專利名稱：一種具有保肝降酶作用的紫蘇籽提取物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種紫蘇籽提取物的用途。
背景技術(shù)：
紫蘇，別名甚、赤蘇、白蘇、香蘇等，學(xué)名Perillafrutescens L.,為唇形科一年生草本植物。具有特異的芳香，原產(chǎn)中國，如今主要分布于印度、緬甸、中國、日本、朝鮮、韓國、印度尼西亞和俄羅斯等國家。據(jù)醫(yī)學(xué)臨床研究，其莖、葉及種子可入藥；莖葉有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、解熱作用，可治療感冒、解魚蟹中毒嘔吐腹痛等種子(果實(shí))有鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘及發(fā)散精
神沉悶之效。紫蘇具有抗氧化、防衰老、降血脂、降血糖、抗過敏、抗微生物、提高記憶力和改善視覺功能等保健功能，是一種具有很高利用價值的藥、食兩用植物。近些年來，紫蘇因其特有的活性物質(zhì)及營養(yǎng)成分，日益成為國內(nèi)外醫(yī)療保健、食品、化工領(lǐng)域備受關(guān)注的多用途植物，經(jīng)濟(jì)價值很高，但國外對紫蘇葉中的活性酚類物質(zhì)的研究較多，而對紫蘇多糖的研究還處于起步階段，目前還沒有相關(guān)研究報(bào)道紫蘇籽的提取物具有相應(yīng)的保肝降酶作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種具有保肝降酶作用的紫蘇籽提取物的用途。本發(fā)明的一種具有保肝降酶作用的紫蘇籽提取物在制備保肝降酶的藥物中的用途。本發(fā)明的一種具有保肝降酶作用的紫蘇籽提取物的制備方法是按照以下步驟進(jìn)行的一、取紫蘇籽進(jìn)行破碎，過20目篩后，采用索式提取法對破碎后的紫蘇籽粉末進(jìn)行脫脂處理，得到紫蘇籽脫脂粉末；二、對步驟一得到的紫蘇籽脫脂粉末，回流提取，將提取液在轉(zhuǎn)速為4000r/min的條件下離心IOmin ;三、將步驟二離心后得到的上清液,加入無水乙醇至乙醇最終體積百分含量為70%，靜置24h后，在轉(zhuǎn)速4000r/min的條件下離心IOmin,收集沉淀；向沉淀中加入20倍體積百分含量為70%的乙醇溶液，靜置24h后，在轉(zhuǎn)速4000r/min的條件下離心lOmin，收集沉淀；四、將步驟三得到的沉淀在80°C水浴下?lián)]干4h，然后冷卻至_20°C，放入冷凍干燥機(jī)中，冷凍干燥10h，即得為紫蘇籽粗提取物。本發(fā)明包含以下有益效果本發(fā)明得到的紫蘇籽提取物具有顯著降低血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT/ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(G0T/AST)的作用，并具有保肝作用。在降酶方面，陽性對照組降低GPT和GOT兩種酶活性分別為65. 67%和48. 46%，與同等質(zhì)量的陽性對照組相比，實(shí)驗(yàn)組降低GPT和GOT兩種酶活性分別為和73. 22%和48. 17%，同樣具有陽性對照組水飛薊素混懸液的降酶能力。在保肝方面，隨著實(shí)驗(yàn)組劑量的增加，肝臟系數(shù)和脾臟系數(shù)變化逐漸減小，說明該提取物能夠減弱肝臟和脾臟因藥物作用而增大的趨勢。


圖I為試驗(yàn)一的紫蘇籽提取物的紅外光譜圖；圖2為 試驗(yàn)一中標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖的紅外光譜圖。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明技術(shù)方案不局限于以下所列舉具體實(shí)施方式
，還包括各具體實(shí)施方式
間的任意組合。
具體實(shí)施方式
一本實(shí)施方式的一種具有保肝降酶作用的紫蘇籽提取物在制備保肝降酶的藥物中的用途。本實(shí)施方式得到的紫蘇籽提取物具有顯著降低血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT/ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(G0T/AST)的作用，并具有保肝作用。在降酶方面，陽性對照組降低GPT和GOT兩種酶活性分別為65. 67%和48. 46%，與同等質(zhì)量的陽性對照組相比，實(shí)驗(yàn)組降低GPT和GOT兩種酶活性分別為和73. 22%和48. 17%，同樣具有陽性對照組水飛薊素混懸液的降酶能力。在保肝方面，隨著實(shí)驗(yàn)組劑量的增加，肝臟系數(shù)和脾臟系數(shù)變化逐漸減小，說明該提取物能夠減弱肝臟和脾臟因藥物作用而增大的趨勢。
具體實(shí)施方式
二 本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是所述的具有保肝降酶作用的紫蘇籽提取物的制備方法是按照以下步驟進(jìn)行的一、取紫蘇籽進(jìn)行破碎，過20目篩后，采用索式提取法對破碎后的紫蘇籽粉末進(jìn)行脫脂處理，得到紫蘇籽脫脂粉末；二、對步驟一得到的紫蘇籽脫脂粉末，回流提取，將提取液在轉(zhuǎn)速為4000r/min的條件下離心IOmin ;三、將步驟二離心后得到的上清液，加入無水乙醇至乙醇最終體積百分含量為70 %，靜置24h后，在轉(zhuǎn)速4000r/min的條件下離心lOmin，收集沉淀；向沉淀中加入20倍體積百分含量為70%的乙醇溶液，靜置24h后，在轉(zhuǎn)速4000r/min的條件下離心lOmin，收集沉淀；四、將步驟三得到的沉淀冷卻至_20°C，然后放入冷凍干燥機(jī)中，冷凍干燥IOh時間，即得為紫蘇籽粗提取物。其它與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一或二不同的是步驟一中所述的索式提取法是指采用沸程為30°C 60°C石油醚，在溫度為40°C的條件下，進(jìn)行索式提取4h，收集上層粉末，即得到紫蘇籽粉末；其中，紫蘇籽粉末與石油醚的質(zhì)量體積比為Ig:4mL。其它與具體實(shí)施方式
一或二相同。
具體實(shí)施方式
四本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至三之一不同的是步驟二中所述的回流提取是指將步驟一得到的紫蘇籽脫脂粉末加入25倍體積的去離子水，在90°C水浴中回流3h，冷卻至室溫后過濾，收集濾液，即為提取液。其它與具體實(shí)施方式
一至三之一相同。通過以下試驗(yàn)驗(yàn)證本發(fā)明的效果試驗(yàn)一本試驗(yàn)的一種具有保肝降酶作用的紫蘇籽提取物制備方法是按照以下步驟進(jìn)行的一、取IOg紫蘇籽(fruit of Perilla frutescens)進(jìn)行破碎后,過20目篩,收集濾過物，進(jìn)行索式提取，收集上層提取管中粉末，即得到紫蘇籽脫脂粉末；二、將步驟一得到的紫蘇籽脫脂粉末加入20倍體積的蒸餾水，然后在90°C溫度下回流提取3h，冷卻至室溫后，將提取液在轉(zhuǎn)速4000r/min的條件下離心IOmin ;三、將步驟二離心后得到的上清液,力口入無水乙醇至乙醇最終體積百分含量為70%，靜置24h后，在轉(zhuǎn)速4000r/min的條件下離心lOmin，收集沉淀；將沉淀加入20倍體積百分含量為70%的乙醇溶液中，靜置24h后，在轉(zhuǎn)速4000r/min的條件下離心lOmin，收集灰白色沉淀；四、將步驟三收集的灰白色沉淀冷卻至_20°C，然后放入冷凍干燥機(jī)中，冷凍干燥10h，即為紫蘇籽粗提取物。本試驗(yàn)步驟一中所述的索式提取方法為采用40mL沸程為60°C石油醚，在溫度為40°C的條件下，進(jìn)行索式提取4h，收集上層粉末，即得到紫蘇籽粉末(抽提室溫以12 25°C為宜)。本試驗(yàn)的紫蘇籽購買自哈爾濱同泰藥店。測定本試驗(yàn)得到的紫蘇籽粗提取物的紅外光譜，結(jié)果如圖I所示，紫蘇籽粗提取物分別在 3301. 58cm_\2930. 73cm_1U659. 23cm_\l541. lOcm'1402. 80cm_\l096. 21cm_\617. 09cm—1有特征吸收峰。在3378cm—1處吸收峰，為O-H的伸縮振動，表明多糖存在分子間和分子內(nèi)氫鍵；在2927CHT1處吸收峰為飽和C-H伸縮振動的；在1417CHT1處吸收峰為C-H彎曲振動，它和C-H的伸縮振動構(gòu)成了糖類的特征峰；在1626CHT1出吸收峰是多糖水合吸收振動；在1200 lOOOcnT1之間的吸收峰由糖環(huán)上和糖苷鍵上C-O伸縮振動所引起的；在831cm—1有一弱吸收峰，為a-糖苷鍵的吸收峰。通過將紫蘇粗提取物的特征吸收峰與標(biāo)準(zhǔn)·葡聚糖的紅外光譜圖(如圖2所示)吸收峰比對，由此可知，本試驗(yàn)得到的紫蘇籽粗提取物為多糖物質(zhì)。對本試驗(yàn)得到的紫蘇籽提取物進(jìn)行藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)試驗(yàn)條件I、試驗(yàn)動物，昆明種健康小鼠，雄性，體重20±2g，購自哈爾濱醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動物中心。飼養(yǎng)環(huán)境為普通級動物飼養(yǎng)室，溫度為20 26°C，相對濕度為60-75 %，定時進(jìn)行通風(fēng)換氣。2,CCl4油溶液的配制取0. 125mL的CCl4,以等量遞加法加入IOOmL大豆油，充分?jǐn)嚢杈鶆?，配?. 125% CCl4溶液。3、水飛薊素混懸液的配制將益肝靈片(購自哈爾濱同泰藥店)粉碎，以適量生理鹽水配制成20. Omg/mL水飛薊素混懸液備用。試驗(yàn)方法I、CCl4所致小鼠急性肝損傷模型的建立取小鼠20只，隨機(jī)分為正常組和模型組0. lmL/10g灌胃生理鹽水，每日I次，連續(xù)7d。于最后一次給藥Ih后，模型組腹腔注射
0.125% CCl4, 24h后摘眼球取血，全血靜置2h后，在轉(zhuǎn)速為3000r/min的條件下離心15min，取上層血清，通過賴氏法測定血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT/ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(G0T/AST)活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，GPT和GOT酶活力明顯增加，表明建模成功。2、紫蘇粗提取物保肝降酶試驗(yàn)取昆明種小鼠60只，按每組10只隨機(jī)分為正常對照組、CCl4模型組、水飛薊素陽性對照組、低劑量給藥組、中劑量給藥組、高劑量給藥組共六組。正常對照組和CCl4模型組按0. lmL/10g灌胃生理鹽水，水飛薊素陽性對照組按
2.Omg/1Og灌胃水飛薊素混懸液,給藥組按劑量為I. 0mg/10g、2. 0mg/10g、3. 0mg/10g灌胃紫蘇粗提取物，連續(xù)7d，第7d給藥Ih后，正常對照組腹腔注射同等體積大豆油，其他組均腹腔注射0. 125% CCl4油溶液，采血前禁食不禁水，于腹腔注射24h后摘眼球取血，全血靜置2h后,3000r/min離心15min,取上層血清。通過賴氏法(利用長春匯力生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的試劑盒)進(jìn)行測定血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT/ALT)活性以及血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT/AST)的活性，并通過觀察肝脾的顏色變化，測定肝臟系數(shù)(肝臟系數(shù)=肝臟重量/體重)、脾臟系數(shù)(脾臟系數(shù)=脾臟重量/體重)，檢查肝脾臟的變化。試驗(yàn)結(jié)果如表I至表3所示，同等濃度的紫蘇籽粗提取物和水飛薊素在降低轉(zhuǎn)氨酶活性方面具有近似同等的效力。紫蘇籽粗提取物(紫蘇多糖)對模型組血清中GPT和GOT活性具有顯著地降低效果(p〈0. 01)，且對GOT的降低效果更顯著(p〈0. 005)。表I不同劑量組對CCl4急性肝損傷小鼠血清GPT的影響(n = 10，x土s)
權(quán)利要求
1.一種具有保肝降酶作用的紫蘇籽提取物的用途，其特征在于具有保肝降酶作用的紫蘇籽提取物在制備保肝降酶的藥物中的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種具有保肝降酶作用的紫蘇籽提取物的用途，其特征在于所述的具有保肝降酶作用的紫蘇籽提取物的制備方法是按照以下步驟進(jìn)行的一、取紫蘇籽進(jìn)行破碎，過20目篩后，采用索式提取法對破碎后的紫蘇籽粉末進(jìn)行脫脂處理，得到紫蘇籽脫脂粉末；二、對步驟一得到的紫蘇籽脫脂粉末，回流提取，將提取液在轉(zhuǎn)速為4000r/min的條件下離心IOmin ;三、將步驟二離心后得到的上清液，加入無水乙醇至乙醇最終體積百分含量為70%，靜置24h后，在轉(zhuǎn)速4000r/min的條件下離心lOmin，收集沉淀；向沉淀中加入20倍體積百分含量為70%的乙醇溶液，靜置24h后，在轉(zhuǎn)速4000r/min的條件下離心lOmin，收集沉淀；四、將步驟三得到的沉淀在80°C水浴下?lián)]干4h，然后冷卻至_20°C，放入冷凍干燥機(jī)中，冷凍干燥10h，即得為紫蘇籽粗提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種具有保肝降酶作用的紫蘇籽提取物的用途，其特征在于步驟一中所述的索式提取法是指采用沸程為30°C 60°C石油醚，在溫度為40°C的條件下，進(jìn)行索式提取4h，收集上層粉末，即得到紫蘇籽粉末；其中，紫蘇籽粉末與石油醚的質(zhì)量體積比為Ig 4mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種具有保肝降酶作用的紫蘇籽提取物的用途，其特征在于步驟二中所述的回流提取是指將步驟一得到的紫蘇籽脫脂粉末加入25倍體積的去離子水，在90°C水浴中回流3h，冷卻至室溫后過濾，收集濾液，即為提取液。
全文摘要
一種具有保肝降酶作用的紫蘇籽提取物的用途，它涉及一種紫蘇籽提取物的用途。提供了一種具有保肝降酶作用的紫蘇籽提取物的用途。具體方法為紫蘇籽破碎、索式提取脫脂、水提醇沉、離心、水浴揮干、冷凍干燥，即得紫蘇籽提取物。通過對紫蘇籽提取物進(jìn)行藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明的紫蘇籽提取物具有保肝降酶的作用，且保肝降酶作用較強(qiáng)。本發(fā)明應(yīng)用于保肝防治領(lǐng)域。
文檔編號A61P1/16GK102743435SQ201210268870
公開日2012年10月24日 申請日期2012年7月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月31日
發(fā)明者孟利, 宋福強(qiáng), 李沖偉, 李宏濤, 程麗 申請人:黑龍江大學(xué)