專利名稱：一種多烯紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)納米粒制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種長(zhǎng)循環(huán)多烯紫杉醇納米粒制劑，同時(shí)本發(fā)明還涉及該多烯紫杉醇納米粒的制備方法。
背景技術(shù)：
多烯紫杉醇(docetaxel)是近年開發(fā)的新一代紫杉烷類抗腫瘤藥物，它可由歐洲紅豆杉提取到的非細(xì)胞毒性前體化合物10-脫?；鶟{果赤霉素II經(jīng)半合成得到，為有絲分裂抑制劑，對(duì)多種實(shí)體瘤具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性，多烯紫杉醇的作用機(jī)制與紫杉醇類似，但抗腫瘤活性是紫杉醇的I. 3 12倍，對(duì)乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌等癌癥均有明顯療效。1998年獲美國(guó)FDA批準(zhǔn)上市，是目前臨床使用最為有效的紫杉烷類抗癌劑。自上市以來(lái)，己被廣泛用于治療多種癌癥，包括前列腺癌、乳腺癌、肺癌、胃癌、頭頸部腫瘤等。目前多烯紫杉醇已成為實(shí)體腫瘤治療中應(yīng)用最為廣泛的細(xì)胞毒藥物之一。己上市的多烯紫杉醇主要適應(yīng)癥是局部晚期或轉(zhuǎn)移性乳腺癌或非小細(xì)胞肺癌癥。多烯紫杉醇難溶于水，即使配制成注射液，在臨床應(yīng)用中的毒副作用也較大，容易引起較多的并發(fā)癥，如過(guò)敏反應(yīng)、骨髓抑制、神經(jīng)毒性、心血管毒性、脫發(fā)等等，同時(shí)藥物的體內(nèi)生物利用度較低，且需長(zhǎng)期使用。目前對(duì)其結(jié)構(gòu)改造以減少不良反應(yīng)的嘗試尚無(wú)大的進(jìn)展。由于多烯紫杉醇難溶于水及許多藥用有機(jī)溶劑，為了達(dá)到臨床注射用濃度(0.3 0. 74mg/ml)的要求，目前上市的多烯紫杉醇注射劑均是采用吐溫_80與無(wú)水乙醇的復(fù)合溶媒制備而成。大量有機(jī)溶劑尤其是吐溫-80的使用易引發(fā)病人嚴(yán)重的過(guò)敏反應(yīng)，在化療前，病人往往需預(yù)先服用或注射抗過(guò)敏藥物(皮質(zhì)類激素和H2受體拮抗劑)，在輸液過(guò)程中，還需連接微孔過(guò)濾器以防止藥物在稀釋過(guò)程中產(chǎn)生的結(jié)晶微粒進(jìn)入病人血液循環(huán)系統(tǒng)，這些均給臨床應(yīng)用帶來(lái)極大的風(fēng)險(xiǎn)和不便。為此，基于上述原因，國(guó)內(nèi)外藥劑工作者開展了廣泛深入的研究，開發(fā)了大量多烯紫杉醇新型制劑。如環(huán)糊精包合物(公開號(hào)為CN101020259A的專利一種含多烯紫杉醇類物質(zhì)的藥物組合物及其制備方法)、脂質(zhì)體(公開號(hào)為CN1931157A的專利多烯紫杉醇脂質(zhì)體及其制備方法)、聚合物納米粒(公開號(hào)為CN1660073A的專利一種多烯紫杉醇納米粒及其制備方法)、乳劑(公開號(hào)為CN102105134的專利穩(wěn)定的可注射的水包油型多烯紫杉醇納米乳劑)，這些新劑型雖然從一定程度上改善了現(xiàn)有制劑的不足，但均存在各自的缺陷，如環(huán)糊精本身存在極高的腎毒性；脂質(zhì)體制劑包封率低、易泄漏、穩(wěn)定性差；聚合物納米粒載藥量低、突釋現(xiàn)象明顯、有機(jī)溶劑不易除盡等；以乳劑處方及工藝制備的紫杉醇乳劑放置兩周即會(huì)析出紫杉醇沉淀。這些難以克服的缺陷阻礙了上述新型制劑的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展和試劑臨床應(yīng)用。納米粒給藥系統(tǒng)(Nanoparticles-baseddrug delivery systems)是將納米技術(shù) 和納米材料應(yīng)用于藥學(xué)領(lǐng)域產(chǎn)生的,它以納米粒(Nanoparticles, NP)作為藥物載體的一種藥物輸送體系。納米粒(Nanoparticle, NP)是一類由高分子物質(zhì)組成的固態(tài)膠體粒子，粒徑大小介于10 lOOOnm，可分散在水中形成近似膠體溶液，由于納米粒性質(zhì)上的奇特性和優(yōu)越性，作為藥物載體，已成為國(guó)內(nèi)外醫(yī)藥學(xué)的重要研究方向。用于制備納米粒制劑的輔料多為高分子可降解聚合物。聚酯類是迄今為止研究最多，應(yīng)用最廣的生物可降解高分子材料，常用的有聚乳酸(PLA)、聚羥基乙酸(PGA)、聚乳酸-聚羥基乙酸共聚物(PLGA)和聚-己內(nèi)酯(PCL)等。由于PLA和PLGA納米粒容易被巨噬細(xì)胞識(shí)別并吞噬，在體內(nèi)循環(huán)時(shí)間短，不能發(fā)揮足夠的藥效，因此我們往往需要對(duì)納米粒進(jìn)行表面修飾，常用的表面修飾劑有聚乙二醇(PEG)、聚乙烯醇(PVA)、聚維酮、肝素、人血白蛋白、唾液酸及神經(jīng)節(jié)苷酯等，使用PEG修飾是最常用的一種方法，因此通過(guò)特殊的表面修飾來(lái)達(dá)到納米粒長(zhǎng)循環(huán)的目的已經(jīng)是現(xiàn)在研究納米粒的一大熱點(diǎn)。水溶性維生素E (TPGS)具有兩親性，是一種安全高效的乳化劑，其分子末端有類似于PEG的片段，多用于乳劑配方中，但TPGS作為助溶劑用于長(zhǎng)循環(huán)納米粒的制備還未見專利報(bào)道。另?yè)?jù)報(bào)道水溶性維生素E本身具有抗癌活性，且對(duì)抑制抗藥性也有一定的作用。因此在本發(fā)明中我們采用TPGS作為共聚物納米粒的表面活性劑兼長(zhǎng)循環(huán)修飾劑，制備的納米粒同樣具有較好的長(zhǎng)循環(huán)效果。
目前就多烯紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)納米粒這方面的技術(shù)還不成熟，尚沒有一套成熟的制備工藝制備出理想的長(zhǎng)效納米粒，很多都停留在實(shí)驗(yàn)室階段，無(wú)法完成規(guī)?；瘮U(kuò)大生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述不足，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題之一是提供一種穩(wěn)定性良好且毒副作用小，適于靜脈注射的含多烯紫杉醇類物質(zhì)的納米粒制劑以克服現(xiàn)有技術(shù)所存在的缺陷。本發(fā)明所要解決的另一個(gè)技術(shù)問(wèn)題在于提供一種全新的納米粒制劑的制備方法，該方法克服了本領(lǐng)域技術(shù)人員的固有偏見，方法簡(jiǎn)便，制備出的納米粒粒徑分布范圍更窄。本發(fā)明目的是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的一種多烯紫杉醇納米粒制劑，其中包含多烯紫杉醇、共聚物、助溶劑和注射用水。其中，所述共聚物為聚乳酸-羥基乙酸共聚物或聚乳酸，所述的共聚物與多烯紫杉醇的重量比例為5 I至20 1，特別優(yōu)選為10 I。所述助溶劑為水溶性維生素E和F68中的一種或多種。所述的助溶劑與多烯紫杉醇的重量比例為15 : I至60 : 1，優(yōu)選為30 I。所述的納米粒制劑的平均粒徑小于200nm,納米粒的藥物包封率為80%至95*%。所述的多烯紫杉醇納米粒制劑，可進(jìn)一步制成注射液、凍干粉針、混懸型注射液
坐寸o本發(fā)明采用PLGA、PLA做為包裹疏水性藥物的共聚物，利用TPGS作為助表面活性劑形成一層保護(hù)納米粒的殼層材料，并且我們?cè)诠に嚿狭肀傩侣?，采用反向滴加法制備了粒徑均勻、包封率高、載藥量高的新型多烯紫杉醇納米粒，平均粒徑控制在200納米以下。一種長(zhǎng)循環(huán)納米粒制劑是由以下材料制備完成的多烯紫杉醇I份，作為載體材料的共聚物5-20份，助溶劑15-60份，納米粒的粒徑范圍為70 200nm ;所述的載體材料為PLA或者PLGA，所述的助溶劑為水溶性維生素E (TPGS)、F68或其混合物。本發(fā)明還提供了上述多烯紫杉醇納米粒制劑的制備方法，包含以下步驟i將多烯紫杉醇和共聚物溶于有機(jī)溶劑中作為油相，助溶劑溶于水中作為水相；ii在剪切力作用下將水相滴加到油相中，得到藍(lán)色乳光的乳液；
iii去除有機(jī)溶劑。其中，所述有機(jī)溶劑為丙酮和乙腈中的一種或多種，優(yōu)選為丙酮。所述油相和水相的體積比例為I : 4至I : 8，優(yōu)選為I : 5。
一種長(zhǎng)循環(huán)納米粒的制備工藝如下將紫杉醇和載體材料溶于有機(jī)溶劑作為油相，助溶劑溶于注射用水作為水相，然后將水相按照一定的比例滴加到水相，剪切力作用下得到藍(lán)色的乳液，繼續(xù)反應(yīng)一段時(shí)間后，將乳液除有機(jī)溶劑就得到長(zhǎng)循環(huán)納米粒。所述的有機(jī)溶劑為丙酮、乙腈的一種或者兩種任意比例混合；本發(fā)明的長(zhǎng)循環(huán)紫杉醇納米粒，由于本身粒徑在70_200nm，可用于靜脈注射和靜脈滴注。所使用的載體材料為可降解材料，本身無(wú)毒副作用，代謝產(chǎn)物為水和二氧化碳，中間產(chǎn)物也是人體正常的代謝產(chǎn)物。水溶性維生素E是人身體必須的材料，作為表面活性劑有比其他表面活性劑更好的優(yōu)勢(shì)，而且在我們的工藝中TPGS的用量也比其他表面活性劑低，即降低了材料的用量，又避免了毒副作用。本發(fā)明的納米粒組合物成本低，穩(wěn)定性高，安全性好，符合臨床用藥的要求，符合大規(guī)模生產(chǎn)的要求，具備良好的市場(chǎng)前景。


圖I正向滴加(實(shí)施例I)納米粒的粒徑分布2反向滴加(實(shí)施例2)納米粒的粒徑分布圖
具體實(shí)施例方式下面用實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受其限制。實(shí)施例I :正向滴加長(zhǎng)循環(huán)多烯紫杉醇納米粒的制備40mgPLGA(50/50) 100000和4mg多烯紫杉醇共同溶于IOml丙酮溶劑中作為油相，120mg TPGS溶解于50ml雙蒸水中形成水相；將有機(jī)相以lml/min的速度滴入水相中，300r/min低速攪拌下形成淺藍(lán)色的納米乳,反應(yīng)IOmin后,轉(zhuǎn)移到旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)下處理30min，去除丙酮溶液，得到長(zhǎng)循環(huán)納米粒。動(dòng)態(tài)激光散射儀測(cè)試得到的平均粒徑為105. 3±20. lnm，包封率為81. 5%，分散系數(shù)為0. 256。實(shí)施例2 :反向滴加長(zhǎng)循環(huán)多烯紫杉醇納米粒的制備40mgPLGA(50/50) 100000和4mg多烯紫杉醇共同溶于IOml丙酮溶劑中作為油相，120mg TPGS溶解于50ml雙蒸水中形成水相；將水相相以5ml/min的速度滴入有機(jī)相中，300r/min低速攪拌下形成淺藍(lán)色的納米乳,反應(yīng)IOmin后,轉(zhuǎn)移到旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)下處理30min，去除丙酮溶液，得到長(zhǎng)循環(huán)納米粒。動(dòng)態(tài)激光散射儀測(cè)試得到的平均粒徑為150. 3±25. 2nm，包封率為85. 3%，分散系數(shù)為0. 087。實(shí)施例3 :反向滴加長(zhǎng)循環(huán)多烯紫杉醇納米粒的制備40mgPLGA(50/50)45000和4mg多烯紫杉醇共同溶于IOml丙酮溶劑中作為油相，120mg TPGS溶解于50ml雙蒸水中形成水相；將水相相以5ml/min的速度滴入有機(jī)相中，300r/min低速攪拌下形成淺藍(lán)色的納米乳,反應(yīng)IOmin后,轉(zhuǎn)移到旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)下處理30min，去除丙酮溶液，得到長(zhǎng)循環(huán)納米粒。動(dòng)態(tài)激光散射儀測(cè)試得到的平均粒徑為169. 5±28. 2nm，包封率為84. 7%，分散系數(shù)為0. 091。
實(shí)施例4 :反向滴加長(zhǎng)循環(huán)多烯紫杉醇納米粒的制備40mgPLGA(50/50) 15000和4mg多烯紫杉醇共同溶于IOml丙酮溶劑中作為油相，120mg TPGS溶解于50ml雙蒸水中形成水相；將水相相以5ml/min的速度滴入有機(jī)相中，300r/min低速攪拌下形成淺藍(lán)色的納米乳,反應(yīng)IOmin后,轉(zhuǎn)移到旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)下處理30min，去除丙酮溶液，得到長(zhǎng)循環(huán)納米粒。動(dòng)態(tài)激光散射儀測(cè)試得到的平均粒徑為164. 7±35. 2nm，包封率為82. 3%，分散系數(shù)為0. 115。實(shí)施例5 :反向滴加長(zhǎng)循環(huán)多烯紫杉醇納米粒的制備40mgPLGA(50/50) 100000和4mg多烯紫杉醇共同溶于IOml乙腈溶劑中作為油相，120mg TPGS溶解于50ml雙蒸水中形成水相；將水相相以5ml/min的速度滴入有機(jī)相中，300r/min低速攪拌下形成淺藍(lán)色的納米乳,反應(yīng)IOmin后,轉(zhuǎn)移到旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)下處理30min，去除丙酮溶液，得到長(zhǎng)循環(huán)納米粒。動(dòng)態(tài)激光散射儀測(cè)試得到的平均粒徑為142. 1±31. 2nm，包封率為87. 9%，分散系數(shù)為0. 106。 實(shí)施例6 :反向滴加長(zhǎng)循環(huán)多烯紫杉醇納米粒的制備40mgPLGA(50/50) 100000和4mg多烯紫杉醇共同溶于IOml丙酮溶劑中作為油相，120mg F68溶解于50ml雙蒸水中形成水相；將水相相以5ml/min的速度滴入有機(jī)相中，300r/min低速攪拌下形成淺藍(lán)色的納米乳,反應(yīng)IOmin后,轉(zhuǎn)移到旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)下處理30min，去除丙酮溶液，得到長(zhǎng)循環(huán)納米粒。動(dòng)態(tài)激光散射儀測(cè)試得到的平均粒徑為144. 5±25. 8nm，包封率為87. 3%，分散系數(shù)為0. 159。實(shí)施例7 :反向滴加長(zhǎng)循環(huán)多烯紫杉醇納米粒的制備40mgPLGA(50/50) 100000和4mg多烯紫杉醇共同溶于IOml丙酮溶劑中作為油相，60mg TPGS溶解于50ml雙蒸水中形成水相；將水相相以5ml/min的速度滴入有機(jī)相中，300r/min低速攪拌下形成淺藍(lán)色的納米乳,反應(yīng)IOmin后,轉(zhuǎn)移到旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)下處理30min，去除丙酮溶液，得到長(zhǎng)循環(huán)納米粒。動(dòng)態(tài)激光散射儀測(cè)試得到的平均粒徑為139. 9±18. 2nm，包封率為89. 3%，分散系數(shù)為0. 143。實(shí)施例8 :反向滴加長(zhǎng)循環(huán)多烯紫杉醇納米粒的制備40mgPLGA(50/50) 100000和8mg多烯紫杉醇共同溶于IOml丙酮溶劑中作為油相，120mg TPGS溶解于50ml雙蒸水中形成水相；將水相相以5ml/min的速度滴入有機(jī)相中，300r/min低速攪拌下形成淺藍(lán)色的納米乳,反應(yīng)IOmin后,轉(zhuǎn)移到旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)下處理30min，去除丙酮溶液，得到長(zhǎng)循環(huán)納米粒。動(dòng)態(tài)激光散射儀測(cè)試得到的平均粒徑為156. 3±31. 2nm，包封率為81. 1%，分散系數(shù)為0. 098。實(shí)施例9 :反向滴加長(zhǎng)循環(huán)多烯紫杉醇納米粒的制備40mgPLGA(50/50) 100000和2mg多烯紫杉醇共同溶于IOml丙酮溶劑中作為油相，120mg TPGS溶解于50ml雙蒸水中形成水相；將水相相以5ml/min的速度滴入有機(jī)相中，300r/min低速攪拌下形成淺藍(lán)色的納米乳,反應(yīng)IOmin后,轉(zhuǎn)移到旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)下處理30min，去除丙酮溶液，得到長(zhǎng)循環(huán)納米粒。動(dòng)態(tài)激光散射儀測(cè)試得到的平均粒徑為143. I ±15. 8nm，包封率為95. 3%，分散系數(shù)為0. 074。實(shí)施例10 :反向滴加長(zhǎng)循環(huán)多烯紫杉醇納米粒的制備40mgPLGA(50/50) 100000和4mg多烯紫杉醇共同溶于IOml丙酮溶劑中作為油相，120mg TPGS溶解于40ml雙蒸水中形成水相；將水相相以5ml/min的速度滴入有機(jī)相中，300r/min低速攪拌下形成淺藍(lán)色的納米乳,反應(yīng)IOmin后,轉(zhuǎn)移到旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)下處理30min，去除丙酮溶液，得到長(zhǎng)循環(huán)納米粒。動(dòng)態(tài)激光散射儀測(cè)試得到的平均粒徑為170. 3±35. 4nm，包封率為80. 3%，分散系數(shù)為0. 095。實(shí)施例11 :反向滴加長(zhǎng)循環(huán)多烯紫杉醇納米粒的制備40mgPLGA(50/50) 100000和4mg多烯紫杉醇共同溶于IOml丙酮溶劑中作為油相，120mg TPGS溶解于80ml雙蒸水中形成水相；將水相相以5ml/min的速度滴入有機(jī)相中，300r/min低速攪拌下形成淺藍(lán)色的納米乳,反應(yīng)IOmin后,轉(zhuǎn)移到旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)下處理30min，去除丙酮溶液，得到長(zhǎng)循環(huán)納米粒。動(dòng)態(tài)激光散射儀測(cè)試得到的平均粒徑為141. 3±28. 2nm，包封率為89. 3%，分散系數(shù)為0. 065。實(shí)施例12 :長(zhǎng)循環(huán)納米粒包封率的測(cè)定采用液相高效色譜測(cè)紫杉醇的含量色譜柱安捷倫C18柱；流動(dòng)相乙腈水(50 50 V v);檢測(cè)波長(zhǎng)232nm;流速l.Oml/min;進(jìn)樣量20ul。分別取濃度為0. 25 ·50ug/ml的紫杉醇標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按照色譜條件進(jìn)行測(cè)試，以峰面積對(duì)紫杉醇濃度進(jìn)行曲線擬合，建立回歸方程。將得到的納米?；鞈乙合?000r/min低速離心IOmin去掉沒有包進(jìn)去的藥物結(jié)晶，再在10000r/min高速離心30min，將上清液吸掉，然后用高純水復(fù)溶再加入同等體積的乙腈破乳，將破乳得到的溶液按照色譜條件測(cè)定紫杉醇的含量。同時(shí)取未經(jīng)任何處理的納米?；鞈乙杭油瑯芋w積的乙腈破乳，按照HPLC條件測(cè)紫杉醇的含量包封率)=納米粒包封的藥物的量/投入藥物總的量X 100%所得微球的平均包封率為80 95 %。實(shí)施例13 :長(zhǎng)循環(huán)納米粒的凍干將納米粒混懸液離心處理過(guò)后，加入10%體積分?jǐn)?shù)的蔗糖，在_40°C下預(yù)凍10h，然后在_60°C冷阱條件下冷凍干燥48h，即的長(zhǎng)循環(huán)納米粒凍干粉末。凍干粉末復(fù)溶后粒徑基本沒有發(fā)生變化，沒有聚集現(xiàn)象出現(xiàn)。
權(quán)利要求
1.一種多烯紫杉醇納米粒制劑，其特征在于制劑中包含多烯紫杉醇、共聚物、助溶劑和注射用水。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的紫杉醇納米粒制劑，其特征在于所述共聚物為聚乳酸-羥基乙酸共聚物或聚乳酸，所述的共聚物與多烯紫杉醇的重量比例為5 : I至20 : I。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的多烯紫杉醇納米粒制劑，其特征在于所述的助溶劑為水溶性維生素E和丙二醇嵌段聚醚F68中的一種或多種。
4.根據(jù)權(quán)利要求I至3任一項(xiàng)所述的多烯紫杉醇納米粒制劑，其特征在于所述的助溶劑與多烯紫杉醇的重量比例為15 I至60 : I。
5.根據(jù)權(quán)利要求I至3任一項(xiàng)所述的多烯紫杉醇納米粒制劑，其特征在于所述的納米粒制劑的平均粒徑小于200nm，納米粒的藥物包封率為80%至95%。
6.一種制備根據(jù)權(quán)利I至5任一項(xiàng)所述的多烯紫杉醇納米粒制劑的方法，其特征在于該方法包括以下步驟 i將多烯紫杉醇和共聚物溶于有機(jī)溶劑中作為油相，助溶劑溶于水中作為水相； ii在剪切力作用下將水相滴加到油相中，得到藍(lán)色乳光的乳液； iii去除有機(jī)溶劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于所述有機(jī)溶劑為丙酮和乙腈中的一種或多種。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于油相和水相的體積比例為I: 4至I 8。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種多烯紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)納米粒。本發(fā)明的納米粒制劑包含多烯紫杉醇、共聚物、助溶劑、注射用水。本發(fā)明還公開了一種多烯紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)納米粒的制備方法和性能研究。采用反向滴加溶劑的方法將含助溶劑的水相滴入含多烯紫杉醇和共聚物的油相，得到粒徑均勻、平均粒徑小于200nm、包封率高、穩(wěn)定性好的納米粒制劑。
文檔編號(hào)A61K31/337GK102772369SQ20121029851
公開日2012年11月14日 申請(qǐng)日期2012年8月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月20日
發(fā)明者余波, 王國(guó)營(yíng), 袁媛 申請(qǐng)人:杭州普施康生物科技有限公司