專利名稱：一種多功能的金銀核殼納米顆粒及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及納米顆粒的制備領(lǐng)域，特別是涉及一種兼具抗感染能力及CT造影功能的金銀核殼納米顆粒的室溫原位制備方法。
背景技術(shù)：
現(xiàn)代放射影像學(xué)成像技術(shù)的飛速發(fā)展，使得諸多傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)難以根治疾病(如惡性腫瘤，動(dòng)脈粥樣硬化)的早期診斷成為了可能，其中，計(jì)算機(jī)斷層掃描成像技術(shù)(ComputedTomography, CT)由于其單次成像時(shí)間短(小于IOs),空間分辨率高(最低O. 5mm),相對(duì)于磁共振成像，在保證圖像精度的同時(shí)，可以有效減弱運(yùn)動(dòng)偽影對(duì)數(shù)據(jù)采集的影響。然而，由于人體組織及血液對(duì)X射線的耗散能力差別較小，病變部位與周圍正常的基質(zhì)較低的區(qū)分度 使得在CT圖像中難以有效辨識(shí)病灶邊界，從而影響術(shù)中對(duì)病灶位置及切除范圍的判斷。CT造影劑的使用有效解決了這一問題，通過注射具有對(duì)X射線具有較強(qiáng)衰減能力的有機(jī)碘水溶液，利用病變部位和周圍正常組織對(duì)造影劑吸收度的差別，來實(shí)現(xiàn)增強(qiáng)CT成像，然后，由于有機(jī)碘分子小分子化合物的本質(zhì)，其血液循環(huán)時(shí)間短，快速的代謝不僅增大了腎臟毒性，同時(shí)削弱了有效機(jī)體顯影時(shí)間，針對(duì)這一問題，雖然可以通過脂質(zhì)體包埋，或者修飾高分子鏈段等方式延長其血液循環(huán)時(shí)間，但是繁瑣的工藝以及較大的顆粒尺寸限制了其進(jìn)一步臨床應(yīng)用。金納米顆粒作為一種生物相容性良好的材料，由于同時(shí)兼具極高的X射線衰減能力以及成熟的表面修飾手段，其作為新型CT增強(qiáng)對(duì)比劑的應(yīng)用受到研究者廣泛關(guān)注。Dongkyu Kim等以朽1檬酸鈉為還原劑，通過Frens法制備了平均粒徑為30nm的金納米顆粒，通過表面修飾末端巰基化的聚乙二醇分子，獲得了血液循環(huán)時(shí)間為4h的血池CT造影劑，以原發(fā)性肝癌小鼠作為動(dòng)物模型，表明該金納米顆粒CT造影劑可以實(shí)現(xiàn)對(duì)病灶區(qū)域的有效區(qū)分(Dongkyu Kim, Sangjin Park, et al. J. AM. CHEM. S0C. 2007, 129，7661 7665)
Wolfgang Eck等同樣采用Frens法制備了 28nm及38nm兩種粒徑的金納米顆粒，通過表面偶聯(lián)F19單克隆抗體，制備了淋巴靶向的CT造影劑，以大白鼠為動(dòng)物模型，可見淋巴結(jié)經(jīng)尾靜脈注射金納米顆粒對(duì)比劑后CT下顯著增強(qiáng)顯影(Wolfgang Eck, Anthony I.Nicholson, et al, Nano Lett. 2010, 10, 2318 - 2322)。史向陽等采用聚酰胺-胺(PAMAM)樹枝狀大分子為模板，以硼氫化鈉為還原劑，控制性合成了金納米顆粒包埋的高分子-無機(jī)物CT造影劑復(fù)合物，以荷瘤鼠為動(dòng)物模型，采取瘤內(nèi)注射和腹腔內(nèi)注射兩種方式，確認(rèn)了該造影劑的 X 射線衰減性能。(Chen Peng, Xiangyang Shi, et al, Biomaterials33 (2012) 1107-1119)(專利申請(qǐng)?zhí)?01010543835. 3)。然而上述的研究都忽視了一個(gè)問題，注射是臨床上造影劑介入最常用的方式，難以避免會(huì)留下創(chuàng)口，統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，創(chuàng)口或者創(chuàng)傷位置病原體感染是抗生素耐受性細(xì)菌最重要的致病途徑，以甲氧西林耐受性金黃色葡萄球菌為例，感染患者往往對(duì)一線及部分二線抗生素表現(xiàn)較強(qiáng)耐受，常規(guī)治療方案通常對(duì)其無效，且預(yù)后較差，而同時(shí)兼具抗感染及X射線裳減能力的CT造影劑目如尚無相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，提供一種兼具抗感染能力及CT造影功能的多功能金銀核殼納米顆粒及制備方法，該方法制備過程簡單，在室溫下快速進(jìn)行，制備的顆粒尺寸高度均一，可使金銀納米顆粒長時(shí)間均勻分散于水溶液當(dāng)中，同時(shí)表面的銀納米殼層可以有效抑制病原體的增殖。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明是通過下述技術(shù)方案加以實(shí)現(xiàn)的金銀核殼結(jié)構(gòu)納米顆粒，超細(xì)金納米顆粒，以銀納米殼層包裹的金金納米顆粒的銀核殼結(jié)構(gòu)納米粒子，并以尾端巰基化修飾的聚乙二醇分子對(duì)銀核殼結(jié)構(gòu)納米顆粒進(jìn)行表面修飾。其中金納米核顆粒尺寸在Γ20 nm之間，銀納米殼厚度在2 12 nm之間。所述X射線衰減能力較強(qiáng)的金銀核殼結(jié)構(gòu)納米顆粒，是以經(jīng)過堿液活化的四羥甲基氯化磷為還原劑，首先還原氯金酸制備超細(xì)金納米顆粒，再以該納米粒子做為晶核，還原硝酸銀溶液，制備銀納米殼層包裹的金銀核殼結(jié)構(gòu)納米粒子，再通過尾端巰基化修飾的聚乙二醇分子對(duì)金銀核殼結(jié)構(gòu)納米顆粒進(jìn)行表面修飾，制備出具有長效血液循環(huán)時(shí)間同時(shí)兼具的抗感染能力的CT造影劑·
本發(fā)明一種兼具抗感染能力及CT造影功能的金銀核殼納米顆粒的制備方法，是室溫原位制備方法，它包括以下步驟
(I)量取(如20-100 μ L)四羥甲基氯化磷溶液，加入O. 05、. 9mol/L的氫氧化鉀或氫氧化鈉水溶液中活化，制備具有還原活性的有機(jī)磷前體溶液。(2)在上述步驟(I)的溶液中加入氯金酸溶液，攪拌條件下反應(yīng)5_20min后，再加入硝酸銀溶液，繼續(xù)攪攪拌反應(yīng)O. 5-2h,將反應(yīng)后的溶液離心純化后，棄去上清液，產(chǎn)物用去離子水洗滌分散后，重復(fù)上述洗滌過程，最終得到純化產(chǎn)品其中金納米核顆粒尺寸在3^20nm之間，銀納米殼厚度在2 12nm之間，核殼納米顆粒的粒徑在5 30nm之間。優(yōu)選的，所述的一種兼具抗感染能力及CT造影功能的金銀核殼納米顆粒的室溫原位制備方法，它包括以下步驟
(I)量取5 40 μ L四羥甲基氯化磷溶液，加入10 50 mL濃度為O. 05^0. 9mol/L的氫氧化鉀水溶液或2(Tl00 mL濃度為O. 05^1 mol/L氫氧化鈉水溶液中活化，制備具有還原活性的有機(jī)磷前體溶液。(2)在上述步驟(I)的溶液中加入5(Γ400 μ L濃度為O. 01、. I mol/L的氯金酸溶液，攪拌條件下反應(yīng)5-20 min后，再加入濃度為O. θΓθ. I mol/L硝酸銀溶液5(Γ300 μ L，其中氯金酸與硝酸銀物質(zhì)量比在5 Γ1 :4之間，而后繼續(xù)攪拌反應(yīng)0.5-2 h，將反應(yīng)后的溶液離心純化后，棄去上清液，產(chǎn)物用去離子水洗滌分散后，重復(fù)上述洗滌過程，最終得到純化產(chǎn)品其中金納米核顆粒尺寸在:Γ20 nm之間，銀納米殼厚度在2 12 nm之間。(3)在上述步驟(2)離心純化前的溶液加入尾端巰基化的聚乙二醇(巰基聚乙二醇)，分子量在2 10 kDa之間，攪拌過夜后，可得到表面聚乙二醇修飾的金銀核殼結(jié)構(gòu)納米顆粒，其中單個(gè)顆粒表面聚乙二醇平均包覆數(shù)量為3(Γ500個(gè)。本發(fā)明的有益效果在于，制備過程簡單，反應(yīng)迅速無能耗，以此制得的金銀核殼結(jié)構(gòu)復(fù)合物納米顆粒呈球形，尺寸均一，粒徑均一，水溶性好，無明顯團(tuán)聚，平均粒徑在5 30nm之間，通過表面聚乙二醇修飾后，能夠均勻長時(shí)間分散于水溶液中；經(jīng)靜脈注射體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)表明，其血液循環(huán)時(shí)間最長可達(dá)4h，體內(nèi)器官CT數(shù)值表明其具備良好X射線衰減能力，體外抗菌試驗(yàn)表明，該金銀核殼納米顆粒具備廣譜抗菌能力，有效細(xì)菌增殖抑制能力可保持72 h，對(duì)大腸桿菌，銅綠假單胞菌，枯草芽孢菌，金黃色葡萄球菌的致死率分別為98% 100%，92% 100%，94% 100%。90% 100%。該核殼納米顆粒的對(duì)X射線的耗散能力較強(qiáng)，體內(nèi)試驗(yàn)證明，其有效血池顯影時(shí)間可達(dá)到30min，優(yōu)于傳統(tǒng)造影劑碘佛醇的CT有效顯影時(shí)間。體外營養(yǎng)肉湯稀釋以及瓊脂糖稀釋抗菌試驗(yàn)比表明，金銀核殼納米顆粒具備優(yōu)異的殺菌能力，可有效抑制細(xì)菌通過造影劑注射窗口對(duì)機(jī)體的感染。


圖I為金銀核殼結(jié)構(gòu)納米顆粒透射電鏡圖； 圖2為金銀核殼結(jié)構(gòu)納米顆粒水溶液紫外-可見光吸收光譜 圖3為金銀核殼結(jié)構(gòu)納米顆粒X射線光電子能譜 圖4為金銀核殼結(jié)構(gòu)納米顆粒增強(qiáng)CT數(shù)據(jù)。具體實(shí)施方法
下面對(duì)本發(fā)明具體實(shí)施方式
進(jìn)行詳細(xì)說明，但是以下實(shí)施例僅僅是作為例證，并不對(duì)本發(fā)明構(gòu)成任何限制，實(shí)施例1-3為本發(fā)明的制備例，實(shí)施例4為體內(nèi)增強(qiáng)CT實(shí)驗(yàn)，實(shí)施例5-6為抗菌效果實(shí)驗(yàn)實(shí)施例I
量取20uL四羥甲基氯化磷溶液，加入20mL O. 05mol/L氫氧化鉀水溶液當(dāng)中活化，制備具有還原活性的有機(jī)磷前體溶液，攪拌5min后靜置待用。將50 UL O. Olmol/L氯金酸溶液迅速加入到上述還原性有機(jī)磷前體溶液當(dāng)中，攪拌條件下反應(yīng)IOmin后，加入200 μ L O. 01mol/L硝酸銀溶液，而后繼續(xù)攪拌反應(yīng)2h，將反應(yīng)后的溶液離心純化，棄去上清液，產(chǎn)物經(jīng)過去洗滌后重新分散在去離子水中，重復(fù)上述洗滌再分散過程至少三次，最終得到純化產(chǎn)品，重新分散在無水乙醇當(dāng)中，得到棕黃色金銀核殼結(jié)構(gòu)納米顆粒溶膠，平均粒徑為15nm，其中金納米核尺寸為5nm，銀納米殼層厚度為IOnm0實(shí)施例2
量取30uL四羥甲基氯化磷溶液，加入30mL O. 07mol/L氫氧化鈉水溶液當(dāng)中活化，制備具有還原活性的有機(jī)磷前體溶液，攪拌IOmin后靜置待用。將IOOyL O. 05mol/L氯金酸溶液迅速加入到上述還原性有機(jī)磷前體溶液當(dāng)中，攪拌條件下反應(yīng)20min后，加入150 μ L O. 05mol/L硝酸銀溶液，而后繼續(xù)攪拌反應(yīng)I. 5h，將反應(yīng)后的溶液離心純化，棄去上清液，產(chǎn)物經(jīng)過去洗滌后重新分散在去離子水中，重復(fù)上述洗滌再分散過程至少三次，最終得到純化產(chǎn)品，重新分散在無水乙醇當(dāng)中，得到紅棕色金銀核殼結(jié)構(gòu)納米顆粒溶膠，采用紫外-可見光吸收光譜對(duì)其進(jìn)行分析，所制備的金銀核殼結(jié)構(gòu)納米顆粒水溶液在XXnm處具有最大吸收，吸收峰形狀為尖峰，證明所制備的納米粒子尺寸分布很窄。實(shí)施例3
量取40 μ L四羥甲基氯化磷溶液，加入50mL O. 45mol/L氫氧化鉀水溶液當(dāng)中活化，制備具有還原活性的有機(jī)磷前體溶液，攪拌20min后靜置待用。
將200 μ L O. 08mol/L氯金酸溶液迅速加入到上述還原性有機(jī)磷前體溶液當(dāng)中，攪拌條件下反應(yīng)8min后，加入300 μ L O. 08mol/L硝酸銀溶液，而后繼續(xù)攪拌反應(yīng)lh，將反應(yīng)后的溶液離心純化，棄去上清液，產(chǎn)物經(jīng)過去洗滌后重新分散在去離子水中，重復(fù)上述洗滌再分散過程至少三次，最終得到純化產(chǎn)品，重新分散在無水乙醇當(dāng)中，得到橙黃色金銀核殼結(jié)構(gòu)納米顆粒溶膠，采用X射線光電子能譜對(duì)其進(jìn)行表面組成元素進(jìn)行分析，再全譜掃描中可見屬于金及銀單質(zhì)的特征吸收峰，可見作為核的金納米顆粒特征峰是由于作為納米殼的銀厚度為5nm，小于X射線光電子能譜的IOnm檢測限度，使得作為內(nèi)核的金元素被探測到。實(shí)施例4
量取40 μ L四羥甲基氯化磷溶液，加入50mL O. 45mol/L氫氧化鉀水溶液當(dāng)中活化，制備具有還原活性的有機(jī)磷前體溶液，攪拌20min后靜置待用。將200 μ L O. 08mol/L氯金酸溶液迅速加入到上述還原性有機(jī)磷前體溶液當(dāng)中，攪拌條件下反應(yīng)8min后，加入300 μ L O. 08mol/L硝酸銀溶液，而后繼續(xù)攪拌反應(yīng)lh，向該溶液中加入IOmg分子量5KDa末端巰基化的聚乙二醇分子，攪拌過夜后，將反應(yīng)后的溶液·離心純化，棄去上清液，產(chǎn)物經(jīng)過無水乙醇洗滌后重新分散在去離子水中，重復(fù)上述洗滌再分散過程至少三次，最終得到純化產(chǎn)品，重新分散在磷酸緩沖溶液中，以成年健康Wista大鼠為模式動(dòng)物(250g)，首先采集大白鼠CT平掃圖像，而后經(jīng)靜脈注射Iml金銀核殼結(jié)構(gòu)納米顆粒磷酸緩沖溶液分散液后(金含量10mg/mL)，30min后采集大白鼠的增強(qiáng)CT掃描圖像，分析造影劑注射前后相應(yīng)器官的增強(qiáng)情況可以發(fā)現(xiàn)，主動(dòng)脈，下腔靜脈，肺靜脈等大血管均獲得不同程度的明顯增強(qiáng)，肝實(shí)質(zhì)相對(duì)較低的信號(hào)上升提示改核殼結(jié)構(gòu)CT造影劑肝內(nèi)巨噬細(xì)胞吞噬程度較低，對(duì)應(yīng)更長的血液循環(huán)時(shí)間。
實(shí)施例5
量取40 μ L四羥甲基氯化磷溶液，加入50mL O. 45mol/L氫氧化鉀水溶液當(dāng)中活化，制備具有還原活性的有機(jī)磷前體溶液，攪拌20min后靜置待用。將400 μ L O. lmol/L氯金酸溶液迅速加入到上述還原性有機(jī)磷前體溶液當(dāng)中，攪拌條件下反應(yīng)8min后，加入250 μ L O. 08mol/L硝酸銀溶液，而后繼續(xù)攪拌反應(yīng)30min，向該溶液中加入IOmg分子量5KDa末端巰基化的聚乙二醇(巰基聚乙二醇)，攪拌過夜后，將反應(yīng)后的溶液離心純化，棄去上清液，產(chǎn)物經(jīng)過無水乙醇洗滌后重新分散在去離子水中，重復(fù)上述洗滌再分散過程至少三次，最終得到純化產(chǎn)品，重新分散在磷酸緩沖溶液中，采用營養(yǎng)肉湯稀釋法檢驗(yàn)該金銀核殼納米顆粒的抑菌能力，銀元素濃度為25 μ g/mL時(shí)，可有效抑制106CFU/mL的大腸桿菌，銅綠假單胞菌，枯草芽孢桿菌，金黃色葡萄球菌的增殖，四種細(xì)菌的致死率分別為99%，100%，95%，94%。
實(shí)施例6
量取40uL四羥甲基氯化磷溶液，加入50mL O. 45mol/L氫氧化鉀水溶液當(dāng)中活化，制備具有還原活性的有機(jī)磷前體溶液，攪拌20min后靜置待用。將200 μ L O. 03mol/L氯金酸溶液迅速加入到上述還原性有機(jī)磷前體溶液當(dāng)中，攪拌條件下反應(yīng)5min后,加入300 μ L O. lmol/L硝酸銀溶液,而后繼續(xù)攪拌反應(yīng)lh,向該溶液中加入IOmg分子量IOKDa末端巰基化的聚乙二醇分子，攪拌過夜后，將反應(yīng)后的溶液離心純化，棄去上清液，產(chǎn)物經(jīng)過無水乙醇洗滌后重新分散在去離子水中，重復(fù)上述洗滌再分散過程至少三次，最終得到純化產(chǎn)品，重新分散在磷酸緩沖溶液中，采用瓊脂糖稀釋法檢驗(yàn)該金銀核殼納米顆粒的抑菌能力，銀元素濃度為43 μ g/mL時(shí)，可有效抑制108CFU/mL的大腸桿菌，銅綠假單胞菌，枯草芽孢桿菌，金黃色葡萄球菌的增殖，四種細(xì)菌的致死率分別為100%,100%，98%，96%。下表為金銀核殼結(jié)構(gòu)納米顆粒增強(qiáng)CT數(shù)據(jù)
權(quán)利要求
1.多功能金銀核殼結(jié)構(gòu)納米顆粒，其特征是以銀納米殼層包裹的金納米顆粒，并以巰基聚乙二醇分子對(duì)銀核殼結(jié)構(gòu)納米顆粒進(jìn)行表面修飾；其中金納米核顆粒尺寸在3 20 nm之間，銀納米殼厚度在疒12 nm之間。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的多功能金銀核殼結(jié)構(gòu)納米顆粒，其特征是所述X射線衰減能力較強(qiáng)的金銀核殼結(jié)構(gòu)納米顆粒，是以經(jīng)過堿液活化的四羥甲基氯化磷為還原劑，首先還原氯金酸制備超細(xì)金納米顆粒，再以該納米粒子為晶核，還原硝酸銀溶液，制備銀納米殼層包裹的金銀核殼結(jié)構(gòu)納米粒子，再通過尾端巰基化修飾的聚乙二醇分子對(duì)金銀核殼結(jié)構(gòu)納米顆粒進(jìn)行表面修飾，制備出具有長效血液循環(huán)時(shí)間同時(shí)兼具的抗感染能力的CT造影劑。
3.多功能的金銀核殼納米顆粒的制備方法，其特征是步驟如下所述的制備兼具抗感染能力及CT造影功能的金銀核殼納米顆粒，在室溫下原位制備，它包括以下步驟 (1)量取5 40μ L四羥甲基氯化磷溶液，加入10 50 mL濃度為O. 05^0. 9mol/L的氫氧化鉀水溶液或2(Tl00 mL濃度為O. 05^1 mol/L氫氧化鈉水溶液中活化，制備具有還原活性的有機(jī)磷前體溶液； (2)在上述步驟(I)的溶液中加入50 400μ L濃度為O. 01 O. I mol/L的氯金酸溶液，攪拌條件下反應(yīng)5-20 min后，再加入濃度為O. 01、. I mol/L硝酸銀溶液5(T300 yL，其中氯金酸與硝酸銀物質(zhì)量比在5 Γ1 :4之間，而后繼續(xù)攪拌反應(yīng)O. 5-2 h，將反應(yīng)后的溶液離心純化后，棄去上清液，產(chǎn)物用去離子水洗滌分散后，重復(fù)上述洗滌過程，最終得到純化產(chǎn)品其中金納米核顆粒尺寸在3 20 nm之間,銀納米殼厚度在2 12 nm之間；核殼納米顆粒的粒徑在5 30nm之間。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的多功能的金銀核殼納米顆粒的制備方法，其特征是在上述步驟(2)離心純化前的溶液加入尾端巰基化的聚乙二醇，分子量在2 10 kDa之間，攪拌過夜后，得到表面聚乙二醇修飾的金銀核殼結(jié)構(gòu)納米顆粒，其中單個(gè)顆粒表面聚乙二醇平均包覆數(shù)量為30 500個(gè)。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的兼具抗感染能力及CT造影功能的金銀核殼納米顆粒的室溫原位制備方法，其特征在于所述步驟(I)中，四羥甲基氯化磷加入量在5 40 yL，氫氧化鉀水溶液總量在1(T50 mL，氫氧化鈉水溶液總量在2(Tl00 mL。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的兼具抗感染能力及CT造影功能的金銀核殼納米顆粒的室溫原位制備方法，其特征在于所述步驟(2)中氯金酸溶液的濃度在O. 0Γ0. I mol/L，用量為50^400 μ L,硝酸銀溶液的濃度在0. 0Γ0. lmol/L,用量在5(Γ300 μ L，氯金酸與硝酸銀摩爾量之比為5 I :4。
7.根據(jù)權(quán)利要求3-6之一所述的兼具抗感染能力及CT造影功能的金銀核殼納米顆粒的室溫原位制備方法，其特征在于所述步驟(2)中所有反應(yīng)溶劑均為去離子水，所有洗滌溶劑均為無水乙醇。
8.根據(jù)權(quán)利要求3-5之一所述的多功能的金銀核殼納米顆粒的室溫原位制備方法，其特征在于取所述步驟(2)離心純化前的溶液加入尾端巰基化的聚乙二醇，分子量2 10KDa，攪拌過夜后，得到表面聚乙二醇修飾的金銀核殼結(jié)構(gòu)納米顆粒。
全文摘要
多功能金銀核殼結(jié)構(gòu)納米顆粒，以銀納米殼層包裹的金納米顆粒，并以巰基聚乙二醇分子對(duì)銀核殼結(jié)構(gòu)納米顆粒進(jìn)行表面修飾；其中金納米核顆粒尺寸在3~20nm之間，銀納米殼厚度在2~12nm之間。尤其是以經(jīng)過堿液活化的四羥甲基氯化磷為還原劑，首先還原氯金酸制備超細(xì)金納米顆粒，再以該納米粒子為晶核，還原硝酸銀溶液，制備銀納米殼層包裹的金銀核殼結(jié)構(gòu)納米粒子，再通過尾端巰基化修飾的聚乙二醇進(jìn)行表面修飾，制備出具有長效血液循環(huán)時(shí)間同時(shí)兼具的抗感染能力的CT造影劑。粒徑均一，水溶性好，無明顯團(tuán)聚，該核殼納米顆粒的對(duì)X射線的耗散能力較強(qiáng)，優(yōu)于傳統(tǒng)造影劑碘佛醇的CT有效顯影時(shí)間。并有效抑制細(xì)菌通過造影劑注射窗口的感染。
文檔編號(hào)A61K49/06GK102908633SQ20121026902
公開日2013年2月6日 申請(qǐng)日期2012年7月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月31日
發(fā)明者胡勇, 霍達(dá), 趙慧玥, 周航, 周藝, 周正揚(yáng), 何健 申請(qǐng)人:南京大學(xué)