專利名稱：一類抑制體外糖基化產(chǎn)物生成的中藥提取物及提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー類中藥提取物，特別是涉及用于ー類抑制體外糖基化產(chǎn)物生成中藥提取物及提取方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
糖尿病在中醫(yī)學(xué)上屬于“消渴證”范疇。糖尿病血管病變是糖尿病的主要并發(fā)癥，其大血管病變性質(zhì)為動脈粥樣硬化，主要累及主動脈、冠狀動脈等大血管，而糖尿病的微血管病變是糖尿病特有的慢性血管并發(fā)癥，主要表現(xiàn)為視網(wǎng)膜、腎等微血管病變。臨床統(tǒng)計(jì)表明，40% — 50%的糖尿病患者在發(fā)病10年后發(fā)生視網(wǎng)膜病變；約有2%的患者在發(fā)病15年后完全失明；5% 10%的患者在發(fā)病20年后惡化成終末期腎病。雖然糖尿病腎病發(fā)生發(fā) 展的確切病理機(jī)制目前尚不十分詳盡，主要有非酶糖化學(xué)說、多元醇通路學(xué)說、蛋白激酶C激活學(xué)說、氧化應(yīng)激等。但比較公認(rèn)的假說是在長期高血糖狀態(tài)下，葡萄糖分子可與體內(nèi)蛋白質(zhì)發(fā)生非酶糖基化反應(yīng)，形成不可逆的強(qiáng)活性物質(zhì)ー晚期糖基化終產(chǎn)物(AGEs)的結(jié)果。AGEs的生成是正常體內(nèi)存在的ー種自然化學(xué)反應(yīng)，即氨基酸和還原糖生成穩(wěn)定的Amadori產(chǎn)物，這一反應(yīng)由Maillard在1912年首次發(fā)現(xiàn)，稱為Maillard反應(yīng)。Maillard反應(yīng)發(fā)生在體外或體內(nèi)蛋白質(zhì)等物質(zhì)的氨基與糖的醛基上，不需酶的催化，但是ー個極為復(fù)雜的過程。首先蛋白質(zhì)分子和糖類發(fā)生縮合反應(yīng)，生成不穩(wěn)定的薛夫堿(Shiff bases)，而后薛夫堿可發(fā)生分子內(nèi)的重排而生成較為穩(wěn)定的阿馬多里(Amadori)重排產(chǎn)物。上述兩步反應(yīng)均為可逆性反應(yīng)，生成的產(chǎn)物稱為早期糖基化產(chǎn)物。此后該產(chǎn)物緩慢地經(jīng)過一系列脫水、氧化及化學(xué)重排，產(chǎn)生高度活性的羰基化合物，如3-脫氧葡萄糖酮醒(3-deoxyglucosone, 3-DG),進(jìn)而與蛋白質(zhì)的自由氨基起反應(yīng)，凝聚形成不可逆的終末產(chǎn)物，稱之為晚期糖基化終產(chǎn)物(AGEs)。中醫(yī)認(rèn)為內(nèi)熱是消渴病發(fā)生發(fā)展的始動因素，進(jìn)ー步可以傷陰導(dǎo)致腎陰虛，最后陰損及陽，而成陰陽俱虛之證。陰虛熱盛貫穿糖尿病腎病的始末，尤多見于糖尿病腎病重癥患者。而糖尿病腎病的西醫(yī)病因病機(jī)研究發(fā)現(xiàn)AGEs是導(dǎo)致糖尿病腎病變的主要病因，AGEs的直接損傷作用以及通過RAGE信號通路引起的腎臟病變是糖尿病腎病發(fā)生發(fā)展的主要病理基礎(chǔ)。故尋找藥物直接抑制中醫(yī)認(rèn)為的“內(nèi)熱”物質(zhì)基礎(chǔ)——AGEs的生成是控制糖尿病血管病變的有效途徑。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的本發(fā)明的目的在于提供ー類抑制體外糖基化產(chǎn)物生成中藥提取物及提取方法和應(yīng)用。技術(shù)方案ー類抑制體外糖基化產(chǎn)物生成的中藥提取物，其特征在于該中藥提取物為生地2份和山茱萸I份的分煎水提物、合煎水提物、水提含藥血清或水提醇沉有效部位。所述的ー類抑制體外糖基化產(chǎn)物生成的中藥提取物，其特征在于分煎水提物的提取方法，包括以下步驟各取生地2份、山茱萸I份，每次按4-12倍量加入蒸餾水后，分別提取2-4次，分別濃縮，按生地山茱萸=2 1混合均勻，得生地山茱萸分煎水提物。所述的ー類抑制體外糖基化產(chǎn)物生成的中藥提取物，其特征在于合煎水提物的提取方法，包括以下步驟取生地、山茱萸藥材以2 1的比例混合均勻，加入8-12倍量蒸餾水后，反復(fù)提取2 4次，提取l_2h，合并提取液、濃縮，得生地山茱萸合煎水提物。所述的ー類抑制體外糖基化產(chǎn)物生成的中藥提取物，其特征在于，生地、山茱萸分煎和合煎水提液的含藥血清提取方法，首先制備生地山茱萸分煎和合煎水提物；然后，選取SD大鼠，將生地山茱萸分煎和合煎水提物給大鼠灌胃，連續(xù)給藥5-7天后，禁食，于末次給藥1-2小時后取血，3000rpm離心10_20min，分離血清，于56°C水浴中滅活補(bǔ)體20_40min，經(jīng)0.22 μ m微孔濾器除菌，-20°C保存?zhèn)溆?，即得生地、山茱萸分煎和合煎水提物含藥血清。所述的ー類抑制體外糖基化產(chǎn)物生成的中藥提取物，其特征在于生地水提醇沉有效部位的提取方法，包括以下步驟將生地粉碎，毎次4-10倍量水提l_2h，合并提取液，カロ70%こ醇醇沉，靜置過濾得上清液和醇沉物，上清液揮至無醇味，上大孔樹脂，用蒸餾水洗 脫，得寡糖部位；上清液繼續(xù)用30%こ醇洗脫，收集醇洗脫液，得環(huán)烯醚帖苷部位；醇沉物加蒸餾水溶解，離心后取上清液，并揮至無醇味，得多糖部位。所述的ー類抑制體外糖基化產(chǎn)物生成的中藥提取物，其特征在于山茱萸水提醇沉有效部位的提取方法，包括以下步驟將山茱萸粉碎，毎次4-10倍量水提l_2h，合并提取液，加70%こ醇醇沉，上清液揮至無醇味，上大孔樹脂，用10%こ醇洗脫，得環(huán)烯醚帖苷部位；醇沉物加水溶解，離心去除不溶物，得多糖部位；將水提藥渣按I :6加入95%こ醇，85°C，提取2次后干燥得干浸膏，將干浸膏用10%Na0H洗滌，再用等倍量的酸性水溶液沉淀得三萜酸浸膏。所述的ー類抑制體外糖基化產(chǎn)物生成的中藥提取物，其特征在于，生地和山茱萸水提醇沉有效部位正交組合方法，包括以下步驟生地、山茱萸有效部位配伍將生地環(huán)烯醚萜苷(A)、寡糖(B)、多糖(C)和山茱萸環(huán)烯醚萜苷(D)、多糖(E)、三萜酸(F)共六個組分各按O、等效量、兩倍量3個水平，用正交設(shè)計(jì)L18 (37)進(jìn)行配伍組合。所述的ー類抑制體外糖基化產(chǎn)物生成的中藥提取物，其特征在于用HPLC法或UV法測定各有效部位含量，得生地環(huán)烯醚萜苷部位中梓醇含量為I. 91%，寡糖部位中水蘇糖含量為26. 01%,多糖純度為68. 52% ;山茱萸環(huán)烯醚萜苷部位中兩苷含量為44. 8%，多糖純度為65. 8%，三萜酸中兩酸含量為20. 89%ο所述的中藥提取物在制備抑制體外糖基化產(chǎn)物生成的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明生地和山茱萸藥材分別為玄參科多年生草本植物地黃Rehmanniaglutinosa Libosch.的干燥的塊根和山茱萸科植物山茱萸Cornus officinalis Sieb. etZucc.的干燥成熟果肉。生地，為治療糖尿病的“四大圣藥”之一，現(xiàn)代研究表明生地的化學(xué)成分主要有環(huán)烯醚萜苷、糖類和氨基酸，藥理研究表明生地具有改善造血功能、促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞増殖、提高免疫、降血糖、保護(hù)腎臟、抗衰老及益智等。生地梓醇對四氧嘧啶致糖尿病小鼠有顯著的降血糖作用、改善糖耐量、提高血清HDL-C含量、降低血清TC和TG水平；生地寡糖對鏈脲佐菌素和腎上腺素糖尿病模型均顯示出降糖作用[17]，井能改善高脂糖尿病大鼠胰島素抵抗的作用。山茱萸，現(xiàn)代化學(xué)研究表明山茱萸藥效成分主要有環(huán)烯醚萜苷、三萜酸和多糖。其中環(huán)烯醚職苷具有降血糖、抗血小板聚集和抗血栓等作用；多糖具有抗氧化、抗衰老等作用；三萜酸具有抗炎、降脂、降血糖和抗癌作用。山茱萸こ酸こ酯提取部位、正丁醇提取部位、こ醇提取液具有降低血糖和升高胰島素的水平。生地，味甘寒，歸心、干、腎經(jīng)，滋補(bǔ)肝腎，清熱涼血；山茱萸，味酸澀微溫，歸肝，腎經(jīng)，補(bǔ)益肝腎，澀精固脫。兩藥配伍，可以加強(qiáng)補(bǔ)益肝腎之功能，共奏滋肝腎而清虛熱。前期的整體動物實(shí)驗(yàn)研究也發(fā)現(xiàn)，生地-山茱萸(2
I)配伍給藥能改善糖尿病大鼠血糖水平、抑制蛋白尿、控制血脂、減少尿糖代謝，研究還發(fā)現(xiàn)藥對能維持NO-ET與TXA2-PGI2平衡，心肌嗜酸變性、空泡變及肥大程度減少，胸主動脈內(nèi)膜增厚程度降低，表明藥對有保護(hù)血管、改善器質(zhì)性病變；同時對腎皮質(zhì)中AGEs也表現(xiàn)為較好的抑制效果。本發(fā)明中生地和山茱萸有效部位成分含量檢測方法分別如下
I 生地I)環(huán)烯醚萜苷部位中梓醇采用HPLC測定生地環(huán)烯醚萜苷部位中梓醇的含量，色譜條件こ腈-O. 1%磷酸水(I 99)為流動相，檢測波長210nm，柱溫為30°C，流速為 O. 8mL · min-1, Venusil MP-C18 柱(4. 6_X 150mm, 5 μ m)。結(jié)果梓醇基線分離良好，進(jìn)樣量在O. 3^1. 8 μ g范圍內(nèi)，其峰面積與梓醇含量呈良好的線性關(guān)系，回歸方程y=283. 61x-4. 84，相關(guān)系數(shù)r=0. 9998，方法學(xué)考察良好，結(jié)果為1.91%。見圖I。2)多糖部位中多糖苯酚-硫酸法測定多糖含量。結(jié)果測得多糖含量為68. 52%。3)寡糖部位水蘇糖用HPLC方法來測定生地寡糖部位中水蘇糖的含量，色譜條件ZJ青-水(70 :30)為流動相，柱溫為室溫，流速為ImL · min-1, Lichrospher-NH2柱(4. 6mmX 150mm, 5 μ m),結(jié)果為 26. 01%。見圖 2。2山茱萸I)環(huán)烯醚萜苷部位中馬錢苷和莫諾苷的含量采用HPLC法測定。條件為色譜柱LichrospHer C18 柱(4. 6mmX 150mm, 5 μ m);流動相こ臆-水(10 90);流速 ImL · min-Ι ；進(jìn)樣量10 μ L ;柱溫30°C ;檢測波長240nm。兩苷總量為44. 8%。見圖3。2)多糖部位中多糖利用苯酚-硫酸法測定多糖含量，測得多糖含量為65.8%。3)三萜酸中齊墩果酸和熊果酸的含量采用ELSD法測定，條件為色譜柱weIchrom-C18 柱(250mmX4. 6mm, 5 μ m);流動相Me0H_l%NH4AC(85 :15);漂移管溫度 90°C，氣流2. 4L/min ;柱溫30°C ;流速0. 8ml/min ;進(jìn)樣量20μ I。兩酸含量為20. 89%。見圖4。本發(fā)明藥物提取物對體外抑制糖基化產(chǎn)物生成作用明顯，以生地和山茱萸有效部位為例，試驗(yàn)方法如下200Μ的葡萄糖與牛血清白蛋白組成反應(yīng)系統(tǒng)，再分別加入生地有效部位(環(huán)烯醚萜苷、寡糖、多糖)、山茱萸有效部位(環(huán)烯醚萜苷、多糖、三萜酸)，使其終濃度為1、0.5、0. I、O. 05、0. 01、0. 005和O. OOlg/し用氨基胍作陽性對照。同時另設(shè)其他對照(1)不加有效部位完整的非酶糖化系統(tǒng)；(2)不加有效部位不含Glu的系統(tǒng)；(3)不加有效部位不含白蛋白的系統(tǒng)；(4)加有效部位不含白蛋白的糖化系統(tǒng)；(5)加有效部位不含Glu的系統(tǒng)。37°C溫孵2周后于530nm處測定早期糖化蛋白(果糖胺)；37°C溫孵4周后于激發(fā)波長360nm，發(fā)射波長460nm處測定AGEs的熒光度值(F)。結(jié)果顯示，生地寡糖部位、山茱萸環(huán)烯醚萜苷部位對果糖胺抑制作用較強(qiáng)，而生地環(huán)烯醚萜苷部位和生地多糖部位對AGEs的抑制作用較強(qiáng)。見圖5、6。
本發(fā)明的有益效果1、同時對生地、山茱萸兩味藥材的有效部位進(jìn)行了較為系統(tǒng)的提取分離，并對其中成分進(jìn)行含量測定；2、利用體外糖基化生成模型，較為系統(tǒng)地對生地、山茱萸及其配伍水提液，生地、山茱萸有效部位及其配伍；對生地、山茱萸共六個有效部位進(jìn)行配伍組合，進(jìn)而確定其抑制糖基化產(chǎn)物的最佳配伍比。因此本發(fā)明提供的新的藥物制備提取物可作為有效抑制體外糖基化產(chǎn)物生成的藥物。


圖I梓醇對照品及樣品色譜圖(A對照品；B樣品)圖2水蘇糖對照品及樣品色譜圖(A對照品；B樣品)圖3對照品及樣品色譜圖(A馬錢苷對照品；B馬錢苷樣品；C莫諾苷對照品；D莫諾苷樣品)圖4對照品及樣品色譜圖(A-1齊墩果酸對照品；A-2熊果酸對照品；B_1齊墩果酸 樣品；B-2熊果酸樣品)
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)ー步闡明本發(fā)明，應(yīng)理解這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，而不用于限制本發(fā)明的范圍，在閱讀了本發(fā)明之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員對本發(fā)明的各種等價形式的修改均落于本申請所附權(quán)利要求所限定的范圍。實(shí)施例I藥物分煎水提液的提取エ藝步驟生地水提液將生地500g粉碎后過40目篩，進(jìn)行3次提取，第一次加入10倍量水，提取2h，過濾得提取液I ;第二次在藥渣中加入6倍量水，提取lh，得提取液II ;第三次在藥渣中加入4倍量水，提取Ih，得提取液III，合并各次提取液，濃縮至I. 5g生藥/mL ;山茱萸水提液山茱萸藥材250g加12倍量的水提取2次，每次2小時，合并提取液，濃縮至1.5g生藥/mL，將上述濃縮的生地、山茱萸提取液按2 :1的比例混合均勻即得。實(shí)施例2藥物合煎水提液的提取エ藝步驟稱取生地500g、山茱萸250g混合均勻粉碎，過40目篩，進(jìn)行3次提取。第一次加入10倍量水，提取2h，過濾得提取液I ;第二次在藥渣中加入6倍量水，提取lh，得提取液
II;第三次在藥渣中加入4倍量水，提取lh，得提取液III，合并各次提取液。實(shí)施例3生地有效部位的提取エ藝流程將生地400g粉碎后過40目篩，進(jìn)行3次提取。第一次加入10倍量水，提取2h，過濾得提取液I ;第二次在藥渣中加入6倍量水，提取lh，得提取液II ;第三次在藥渣中加入4倍量水，提取lh，得提取液III，合并各次提取液，濃縮至Ig生藥/mL，加醇至濃度為70%醇沉，靜置24h，過濾得上清液和醇沉物。寡糖將上清液揮至無醇味，并定容至O. 5g生藥/mL，上大孔樹脂，用蒸餾水洗脫，洗至Molish反應(yīng)為陰性，收集水洗脫液，濃縮，噴霧干燥，得寡糖粉末48. 54g，得率為12. 14%。環(huán)烯醚萜苷將上述的上清液再用30%こ醇洗脫，流速為I. 8BV/h (lmL/min)收集醇洗脫液，濃縮噴霧干燥，得環(huán)烯醚萜苷粉末4. 52g，得率為I. 13%。多糖將醇沉濾餅加蒸餾水溶解(濾餅相當(dāng)于山茱萸藥材量)，加水至多糖濃度為O. 25g生藥/mL，離心(IOmin, 5000rpm)，去除不溶物，上清液揮至無醇味，噴霧干燥，得多糖粉末129. 31g，得率為32. 33%。實(shí)施例4山茱萸有效部位的提取エ藝流程山茱萸藥材300g加12倍量的水提取2次，每次2小時，合并提取液，濃縮至Ig生藥/mL，加醇至濃度為70%醇沉，靜置24小吋，過濾得上清液和醇沉物。環(huán)烯醚萜苷將上清液揮至無醇味，并定容至O. 5g生藥/mL，上大孔樹脂，用蒸餾水洗脫，洗至Molish反應(yīng)為陰性，棄去水洗脫液；用10%こ醇洗脫，流速為I. 8BV/h (lmL/min)收集醇洗脫液，濃縮噴霧干燥，得環(huán)烯醚萜苷粉末5. 62g，得率為I. 87%。多糖將醇沉濾餅加蒸餾水溶解(濾餅相當(dāng)于山茱萸藥材量)，加水至多糖濃度為O. 25g生藥/mL，離心(IOmin, 5000rpm)，去除不溶物，上清液揮至無醇味，噴霧干燥，得多糖粉末34g，得率為11.33%。
三萜酸將水提后藥渣浙干，按I :6 (溶劑未水提之前的藥材質(zhì)量)95%こ醇在850C，提取2. 5h和I. 5h各一次，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，真空干燥得干浸膏。將干浸膏加40倍量無水こ醇溶解，離心(IOmin, 5000rpm)，去除不溶物，上清液用10%Na0H調(diào)節(jié)溶液pH值為14,水浴加熱IOmin,離心去除不溶物(IOmin, 5000rpm),上清液先用5%HC1酸化至pH為3,再用等體積PH為3的鹽酸水溶液沉淀，靜置后離心(IOmin, 5000rpm),所得沉淀水洗后蒸干，得三萜酸I. 41g，得率為O. 47%。實(shí)施例5生地、山茱萸分煎水提液和合煎水提液抑制體外糖基化產(chǎn)物生成按實(shí)施例I和2方法制備生地、山茱萸分煎水提液和合煎水提液。體外牛血清白蛋白糖化系統(tǒng)取葡萄糖終濃度為200mmol/L，牛血清白蛋白終濃度40g/L，分別加入生地山茱萸分煎水提液和生地山茱萸合煎水提液，該反應(yīng)系統(tǒng)用3mmol/LNaN3防腐。用氨基胍作陽性對照。同時另設(shè)其他對照(I)不加水提液完整的非酶糖化系統(tǒng)；(2)不加水提液不含Glu的系統(tǒng)；(3)不加水提液不含白蛋白的系統(tǒng)；(4)加有水提液不含白蛋白的糖化系統(tǒng)；(5)加有水提液不含Glu的系統(tǒng)。早期糖化蛋白(果糖胺)的測定反應(yīng)系統(tǒng)于37°C溫孵2周后，取反應(yīng)液12. 5 μ L，加10%NBT lmL, 37°C孵育15min后用15%こ酸25 μ L和冷浴終止反應(yīng)，然后于530nm處比色。計(jì)算對果糖胺抑制率。糖化終末產(chǎn)物(AGEs)的測定反應(yīng)系統(tǒng)于37°C溫孵4周后，于激發(fā)波長360nm，發(fā)射波長460nm處測定AGEs的熒光度值(F)。計(jì)算對AGEs抑制率。表I生地、山茱萸對早期糖化蛋白(果糖胺)的影響(n=3)
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'分《水從, 桃·》59.747.221 13.Λ4.50.14Λ
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幻.4"I )44.3_ 4r^-5130.713.1(11)44表2生地、山茱萸對晚期糖基化產(chǎn)物(AGEs)的影響(η=3)
權(quán)利要求
1.一類抑制體外糖基化產(chǎn)物生成的中藥提取物，其特征在于該中藥提取物為生地2份和山茱萸I份的分煎水提物、合煎水提物、水提含藥血清或水提醇沉有效部位。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一類抑制體外糖基化產(chǎn)物生成的中藥提取物，其特征在于分煎水提物的提取方法，包括以下步驟各取生地2份、山茱萸I份，每次按4-12倍量加入蒸餾水后，分別提取2-4次，分別濃縮，按生地山茱萸=2 1混合均勻，得生地山茱萸分煎水提物。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一類抑制體外糖基化產(chǎn)物生成的中藥提取物，其特征在于合煎水提物的提取方法，包括以下步驟取生地、山茱萸藥材以2 1的比例混合均勻，加入8-12倍量蒸餾水后，反復(fù)提取2 4次，提取l-2h，合并提取液、濃縮，得生地山茱萸合煎水提物。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一類抑制體外糖基化產(chǎn)物生成的中藥提取物，其特征在于，生地、山茱萸分煎和合煎水提液的含藥血清提取方法，首先制備生地山茱萸分煎和合煎水提物；然后，選取SD大鼠，將生地山茱萸分煎和合煎水提物分別給大鼠灌胃，連續(xù)給藥5-7天后，禁食，于末次給藥1-2小時后取血，3000rpm離心10_20min，分離血清，于56°C水浴中滅活補(bǔ)體20-40min，經(jīng)0. 22 y m微孔濾器除菌，_20°C保存?zhèn)溆?，即得生地、山茱萸分煎和合煎水提物含藥血清?br> 5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一類抑制體外糖基化產(chǎn)物生成的中藥提取物，其特征在于生地水提醇沉有效部位的提取方法，包括以下步驟將生地粉碎，每次4-10倍量水提l-2h，合并提取液，加70%乙醇醇沉，靜置過濾得上清液和醇沉物，上清液揮至無醇味，上大孔樹脂，用蒸餾水洗脫，得寡糖部位；上清液繼續(xù)用30%乙醇洗脫，收集醇洗脫液，得環(huán)烯醚帖苷部位；醇沉物加蒸餾水溶解，離心后取上清液，并揮至無醇味，得多糖部位。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一類抑制體外糖基化產(chǎn)物生成的中藥提取物，其特征在于山茱萸水提醇沉有效部位的提取方法，包括以下步驟將山茱萸粉碎，每次4-10倍量水提l_2h，合并提取液，加70%乙醇醇沉，上清液揮至無醇味，上大孔樹脂，用10%乙醇洗脫，得環(huán)烯醚帖苷部位；醇沉物加水溶解，離心去除不溶物，得多糖部位；將水提藥渣按I :6加入95%乙醇，85°C，提取2次后干燥得干浸膏，將干浸膏用10%Na0H洗滌，再用等倍量的酸性水溶液沉淀得三萜酸浸膏。
7.根據(jù)權(quán)利要求5、6所述的一類抑制體外糖基化產(chǎn)物生成的中藥提取物，其特征在于，生地和山茱萸水提醇沉有效部位正交組合方法，包括以下步驟生地、山茱萸有效部位配伍將生地環(huán)烯醚萜苷(A)、寡糖(B)、多糖(C)和山茱萸環(huán)烯醚萜苷(D)、多糖(E)、三萜酸(F)共六個組分各按O、等效量、兩倍量3個水平，用正交設(shè)計(jì)L18 (37)進(jìn)行配伍組合。
8.根據(jù)權(quán)利要求5、6所述的一類抑制體外糖基化產(chǎn)物生成的中藥提取物，其特征在于用HPLC法或UV法測定各有效部位含量，得生地環(huán)烯醚萜苷部位中梓醇含量為I. 91%，寡糖部位中水蘇糖含量為26. 01%，多糖純度為68. 52% ;山茱萸環(huán)烯醚萜苷部位中兩苷含量為44. 8%，多糖純度為65. 8%，三萜酸中兩酸含量為20. 89%。
9.如權(quán)利要求I所述的中藥提取物在制備抑制體外糖基化產(chǎn)物生成的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一類中藥提取物，該提取物分為生地山茱萸分煎水提液水提物，生地山茱萸合煎水提液水提物，生地、山茱萸分煎和合煎水提液物含藥血清，生地有效部位——環(huán)烯醚帖苷、寡糖、多糖與山茱萸有效部位——環(huán)烯醚帖苷、多糖、三萜酸，及6個有效部位的正交配伍組合。其中有效部位含量分別為生地環(huán)烯醚萜苷部位中梓醇含量為1.91%，多糖純度為68.52%；山茱萸環(huán)烯醚萜苷部位中兩苷含量為44.8%等。以體外AGEs生成模型為研究對象，對該類中藥提取物進(jìn)行較為系統(tǒng)的篩選研究，結(jié)果表明，該類中藥提取物可顯著抑制體外糖基化產(chǎn)物——果糖胺(前期)和AGEs(晚期)的生成，因此本發(fā)明為中醫(yī)臨床應(yīng)用生地、山茱萸治療糖尿病腎病等血管病變提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
文檔編號A61P9/14GK102824463SQ20121035781
公開日2012年12月19日 申請日期2012年9月24日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月24日
發(fā)明者許惠琴, 趙曉莉, 趙騰斐, 狄留慶, 農(nóng)偉虎, 呂高虹, 崔小兵 申請人:南京中醫(yī)藥大學(xué)