醇，調解至醇濃度為 70%，冷藏放置，過濾，回收乙醇至無醇味，得清膏備用；(5)將步驟(4)所得所得清膏與步驟(3)所得醇提液合并，濃縮至在60°C時測定相對密度為1.15-1.20的清膏，干燥，得干膏粉，備用；(6)將步驟(5)所得干膏粉加入適當藥學上可接受的輔料制粒；(7)將薄荷腦、步驟(2)所得揮發(fā)油加入乙醇溶解，噴入步驟(6)所得顆粒，密閉，混勻，裝入膠囊，即得。
8.根據(jù)權利要求6所述的應用，其特征在于所述顆粒劑是由以下步驟制成:(1)按照原料藥重量比例稱取中藥材，凈選，酌情碎斷；(2)廣藿香碎斷，加5-8倍量水提取揮發(fā)油，提油時間4小時，收集揮發(fā)油，備用；提取液過濾后，殘洛棄去，濾液備用；(3)連翹、麻黃、魚腥草、大黃，用6-10倍量50-90%的乙醇提取2次，每次1-3小時，提取液合并過濾，回收乙醇，濾液備用；(4)金銀花、石膏、板藍根、綿馬貫眾、甘草、紅景天，加7-11倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁，煎煮2次，每次0.5-2.5小時，提取液合并過濾，所得濾液與步驟(2)廣藿香提油后的濾液合并，濃縮成在60°C時測定相對密度為1.10-1.15的清膏，加入乙醇，調解至醇濃度為 70%，冷藏放置，過濾，回收乙醇至無醇味，得清膏備用；(5)將步驟(4)所得所得清膏與步驟(3)所得醇提液合并，濃縮至在60°C時測定相對密度為1.15-1.20的清膏，干燥，得干膏粉，備用 ；(6)將步驟(5)所得干膏粉加入適當藥學上可接受的輔料制粒；(7)將薄荷腦、步驟(2)所得揮發(fā)油加入乙醇溶解，噴入步驟(6)所得顆粒，密閉，混勻，裝袋，即得。
9.根據(jù)權利要求6所述的應用，其特征在于所述顆粒劑是由以下步驟制成:(1)按照原料藥重量比例稱取中藥材，凈選，酌情碎斷；(2)廣藿香碎斷，加6倍量水提取揮發(fā)油，提油時間4小時，收集揮發(fā)油，備用；提取液過濾后，殘渣棄去，濾液備用；(3)連翹、麻黃、魚腥草、大黃，用8倍量70%的乙醇提取2次，第一次2小時，第二次 1.5小時，提取液合并過濾，回收乙醇,濾液備用；(4)金銀花、石膏、板藍根、綿馬貫眾、甘草、紅景天，加9倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁、煎煮2次，第一次1.5小時，第二次I小時，提取液合并過濾，所得濾液與步驟(2)廣藿香提油后的水濾液合并，濃縮成在60°C時測定相對密度為1.10-1.15的清膏，加95%乙醇， 調節(jié)至醇濃度為70%，冷藏放置，過濾，回收乙醇至無醇味，得清膏濾液；(5)將步驟(4)所得清膏濾液與步驟(3)所得醇提液合并，濃縮至在60°C時測定相對密度為1.25-1.35的稠膏，備用；(6)將步驟(5)所得稠膏加入適當藥學上可接受的輔料制粒；(7)將薄荷腦、步驟(2)所得揮發(fā)油加入乙醇溶解，噴入步驟(6)所得顆粒，密閉，混勻，裝袋，即得。
10.根據(jù)權利要求1-4任一·項所述的應用，其特征在于所述中藥組合物在制備提高抗生素療效的藥物中的應用。
【文檔編號】A61K9/48GK103566006SQ201210267111
【公開日】2014年2月12日 申請日期:2012年7月31日 優(yōu)先權日:2012年7月31日
【發(fā)明者】王宏濤, 魏聰, 安軍永, 張會欣, 秦攏, 李向軍, 王永, 王猛, 王超 申請人:北京以嶺藥業(yè)有限公司