專(zhuān)利名稱(chēng)：用于腫瘤治療的白細(xì)胞介素21(il-21)藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及腫瘤治療領(lǐng)域。具體地，本發(fā)明涉及將白細(xì)胞介素-21用于治療腫瘤。更具體地，本發(fā)明涉及使用白細(xì)胞介素21與抗Her2/neU的單鏈抗體的融合蛋白治療乳腺癌。
背景技術(shù)：
機(jī)體免疫在腫瘤發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中起著重要作用，近幾年研究發(fā)現(xiàn)機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)對(duì)常規(guī)的腫瘤放療、化療的治療效應(yīng)也起著重要作用。腫瘤放療和化療導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞大量死亡，釋放腫瘤抗原和系列“危險(xiǎn)信號(hào)”，激活機(jī)體先天免疫信號(hào)通路，促進(jìn)抗原遞 呈細(xì)胞對(duì)抗原的攝取、加工和遞呈，誘發(fā)和增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤免疫反應(yīng)。誘發(fā)的機(jī)體內(nèi)在抗腫瘤免疫反應(yīng)對(duì)清除殘存的腫瘤細(xì)胞和腫瘤灶、抑制殘存的腫瘤細(xì)胞和腫瘤灶的生長(zhǎng)、防止腫瘤復(fù)發(fā)起著決定性作用[1，2，3]。腫瘤抗體靶向治療，以其高特異性、低毒性作用以及和化療之間很好的協(xié)同作用而成為快速發(fā)展的腫瘤治療方法。抗HER2/neu抗體是其中的一個(gè)典型代表，傳統(tǒng)認(rèn)為其腫瘤治療機(jī)制[4,5]是通過(guò)阻斷或抑制HER2/neu受體的胞內(nèi)信號(hào)，以及抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(ADCC)來(lái)殺傷腫瘤細(xì)胞，或抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。本發(fā)明的申請(qǐng)人最新研究發(fā)現(xiàn)抗HER2/neu抗體的腫瘤治療效應(yīng)還依賴于機(jī)體的先天和獲得性免疫反應(yīng)[6]?？笻ER2/neu抗體在臨床上主要與化療藥聯(lián)合應(yīng)用，對(duì)HER2/neu+腫瘤患者具有良好治療效果，存在的主要問(wèn)題是抗性腫瘤細(xì)胞的產(chǎn)生和高復(fù)發(fā)率。本發(fā)明的申請(qǐng)人在小鼠移植乳腺癌模型中對(duì)抗HER2/neu抗體和化療的不同聯(lián)合應(yīng)用方案進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)雖然兩者聯(lián)合應(yīng)用能夠顯著促進(jìn)原位腫瘤的消退，但與單獨(dú)抗體治療或先用化療后用抗體的聯(lián)合治療方案相比，先用抗體后用化療的聯(lián)合治療方案明顯降低機(jī)體產(chǎn)生的記憶性抗腫瘤免疫反應(yīng)，能夠抑制治愈小鼠對(duì)腫瘤再攻擊的免疫保護(hù)作用，可能促進(jìn)腫瘤復(fù)發(fā)。由于機(jī)體免疫系統(tǒng)在腫瘤發(fā)生和發(fā)展中的重要作用，腫瘤免疫治療一直是腫瘤研究的一個(gè)熱點(diǎn)，產(chǎn)生了各種旨在增強(qiáng)抗腫瘤免疫反應(yīng)(主要是T細(xì)胞免疫反應(yīng))的腫瘤免疫治療策略和方法。絕大多數(shù)免疫治療對(duì)小的動(dòng)物移植腫瘤具有良好的治療效果，但對(duì)移植腫瘤晚期或者原發(fā)腫瘤治療效果卻不理想，臨床試驗(yàn)的腫瘤治療效果更不如人意[7]。雖然腫瘤常規(guī)治療誘發(fā)的機(jī)體內(nèi)源性抗腫瘤免疫反應(yīng)對(duì)清除殘存的腫瘤細(xì)胞和腫瘤灶、抑制殘存的腫瘤細(xì)胞和腫瘤灶的生長(zhǎng)具有重要作用，但對(duì)大多數(shù)腫瘤病人來(lái)講，并不能完全徹底清除腫瘤細(xì)胞，不能防止腫瘤最終的復(fù)發(fā)。大量研究顯示，腫瘤細(xì)胞在發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中，逐步建立起腫瘤微環(huán)境，以利于、或者促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)，同時(shí)抑制機(jī)體的抗腫瘤反應(yīng)。造成這一局面的主要的原因是腫瘤免疫抑制微環(huán)境對(duì)抗腫瘤免疫反應(yīng)的抑制作用[8]。腫瘤免疫抑制微環(huán)境是腫瘤細(xì)胞為了生存和發(fā)展，在逃逸腫瘤免疫監(jiān)視的基礎(chǔ)上，為了對(duì)抗機(jī)體抗腫瘤免疫反應(yīng)，充分利用機(jī)體免疫系統(tǒng)自身的負(fù)調(diào)控機(jī)制，在腫瘤微環(huán)境中建立的全方位免疫抑制網(wǎng)絡(luò)。它是一個(gè)在抗腫瘤免疫選擇壓力作用下的動(dòng)態(tài)免疫抑制網(wǎng)絡(luò)，是隨抗腫瘤免疫反應(yīng)的變化而變化。無(wú)論是腫瘤疫苗免疫、抗體治療、還是腫瘤反應(yīng)性淋巴細(xì)胞過(guò)繼治療等，僅單方面的誘發(fā)和增強(qiáng)抗腫瘤免疫反應(yīng)，腫瘤細(xì)胞會(huì)在抗腫瘤免疫壓力作用下發(fā)生變化和調(diào)整，發(fā)生免疫逃逸，并增強(qiáng)相應(yīng)的免疫抑制信號(hào)，最終在另一層面建立起足以抑制抗腫瘤免疫、使腫瘤細(xì)胞不被殺傷的免疫抑制微環(huán)境。因此，只增強(qiáng)抗腫瘤免疫，而不改善或解除腫瘤免疫抑制，就難以取得良好的治療效果。大量研究證據(jù)顯示，無(wú)論是腫瘤快速生長(zhǎng)期，還是腫瘤發(fā)展晚期，荷瘤機(jī)體內(nèi)均有抗腫瘤免疫反應(yīng)的存在，但是被腫瘤免疫抑制微環(huán)境不同程度地控制。越來(lái)越多靶向腫瘤免疫抑制機(jī)制的研究結(jié)果，說(shuō)明了腫瘤免疫抑制微環(huán)境對(duì)促進(jìn)腫瘤發(fā)展和抵抗腫瘤治療效應(yīng)的關(guān)鍵作用。巨噬細(xì)胞是腫瘤免疫抑制微環(huán)境的重要組成成分，已有大量研究顯示，腫瘤組織巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)與腫瘤病人不良預(yù)后相關(guān)，不僅腫瘤組織中浸潤(rùn)巨噬細(xì)胞(又稱(chēng)為腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAM))的數(shù)量，而且TAM的表型和功能對(duì)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、以及化療的敏感性具有重要調(diào)節(jié)作用[9，10，11]。根據(jù)表型和功能，巨噬細(xì)胞傳統(tǒng)上被分為Ml和M2型。在靜止不發(fā)展的腫瘤、或者回縮腫瘤組織中，TAM表現(xiàn)為Ml型，具有促炎、抗原遞呈和腫瘤殺傷活性，起著抗腫瘤作用；而在進(jìn)展的惡性腫瘤組織中，TAM主要表現(xiàn)為M2型，具有促進(jìn)腫瘤血管生成、腫瘤細(xì)胞的侵襲和生長(zhǎng)，以及抑制抗腫瘤免疫反應(yīng)，起著促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移的作用[11]。TAM在表型和功能上表現(xiàn)為不同的亞群，可以隨著腫瘤組織環(huán)境的改變而發(fā)生 變化，也可以通過(guò)免疫調(diào)控將TAM向不同亞群分化。本發(fā)明的申請(qǐng)人在小鼠乳腺癌移植模型中研究發(fā)現(xiàn)，隨著腫瘤生長(zhǎng)，腫瘤組織中浸潤(rùn)的巨噬細(xì)胞數(shù)量和比例急劇增加，功能和表型表現(xiàn)為典型的M2型，而其它免疫和炎癥細(xì)胞的數(shù)量和比例變化不大。由于TAM在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起著非常重要的作用，TAM —直是腫瘤治療研究的靶點(diǎn)，誘導(dǎo)TAM由M2向Ml型分化(即TAM的極化)一直是腫瘤治療研究的一個(gè)重要方向[12，13，14]。白細(xì)胞介素21(IL_21)是一種主要由⑶4+T細(xì)胞產(chǎn)生的I類(lèi)細(xì)胞因子，它的受體是由IL-21受體(IL-21R)和共同的Y鏈組成的異源二聚體。IL-21通過(guò)與靶細(xì)胞上受體的結(jié)合，激活胞內(nèi)信號(hào)，在先天和獲得性免疫反應(yīng)中發(fā)揮多種生物學(xué)效應(yīng)。已知IL-21可以促進(jìn)B細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞的分化，增強(qiáng)抗體反應(yīng)、以及CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞的反應(yīng)和效應(yīng)功能。已有研究發(fā)現(xiàn)全身系統(tǒng)性給予IL-21可以增強(qiáng)CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞的反應(yīng)和效應(yīng)功能發(fā)揮抗腫瘤作用[15，16，17]，但腫瘤治療效應(yīng)不很理想。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)通過(guò)腫瘤特異性單鏈抗體將IL-21靶向腫瘤組織，可以將促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)的M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞分化成具有抗腫瘤作用的Ml型巨噬細(xì)胞，改善腫瘤組織微環(huán)境，從而顯著增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤免疫反應(yīng)，極大提高目前腫瘤常規(guī)治療的療效，防止腫瘤復(fù)發(fā)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明公開(kāi)了 IL-21新的生物學(xué)功能，IL-21可以誘導(dǎo)腫瘤組織中腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAM)由M2向Ml型分化。靶向腫瘤組織的IL-21能減少腫瘤組織巨噬細(xì)胞的數(shù)量，同時(shí)能將TAM由M2極化為M1，消除TAM對(duì)T細(xì)胞反應(yīng)的抑制作用，減少巨噬細(xì)胞促血管生成因子(VEGF)、免疫抑制因子(TGF-β、IL-10等)的產(chǎn)生，顯著改善腫瘤免疫抑制微環(huán)境，發(fā)揮極強(qiáng)的抗腫瘤作用?；贗L-21新的生物學(xué)功能，通過(guò)本說(shuō)明書(shū)中公開(kāi)的方法把IL-21靶向到腫瘤組織，改善腫瘤組織免疫抑制微環(huán)境，顯著增強(qiáng)目前腫瘤常規(guī)治療的療效。本發(fā)明通過(guò)基因工程方法將IL-21與抗HER2/neu的單鏈抗體構(gòu)建成融合蛋白IL-21/scFv (neu),與抗HER2/neu抗體聯(lián)合應(yīng)用，顯著增強(qiáng)抗HER2/neu抗體的腫瘤治療效果，防止腫瘤復(fù)發(fā)。本發(fā)明除了通過(guò)基因工程方法把IL-21與抗腫瘤組織細(xì)胞的單鏈抗體或抗體構(gòu)建成融合蛋白，還包括其它將IL-21靶向腫瘤組織，作用于腫瘤浸潤(rùn)巨噬細(xì)胞的方法，包括把IL-21重組到融瘤病毒載體；通過(guò)轉(zhuǎn)染建立表達(dá)IL-21的腫瘤特異性T細(xì)胞；通過(guò)納米技術(shù)制備IL-21納米顆粒。 更具體地，本發(fā)明提供以下各項(xiàng)I. 一種融合蛋白，其包含白細(xì)胞介素21與抗腫瘤組織細(xì)胞的單鏈抗體的氨基酸序列。2.第I項(xiàng)所述的融合蛋白，其中所述抗腫瘤組織細(xì)胞的單鏈抗體是抗Her2/neu的單鏈抗體。3.第2項(xiàng)所述的融合蛋白，其中所述白細(xì)胞介素21的氨基酸序列如SEQ ID NO:I所示，所述抗Her2/neu的單鏈抗體的氨基酸序列如SEQ ID NO 2所示。4.第3項(xiàng)所述的融合蛋白，其中所述白細(xì)胞介素21與所述抗Her2/neu的單鏈抗體之間通過(guò)連接體相連。5.第4項(xiàng)所述的融合蛋白，其中所述連接體的氨基酸序列如SEQ ID NO 3所示。6.第5項(xiàng)所述的融合蛋白，所述融合蛋白在所述抗Her2/neu的單鏈抗體的C端還含有氨基酸序列如SEQ ID NO :4所示的Ig Fe。7.第6項(xiàng)所述的融合蛋白，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO 7所示。8.編碼第1-7項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的融合蛋白的核苷酸序列。9.第1-7項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的融合蛋白在制備用于治療腫瘤的藥物中的用途。10.第9項(xiàng)所述的用途，其中所述腫瘤為乳腺癌。11.第10項(xiàng)所述的用途,其中所述藥物與抗Her2/neu抗體一起施用。12. 一種用于治療乳腺癌的試劑盒，所述試劑盒包含第1-7項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的融合蛋白和抗Her2/neu抗體。下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。


圖I.局部IL-21治療增強(qiáng)抗HER2/neu抗體的治療效果(A)Balb/c小鼠皮下接種8xl05Tubo腫瘤細(xì)胞，分為4組，每組5只小鼠，抗HER2/neu抗體+IL-21組在第16天腹腔注射100 μ g抗HER2/neu抗體,在第16天和第19天，瘤內(nèi)注射5 μ g IL-21蛋白；抗HER2/neu抗體組在第16天腹腔注射100 μ g抗HER2/neu抗體,在第16天和第19天,瘤內(nèi)注射等體積PBS ;IL-21組在第16天和第19天，瘤內(nèi)注射SygILjl蛋白;PBS組:在第16天腹腔注射等體積PBS做為對(duì)照，定期用游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤的兩個(gè)垂直直徑，按O. 5X [長(zhǎng)(cm) X寬(cm) X寬(cm)]計(jì)算腫瘤體積,繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線。(B)給(HER2/neu x Balb/c)Fl小鼠皮下接種lxl06Tubo腫瘤細(xì)胞，小鼠分為兩組，每組5只小鼠，在腫瘤接種后的第18天,兩組小鼠腹腔注射100 μ g抗HER2/neu抗體,在第18天和第20天,一組小鼠瘤內(nèi)注射5ygIL-21蛋白，另一組小鼠瘤內(nèi)注射等體積PBS，定期用游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤的兩個(gè)垂直直徑，按O. 5X [長(zhǎng)(cm) X寬(cm) X寬(cm)]計(jì)算腫瘤體積，繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線；
圖2.局部IL-21治療誘導(dǎo)M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞向Ml型轉(zhuǎn)化(A-B)給Balb/c小鼠皮下接種8xl05Tubo腫瘤細(xì)胞,在接種后的第15天,瘤內(nèi)注射IOyg IL-21蛋白，5天后，取腫瘤組織，進(jìn)行流式染色，分析各種淋巴細(xì)胞亞群占CD45+細(xì)胞的比例。(C)用流式細(xì)胞儀分選出腫瘤浸潤(rùn)的巨噬細(xì)胞(Ly6C-GR-l-F4/80+CDllC+)，實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)各種Ml型(下排)和M2 (上排)型細(xì)胞因子的表達(dá)，內(nèi)參為β肌動(dòng)蛋白(β-actin)。(D)流式細(xì)胞儀分選出腫瘤浸潤(rùn)的巨噬細(xì)胞，在體外與CFSE標(biāo)記的淋巴細(xì)胞以I : 3的比例共孵育72小時(shí)，同時(shí)用CD3和CD28激活抗體刺激。三天后，用流式檢測(cè)淋巴細(xì)胞的增殖情況，圖上分別標(biāo)出增殖細(xì)胞群與未增殖細(xì)胞群。左圖為代表性的流式結(jié)果，右圖為增殖細(xì)胞的統(tǒng)計(jì)結(jié)果;圖3. IL-21直接作用于巨噬細(xì)胞向Ml型極化(A)給Balb/c小鼠腹腔注射5 μ g無(wú)LPS的IL21蛋白或生理鹽水，18小時(shí)后，取腹腔巨噬細(xì)胞，實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)巨噬細(xì)胞分泌M2型細(xì)胞因子的水平。(B-C)取Balb/c小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，加入培養(yǎng)皿中貼壁過(guò)夜后，去掉懸浮的細(xì)胞，加100ng/ml的IL-21培養(yǎng)過(guò)夜(B)，或加100ng/ml的IL-21培養(yǎng)4小時(shí)后，移走上清，加入低劑量50ng/ml LPS短時(shí)間刺激4小時(shí)(C)，實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)巨噬細(xì)胞分泌M2型細(xì)胞因子的水平。(D)給Balb/c小鼠皮下接種Tubo腫瘤細(xì)胞，接種后第20天取 腫瘤組織，流式分選腫瘤浸潤(rùn)巨噬細(xì)胞(⑶llb+F4/80+⑶11c+)，在100ng/ml IL-21的條件下培養(yǎng)過(guò)夜，實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)細(xì)胞因子的表達(dá)。以上內(nèi)參為β-actin;圖4.融合蛋白IL-21/ScFV(neu)可以增強(qiáng)HER2/neu抗體的治療效果，防止腫瘤復(fù)發(fā)(A) IL-21/scFv (neu)融合蛋白的構(gòu)建圖譜由IL-21、G10S3連接體(linker)、抗HER2/neu單鏈抗體(scFv)和IgG的Fe段組成；(B)融合蛋白IL-21/scFv(neu)可以結(jié)合到HER2/neu陽(yáng)性的Tubo細(xì)胞表面，紅色為不加融合蛋白只加二抗的對(duì)照。(C)低劑量融合蛋白可以增強(qiáng)HER2/neu抗體的治療效果；(D)融合蛋白IL-21/scFv (neu)與抗HER2/neu抗體對(duì)免疫耐受腫瘤的聯(lián)合治療，(*P < O. 05)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例中所用的實(shí)驗(yàn)材料(I)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Balb/c小鼠SPF級(jí)Balb/c雌性小鼠，6到8周，購(gòu)于維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。HER2/Neu轉(zhuǎn)基因小鼠為FVB遺傳背景，購(gòu)自美國(guó)Jackson Lab。因?yàn)樗玫娜橄侔┘?xì)胞Tubo來(lái)自Balb/c遺傳背景小鼠，我們將HER2/Neu轉(zhuǎn)基因小鼠與Balb/c小鼠交配，得到的(HER2/Neu x Balb/c)Fl代小鼠用于Tubo腫瘤細(xì)胞的移植試驗(yàn)。正常小鼠接種外來(lái)腫瘤細(xì)胞建立的小鼠腫瘤模型，并不能很好反映臨床病人自發(fā)的腫瘤，因?yàn)檫@種小鼠對(duì)腫瘤抗原沒(méi)有免疫耐受，容易產(chǎn)生良好的抗腫瘤免疫反應(yīng)；而腫瘤病人的腫瘤來(lái)自自身，對(duì)其腫瘤抗原往往產(chǎn)生一定程度的免疫耐受,不容易產(chǎn)生抗腫瘤免疫反應(yīng)。HER2/Neu轉(zhuǎn)基因小鼠自身表達(dá)高水平HER2/neu抗原，對(duì)HER2/Neu抗原免疫耐受，接種HER2/Neu+的乳腺癌細(xì)胞，更能模擬乳腺癌病人的免疫狀況。(2)細(xì)胞Tubo細(xì)胞來(lái)自于Balb/c背景的HER2/neu轉(zhuǎn)基因小鼠，將該小鼠自發(fā)的乳腺癌細(xì)胞建成穩(wěn)定的細(xì)胞系[18]。該細(xì)胞系高表達(dá)大鼠原癌基因HER2/neu，且突變的HER2/neu分子可持續(xù)性的激活下游信號(hào)，促進(jìn)細(xì)胞的增殖和癌變。3T3KB細(xì)胞株穩(wěn)定表達(dá)MHCI和共刺激分子B7. 1，通過(guò)用表達(dá)MHCI和B7. I的質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染3T3細(xì)胞(購(gòu)自ATCC，CCL-92 )建立而成[6]。3T3NKB則穩(wěn)定表達(dá)HER2/neu，同時(shí)也表達(dá)MHCI和共刺激分子B7. 1，其通過(guò)用表達(dá)MHCI、B7. I和HER2/neu的質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染3T3細(xì)胞建立而成[6]。(3)抗體抗HER2/neu抗體(克隆號(hào)-J. 16. 4):與Tubo細(xì)胞上的HER2/neu分子結(jié)合，抑制 腫瘤的生長(zhǎng)[19]，該抗體利用雜交瘤細(xì)胞制備(所用雜交瘤及所用方法參見(jiàn)[20])。流式染色抗體Anti-CD45-PacificBlue、Anti-CDllb-FITC、Anti-CDllc-PE、Anti-F4/80-PEcy7> Anti-GrI-Percp cy5. 5、Anti-Ly6c_APCcy7、anti-FcR 均購(gòu)于Biolegend 公司(美國(guó))。CD4、CD8、CD49b (DX5)抗體購(gòu)于 BD Pharmingen 公司(美國(guó))?；罨?xì)胞的功能性抗體Anti-Q)3、Anti-a)28抗體購(gòu)于BD Pharmingen公司(美國(guó))。(4) PCR 所用引物
權(quán)利要求
1.ー種融合蛋白，其包含白細(xì)胞介素21與抗腫瘤組織細(xì)胞的單鏈抗體的氨基酸序列。
2.權(quán)利要求I所述的融合蛋白，其中所述抗腫瘤組織細(xì)胞的單鏈抗體是抗Her2/neu的單鏈抗體。
3.權(quán)利要求2所述的融合蛋白，其中所述白細(xì)胞介素21的氨基酸序列如SEQID NO:I所示，所述抗Her2/neu的單鏈抗體的氨基酸序列如SEQ ID NO 2所示。
4.權(quán)利要求3所述的融合蛋白，其中所述白細(xì)胞介素21與所述抗Her2/neu的單鏈抗體之間通過(guò)連接體相連。
5.權(quán)利要求4所述的融合蛋白，其中所述連接體的氨基酸序列如SEQID N0:3所示。
6.權(quán)利要求5所述的融合蛋白，所述融合蛋白在所述抗Her2/neu的單鏈抗體的C端還含有氨基酸序列如SEQ ID NO 4所示的Ig Fe。
7.權(quán)利要求6所述的融合蛋白，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQID N0:7所示。
8.編碼權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的融合蛋白的核苷酸序列。
9.權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的融合蛋白在制備用于治療腫瘤的藥物中的用途。
10.權(quán)利要求9所述的用途，其中所述腫瘤為乳腺癌。
11.權(quán)利要求10所述的用途,其中所述藥物與抗Her2/neu抗體一起施用。
12.ー種用于治療乳腺癌的試劑盒，所述試劑盒包含權(quán)利要求1-7中任ー項(xiàng)所述的融合蛋白和抗Her2/neu抗體。
全文摘要
本發(fā)明涉及腫瘤治療領(lǐng)域。本發(fā)明涉及使用白細(xì)胞介素21與抗Her2/neu的單鏈抗體的融合蛋白治療乳腺癌。
文檔編號(hào)A61K47/48GK102775501SQ201210276119
公開(kāi)日2012年11月14日 申請(qǐng)日期2012年8月3日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月3日
發(fā)明者傅陽(yáng)心, 徐萌, 王盛典 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院生物物理研究所