專(zhuān)利名稱(chēng)：用于制備抗凡納濱對(duì)蝦紅體病的卵黃抗體的滅活疫苗制法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種滅活疫苗的制備方法，特別涉及一種用于制備抗凡納濱對(duì)蝦紅體病的卵黃抗體的滅活疫苗制法。
背景技術(shù)：
凡納濱對(duì)奸{Li top enaeus vannamei)又稱(chēng)白對(duì)奸、萬(wàn)氏對(duì)奸等,是一熱帶奸種，其具有適鹽范圍廣、耐密養(yǎng)、生長(zhǎng)快、抗逆能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，我國(guó)于1988年引進(jìn)后，現(xiàn)已在全國(guó)沿海各地大規(guī)模養(yǎng)殖。隨著凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大，養(yǎng)殖生態(tài)環(huán)境日益惡化，病害發(fā)生頻率急劇上升，由病原副溶血弧菌(K/Ario parahaemoIyticus)引起的紅體病在全國(guó)各養(yǎng)蝦地區(qū)均廣泛流行，且傳播快，可造成海水養(yǎng)殖凡納濱對(duì)蝦毀滅性死亡，已成為凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖過(guò)程中最常見(jiàn)且是造成經(jīng)濟(jì)損失最嚴(yán)重的疾病之一。目前凡納濱對(duì)蝦海水養(yǎng)殖生產(chǎn)中很難控制副溶血弧菌引起的疾病的發(fā)生與流行，市場(chǎng)上缺乏一種使用方便的抗凡納濱對(duì)蝦紅體病的滅活疫苗。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種提高凡納濱對(duì)蝦針對(duì)副溶血弧菌的免疫力、降低凡納濱對(duì)蝦海水養(yǎng)殖生產(chǎn)中由病原副溶血弧菌所造成的危害、以滿(mǎn)足凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖生產(chǎn)上的抗病需求的用于制備抗凡納濱對(duì)蝦紅體病的卵黃抗體的滅活疫苗制法。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是通過(guò)以下的技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明是一種用于制備抗凡納濱對(duì)蝦紅體病的卵黃抗體的滅活疫苗制法，其特點(diǎn)是它以經(jīng)甲醛溶液滅活后的凡納濱對(duì)奸紅體病的病原副溶血弧菌JGB080708-1 ( Vibrio parahaemolyticusW^k^i疫原，以白油、司班80、硬脂酸鋁作油乳劑，以及以黃芪浸出液作為免疫增強(qiáng)劑，乳化制備成油乳劑滅活疫苗；其具體步驟如下
(1)將病原副溶血弧菌JGB080708-1菌株接種在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂肉湯培養(yǎng)基上，28-30°C搖床培養(yǎng)24h，加入體積終濃度O. 3%的甲醛28°C滅活48h，離心得滅活菌體；
(2)取黃芪用蒸餾水浸泡30-60min后煎煮，過(guò)濾，濃縮至終濃度為原藥lg/mL，得黃芪浸出液；
(3 )將白油加熱至50-55 V，加入硬脂酸鋁，硬脂酸鋁與白油的重量體積比為1-3 :100g / ml，繼續(xù)加熱至65-70°C，加入司班80，司班80與白油的體積比為5-7 :100，直至終溫度115-120°C，維持15-20 min，制得油相，冷卻備用；
(4)將滅活菌體與黃芪浸出液混合，制得疫苗水相；水相中病原副溶血弧菌JGB080708-1免疫原為10ncells/mL，黃芪浸出液為lg/mL，水相中還加入了終體積濃度為4%的吐溫80 ；
(5)將油相和水相按體積比2:1混合乳化研磨5min，制得黃芪和白油為聯(lián)合佐劑的副溶血弧菌油乳劑滅活疫苗。
本發(fā)明所述的病原副溶血弧菌JGB080708-1已經(jīng)在公開(kāi)文獻(xiàn)《凡納濱對(duì)蝦{Litopenaeus vannamei)病原副溶血弧菌{Vibrio parahaemolyticus)的表型及分子特征》中所公開(kāi)(菌株JGB080708-1)，上述公開(kāi)文獻(xiàn)發(fā)表于《海洋與湖沼》，2009，40 (5)654-661。菌株JGB080708-1的DNA序列長(zhǎng)度及Genebank登錄號(hào)見(jiàn)下表
權(quán)利要求
1.一種用于制備抗凡納濱對(duì)蝦紅體病的卵黃抗體的滅活疫苗制法，其特征在于它以經(jīng)甲醛溶液滅活后的凡納濱對(duì)蝦紅體病的病原副溶血弧菌JGB080708-1 ( Vibrio作為免疫原，以白油、司班80、硬脂酸鋁作油乳劑，以及以黃芪浸出液作為免疫增強(qiáng)劑，乳化制備成油乳劑滅活疫苗；其具體步驟如下 (1)將病原副溶血弧菌JGB080708-1菌株接種在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂肉湯培養(yǎng)基上，28-30°C搖床培養(yǎng)24h，加入體積終濃度O. 3%的甲醛28°C滅活48h，離心得滅活菌體； (2)取黃芪用蒸餾水浸泡30-60min后煎煮，過(guò)濾，濃縮至終濃度為原藥lg/mL，得黃芪浸出液； (3 )將白油加熱至50-55 V，加入硬脂酸鋁，硬脂酸鋁與白油的重量體積比為1-3 :100g / ml，繼續(xù)加熱至65-70°C，加入司班80，司班80與白油的體積比為5-7 :100，直至終溫度115-120°C，維持15-20 min，制得油相，冷卻備用； (4)將滅活菌體與黃芪浸出液混合，制得疫苗水相；水相中病原副溶血弧菌JGB080708-1免疫原為10ncells/mL，黃芪浸出液為lg/mL，水相中還加入了終體積濃度為4%的吐溫80 ； (5)將油相和水相按體積比2:1混合乳化研磨5min，制得黃芪和白油為聯(lián)合佐劑的副溶血弧菌油乳劑滅活疫苗。
全文摘要
一種用于制備抗凡納濱對(duì)蝦紅體病的卵黃抗體的滅活疫苗制法，該方法先將病原副溶血弧菌JGB080708-1菌株滅活、離心得滅活菌體；然后制得黃芪浸出液；再由白油、硬脂酸鋁、司班80制得油相，滅活菌體與黃芪浸出液混合制得疫苗水相；最后將油相和水相按體積比2:1混合乳化研磨5min，制得黃芪和白油為聯(lián)合佐劑的副溶血弧菌油乳劑滅活疫苗。本發(fā)明副溶血弧菌油乳劑滅活疫苗，可以用于免疫成年產(chǎn)蛋雞，進(jìn)而得到抗凡納濱對(duì)蝦紅體病的高免卵黃抗體，能增強(qiáng)凡納濱對(duì)蝦對(duì)病原副溶血弧菌的免疫力，提高凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖的成活率，增加凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖的產(chǎn)量，提高凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖生產(chǎn)的經(jīng)濟(jì)效益。從根本上解決了目前凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖生產(chǎn)過(guò)程中易發(fā)生副溶血弧菌所致疾病的問(wèn)題。
文檔編號(hào)A61K39/106GK102836428SQ20121033605
公開(kāi)日2012年12月26日 申請(qǐng)日期2012年9月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月12日
發(fā)明者秦國(guó)民, 張曉君, 閆斌倫, 畢可然, 陳麗 申請(qǐng)人:淮海工學(xué)院