專利名稱：納米顆?；鞈乙喊停桶{米藥物制備微球的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物微球制劑的制備方法，具體地說，是一種納米顆?；鞈乙喊鸵挥桶{米藥物(Ν/0/Ν)制備微球的方法，屬于制藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
制藥行業(yè)從藥物發(fā)現(xiàn)，到臨床的應(yīng)用，最后一個(gè)環(huán)節(jié)是藥物制劑。其中有一部分藥物需要長(zhǎng)期給藥才能治愈，還有一部分需要靶向等局部給藥。要達(dá)到這些目的，原料藥必須要制備成相應(yīng)的劑型。例如需要長(zhǎng)期給藥但在體內(nèi)的半衰期短的藥物，宜制備成緩釋或控釋劑型；對(duì)于一些腫瘤的治療，需要一些藥物靶向于病灶，例如靶向于腫瘤血管的栓塞微球制劑等。
關(guān)于微球制劑的制備方法，Shi等[Double walled POE/PLGA microspheres:encapsulation of water-soluble and water-insoluble proteins and their releaseproperties, Journal of Controlled Release,89 (2003):167 - 177]利用 W/0/W 方法把牛血清白蛋白(BSA)和環(huán)孢霉素A (CyA)包封在P0E/PLGA殼一核微球里，該方法利用最常見的W/0/W復(fù)乳法來制備雙層微球，而該復(fù)乳的油水界面是公認(rèn)的蛋白殺手，容易導(dǎo)致水溶性的蛋白在該界面聚集，同樣致使包封率不高，存在不完全釋放和突釋等缺陷。Morita 等[Protein encapsulation into biodegradable microspheres by a novel S/0/ff emulsion method using poly (ethylene glycol) as a protein micronizationadjuvant, Journal of Controlled Release,69 (2000):435-444]用聚乙二醇(PEG)作為蛋白微粉化的賦形劑，即表面活性劑，然后用水包油一油包固體的方法把蛋白微囊包在生物可降解的微球里，該文獻(xiàn)雖然利用新的s/0/w乳化法制備載蛋白微球，但只是改變了表面活性劑，將以前報(bào)道較多的聚乙烯醇(PVA)改為聚乙二醇(PEG)，這種改變?nèi)圆荒芸朔饴实停杷员砻嬉滓鹁植课⒛一把装Y的缺點(diǎn)。用常規(guī)的S/0、S/0/W和S/0/0方法制備的微球，由于表面疏水，容易導(dǎo)致體內(nèi)組織微囊化及炎癥等副作用，且藥物突釋易造成藥物本身的毒副作用。關(guān)于納米顆粒混懸液包油一油包納米藥物(Ν/0/Ν)制備微球的方法，目前還未見報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種納米顆?；鞈乙喊鸵挥桶{米藥物(Ν/0/Ν)制備微球的方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)中微球制劑包封率低，不完全釋放和突釋，疏水性表面會(huì)引起局部微囊化及炎癥的缺點(diǎn)。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是
一種納米顆?；鞈乙喊鸵挥桶{米藥物制備微球的方法，包括以下步驟
(O將藥物和藥用輔料制備成納米藥物，所述藥物在納米藥物中的重量百分比為0. 1% - 90%,藥用輔料在納米藥物中的重量百分比為0% - 20 % ；
(2)將步驟(I)制備的納米藥物按照1:1 一 1:10的重量比分散在重量百分比濃度為O.5% - 80%聚合物的有機(jī)溶劑混合溶液中，形成均勻的混懸液，即油包納米藥物混懸液；
(3)將步驟(2)形成的油包納米藥物混懸液加入到含重量百分比為1%— 80%納米顆粒的水混懸液或含重量百分比為1% - 80%納米顆粒和重量百分比為O. 5% - 5%表面活性劑的水混懸液中，進(jìn)行乳化，形成納米顆?；鞈乙喊鸵挥桶{米藥物復(fù)乳；
(4)將所述納米顆粒混懸液包油一油包納米藥物復(fù)乳轉(zhuǎn)移到含重量百分比為1%— 10%無機(jī)鹽的水溶液中固化I一 4小時(shí)；
(5)將步驟(4)所得樣品進(jìn)行離心，收集微球，并洗滌所得微球，之后凍干，得到表面自組裝有納米顆粒且內(nèi)部含有納米藥物的微球。步驟(I)中所述的納米藥物的制備包括以下步驟
將藥物和藥用輔料溶解在水中，然后加入多孔納米顆粒，攪拌使得藥物和藥用輔料充分吸附在多孔納米顆粒里，離心去除上清液，再充分洗滌，然后凍干形成納米藥物；或
將藥物和藥用輔料溶解在水中形成藥物水溶液，然后將藥物水溶液轉(zhuǎn)移到聚乙二醇水溶液中，充分混勻后于冰箱中預(yù)凍，之后凍干，再用二氯甲烷溶解聚乙二醇并離心除去聚乙二醇得到納米藥物。所述的藥物包括小分子藥物和大分子藥物，所述的小分子藥物為化學(xué)藥物，可選自腫瘤化療類藥物、治療血管瘤的藥物或抗生素類藥物中的一種，所述的大分子藥物為生物大分子藥物，可選自蛋白大分子藥物、疫苗、抗體、核酸或脂質(zhì)體藥物中的一種或幾種，所述的藥用輔料為注射用藥用輔料。所述的腫瘤化療類藥物選自阿霉素、環(huán)磷酰胺、更生霉素、博萊霉素、柔紅霉素、表阿霉素、絲裂霉素、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、卡鉬、卡莫司汀、司莫司汀、順鉬、依托泊苷、喜樹堿及其衍生物、苯芥膽留醇、紫杉醇及其衍生物、多西紫杉醇及其衍生物、長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、它莫西芬、哌泊舒凡、環(huán)磷酰胺或氟他胺及其衍生物中的一種，所述的治療血管瘤的藥物選自潑尼松、普萘洛爾或雷帕霉素中的一種，所述的抗生素類藥物選自環(huán)孢素、左氧氟沙星、氧氟沙星或鹽酸依匹斯汀中的一種。所述的生物大分子藥物選自促紅細(xì)胞生成素、重組人粒細(xì)胞集落刺激因子、粒細(xì)胞一巨噬細(xì)胞集落刺激因子、疫苗、干擾素、生長(zhǎng)激素、胰島素、表皮生長(zhǎng)因子、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子、胰島素生長(zhǎng)因子、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子、血小板生長(zhǎng)因子、內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、神經(jīng)生長(zhǎng)因子、骨衍生性生長(zhǎng)因子、骨形成蛋白、組織多肽抗原、抗體、凝血因子VIII、凝血因子IX、遺傳因子、反義核苷酸、小分子RNA或基因中的一種或幾種。步驟(2)中所述的有機(jī)溶劑混合溶液中還添加有重量百分比為O. 1% - 20%的聚乙二醇或泊洛沙姆。步驟(2)中所述的有機(jī)溶劑混合溶液中聚合物重量百分比濃度為5% - 30%，所述的聚合物選自聚己內(nèi)酯、聚乳酸、聚乳酸一羥基乙酸、聚乳酸一聚乙二醇、聚羥基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇或聚己內(nèi)酯一聚乙二醇中的一種或幾種，所述的有機(jī)溶劑選自二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、庚烷、氯仿或丙酮中的一種或幾種。步驟(3)中所述的納米顆粒重量百分比濃度為20% - 70%，所述的納米顆粒為有機(jī)納米顆?；驘o機(jī)納米顆粒，可選自聚苯乙烯納米顆粒、交聯(lián)葡聚糖納米顆粒、二氧化娃納米顆粒、二氧化鈦納米顆粒、輕基磷灰石納米顆粒、四氧化三鐵納米顆粒、三氧化二鐵顆粒、金納米顆粒、三氧化二鋁納米顆粒、碳酸鈣納米顆粒、磷酸鈣納米顆粒、碳酸鎂納米顆粒、氫氧化鎂納米顆?；蜚y納米顆粒中的一種或幾種，所述的表面活性劑選自聚乙烯醇、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、泊洛沙姆、聚山梨醇、乙基纖維素或吐溫中的一種或幾種。所述微球的粒徑為I 一 500 Mffl，其表面自組裝有一層納米顆粒，所述微球中，藥物的重量百分比為O. 01% - 40%，納米顆粒的重量百分比為O. 01% - 96%，聚合物的重量百分比為3. 65% - 99. 98%，藥用輔料的重量百分比為0% — 30%。所述微球的粒徑為10 - 100 Mm。本發(fā)明的有益效果在于
I、本發(fā)明選擇了合適的聚合物材料和制備微球的方法，制備的微球包封率高達(dá)80%以上，并且這種表面自組裝有一層納米顆粒的微球具有增強(qiáng)細(xì)胞黏附的作用，以及減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。2、采用本發(fā)明方法制備的微球，其粒徑大小可以根據(jù)不同需要從I μ m到500 μπι進(jìn)行調(diào)控，且制備過程不污染環(huán)境。3、本發(fā)明方法制備的微球，大大降低了藥物突釋，藥物幾乎完全釋放，可以達(dá)到零級(jí)釋放，釋放的納米藥物可以局部高效被病變細(xì)胞攝取，從而減少藥物本身的毒副作用，同時(shí)可以使藥物在整個(gè)制備過程和治療過程中保持高活性即不失活。4、采用本發(fā)明方法制成的微球制劑，其微粒表面光滑圓整，顆粒規(guī)整無粘連，其凍干粉劑為白色細(xì)膩、疏松的粉體，不會(huì)塌陷、不粘連，再分散性良好，可以運(yùn)用到各種藥物緩釋或控釋微球的制備及疫苗的佐劑制備中。
附圖I是本發(fā)明實(shí)施例I制備所得微球的掃描電鏡(SEM)照片。附圖2是本發(fā)明實(shí)施例I制備所得微球的體外釋放曲線。附圖3是本發(fā)明實(shí)施例I制備所得微球的抗菌作用效果曲線。附圖4是本發(fā)明實(shí)施例I制備所得微球的抗癌作用效果曲線。附圖5是本發(fā)明實(shí)施例I制備所得微球與用S/0/W方法制備微球的體內(nèi)組織相容性掃描電鏡(SEM)照片。附圖6是本發(fā)明實(shí)施例3制備所得微球的掃描電鏡(SEM)照片。附圖7是本發(fā)明實(shí)施例3制備所得微球的體外釋放曲線。附圖8是本發(fā)明實(shí)施例3制備所得微球的藥效作用曲線。附圖9是本發(fā)明實(shí)施例3制備所得微球與用S/0/W方法制備微球的體內(nèi)組織相容性情況。附圖10是本發(fā)明實(shí)施例5制備所得微球的體外釋放曲線。附圖11是本發(fā)明實(shí)施例5制備所得微球的藥效作用曲線。附圖12是本發(fā)明實(shí)施例7制備所得微球的藥效作用曲線。附圖13是本發(fā)明實(shí)施例9制備所得微球的藥效作用曲線。附圖14是本發(fā)明實(shí)施例13制備所得微球的藥效作用曲線。附圖15是本發(fā)明實(shí)施例15制備所得微球的藥效作用曲線。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例并參照附圖對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)說明。應(yīng)該理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，而不用于限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。在實(shí)際應(yīng)用中本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明做出的改進(jìn)和調(diào)整，仍屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。需要說明的是，本發(fā)明技術(shù)方案中，所述的小分子藥物為化學(xué)藥物，可以是腫瘤化療類藥物、治療血管瘤的藥物或抗生素類藥物中的一種，其中腫瘤化療類藥物選自阿霉素、環(huán)磷酰胺、更生霉素、博萊霉素、柔紅霉素、表阿霉素、絲裂霉素、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、卡鉬、卡莫司汀(BCNU)、司莫司汀、順鉬、依托泊苷、喜樹堿及其衍生物、苯芥膽留醇、紫杉醇及其衍生物、多西紫杉醇及其衍生物、長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、它莫西芬、哌泊舒凡、環(huán)磷酰胺或氟他胺及其衍生物等中的一種；治療血管瘤的藥物選自潑尼松、普萘洛爾或雷帕霉素等中的一種；抗生素類藥物選自環(huán)孢素、左氧氟沙星、氧氟沙星或鹽酸依匹斯汀等中的一種。所述的大分子藥物為生物大分子藥物，選自蛋白大分子藥物、疫苗 、抗體、核酸或脂質(zhì)體藥物中的一種或幾種，具體指選自促紅細(xì)胞生成素(ΕΡ0)、重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)、粒細(xì)胞一巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)、疫苗、干擾素(IFN)、生長(zhǎng)激素(GH)、胰島素(Insulin)、表皮生長(zhǎng)因子(EGF)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-β )、胰島素生長(zhǎng)因子(IGF)、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)、血小板生長(zhǎng)因子(TOGF)、內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(EGF)、神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)、骨衍生性生長(zhǎng)因子(BDGF)、骨形成蛋白(BMP),組織多肽抗原(TPA)、抗體(Antibody)、凝血因子VIII、凝血因子IX、遺傳因子、反義核苷酸(anti-RNA)、小分子RNA或基因(DNA)等中的一種或幾種。所述的藥用輔料為注射用藥用輔料，可以是小糖類(如蔗糖、海藻糖、葡萄糖、麥芽糖或乳糖等)、多羥基類化合物(如甘露醇、山梨醇、甘油、1，2 —丙二醇、赤鮮糖醇、聚乙二醇、聚乙烯醇、聚環(huán)氧乙烷或聚吡咯烷酮等)、多糖類化合物(如葡聚糖、海藻酸鈉、殼聚糖、淀粉、纖維素或環(huán)糊精等)、氨基酸化合物(如甘氨酸、賴氨酸、精氨酸、谷氨酸或組氨酸等)或無機(jī)鹽類物質(zhì)(如鋅鹽、鈣鹽、銅鹽、鎂鹽或鑰鹽等)中的一種或任意組合。所述的聚合物選自聚己內(nèi)酯(PCL)、聚乳酸(PLA)、聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)、聚乳酸一聚乙二醇(PLA - PEG)、聚羥基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇(PLGA — PEG)或聚己內(nèi)酯一聚乙二醇(PCL - PEG)中的一種或幾種。制備微球的步驟(2)中，所述的聚合物有機(jī)溶劑混合溶液中還添加有重量百分比為O. 1% - 20%的聚乙二醇(PEG)或泊洛沙姆(Poloxamer)。所述的有機(jī)溶劑選自二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、庚烷、氯仿或丙酮中的一種或幾種，其中以二氯甲烷、乙酸乙酯或乙腈中的一種或幾種有機(jī)溶劑為佳。所述的納米顆粒為有機(jī)納米顆?；驘o機(jī)納米顆粒，具體指選自聚苯乙烯納米顆粒、交聯(lián)葡聚糖納米顆粒、二氧化娃納米顆粒、二氧化鈦納米顆粒、輕基磷灰石納米顆粒、四氧化三鐵納米顆粒、三氧化二鐵顆粒、金納米顆粒、三氧化二招納米顆粒、碳酸韓納米顆粒、磷酸鈣納米顆粒、碳酸鎂納米顆粒、氫氧化鎂納米顆?；蜚y納米顆粒等中的一種或多種。制備微球的步驟(3 )中，所述的表面活性劑選自聚乙烯醇(PVA)、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、泊洛沙姆(PoIoxamer)、聚山梨醇、乙基纖維素(EC)或吐溫中的一種或幾種。制備微球的步驟(2)中，所述的分散方式可選擇乳化、渦旋或超聲等，分散時(shí)間優(yōu)選為I 一 5分鐘。
制備微球的步驟(3)中，所述的加入方式可選擇滴加、一次性加入、噴霧方式加入或倒入等；所述的乳化方式可選擇乳化、渦旋或超聲等，乳化時(shí)間為O. 1 — 5分鐘。制備微球的步驟(4)中，所述的無機(jī)鹽可選自氯化鈉、氯化鉀、硝酸鉀或碳酸鈉等；所述的轉(zhuǎn)移方式可為滴加、一次性加入、噴霧方式加入或倒入等。制備微球的步驟(5)中，洗滌時(shí)可采用水、乙醇或乙醇一水混合液洗滌3 — 5次。一種納米顆粒混懸液包油一油包納米藥物制備的微球，所述微球的粒徑為1 一.500 Mm，較佳地為10 - 100 Mm，其表面組裝有一層納米顆粒；其中所述微球中，藥物的重量百分比為O. 01% - 40%，納米顆粒的重量百分比為O. 01% - 96%，聚合物的重量百分比為.3. 65% - 99. 98%，藥用輔料的重量百分比為0% — 30%。實(shí)施例I載有小分子藥物阿霉素微球的制備(一)
阿霉素具有抗菌作用和抗癌作用，載有阿霉素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球的制備，包括如下步驟
(1)取20mg阿霉素溶解到O. 5 ml的水中，然后和多孔二氧化娃納米顆粒20 mg攪拌.24小時(shí)，使得阿霉素充分吸附在多孔的二氧化硅納米顆粒里，離心去除上清液，再充分洗滌.3次，然后凍干形成阿霉素納米藥物；
(2)把上述阿霉素納米藥物和濃度為20%(w/w)的PLGA的二氯甲烷溶液按照重量比.1:9混合并超聲5分鐘形成均勻的混懸液，即油包阿霉素納米藥物(N/0)混懸液；
(3)把步驟(2)所得油包阿霉素納米藥物(N/0)混懸液滴加到50ml濃度為10% Cw/w)的銀納米顆粒水混懸液中，攪拌5分鐘形成納米顆?；鞈乙喊鸵挥桶⒚顾丶{米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳；
(4)把步驟(3)所得的納米顆?；鞈乙喊鸵挥桶⒚顾丶{米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳滴加到1000 ml濃度為5% (w/w)的氯化鈉水溶液中固化2小時(shí)；
(5)把步驟(4)所得樣品進(jìn)行離心，收集微球，并用水洗滌3次，凍干后得到載有阿霉素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球。本實(shí)施例所制得的微球中，藥物的重量百分比為O. 35%，納米顆粒的重量百分比為.96%，聚合物的重量百分比為3. 65%，藥用輔料的重量百分比為0%。對(duì)本實(shí)施例制備的載有阿霉素的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球進(jìn)行形貌表征、釋放曲線測(cè)試、抗菌測(cè)試、抗癌測(cè)試及在體內(nèi)組織相容性測(cè)試,并將其抗菌性、抗癌性及組織相容性與用S/0/W方法(詳見李志平，李云富，張振亞，劉燕，曲燕燕，梅興國(guó)，干擾素A-2b緩釋微球的制備及影響因素考察，軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊，2007，31 (5) :451-455)制備的微球進(jìn)行對(duì)比，其中抗癌作用的測(cè)試條件為一次給藥，總劑量與對(duì)照組水溶液組每天一次的共.15天的總劑量相同；組織相容性測(cè)試中，以微球注射部位出現(xiàn)纖維化的時(shí)間為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算時(shí)間。圖1是本實(shí)施例中載有阿霉素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球的掃描電鏡(SEM)照片，其中，A為微球的掃描電鏡圖，B為微球的表面放大圖，從圖中可以看出，所制備的微球形態(tài)好，其表面自組裝有一層銀納米顆粒，粒徑在I 一 50 μπι。圖2是本實(shí)施例中載有阿霉素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球的體外釋放曲線，從圖中可以看出，所制備的微球幾乎達(dá)到100%的藥物釋放率，突釋非常小，幾乎完全釋放，基本可以達(dá)到零級(jí)釋放，其體外釋放性能符合要求。微球中阿霉素相對(duì)于其原始投加量的包封率為92. 0%(計(jì)算方法為實(shí)際包封在微球的藥/投入的藥量X 100%=藥物的包封率)。圖3是本實(shí)施例中載有阿霉素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球的抗菌作用曲線，所制備微球的抗菌效果從圖中看，其抗菌作用比對(duì)照組的好。圖4是本實(shí)施例中載有阿霉素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球的抗癌作用曲線，所制備微球的抗癌作用效果比對(duì)照組的好，本實(shí)施例制備的微球約為100%，而對(duì)照組僅為80%。圖5是本實(shí)施例中載有阿霉素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球的相容性掃描電鏡(SEM)照片，可看出用S/0/W方法制備的微球(圖5A)在治療后的3 — 6個(gè)月出現(xiàn)纖維化組織；而本實(shí)施例用Ν/0/Ν方法制備的微球(圖5B)在治療一年后也沒有纖維組織的出現(xiàn)，即注射部位的微囊化不出現(xiàn)，從而克服了微囊化的產(chǎn)生。以本實(shí)施例方法制備的小分子藥物微球可以用于需要長(zhǎng)期治療的疾病，尤其是需要局部治療的疾病如腫瘤的血管栓塞等。這種方法制備的微球包封率高，可以達(dá)到80%以上，且這種表面具有納米顆粒的微球，由于表面親水性材料的組織相容性比疏水性材料的好，具有增強(qiáng)細(xì)胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。
實(shí)施例2載有小分子藥物阿霉素微球的制備(二)
載有阿霉素納米藥物的聚己內(nèi)酯(PCL)微球的制備，包括如下步驟
(1)取20mg阿霉素溶解到O. 5 ml的水中，然后和多孔二氧化鈦納米顆粒20 mg攪拌24小時(shí)，使得阿霉素充分吸附在多孔的二氧化鈦納米顆粒里，離心去除上清液，再充分洗滌3次，然后凍干形成阿霉素納米藥物；
(2)把上述阿霉素納米藥物和濃度為O.5% (w/w)的PCL的乙酸乙酯溶液按照重量比1:10混合并超聲5分鐘形成均勻的混懸液，即油包阿霉素納米藥物(N/0)混懸液；
(3)把步驟(2)所得油包阿霉素納米藥物(N/0)混懸液滴加到50ml含10% (w/w)銀納米顆粒和1% (w/w)聚乙烯醇(PVA)表面活性劑的水混懸液中,攪拌5分鐘形成納米顆?；鞈乙喊鸵挥桶⒚顾丶{米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳；
(4)把步驟(3)所得的納米顆?；鞈乙喊鸵挥桶⒚顾丶{米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳滴加到1000 ml濃度為1% (w/w)的氯化鉀水溶液中固化3小時(shí)；
(5)把步驟(4)所得樣品進(jìn)行離心，收集微球，并用水洗滌3次，凍干后得到載有阿霉素納米藥物的聚己內(nèi)酯(PCL)微球。本實(shí)施例所得的微球中，藥物的重量百分比為O. 47%，納米顆粒的重量百分比為83%，聚合物的重量百分比為16. 53%，藥用輔料的重量百分比為0%。本實(shí)施例中載有阿霉素納米藥物的聚己內(nèi)酯(PCL)微球形態(tài)好，其表面自組裝有一層銀納米顆粒，粒徑在10 - 100 μπι。微球的藥物體外釋放率幾乎達(dá)到100%，突釋非常小，幾乎完全釋放，基本可以達(dá)到零級(jí)釋放，其體外釋放性能符合要求。微球中阿霉素相對(duì)于其原始投加量的包封率為93. 5% (計(jì)算方法為實(shí)際包封在微球的藥/投入的藥量X 100%=藥物的包封率)。所制備微球的抗菌、抗癌效果較好，另外，采用Ν/0/Ν方法制備的微球在治療一年后也沒有纖維組織的出現(xiàn)，即注射部位的微囊化不出現(xiàn)，從而克服了微囊化的產(chǎn)生。實(shí)施例3載有大分子藥物生長(zhǎng)激素微球的制備(一)
生長(zhǎng)激素具有細(xì)胞黏附作用和促進(jìn)生長(zhǎng)或延緩衰老作用，載有生長(zhǎng)激素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球的制備，包括如下步驟(1)取10mg生長(zhǎng)激素和10 mg葡聚糖溶解到O. 4 ml的水中形成藥物水溶液，然后把上述溶液轉(zhuǎn)移到3. 2 ml濃度為5% (w/w)的聚乙二醇(PEG8000)水溶液中，充分混勻，然后在一 80°C冰箱預(yù)凍12小時(shí)，再用凍干機(jī)凍干，然后用二氯甲烷溶解PEG并離心除去PEG得到生長(zhǎng)激素納米藥物；
(2)把上述生長(zhǎng)激素納米藥物和濃度為30%(w/w)的PLGA的乙腈溶液按照重量比為1:8混合，并超聲I分鐘形成均勻的混懸液，即油包生長(zhǎng)激素納米藥物(N/0)混懸液；
(3)把步驟(2)所得油包生長(zhǎng)激素納米藥物(N/0)混懸液滴加到40ml濃度為20% (w/w)的輕基磷灰石納米顆粒水混懸液中并超聲O. I分鐘形成納米顆粒混懸液包油一油包生長(zhǎng)激素納米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳；
(4)把步驟(3)所得的納米顆粒混懸液包油一油包生長(zhǎng)激素納米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳滴加到濃度為10% (w/w)的氯化鈉水溶液中固化4小時(shí)；
(5)把步驟(4)所得樣品進(jìn)行離心，收集微球，并用乙醇洗滌5次，凍干后得到載有生長(zhǎng)激素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球。本實(shí)施例中所制得微球中，藥物的重量百分比為O. 17%，納米顆粒的重量百分比為84. 45%，聚合物的重量百分比為15. 17%，藥用輔料的重量百分比為O. 21%。對(duì)本實(shí)施例制備的載有生長(zhǎng)激素的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA )微球進(jìn)行形貌表征、釋放曲線測(cè)試、藥效測(cè)試及在體內(nèi)組織相容性測(cè)試，并將其藥效及組織相容性與用s/0/w方法制備的微球進(jìn)行對(duì)比，其中藥效測(cè)試條件為一次給藥，總劑量與對(duì)照組水溶液組每天一次的共15天的總劑量相同。圖6是本實(shí)施例中載有生長(zhǎng)激素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球的掃描電鏡(SEM)照片，其中，A為微球的掃描電鏡圖，B為微球的表面放大圖，從圖中可以看出，所制備的微球形態(tài)好，其表面自組裝有一層羥基磷灰石納米顆粒，粒徑在10 — 120 μπι。圖7是本實(shí)施例中載有生長(zhǎng)激素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球的體外釋放曲線，從圖中可以看出，所制備的微球幾乎達(dá)到100%的藥物釋放率，突釋非常小，幾乎完全釋放，基本可以達(dá)到零級(jí)釋放(各條曲線代表不同PLGA材料制備的微球，可以調(diào)控藥物的不同釋放時(shí)間，其中各個(gè)PLGA分別為2Α50/50:羥基乙酸-乳酸=1:1和分子量為20000_30000Da、 2A65/35:羥基乙酸-乳酸=0. 65:0. 35和分子量為20000-30000Da、3A50/50:羥基乙酸-乳酸=1:1和分子量為30000-47000Da、3A65/35:羥基乙酸-乳酸=0. 65:0. 35和分子量為30000-47000Da)，其體外釋放性能符合要求。微球中生長(zhǎng)激素相對(duì)于其原始投加量的包封率為91. 0% (計(jì)算方法為實(shí)際包封在微球的藥/投入的藥量X 100%=藥物的包封率)。圖8是本實(shí)施例中載有生長(zhǎng)激素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球的藥效作用曲線，微球組為本實(shí)施例方法制備的微球，對(duì)照組為用S/0/W方法制備的微球，空白組為不含藥物的微球，可以看出，使用本實(shí)施例所制備的微球，體重增加比對(duì)照組的體重增加快，藥效更好。圖9是本實(shí)施例中載有生長(zhǎng)激素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球的組織相容性情況，從圖中可以看出，所制備的微球(Ν/0/Ν組)的相容性比對(duì)照組的好，在治療期間，在動(dòng)物組織內(nèi)沒有出現(xiàn)注射部位的微囊化或纖維化。以本實(shí)施例方法制備的微球包封率高，最少可以達(dá)到80%，突釋非常小，幾乎完全釋放，基本可以達(dá)到零級(jí)釋放，同時(shí)由于納米顆粒在材料降解產(chǎn)生的酸可以與羥基磷灰石納米顆粒發(fā)生反應(yīng)，從而中和酸，以保證微球的內(nèi)環(huán)境相對(duì)穩(wěn)定，可以使生物大分子藥物在整個(gè)制備過程和治療過程中保持高活性，即不失活。而且這種表面具有納米顆粒的生物大分子藥物微球，由于表面親水性材料的組織相容性比疏水性材料的好，具有增強(qiáng)細(xì)胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。本實(shí)施例方法制備的生物大分子藥物微球可以用于需要頻繁注射給藥、長(zhǎng)期治療的疾病，尤其是需要局部治療的疾病如腫瘤、各種病因引起的貧血、侏儒等重大疾病的治療。實(shí)施例4載有大分子藥物生長(zhǎng)激素微球的制備(二)
載有生長(zhǎng)激素納米藥物的聚乳酸一聚乙二醇(PLA - PEG)微球的制備，包括如下步驟
(1)取10mg生長(zhǎng)激素和10 mg纖維素溶解到O. 4 ml的水中形成藥物水溶液，然后把上述溶液轉(zhuǎn)移到3. 2 ml濃度為5% (w/w)的聚乙二醇(PEG8000)水溶液中，充分混勻，然后 在一 80°C冰箱預(yù)凍12小時(shí)，再用凍干機(jī)凍干，然后用二氯甲烷溶解PEG并離心除去PEG得到生長(zhǎng)激素納米藥物；
(2)把上述生長(zhǎng)激素納米藥物和濃度為5%(w/w)的PLA - PEG的二氯甲烷溶液按照重量比為1:5混合，并超聲I分鐘形成均勻的混懸液，即油包生長(zhǎng)激素納米藥物(N/0)混懸液；
(3)把步驟(2)所得油包生長(zhǎng)激素納米藥物(N/0)混懸液滴加到40ml含有20% (w/w)羥基磷灰石納米顆粒和O. 5% (w/w)聚乙二醇(PEG)表面活性劑的水混懸液中并超聲O. I分鐘形成納米顆?；鞈乙喊鸵挥桶L(zhǎng)激素納米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳；
(4)把步驟(3)所得的納米顆粒混懸液包油一油包生長(zhǎng)激素納米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳滴加到濃度為5% (w/w)的氯化鈉水溶液中固化I小時(shí)；
(5)把步驟(4)所得樣品進(jìn)行離心，收集微球，并用乙醇水溶液洗滌5次，凍干后得到載有生長(zhǎng)激素納米藥物的聚乳酸一聚乙二醇(PLA - PEG)微球。本實(shí)施例中所制得微球中，藥物的重量百分比為O. 17%，納米顆粒的重量百分比為74. 15%，聚合物的重量百分比為25. 47%，藥用輔料的重量百分比為O. 21%。本實(shí)施例中載有生長(zhǎng)激素納米藥物的聚乳酸一聚乙二醇(PLA - PEG)微球形態(tài)好，其表面自組裝有一層羥基磷灰石納米顆粒，粒徑在12 - 180 μπι。微球的藥物體外釋放率幾乎達(dá)到100%，突釋非常小，幾乎完全釋放，基本可以達(dá)到零級(jí)釋放，其體外釋放性能符合要求。微球中阿霉素相對(duì)于其原始投加量的包封率為94. 7%(計(jì)算方法為實(shí)際包封在微球的藥/投入的藥量X 100%=藥物的包封率)。所制備微球的藥效較好，在治療期間，在動(dòng)物組織內(nèi)沒有出現(xiàn)注射部位的微囊化或纖維化。這種表面具有納米顆粒的生物大分子藥物微球，由于表面親水性材料的組織相容性比疏水性材料的好，具有增強(qiáng)細(xì)胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。由于納米顆粒在材料降解產(chǎn)生的酸可以與羥基磷灰石納米顆粒發(fā)生反應(yīng)，從而中和酸，以保證微球的內(nèi)環(huán)境相對(duì)穩(wěn)定，可以使大分子藥物在整個(gè)制備過程和治療過程中保持高活性，即不失活。實(shí)施例5載有大分子藥物干擾素微球的制備(一)
干擾素具有抗菌作用和抗病毒效果，載有干擾素納米藥物的聚羥基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇(PLGA - PEG)微球的制備，包括如下步驟
(I)將5 mg干擾素和5 mg甘氨酸溶解到O. 2 ml的水中形成藥物水溶液，然后把上述溶液轉(zhuǎn)移到3. 2 ml的濃度為5% (w/w)的聚乙二醇(PEG8000)水溶液中，充分混勻，然后在一 80°C冰箱預(yù)凍12小時(shí)，再用凍干機(jī)凍干，然后用二氯甲烷溶解PEG并離心除去PEG得到干擾素納米藥物；
(2)把上述干擾素納米藥物和濃度為80%(w/w)的PLGA — PEG的乙腈溶液按照重量比為1:1混合并超聲I分鐘形成均勻的混懸液，即油包干擾素納米藥物(N/0)混懸液；
(3)把步驟(2)所得油包干擾素納米藥物(N/0)混懸液滴加到4ml濃度為20% (w/w)的二氧化鈦納米顆粒水混懸液中并超聲2分鐘形成納米顆?；鞈乙喊鸵挥桶蓴_素納米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳；
(4)把步驟(3)所得的納米顆粒混懸液包油一油包干擾素納米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳滴加到1000 ml濃度為10% (w/w)的氯化鈉水溶液中固化4小時(shí)；
(5)把步驟(4)所得樣品進(jìn)行離心，收集微球，并用水洗滌4次，凍干后得到載有干擾素納米藥物的聚羥基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇(PLGA - PEG)微球。本實(shí)施例中所得微球中，藥物的重量百分比為O. 51%，納米顆粒的重量百分比為89. 89%，聚合物的重量百分比為9. 04%，藥用輔料的重量百分比為O. 56%。對(duì)本實(shí)施例制備的微球進(jìn)行形貌表征，結(jié)果顯示，制備的微球形態(tài)好，其表面自組裝一層二氧化鈦納米顆粒，粒徑在10 - 150 Mffl ;微球中干擾素相對(duì)于其原始投加量的包封率為95. 07% (計(jì)算方法為實(shí)際包封在微球的藥/投入的藥量X 100%=藥物的包封率)。本實(shí)施例所制得的微球的體外釋放曲線如圖10，可看出藥物在體外釋放幾乎達(dá)到零級(jí)釋放。微球的藥效曲線如圖11，Ν/0/Ν組為本實(shí)施例方法制備的微球，對(duì)照組為用S/0/W方法制備的微球，可看出本實(shí)施例微球抗病毒作用優(yōu)于對(duì)照組。
這種方法制備的微球包封率高，可以達(dá)到80%以上，突釋非常小和幾乎完全釋放，可以達(dá)到零級(jí)釋放。由于納米顆粒在材料降解產(chǎn)生的酸可以與二氧化鈦納米顆粒發(fā)生反應(yīng)，從而中和酸，以保證微球的內(nèi)環(huán)境相對(duì)穩(wěn)定，可以使大分子藥物在整個(gè)制備過程和治療過程中保持高活性，即不失活。這種方法制備的干擾素微球可以用于需要頻繁注射給藥、長(zhǎng)期治療的疾病，如肝炎；可以減少注射的頻率和減輕病人的痛苦。實(shí)施例6載有大分子藥物干擾素微球的制備(二)
載有干擾素納米藥物的聚己內(nèi)酯一聚乙二醇(PCL - PEG)微球的制備，包括如下步驟
(1)將5mg干擾素和5 mg甘油溶解到O. 2 ml的水中形成藥物水溶液，然后把上述溶液轉(zhuǎn)移到3. 2 ml的濃度為5% (w/w)的聚乙二醇(PEG8000)水溶液中，充分混勻，然后在一80°C冰箱預(yù)凍12小時(shí)，再用凍干機(jī)凍干，然后用二氯甲烷溶解PEG并離心除去PEG得到干擾素納米藥物；
(2)把上述干擾素納米藥物和濃度為10%(w/w)的PCL - PEG的庚烷溶液按照重量比為1:8混合并超聲I分鐘形成均勻的混懸液，即油包干擾素納米藥物(N/0)混懸液，庚烷溶液中還含有O. 1% (w/w)的泊洛沙姆；
(3)把步驟(2)所得油包干擾素納米藥物(N/0)混懸液滴加到4ml含50% (w/w) 二氧化鈦納米顆粒和5% (w/w)聚乙烯吡咯烷酮表面活性劑的水混懸液中并超聲2分鐘形成納米顆?；鞈乙喊鸵挥桶蓴_素納米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳；
(4)把步驟(3)所得的納米顆?；鞈乙喊鸵挥桶蓴_素納米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳滴加到1000 ml濃度為8% (w/w)的氯化鈉水溶液中固化4小時(shí)；
(5)把步驟(4)所得樣品進(jìn)行離心，收集微球，并用乙醇洗滌4次，凍干后得到載有干擾素納米藥物的聚己內(nèi)酯一聚乙二醇(PCL - PEG)微球。本實(shí)施例中所得微球中，藥物的重量百分比為O. 51%，納米顆粒的重量百分比為49.89 %，聚合物的重量百分比為49.04 %，藥用輔料的重量百分比為O. 56%。本實(shí)施例制備的微球形態(tài)好，其表面自組裝一層二氧化鈦納米顆粒，粒徑在5 -260 Mm ;微球中干擾素相對(duì)于其原始投加量的包封率為93. 87% (計(jì)算方法為實(shí)際包封在微球的藥/投入的藥量X 100%=藥物的包封率)。本實(shí)施例所制得的微球在體外釋放幾乎達(dá)到零級(jí)釋放，微球抗病毒和抗菌作用均優(yōu)于對(duì)照組。這種方法制備的微球包封率高，突釋非常小和幾乎完全釋放，可以達(dá)到零級(jí)釋放。由于納米顆粒在材料降解產(chǎn)生的酸可以與二氧化鈦納米顆粒發(fā)生反應(yīng)，從而中和酸，以保證微球的內(nèi)環(huán)境相對(duì)穩(wěn)定，可以使大分子藥物在整個(gè)制備過程和治療過程中保持高活性，即不失活。這種方法制備的干擾素微球可以用于需要頻繁注射給藥、長(zhǎng)期治療的疾病，如肝炎，可以減少注射的頻率和減輕病人的痛苦。實(shí)施例7載有大分子藥物EPO微球的制備(一)
促紅細(xì)胞生成素(EPO)具有抗菌作用和治療貧血作用，載有EPO納米藥物的聚己內(nèi)酯(PCL)和聚乳酸(PLA)微球的制備，包括如下步驟
(1)將5mg EPO和5 mg葡聚糖溶解到O. 2 ml的水中形成藥物水溶液，然后把上述溶液轉(zhuǎn)移到3. 2 ml的濃度為5% (w/w)的聚乙二醇(PEG8000)水溶液中，充分混勻，然后在一80°C冰箱預(yù)凍12小時(shí)，再用凍干機(jī)凍干，然后用二氯甲烷溶解PEG并離心除去PEG得到EPO納米藥物；
(2)把上述EPO納米藥物和濃度為10%(w/w)的PCL和10% (w/w) PLA的氯仿溶液按照重量比為1:9混合并超聲I分鐘形成均勻的混懸液，即油包EPO納米藥物(N/0)混懸液；
(3)把步驟(2)所得油包EPO納米藥物(N/0)混懸液滴加到5ml濃度為20% (w/w)的輕基磷灰石納米顆粒水混懸液中并攪拌5分鐘形成納米顆?；鞈乙喊鸵挥桶麰PO納米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳；
(4)把步驟(3)所得的納米顆?；鞈乙喊鸵挥桶麰PO納米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳滴加到1000 ml濃度為1% (w/w)的氯化鈉水溶液中固化I小時(shí)；
(5)把步驟(4)所得樣品進(jìn)行離心，收集微球，并用水洗滌3次，凍干后得到載有EPO納米藥物的聚己內(nèi)酯(PCL)和聚乳酸(PLA)微球。本實(shí)施例中所得微球中，藥物的重量百分比為O. 30%，納米顆粒的重量百分比為71. 79%，聚合物的重量百分比為27. 55%，藥用輔料的重量百分比為O. 36%。對(duì)本例制備的微球進(jìn)行形貌表征，結(jié)果顯示，所制備微球形態(tài)好，其表面自組裝有一層羥基磷灰石納米顆粒，粒徑在50 - 220 Mm ;微球中EPO相對(duì)于其原始投加量的包封率為93. 33% (計(jì)算方法為實(shí)際包封在微球的藥/投入的藥量X 100%=藥物的包封率)，且實(shí)驗(yàn)表明其體外釋放曲線也符合要求。本實(shí)施例制備的微球的藥效曲線見圖12，由圖中可看出，本實(shí)施例制備的微球抗貧血效果和抗菌效果較好，與普通的藥物顆粒治療70天相比，效果都非常好。這種方法制備的微球包封率高，可以達(dá)到80%以上，突釋非常小和幾乎完全釋放，可以達(dá)到零級(jí)釋放。由于納米顆粒在材料降解產(chǎn)生的酸可以與羥基磷灰石納米顆粒發(fā)生反應(yīng)，從而中和酸，以保證微球的內(nèi)環(huán)境相對(duì)穩(wěn)定，同時(shí)可以使EPO藥物在整個(gè)制備過程和治療過程保持高活性，即不失活。且這種表面具有納米顆粒的微球，由于表面親水性材料的組織相容性比疏水性材料的好，具有增強(qiáng)細(xì)胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。本實(shí)施例方法制備的EPO微球可以用于需要頻繁注射給藥、長(zhǎng)期治療各種原因引起的貧血如腫瘤治療引起的腎衰貧血，可以減少注射的頻率和減輕病人的痛苦。實(shí)施例8載有大分子藥物EPO微球的制備(二)
載有EPO納米藥物的聚己內(nèi)酯(PCL)和聚羥基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇(PLGA — PEG)微球的制備，包括如下步驟
(1)將5mg EPO和5 mg山梨醇溶解到O. 2 ml的水中形成藥物水溶液，然后把上述溶液轉(zhuǎn)移到3. 2 ml的濃度為5% (w/w)的聚乙二醇(PEG8000)水溶液中，充分混勻，然后在一80°C冰箱預(yù)凍12小時(shí)，再用凍干機(jī)凍干，然后用二氯甲烷溶解PEG并離心除去PEG得到EPO納米藥物；
(2)把上述EPO納米藥物和濃度為20%(w/w)的PCL和60% (w/w)的PLGA — PEG的丙 酮溶液按照重量比為1:2混合并超聲2分鐘形成均勻的混懸液，即油包EPO納米藥物(N/0)混懸液；
(3)把步驟(2)所得油包EPO納米藥物(N/0)混懸液滴加到5ml含有40% (w/w)羥基磷灰石納米顆粒和5% (w/w)泊洛沙姆表面活性劑的水混懸液中并攪拌5分鐘形成納米顆?；鞈乙喊鸵挥桶麰PO納米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳；
(4)把步驟(3)所得的納米顆粒混懸液包油一油包EPO納米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳滴加到1000 ml濃度為1% (w/w)的氯化鈉水溶液中固化2小時(shí)；
(5)把步驟(4)所得樣品進(jìn)行離心，收集微球，并用水洗滌3次，凍干后得到載有EPO納米藥物的聚己內(nèi)酯(PCL)和聚羥基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇(PLGA - PEG)微球。本實(shí)施例中所得微球中，藥物的重量百分比為O. 36%，納米顆粒的重量百分比為41. 79%，聚合物的重量百分比為57. 49%，藥用輔料的重量百分比為O. 36%。對(duì)本例制備的微球形貌表征，結(jié)果顯示所制備微球形態(tài)好，其表面自組裝有一層羥基磷灰石納米顆粒，粒徑在40 - 250 Mm ;微球中EPO相對(duì)于其原始投加量的包封率為89. 8% (計(jì)算方法為實(shí)際包封在微球的藥/投入的藥量X 100%=藥物的包封率)，且實(shí)驗(yàn)表明其體外釋放曲線也符合要求。本實(shí)施例制備的微球抗貧血效果和抗菌效果較好，與普通的藥物顆粒治療70天相比，效果都非常好。這種方法制備的微球包封率高，可以達(dá)到80%以上，突釋非常小和幾乎完全釋放，可以達(dá)到零級(jí)釋放。由于納米顆粒在材料降解產(chǎn)生的酸可以與羥基磷灰石納米顆粒發(fā)生反應(yīng)，從而中和酸，以保證微球的內(nèi)環(huán)境相對(duì)穩(wěn)定，同時(shí)可以使EPO藥物在整個(gè)制備過程和治療過程保持高活性，即不失活。且這種表面具有納米顆粒的微球，由于表面親水性材料的組織相容性比疏水性材料的好，具有增強(qiáng)細(xì)胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。本實(shí)施例方法制備的EPO微球可以用于需要頻繁注射給藥、長(zhǎng)期治療各種原因引起的貧血如腫瘤治療引起的腎衰貧血，可以減少注射的頻率和減輕病人的痛苦。實(shí)施例9載有大分子藥物G-CSF微球的制備(一)
粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)具有抗菌作用和粒細(xì)胞增加作用，載有G-CSF納米藥物的聚己內(nèi)酯(PCL)微球的制備，包括如下步驟
(I)將5 mg G-CSF和5 mg葡聚糖溶解到O. 2 ml的水中形成藥物水溶液，然后把上述溶液轉(zhuǎn)移到3. 2 ml的濃度為5% (w/w)的聚乙二醇(PEG8000)水溶液中，充分混勻，然后在一 80°C冰箱預(yù)凍12小時(shí)，再用凍干機(jī)凍干，然后用二氯甲烷溶解PEG并離心除去PEG得到G-CSF納米藥物；
(2)把上述G-CSF納米藥物和濃度為20%(w/w)的PCL的乙腈溶液按照重量比為1:9混合并超聲5分鐘形成均勻的混懸液，即油包G-CSF納米藥物(N/0)混懸液，乙腈溶液中還含有20% (w/w)的聚乙二醇；
(3)把步驟(2)所得油包G-CSF納米藥物(N/0)混懸液滴加到Iml濃度為70% (w/w)的羥基磷灰石納米顆粒水混懸液中并攪拌5分鐘形成納米顆?；鞈乙喊鸵挥桶麲-CSF納米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳；
(4)把步驟(3)所得的納米顆?；鞈乙喊鸵挥桶麲-CSF納米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳滴加到1000 ml濃度為5% (w/w)的氯化鈉水溶液中固化2小時(shí)；
(5)把步驟(4)所得樣品進(jìn)行離心，收集微球，并用乙醇洗滌3次，凍干后得到載有 G-CSF納米藥物的聚己內(nèi)酯(PCL)微球。本實(shí)施例中所得微球中，藥物的重量百分比為O. 70%，納米顆粒的重量百分比為44. 03%，聚合物的重量百分比為54. 72%，藥用輔料的重量百分比為O. 55%。對(duì)本實(shí)施例制備的微球進(jìn)行形貌表征，結(jié)果顯示，制備的微球形態(tài)好，其表面自組裝有一層羥基磷灰石納米顆粒，粒徑在I 一 500 Mm ;微球中G-CSF相對(duì)于其原始投加量的包封率為91. 8%(計(jì)算方法為實(shí)際包封在微球的藥/投入的藥量X 100%=藥物的包封率)，且實(shí)驗(yàn)表明其體外釋放曲線也符合要求。該實(shí)施例微球的藥效曲線如圖13，其中Ν/0/Ν組為本實(shí)施例方法制備的微球，對(duì)照組為用S/0/W方法制備的微球，空白組為不含藥物的微球，從圖中可以看出，本實(shí)施例微球的藥效明顯優(yōu)于對(duì)照組。本實(shí)施例方法制備的G-CSF微球可以用于需要頻繁注射給藥、長(zhǎng)期治療各種原因引起的白細(xì)胞減少癥，可以減少注射的頻率和減輕病人的痛苦。種方法制備的微球包封率高，可以達(dá)到80%以上，突釋非常小和幾乎完全釋放，可以達(dá)到零級(jí)釋放。由于納米顆粒在材料降解產(chǎn)生的酸可以與羥基磷灰石納米顆粒發(fā)生反應(yīng)，從而中和酸，以保證微球的內(nèi)環(huán)境相對(duì)穩(wěn)定，同時(shí)可以使EPO藥物在整個(gè)制備過程和治療過程中保持高活性，即不失活。且這種表面具有納米顆粒的微球，由于表面親水性材料的組織相容性比疏水性材料的好，具有增強(qiáng)細(xì)胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。實(shí)施例10載有大分子藥物G-CSF微球的制備(二)
載有G-CSF納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球的制備，包括如下步驟
(1)將5mg G-CSF和5 mg葡聚糖溶解到O. 2 ml的水中形成藥物水溶液，然后把上述溶液轉(zhuǎn)移到3. 2 ml的濃度為5% (w/w)的聚乙二醇(PEG8000)水溶液中，充分混勻，然后在一 80°C冰箱預(yù)凍12小時(shí)，再用凍干機(jī)凍干，然后用二氯甲烷溶解PEG并離心除去PEG得到G-CSF納米藥物；
(2)把上述G-CSF納米藥物和濃度為20%(w/w)的PLGA的二氯甲烷-乙酸乙酯(1: 1，v/v)溶液按照重量比為1:9混合并超聲5分鐘形成均勻的混懸液，即油包G-CSF納米藥物(N/0)混懸液，二氯甲烷-乙酸乙酯溶液中還含有O. 1% (w/w)的聚乙二醇；
(3)把步驟(2)所得油包G-CSF納米藥物(N/0)混懸液滴加到Iml含有20% (w/w)羥基磷灰石納米顆粒和2% (w/w)聚山梨醇表面活性劑的水混懸液中并攪拌5分鐘形成納米顆?；鞈乙喊鸵挥桶麲-CSF納米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳；(4)把步驟(3)所得的納米顆粒混懸液包油一油包G-CSF納米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳滴加到1000 ml濃度為5% (w/w)的氯化鈉水溶液中固化2小時(shí)；
(5)把步驟(4)所得樣品進(jìn)行離心，收集微球，并用水洗滌3次，凍干后得到載有G-CSF納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球。本實(shí)施例中所得微球中，藥物的重量百分比為I. 70%，納米顆粒的重量百分比為43. 03%，聚合物的重量百分比為54. 12%，藥用輔料的重量百分比為I. 15%。對(duì)本例制備的微球進(jìn)行形貌表征，結(jié)果顯示微球形態(tài)好，其表面自組裝有一層羥基磷灰石納米顆粒，粒徑在I 一 450 Mm ;微球中G-CSF相對(duì)于其原始投加量的包封率為89. 9% (計(jì)算方法為實(shí)際包封在微球的藥/投入的藥量X 100%=藥物的包封率)，且實(shí)驗(yàn)表明其體外釋放曲線也符合要求，微球的藥效較好。本實(shí)施例方法制備的G-CSF微球可以用于需要頻繁注射給藥、長(zhǎng)期治療各種原因引起的白細(xì)胞減少癥，可以減少注射的頻率和減輕病人的痛苦。這種方法制備的微球包封率高，可以達(dá)到80%以上，突釋非常小和幾乎完全 釋放，可以達(dá)到零級(jí)釋放。由于納米顆粒在材料降解產(chǎn)生的酸可以與輕基磷灰石納米顆粒發(fā)生反應(yīng)，從而中和酸，以保證微球的內(nèi)環(huán)境相對(duì)穩(wěn)定，同時(shí)可以使G-CSF藥物在整個(gè)制備過程和治療過程中保持高活性，即不失活。且這種具有納米顆粒表面的微球，由于表面親水性材料的組織相容性比疏水性材料的好，具有增強(qiáng)細(xì)胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。實(shí)施例11載有小分子藥物普萘洛爾微球的制備(一)
普萘洛爾具有抗菌作用和抗癌效果，載有普萘洛爾納米藥物的聚羥基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇(PLGA - PEG)微球的制備，包括如下步驟
(1)取20mg普萘洛爾溶解到O. 5 ml的水中，然后和20 mg多孔二氧化硅納米顆粒攪拌24小時(shí)，使得普萘洛爾充分吸附在多孔的二氧化硅納米顆粒里，離心去除上清液，再充分洗滌3次，然后凍干形成普萘洛爾納米藥物；
(2)把上述普萘洛爾納米藥物和濃度為20%(w/w)的PLGA — PEG的二氯甲烷溶液按照重量比1:9混合并超聲5分鐘形成均勻的混懸液，即油包普萘洛爾納米藥物(N/0)混懸液；
(3)把步驟(2)所得油包普萘洛爾納米藥物(N/0)混懸液滴加到50ml濃度為10% (w/w)的銀納米顆粒水混懸液中并攪拌5分鐘形成納米顆粒混懸液包油一油包普萘洛爾納米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳；
(4)把步驟(3)所得的納米顆粒混懸液包油一油包普萘洛爾納米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳滴加到1000 ml濃度為5% (w/w)的氯化鈉水溶液中固化2小時(shí)；
(5)把步驟(4)所得樣品進(jìn)行離心，收集微球，并用水洗滌3次，凍干后得到載有普萘洛爾納米藥物的聚羥基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇(PLGA - PEG)微球。本實(shí)施例中所得微球中，藥物的重量百分比為O. 35%，納米顆粒的重量百分比為96%，聚合物的重量百分比為3. 65%，藥用輔料的重量百分比為0%。對(duì)本實(shí)施例制備的微球進(jìn)行形貌表征，結(jié)果顯示，制備的微球形態(tài)好，表面自組裝一層銀納米顆粒，粒徑在20 - 450 Mffl ;微球中普萘洛爾相對(duì)于其原始投加量的的包封率為90% (計(jì)算方法為實(shí)際包封在微球的藥/投入的藥量X 100%=藥物的包封率)，且實(shí)驗(yàn)表明其體外釋放曲線也符合要求。本實(shí)施例方法制備的普萘洛爾納米藥物微球可以適用于嬰幼兒血管瘤治療，可以減少注射的頻率和減輕病人的痛苦。這種方法制備的微球包封率最少可以達(dá)到80%，突釋非常小和幾乎完全釋放，可以達(dá)到零級(jí)釋放。由于表面親水性材料的組織相容性比疏水性材料的好，且這種具有納米顆粒表面的微球具有增強(qiáng)細(xì)胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。實(shí)施例12載有小分子藥物普萘洛爾微球的制備(二)
載有普萘洛爾納米藥物的聚羥基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇(PLGA - PEG)微球的制備，包括如下步驟
(1)取45mg普萘洛爾溶解到O. 5 ml的水中形成藥物水溶液，然后和20 mg多孔二氧化硅納米顆粒攪拌24小時(shí)，使得普萘洛爾充分吸附在多孔的二氧化硅納米顆粒里，離心去除上清液，再充分洗滌3次，然后凍干形成普萘洛爾納米藥物；
(2)把上述普萘洛爾納米藥物和濃度為20%的PLGA- PEG的二氯甲烷溶液按照重量比I 10混合并超聲5分鐘形成均勻的混懸液，即油包普萘洛爾納米藥物(N/0)混懸液，二氯甲烷溶液中還含有20% (w/w)的泊洛沙姆；
(3)把步驟(2)所得油包普萘洛爾納米藥物(N/0)混懸液滴加到50ml含濃度為10%(w/w)銀納米顆粒和5% (w/w)乙基纖維素表面活性劑的水混懸液中并攪拌5分鐘形成納米顆?；鞈乙喊鸵挥桶蛰谅鍫柤{米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳；
(4)把步驟(3)所得的納米顆?；鞈乙喊鸵挥桶蛰谅鍫柤{米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳滴加到1000 ml濃度為5% (w/w)的氯化鈉水溶液中固化2小時(shí)； (5)把步驟(4)所得樣品進(jìn)行離心，收集微球，并用水洗滌3次，凍干后得到載有普萘洛爾納米藥物的聚羥基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇(PLGA - PEG)微球。本實(shí)施例中所得微球中，藥物的重量百分比為14.5%，納米顆粒的重量百分比為
60.18%，聚合物的重量百分比為25. 32%，藥用輔料的重量百分比為0%。對(duì)本例制備的微球進(jìn)行形貌表征，結(jié)果顯示，本實(shí)施例制備的微球形態(tài)好，其表面自組裝有一層銀納米顆粒，粒徑在10 - 400 Mffl ;微球中普萘洛爾相對(duì)于其原始投加量的包封率為93. 90% (計(jì)算方法為實(shí)際包封在微球的藥/投入的藥量X 100%=藥物的包封率)，且實(shí)驗(yàn)表明其體外釋放曲線也符合要求。以本實(shí)施例方法制備的小分子藥物微球可以用于需要長(zhǎng)期治療的疾病，尤其是需要局部治療的疾病如腫瘤的血管栓塞等。這種方法制備的微球包封率高，可以達(dá)到80%以上，且這種表面具有納米顆粒的微球，由于表面親水性材料的組織相容性比疏水性材料的好，具有增強(qiáng)細(xì)胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。實(shí)施例13載有小分子藥物潑尼松微球的制備
載有潑尼松納米藥物的聚己內(nèi)酯一聚乙二醇(PCL - PEG)微球的制備，包括如下步驟
(1)取20mg潑尼松溶解到O. 5 ml的水中，然后和20 mg多孔二氧化娃納米顆粒攪拌24小時(shí)，使得潑尼松充分吸附在多孔的二氧化硅納米顆粒里，離心去除上清液，再充分洗滌3次，然后凍干形成潑尼松納米藥物；
(2)把上述潑尼松納米藥物和濃度為30%(w/w)的PCL - PEG的二氯甲烷溶液按照重量比為1:9混合并超聲I. 5分鐘形成均勻的混懸液，即油包潑尼松納米藥物(N/0)混懸液；
(3)把步驟(2)的油包潑尼松納米藥物(N/0)混懸液滴加到Iml濃度為60% (w/w)羥基磷灰石納米顆粒和1% (w/w)吐溫表面活性劑的水混懸液中并攪拌5分鐘形成納米顆?；鞈乙喊鸵挥桶鼭娔崴杉{米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳；(4)把步驟(3)所得的納米顆?；鞈乙喊鸵挥桶鼭娔崴杉{米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳滴加到1000 ml濃度為5% (w/w)的氯化鉀水溶液中固化2小時(shí)；
(5)把步驟(4)所得樣品進(jìn)行離心，收集微球，并用水洗滌5次，凍干后得到載有潑尼松納米藥物的聚己內(nèi)酯一聚乙二醇(PCL - PEG)微球。本實(shí)施例中所得微球中，藥物的重量百分比為I. 29%，納米顆粒的重量百分比為51. 72%，聚合物的重量百分比為46. 99%，藥用輔料的重量百分比為0%。對(duì)本例制備的微球進(jìn)行形貌表征，結(jié)果顯示，本實(shí)施例制備的微球形態(tài)好，其表面自組裝有一層羥基磷灰石納米顆粒，粒徑在I 一 400 Mffl ;微球中潑尼松相對(duì)于其原始投加量的包封率為81. 23% (計(jì)算方法為實(shí)際包封在微球的藥/投入的藥量X 100%=藥物的包封率)，且實(shí)驗(yàn)表明其體外釋放曲線也符合要求。本實(shí)施例制備的潑尼松納米藥物聚己內(nèi)酯一聚乙二醇(PCL - PEG)微球藥效曲線如附圖14，其中Ν/0/Ν組為本實(shí)施例方法制備的微球，對(duì)照組為用S/0/W方法制備的微球，從圖中可見，本實(shí)施例微球的治療效果明顯優(yōu)于對(duì)照組。 這種方法制備的潑尼松納米藥物微球可以適用于嬰幼兒血管瘤的治療，可以減少注射的頻率和減輕病人的痛苦。本方法制備的微球包封率高最少可以達(dá)到80%，突釋非常小和幾乎完全釋放，可以達(dá)到零級(jí)釋放。由于納米顆粒在材料降解產(chǎn)生的酸可以與羥基磷灰石納米顆粒發(fā)生反應(yīng)，從而中和酸，以保證微球的內(nèi)環(huán)境相對(duì)穩(wěn)定。且這種表面自組裝有納米顆粒的微球，由于表面親水性材料的組織相容性比疏水性材料的好，具有增強(qiáng)細(xì)胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。實(shí)施例14載有大分子藥物乙肝疫苗微球的制備
載有乙肝疫苗納米藥物的聚己內(nèi)酯一聚乙二醇(PCL - PEG)微球的制備，包括如下步
驟
(1)將5mg乙肝疫苗和10 mg葡聚糖溶解到O. 2 ml的水中形成藥物水溶液，然后把多孔三氧化鋁納米顆粒20 mg加入上述溶液中攪拌24小時(shí)，使得乙肝疫苗及葡聚糖充分吸附在多孔的三氧化鋁納米顆粒里，離心去除上清液，再充分洗滌3次，然后凍干形成乙肝疫苗納米藥物；
(2)把上述乙肝疫苗納米藥物和含有濃度為15%(w/w)的PCL - PEG的二氯甲烷溶液按照重量比為I: I混合并超聲I. 5分鐘形成均勻混懸液，即油包乙肝疫苗納米藥物(N/0)混懸液，二氯甲烷溶液中還含有10% (w/w)的泊洛沙姆；
(3)把步驟(2)的油包乙肝疫苗納米藥物(N/0)混懸液滴加到Iml含有濃度為80% (w/w)交聯(lián)葡聚糖納米顆粒和O. 5% (w/w)聚乙烯醇(PVA)表面活性劑的水混懸液中并攪拌5分鐘形成納米顆?；鞈乙喊鸵挥桶腋我呙缂{米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳；
(4)把步驟(3)所得納米顆?；鞈乙喊鸵挥桶腋我呙缂{米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳滴加到1000 ml濃度為5% (w/w)的氯化鈉水溶液中固化2小時(shí)；
(5)把步驟(4)所得樣品進(jìn)行離心，收集微球，并用乙醇洗滌5次，凍干后得到載有乙肝疫苗納米藥物的聚己內(nèi)酯一聚乙二醇(PCL - PEG)微球。本實(shí)施例中所得微球中，藥物的重量百分比為6. 15%，納米顆粒的重量百分比為
61.54%，聚合物的重量百分比為7. 69%，藥用輔料的重量百分比為24. 62%。對(duì)本實(shí)施例制備的微球進(jìn)行形貌表征，結(jié)果顯示，本實(shí)施例制備的微球形態(tài)好，其表面自組裝有一層交聯(lián)葡聚糖納米顆粒，粒徑在50 - 300 μ ;微球中乙肝疫苗相對(duì)于其原始投加量的包封率為82. 74% (計(jì)算方法為實(shí)際包封在微球的藥/投入的藥量X 100%=藥物的包封率)，且實(shí)驗(yàn)表明其體外釋放曲線也符合要求，藥用效果明顯。這種方法制備的乙肝疫苗納米藥物微球可以適用于乙肝的防治，可以減少注射的頻率和減輕病人 的痛苦；本方法制備的微球包封率高，最少可以達(dá)到80%，突釋非常小和幾乎完全釋放，可以達(dá)到零級(jí)釋放。這種表面自組裝有納米顆粒的微球，由于表面親水性材料的組織相容性比疏水性材料的好，具有增強(qiáng)細(xì)胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。實(shí)施例15載有小分子藥物雷帕霉素微球的制備(一)
雷帕霉素具有抗菌作用和抗癌效果，載有雷帕霉素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)和聚乳酸(PLA)微球的制備，包括如下步驟
(1)取20mg雷帕霉素溶解到O. 5 ml的水中，然后和20 mg多孔二氧化娃納米顆粒攪拌24小時(shí)，使得雷帕霉素充分吸附在多孔的二氧化硅納米顆粒里，離心去除上清液，再充分洗滌3次，然后凍干形成雷帕霉素納米藥物；
(2)把上述雷帕霉素納米藥物和濃度為12.5% (w/w)的PLGA的二氯甲烷溶液按照重量比為1:4混合并攪拌2. 5分鐘，形成均勻的混懸液，再把I. 6 ml濃度為12. 5% (w/w)的PLA的乙酸乙酯溶液加到上述混懸液中，再攪拌2分鐘形成均勻混懸液，即油包雷帕霉素納米藥物(N/0)混懸液；
(3)把步驟(2)的油包雷帕霉素納米藥物(N/0)混懸液滴加到2ml含濃度為10% (w/w)羥基磷灰石納米顆粒和2% (w/w)聚乙二醇表面活性劑的水混懸液中并超聲O. 5分鐘形成納米顆粒混懸液包油一油包雷帕霉素納米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳；
(4)把步驟(3)所得的納米顆?；鞈乙喊鸵挥桶着撩顾丶{米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳滴加到1000 ml濃度為5% (w/w)的氯化鉀水溶液中固化2小時(shí)；
(5)把步驟(4)所得樣品進(jìn)行離心，收集微球，并用水洗滌3次，凍干后得到載有雷帕霉素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)和聚乳酸(PLA)微球。本實(shí)施例中所得微球中，藥物的重量百分比為I. 58%，納米顆粒的重量百分比為60. 20%，聚合物的重量百分比為38. 22%，藥用輔料的重量百分比為0%。對(duì)本實(shí)施例制備的微球進(jìn)行形貌表征，結(jié)果顯示，制備的微球形態(tài)好，其表面自組裝有一層輕基磷灰石納米顆粒，粒徑在10 — 200 Mm ;微球中雷帕霉素納米藥物相對(duì)于其原始投加量的包封率為91. 84% (計(jì)算方法為實(shí)際包封在微球的藥/投入的藥量X 100%=藥物的包封率)，且實(shí)驗(yàn)表明其體外釋放曲線也符合要求。本實(shí)施例制備的雷帕霉素納米藥物聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)和聚乳酸(PLA)微球藥效曲線如附圖15，其中Ν/0/Ν組為本實(shí)施例方法制備的微球，對(duì)照組為用S/0/W方法制備的微球，從圖中可見，本實(shí)施例微球的藥效明顯優(yōu)于對(duì)照組。本實(shí)施例方法制備的微球可以適用于兒童血管瘤的治療，可以減少注射的頻率和減輕病人的痛苦。由于納米顆粒在材料降解產(chǎn)生的酸可以與羥基磷灰石納米顆粒發(fā)生反應(yīng)，從而中和酸，以保證微球的內(nèi)環(huán)境相對(duì)穩(wěn)定。同時(shí)表面自組裝有納米顆粒的微球，由于表面親水性材料的組織相容性比疏水性材料的好，具有增強(qiáng)細(xì)胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。
實(shí)施例16載有小分子藥物雷帕霉素微球的制備(二)
載有雷帕霉素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球的制備，包括如下步驟
(1)取0.5mg雷帕霉素溶解到0.5 ml的水中形成藥物水溶液，然后和20 mg多孔二氧化硅納米顆粒攪拌24小時(shí)，使得雷帕霉素充分吸附在多孔的二氧化硅納米顆粒里，離心去除上清液，再充分洗滌3次，然后凍干形成雷帕霉素納米藥物；
(2)把上述雷帕霉素納米藥物和濃度為20%(w/w)的PLGA的二氯甲烷溶液按照重量比1:9混合并超聲5分鐘形成均勻的混懸液，即油包雷帕霉素納米藥物(N/0)混懸液，二氯甲烷溶液中還含有10% (w/w)的聚乙二醇；
(3)把步驟(2)所得油包雷帕霉素納米藥物(N/0)混懸液滴加到50ml含有10% (w/w)銀納米顆粒和2% (w/w)聚乙烯吡咯烷酮表面活性劑的水混懸液中并攪拌5分鐘形成納米 顆?；鞈乙喊鸵挥桶着撩顾丶{米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳；
(4)把步驟(3)所得的納米顆?；鞈乙喊鸵挥桶着撩顾丶{米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳滴加到1000 ml濃度為5% (w/w)的氯化鈉水溶液中固化2小時(shí)；
(5)把步驟(4)所得樣品進(jìn)行離心，收集微球，并用水洗滌3次，凍干后得到載有雷帕霉素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球。本實(shí)施例中所得微球中，藥物的重量百分比為4. 17%，納米顆粒的重量百分比為35. 71%，聚合物的重量百分比為60. 12%，藥用輔料的重量百分比為0%。對(duì)本實(shí)施例制備的微球進(jìn)行形貌表征，結(jié)果顯示，本實(shí)施例制備的微球形態(tài)好，其表面自組裝有一層銀納米顆粒，粒徑在50 - 200 Mm ;微球中雷帕霉素相對(duì)于其原始投加量的包封率為98. 90% (計(jì)算方法為實(shí)際包封在微球的藥/投入的藥量X 100%=藥物的包封率),且實(shí)驗(yàn)表明其體外釋放曲線也符合要求。本實(shí)施例方法制備的小分子藥物微球可以用于需要長(zhǎng)期治療的疾病，尤其是需要局部治療的疾病如腫瘤的血管栓塞等。這種方法制備的微球包封率高，最少可以達(dá)到80%。由于納米顆粒在材料降解產(chǎn)生的酸可以與羥基磷灰石納米顆粒發(fā)生反應(yīng)，從而中和酸，以保證微球的內(nèi)環(huán)境相對(duì)穩(wěn)定。且這種表面具有納米顆粒的微球，由于表面親水性材料的組織相容性比疏水性材料的好，具有增強(qiáng)細(xì)胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。實(shí)施例17載有小分子藥物雷帕霉素微球的制備(三)
載有雷帕霉素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球的制備，包括如下步驟
(1)取O.01 mg雷帕霉素溶解到O. I ml的水中形成藥物水溶液,然后和20 mg多孔二氧化硅納米顆粒攪拌24小時(shí)，使得雷帕霉素充分吸附在多孔的二氧化硅納米顆粒里，離心去除上清液，再充分洗滌3次，然后凍干形成雷帕霉素納米藥物；
(2)把上述雷帕霉素納米藥物和濃度為10%(w/w)的PLGA的二氯甲烷溶液按照重量比1:10混合并超聲5分鐘形成均勻的混懸液，即油包雷帕霉素納米藥物(N/0)混懸液，二氯甲烷溶液中還含有1% (w/w)的聚乙二醇；
(3)把步驟(2)所得油包雷帕霉素納米藥物(N/0)混懸液滴加到O.I ml濃度為1% (w/w)銀納米顆粒和2% (w/w)乙基纖維素表面活性劑的水混懸液中并攪拌5分鐘形成納米顆粒混懸液包油一油包雷帕霉素納米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳；
(4)把步驟(3)所得的納米顆?；鞈乙喊鸵挥桶着撩顾丶{米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳滴加到1000 ml濃度為5% (w/w)的氯化鈉水溶液中固化2小時(shí)；
(5)把步驟(4)所得樣品進(jìn)行離心，收集微球，并用乙醇洗滌3次，凍干后得到載有雷帕霉素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球。本實(shí)施例中所得微球中，藥物的重量百分比為O. 01%，納米顆粒的重量百分比為O. 01%，聚合物的重量百分比為99. 98%，藥用輔料的重量百分比為0%。本實(shí)施例方法制備的小分子藥物微球可以用于需要長(zhǎng)期治療的疾病，尤其是需要局部治療的疾病如血管瘤等。由于納米顆粒在材料降解產(chǎn)生的酸可以與羥基磷灰石納米顆粒發(fā)生反應(yīng)，從而中和酸，以保證微球的內(nèi)環(huán)境相對(duì)穩(wěn)定。這種方法制備的微球包封率高，可以達(dá)到80%以上，且這種表面具有納米顆粒的微球，由于表面親水性材料的組織相容性比疏水性材料的好，具有增強(qiáng)細(xì)胞黏附、減少局部過酸和疏水材料 引起的炎癥及微囊化的作用。實(shí)施例18載有小分子藥物雷帕霉素微球的制備(四)
載有雷帕霉素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球的制備，包括如下步驟
(1)取4mg雷帕霉素溶解到O. 2 ml的水中形成藥物水溶液，然后和20 mg多孔二氧化硅納米顆粒攪拌24小時(shí)，使得雷帕霉素充分吸附在多孔的二氧化硅納米顆粒里，離心去除上清液，再充分洗滌3次，然后凍干形成雷帕霉素納米藥物；
(2)把上述雷帕霉素納米藥物和濃度為1%(w/w)的PLGA的乙腈溶液按照重量比1:1混合并超聲5分鐘形成均勻的混懸液，即油包雷帕霉素納米藥物(N/0)混懸液，乙腈溶液中還含有1% (w/w)的泊洛沙姆；
(3)把步驟(2)所得油包雷帕霉素納米藥物(N/0)混懸液滴加到O.Iml濃度為4% (w/w)銀納米顆粒和1% (w/w)聚乙烯醇(PVA)表面活性劑和1% (w/w)聚山梨醇表面活性劑的水混懸液中并攪拌5分鐘形成納米顆粒混懸液包油一油包雷帕霉素納米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳；
(4)把步驟(3)所得的納米顆粒混懸液包油一油包雷帕霉素納米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳滴加到1000 ml濃度為5% (w/w)的氯化鈉水溶液中固化2小時(shí)；
(5)把步驟(4)所得樣品進(jìn)行離心，收集微球，并用水洗滌3次，凍干后得到載有雷帕霉素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球。本實(shí)施例中所得微球中，藥物的重量百分比為4 O %，納米顆粒的重量百分比為40%，聚合物的重量百分比為20%，藥用輔料的重量百分比為0%。本實(shí)施例方法制備的小分子藥物微球可以用于需要長(zhǎng)期治療的疾病，尤其是需要局部治療的疾病如腫瘤的血管栓塞等。這種方法制備的微球包封率高，可以達(dá)到80%以上，且這種表面具有納米顆粒的微球，由于表面親水性材料的組織相容性比疏水性材料的好，具有增強(qiáng)細(xì)胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。實(shí)施例19載有小分子藥物雷帕霉素微球的制備(五)
載有雷帕霉素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球的制備，包括如下步驟
(1)取3mg雷帕霉素和3 mg聚乙二醇溶解到O. 2 ml的水中形成藥物水溶液,然后和20 mg多孔二氧化硅納米顆粒攪拌24小時(shí)，使得雷帕霉素充分吸附在多孔的二氧化硅納米顆粒里，離心去上清液，再充分洗滌3次，然后凍干形成雷帕霉素納米藥物；
(2)把上述雷帕霉素納米藥物和濃度為5%(w/w)的PLGA的二氯甲烷溶液按照重量比1:3混合并超聲5分鐘形成均勻的混懸液，即油包雷帕霉素納米藥物(N/0)混懸液，二氯甲烷溶液中還含有5% (w/w)的聚乙二醇；
(3)把步驟(2)所得油包雷帕霉素納米藥物(N/0)混懸液滴加到O.I ml含20% (w/w)銀納米顆粒和2% (w/w)聚乙烯醇(PVA)表面活性劑的水混懸液中并攪拌5分鐘形成納米顆粒混懸液包油一油包雷帕霉素納米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳；
(4)把步驟(3)所得的納米顆?；鞈乙喊鸵挥桶着撩顾丶{米藥物(Ν/0/Ν)復(fù)乳滴加到1000 ml濃度為5% (w/w)的氯化鈉水溶液中固化2小時(shí)；
(5)把步驟(4)所得樣品進(jìn)行離心，收集微球，并用水洗滌3次，凍干后得到載有雷帕霉素納米藥物的聚乳酸一羥基乙酸(PLGA)微球。本實(shí)施例中所得微球中，藥物的重量百分比為30%，納米顆粒的重量百分比為20%，聚合物的重量百分比為20%，藥用輔料的重量百分比為30%。
本實(shí)施例方法制備的小分子藥物微球可以用于需要長(zhǎng)期治療的疾病，尤其是需要局部治療的疾病如血管瘤等。這種方法制備的微球包封率高，最少可以達(dá)到80%，且這種表面具有納米顆粒的微球，由于表面親水性材料的組織相容性比疏水性材料的好，具有增強(qiáng)細(xì)胞黏附、減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明方法的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和補(bǔ)充，這些改進(jìn)和補(bǔ)充也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種納米顆?；鞈乙喊鸵挥桶{米藥物制備微球的方法，其特征在于，包括以下步驟 (1)將藥物和藥用輔料制備成納米藥物，所述藥物在納米藥物中的重量百分比為O.1% - 90%，藥用輔料在納米藥物中的重量百分比為0% - 20 % ； (2)將步驟(I)制備的納米藥物按照1:1一 1:10的重量比分散在重量百分比濃度為O.5% - 80%聚合物的有機(jī)溶劑混合溶液中，形成均勻的混懸液，即油包納米藥物混懸液； (3)將步驟(2)形成的油包納米藥物混懸液加入到含重量百分比為1%— 80%納米顆粒的水混懸液或含重量百分比為1% - 80%納米顆粒和重量百分比為O. 5% - 5%表面活性劑的水混懸液中，進(jìn)行乳化，形成納米顆粒混懸液包油一油包納米藥物復(fù)乳； (4)將所述納米顆粒混懸液包油一油包納米藥物復(fù)乳轉(zhuǎn)移到含重量百分比為1%— 10%無機(jī)鹽的水溶液中固化I 一 4小時(shí)； (5)將步驟(4)所得樣品進(jìn)行離心，收集微球，并洗滌所得微球，之后凍干，得到表面自組裝有納米顆粒且內(nèi)部含有納米藥物的微球。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的納米顆?；鞈乙喊鸵挥桶{米藥物制備微球的方法，其特征在于，步驟(I)中所述的納米藥物的制備包括以下步驟 將藥物和藥用輔料溶解在水中，然后加入多孔納米顆粒，攪拌使得藥物和藥用輔料充分吸附在多孔納米顆粒里，離心去除上清液，再充分洗滌，然后凍干形成納米藥物；或 將藥物和藥用輔料溶解在水中形成藥物水溶液，然后將藥物水溶液轉(zhuǎn)移到聚乙二醇水溶液中，充分混勻后于冰箱中預(yù)凍，之后凍干，再用二氯甲烷溶解聚乙二醇并離心除去聚乙二醇得到納米藥物。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的納米顆?；鞈乙喊鸵挥桶{米藥物制備微球的方法，其特征在于，所述的藥物包括小分子藥物和大分子藥物，所述的小分子藥物為化學(xué)藥物，可選自腫瘤化療類藥物、治療血管瘤的藥物或抗生素類藥物中的一種，所述的大分子藥物為生物大分子藥物，可選自蛋白大分子藥物、疫苗、抗體、核酸或脂質(zhì)體藥物中的一種或幾種，所述的藥用輔料為注射用藥用輔料。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的納米顆?；鞈乙喊鸵挥桶{米藥物制備微球的方法，其特征在于，所述的腫瘤化療類藥物選自阿霉素、環(huán)磷酰胺、更生霉素、博萊霉素、柔紅霉素、表阿霉素、絲裂霉素、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、卡鉬、卡莫司汀、司莫司汀、順鉬、依托泊苷、喜樹堿及其衍生物、苯芥膽留醇、紫杉醇及其衍生物、多西紫杉醇及其衍生物、長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、它莫西芬、哌泊舒凡、環(huán)磷酰胺或氟他胺及其衍生物中的一種，所述的治療血管瘤的藥物選自潑尼松、普萘洛爾或雷帕霉素中的一種，所述的抗生素類藥物選自環(huán)孢素、左氧氟沙星、氧氟沙星或鹽酸依匹斯汀中的一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的納米顆?；鞈乙喊鸵挥桶{米藥物制備微球的方法，其特征在于，所述的生物大分子藥物選自促紅細(xì)胞生成素、重組人粒細(xì)胞集落刺激因子、粒細(xì)胞一巨噬細(xì)胞集落刺激因子、疫苗、干擾素、生長(zhǎng)激素、胰島素、表皮生長(zhǎng)因子、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子、胰島素生長(zhǎng)因子、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子、血小板生長(zhǎng)因子、內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、神經(jīng)生長(zhǎng)因子、骨衍生性生長(zhǎng)因子、骨形成蛋白、組織多肽抗原、抗體、凝血因子VIII、凝血因子IX、遺傳因子、反義核苷酸、小分子RNA或基因中的一種或幾種。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的納米顆粒混懸液包油一油包納米藥物制備微球的方法，其特征在于，步驟(2)中所述的有機(jī)溶劑混合溶液中還添加有重量百分比為O. 1% - 20%的聚乙二醇或泊洛沙姆。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的納米顆?；鞈乙喊鸵挥桶{米藥物制備微球的方法，其特征在于，步驟(2)中所述的有機(jī)溶劑混合溶液中聚合物重量百分比濃度為5% — 30%，所述的聚合物選自聚己內(nèi)酯、聚乳酸、聚乳酸一羥基乙酸、聚乳酸一聚乙二醇、聚羥基乙酸一聚乳酸一聚乙二醇或聚己內(nèi)酯一聚乙二醇中的一種或幾種，所述的有機(jī)溶劑選自二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、庚烷、氯仿或丙酮中的一種或幾種。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的納米顆粒混懸液包油一油包納米藥物制備微球的方法，其特征在于，步驟(3)中所述的納米顆粒重量百分比濃度為20% - 70%，所述的納米顆粒為有機(jī)納米顆?；驘o機(jī)納米顆粒，可選自聚苯乙烯納米顆粒、交聯(lián)葡聚糖納米顆粒、二氧化娃納米顆粒、二氧化鈦納米顆粒、輕基磷灰石納米顆粒、四氧化三鐵納米顆粒、三氧化二鐵顆粒、金納米顆粒、三氧化二鋁納米顆粒、碳酸鈣納米顆粒、磷酸鈣納米顆粒、碳酸鎂納米顆粒、氫氧化鎂納米顆?；蜚y納米顆粒中的一種或幾種，所述的表面活性劑選自聚乙烯醇、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、泊洛沙姆、聚山梨醇、乙基纖維素或吐溫中的一種或幾種。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的納米顆?；鞈乙喊鸵挥桶{米藥物制備微球的方法，其特征在于，所述微球的粒徑為I 一 500 Mffl，其表面自組裝有一層納米顆粒，所述微球中，藥物的重量百分比為O. 01% - 40%，納米顆粒的重量百分比為O. 01% - 96%，聚合物的重量百分比為3. 65% - 99. 98%，藥用輔料的重量百分比為0% — 30%。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的納米顆粒混懸液包油一油包納米藥物制備微球的方法，其特征在于，所述微球的粒徑為10 - 100 Mm。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種納米顆?；鞈乙喊停桶{米藥物制備微球的方法，該方法將藥物和藥用輔料制備成納米藥物，將所述納米藥物加到含有聚合物的有機(jī)溶劑混合溶液中進(jìn)行乳化，然后將油包納米藥物混懸液加到含納米顆?；蚝{米顆粒和表面活性劑的水混懸液中進(jìn)行乳化得到納米顆?；鞈乙喊停桶{米藥物復(fù)乳，最后將所得復(fù)乳固化，離心收集微球，所制得的微球包括藥物、納米顆粒、聚合物和藥用輔料。本發(fā)明選擇了合適的聚合物材料和微球制備方法，制備的微球包封率高，其表面自組裝的一層納米顆粒具有增強(qiáng)細(xì)胞黏附作用，以及減少局部過酸和疏水材料引起的炎癥及微囊化的作用，本發(fā)明方法可以運(yùn)用到各種藥物緩釋或控釋微球的制備中。
文檔編號(hào)A61K47/34GK102885784SQ20121036163
公開日2013年1月23日 申請(qǐng)日期2012年9月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月26日
發(fā)明者袁偉恩, 陳英輝 申請(qǐng)人:復(fù)旦大學(xué)附屬金山醫(yī)院