專利名稱：負載溶菌酶的殼聚糖/γ-聚谷氨酸復合納米粒子的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種長效安全的抗菌納米材料的制備方法，具體涉及一種負載溶菌酶的殼聚糖/ Y -聚谷氨酸復合納米粒子的制備方法，屬于醫(yī)藥工程技術領域。
背景技術：
溶菌酶(lysozyme)又稱胞壁質(zhì)酶或N-乙酰胞壁質(zhì)聚糖水解酶，是一種能水解致病菌中粘多糖的堿性酶。主要通過破壞細胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之間的β_1，4糖苷鍵，使細胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，導致細胞壁破裂，內(nèi)容物溢出而使細菌溶解。溶菌酶還可與帶負電荷的病毒蛋白直接結合，與DNA、RNA、脫輔基蛋白形成復鹽，使病毒失活。因此，溶菌酶具有抗菌、消炎和抗病毒的作用，并且不產(chǎn)生耐藥性，所以溶菌酶在一定程度上可以代替抗生素，具有較大的應用潛力。口服給藥要受到兩種首過效應的影響，即胃腸道上皮細胞中酶系的降解、代謝及肝中各酶系的生物代謝。許多藥物很大一部分因首過效應而代謝失效，如肽類和蛋白類藥物等。為獲得良好的治療效果，通常不得不將口服給藥改為注射等其它給藥途徑。由于通過注射途徑的非靶向藥物均勻分布在全身循環(huán)中，到達病灶之前，要經(jīng)過同蛋白結合、排泄、代謝、分解等步驟，所以最終只有少量藥物能達到病灶。靶向給藥的目的就是提高靶區(qū)的藥物濃度，從而提高藥物的利用率、療效以及降低藥物的副作用，這一直是醫(yī)藥領域一項重要的研究課題。納米藥物載體的研究能有效地解決這些問題。

高聚物納米材料作為藥物載體已經(jīng)獲得廣泛研究。其中合成的可生物降解高分子材料，如聚己內(nèi)酯和聚乳酸等，由于其良好的生物相容性頗受關注。然而用聚己內(nèi)酯和聚乳酸制備的納米材料由于其疏水性，對于親水性藥物的輸送效果不顯著。因此，對于親水性藥物容菌酶的包埋，可以選擇殼聚糖和Y-聚谷氨酸(Y-PGA)作為載體材料，通過殼聚糖和
Y-聚谷氨酸之間發(fā)生離子交聯(lián)，制備納米載體。這種納米載體的優(yōu)點是不使用有毒溶劑，制備條件較緩和。這可以避免有機溶劑的存在導致溶解酶不穩(wěn)定，因為有機溶劑會使蛋白或肽類物質(zhì)發(fā)生降解。殼聚糖由于其獨特的性質(zhì)倍受人們關注。其中，殼聚糖來源豐富，并且有很好的抗菌性，是其備受關注的焦點。殼聚糖是甲殼素脫乙酰化的產(chǎn)物，通常脫乙酰度達到50%-95%之間就可以成為很好的殼聚糖。殼聚糖基本結構單元為殼二糖，殼聚糖是D-氨基葡萄糖通過β -1，4糖苷鍵結合而成的多糖，化學名為聚(2-氨基-2-脫氧-β -D-葡萄糖)，是自然界中唯一存在的帶正電的天然多糖，它無毒副作用，具有良好的生物相容性、生物可降解性、吸濕性和保濕性，有明顯的抗菌抑菌作用，具有表面多孔結構，是良好的藥物緩釋劑和保水齊U，其形成和結構式可表示為
權利要求
1.一種負載溶菌酶的殼聚糖/ Y -聚谷氨酸復合納米粒子的制備方法，其特征在于所述制備方法是以質(zhì)量比為20 5^16 Γ5 Γ8的殼聚糖、Y-聚谷氨酸、三聚磷酸鈉和溶菌酶為原料，具體包括如下步驟 (1)將O.5^5. Omg/mL的Y -聚谷氨酸水溶液與O. 5^5. Omg/mL的溶菌酶水溶液混合，不斷攪拌至有藍色熒光出現(xiàn)并穩(wěn)定存在，即得到Y-聚谷氨酸/溶菌酶復合納米粒子溶液； (2)取步驟(I)得到的Y-聚谷氨酸/溶菌酶復合納米粒子溶液滴于O. 5^5. Omg/mL的殼聚糖醋酸水溶液中，所述殼聚糖醋酸水溶液中殼聚糖濃度為O. 5^5. Omg/mL，醋酸體積濃度為1-3% ;再滴加濃度為O. 5^5. Omg/mL的三聚磷酸鈉水溶液，不斷攪拌至有藍色熒光出現(xiàn)并穩(wěn)定存在，離心，取沉淀冷凍干燥，即得負載溶菌酶的殼聚糖/Y-聚谷氨酸復合納米粒子。
2.根據(jù)權利要求1所述的負載溶菌酶的殼聚糖/Y -聚谷氨酸復合納米粒子的制備方法，其特征在于所述的殼聚糖的脫乙酰度為85% 95%，分子量15 150萬。
3.根據(jù)權利要求1所述的負載溶菌酶的殼聚糖/Y -聚谷氨酸復合納米粒子的制備方法，其特征在于所述的Y-聚谷氨酸純度在92.0%與99%之間，分子量100 145萬。
4.根據(jù)權利要求f3之一所述的負載溶菌酶的殼聚糖/ Y -聚谷氨酸復合納米粒子的制備方法，其特征在于原料殼聚糖、Y-聚谷氨酸、三聚磷酸鈉和溶菌酶的質(zhì)量比為20 12 16 :3 5 4. 8 8。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種負載溶菌酶的殼聚糖/γ-聚谷氨酸復合納米粒子的制備方法，所述制備方法具體包括如下步驟(1)將0.5~5.0mg/mL的γ-聚谷氨酸水溶液與0.5~5.0mg/mL的溶菌酶水溶液混合，不斷攪拌至有藍色熒光出現(xiàn)并穩(wěn)定存在，即得到γ-聚谷氨酸/溶菌酶復合納米粒子溶液；(2)取γ-聚谷氨酸/溶菌酶復合納米粒子溶液滴于0.5~5.0mg/mL的殼聚糖醋酸水溶液中；再滴加濃度為0.5~5.0mg/mL的三聚磷酸鈉水溶液，不斷攪拌至有藍色熒光出現(xiàn)并穩(wěn)定存在，得到負載溶菌酶的殼聚糖/γ-聚谷氨酸復合納米粒子。本發(fā)明操作簡單，制得的負載溶菌酶的殼聚糖/γ-聚谷氨酸復合納米粒子可以調(diào)節(jié)溶菌酶釋放速度，具有良好的熱穩(wěn)定性，增加了溶菌酶治療的安全性、高效性和可靠性，是比較優(yōu)良的載藥納米體系。
文檔編號A61P31/12GK103041377SQ20121035316
公開日2013年4月17日 申請日期2012年9月20日 優(yōu)先權日2012年9月20日
發(fā)明者孫燕, 柳永, 符思達, 吳駿, 劉學粉, 余虹 申請人:杭州師范大學, 浙江省農(nóng)業(yè)科學院