專利名稱：葉酸在制備預(yù)防大腸腺瘤初發(fā)藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物化學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及葉酸的新的藥物用途，具體來說是葉酸在制備預(yù)防大腸腺瘤初發(fā)藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
大腸癌是目前世界上最常見的三大癌癥之一，在我國，隨著生活節(jié)奏加快和飲食結(jié)構(gòu)的改變，大腸癌的發(fā)生呈現(xiàn)逐年增高的趨勢。大腸腺瘤與大腸癌關(guān)系密切，研究認(rèn)為大約有90%的大腸癌由大腸腺瘤演變而來，平均歷時10-15年(WinawerSJ, et al. N Engl J Med, 1993. Cotton S，et al. Crit Rev Oncog, 1996. Manzano A, etal. Scientific World Journal. 2012)，內(nèi)窺鏡篩查的結(jié)果提示，20-35%的50歲以上人群發(fā)生單個或多個大腸腺瘤(Marshall JR. Gastroenterol Clin North Am, 2008. Strul H,et al. Am JGastroenteroI，2006. Lieberman DA, et al. N Engl J Med, 2000. ) 內(nèi)鏡下腺瘤摘除是預(yù)防大腸癌的重要途徑，然而大腸腺瘤的復(fù)發(fā)率較高(Martinez ME, etal.Gastroenterology, 2009. Gao QY, et al. Frontiers of medicine in China, 2010.),所以，大腸腺瘤復(fù)發(fā)的化學(xué)預(yù)防是近年來的研究熱點(diǎn)之一。盡管研究表明非留體類抗炎藥阿司匹林和Cox-2選擇性抑制劑塞來昔布等藥物有一定的預(yù)防作用，但是藥物副作用限制了其在此領(lǐng)域的應(yīng)用(Gao F，et al. Colorectal Dis, 2009. Dube C，et al. Ann InternMed, 2007.)?，F(xiàn)有技術(shù)中，缺乏有效、副作用小和病人依從性好的預(yù)防方法。隨著大腸腫瘤發(fā)生中表觀遺傳作用的深入研究，甲基化相關(guān)的生物活性成分由于具有副作用較小的優(yōu)勢，在大腸腺瘤的化學(xué)預(yù)防中顯示出巨大的潛力。葉酸是一種由蝶啶、對氨基苯甲酸及谷氨酸的殘基組成的水溶性B族維生素，在核酸合成和甲基化反應(yīng)中起重要作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供葉酸在制備預(yù)防大腸腺瘤初發(fā)藥物中的應(yīng)用，所述的這種葉酸在制備預(yù)防大腸腺瘤初發(fā)藥物中的應(yīng)用要解決現(xiàn)有技術(shù)中預(yù)防大腸腺瘤初發(fā)的藥物效果不佳和副作用大的技術(shù)問題。本發(fā)明提供了葉酸作為唯一活性成份在制備預(yù)防大腸腺瘤初發(fā)藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的預(yù)防大腸腺瘤初發(fā)的方法，包括每天一次給予治療對象Img的葉酸，給藥時間持續(xù)3年。本發(fā)明的治療對象為內(nèi)鏡排除大腸腺瘤的、年齡大于50歲的人群。通過實(shí)驗(yàn)證明，對不同部位不同時期的大腸腺瘤預(yù)防效果不同，左半結(jié)腸腺瘤和高級大腸腺瘤預(yù)防效果更佳。本發(fā)明對不同血清基礎(chǔ)葉酸濃度的人群，預(yù)防效果不同，血清基礎(chǔ)葉酸濃度低于4. 27ng/ml的人群，大腸腺瘤發(fā)生率增高。補(bǔ)充葉酸后，血清葉酸濃度比基礎(chǔ)值提高
I.85ng/ml才能有效預(yù)防大腸腺瘤的發(fā)生。本發(fā)明選用的葉酸片劑，商品名為斯利安，單劑量為0.4mg。葉酸經(jīng)二氫葉酸還原酶及維生素B12的作用，形成四氫葉酸(THFA)，后者與多種一碳單位(包括CH3、CH2、CH0等)結(jié)合成四氫葉酸類輔酶，傳遞一碳單位，參與體內(nèi)很多重要反應(yīng)及核酸和氨基酸的合成。THFA在絲氨酸轉(zhuǎn)羥基酶的作用下，形成N5，10甲烯基四氫葉酸，能促使尿嘧啶核苷酸(dUMP)形成胸腺嘧啶核苷酸(dTMP)，后者可參與細(xì)胞的DNA合成，促進(jìn)細(xì)胞的分裂與成熟。在DNA合成過程中，脫氧尿苷酸轉(zhuǎn)變?yōu)槊撗跣剀账?，其間所需的甲基由亞甲基四氫葉酸提供。所以，葉酸在甲基化反應(yīng)和核酸合成中起重要作用，葉酸的缺乏可能導(dǎo)致甲基化異常、基因表達(dá)的缺失、基因組的不穩(wěn)定，從而增加腫瘤發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。葉酸干預(yù)的時機(jī)是本發(fā)明的一個關(guān)鍵點(diǎn)。發(fā)明人既往的動物模型研究表明，葉酸對于沒有癌前病變小鼠的干預(yù)效果優(yōu)于有癌前病變的小鼠，故此，發(fā)明人認(rèn)為應(yīng)該在大腸腺瘤發(fā)生之前就開始葉酸的干預(yù)。本發(fā)明適用于既往沒有大腸腺瘤病史的、現(xiàn)腸鏡檢查排除腺瘤的、年齡大于50歲的人群?；加羞z傳性非息肉病性大腸癌、家族性腺瘤性息肉病、炎癥性腸病、大腸癌、吸收不良綜合征、任何攝入葉酸會造成病情加重的疾病，以及任何需要 服用葉酸治療的疾病(例如慢性萎縮性胃炎、關(guān)節(jié)炎和巨細(xì)胞性貧血)的人群需排除。發(fā)明人評估了血清基礎(chǔ)葉酸水平與大腸腺瘤發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)在入選的50歲以上人群中，基礎(chǔ)葉酸水平低于4. 27ng/ml的受試者較易產(chǎn)生大腸腺瘤，故這部分人群是葉酸預(yù)防干預(yù)的優(yōu)選高危人群。本發(fā)明的方法中，葉酸干預(yù)的劑量是lmg/d，持續(xù)3年，發(fā)明人的具體實(shí)施情況證明，lmg/d的劑量是安全的，副反應(yīng)鮮見。不同血清葉酸水平的人群，葉酸干預(yù)的效果不同。腺瘤的發(fā)生率與葉酸干預(yù)后，血清葉酸升高的水平呈負(fù)相關(guān)。ROC曲線檢驗(yàn)顯示，補(bǔ)充葉酸后，血清葉酸濃度比基礎(chǔ)值提高I. 85ng/ml才能有效預(yù)防大腸腺瘤的發(fā)生。故此，本發(fā)明方法的最優(yōu)選干預(yù)方案是，口服葉酸至血清葉酸水平升高至少I. 85ng/mL·本發(fā)明和已有技術(shù)相比較，其效果是積極和明顯的。前瞻性、多中心將860位受試者隨機(jī)分為兩組，分別以葉酸組lmg/day干預(yù)或?qū)φ战M常規(guī)處理，不用特別干預(yù)，一旦出現(xiàn)腺瘤樣息肉則內(nèi)鏡下摘除，累計(jì)計(jì)數(shù)并繼續(xù)觀察，共3年，同時檢測干預(yù)前后血清葉酸濃度。結(jié)果顯示補(bǔ)充葉酸可以降低大腸腺瘤的發(fā)生率。葉酸組中64例受試者發(fā)生大腸腺瘤(14. 88%);對照組中 132 例發(fā)生大腸腺瘤(30. 70%) (RR，0. 485 ；95%CI,0. 371-0. 633 ；P < O. 01)。葉酸組和對照組發(fā)生左半結(jié)腸腺瘤的人數(shù)具有顯著差異，分別為42和78人(RR，0. 538 ；95%CI,0. 379-0. 764 ；P = O. 001)。葉酸組和對照組的高級腺瘤人數(shù)分別為8人(I. 86%)和 22 人(5. 17%)，具有顯著差異(RR，O. 364 ；95%CI,0. 164-0. 808 ；P = O. 014)。血清基礎(chǔ)葉酸水平與大腸腺瘤發(fā)生率呈負(fù)相關(guān)，血清葉酸水平低的人群發(fā)生大腸腺瘤的風(fēng)險(xiǎn)增高，基礎(chǔ)葉酸水平低于4. 27ng/ml較易產(chǎn)生大腸腺瘤。補(bǔ)充葉酸后，血清葉酸濃度需比基礎(chǔ)值提高至少I. 85ng/ml,才能有效預(yù)防大腸腺瘤的發(fā)生。綜上所述，口服葉酸用以預(yù)防大腸腺瘤的初發(fā)。


圖I是本發(fā)明臨床研究設(shè)計(jì)的流程圖。圖2是兩個試驗(yàn)組之間通過統(tǒng)計(jì)軟件review manager5比較后輸出的森林圖。經(jīng)過3年的隨訪，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)葉酸干預(yù)可以降低大腸腺瘤的發(fā)生率，尤其是左半結(jié)腸腺瘤和高級腺瘤。但多發(fā)腺瘤O 3個)的發(fā)生率沒有顯著差異。
圖3是受試者隨訪前后血清葉酸水平。#P < O. 01, *P < O. 05, #P > O. 05。圖4是血清基礎(chǔ)葉酸水平和大腸腺瘤發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的ROC曲線檢驗(yàn)。圖5是干預(yù)前后血清葉酸濃度差值與大腸腺瘤發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的ROC曲線檢驗(yàn)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I臨床研究設(shè)計(jì)設(shè)計(jì)一個前瞻性、多中心隨機(jī)對照試驗(yàn)。5個臨床中心分別為上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院、中國人民解放軍總醫(yī)院、第三軍醫(yī)大學(xué)附屬西南醫(yī)院、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬上海市第一人民醫(yī)院和南京醫(yī)學(xué)大學(xué)附屬南京鼓樓醫(yī)院。試驗(yàn)以四年為期，入選內(nèi)鏡排除了大腸腺瘤(CRA)的、年齡為50-80歲者960例，排除標(biāo)準(zhǔn)包括 I)遺傳性非息肉病性大腸癌；2)家族性腺瘤性息肉??；3)炎癥性腸??；4)大腸癌；5)吸收不良綜合征；6)任何攝入葉酸會造成病情加重的疾??；7)以及任何需要服用葉酸治療的疾病(例如慢性萎縮性胃炎、關(guān)節(jié)炎和巨細(xì)胞性貧血)剔除依從性差、不能堅(jiān)持服藥及不能按時隨訪等，最后完成隨訪的共860例。隨機(jī)分為兩組I)葉酸組430例，給予葉酸(斯利安，北京北大藥業(yè)有限公司)lmg/d，口服，干預(yù)3年，每3月隨訪一次，3年后做腸鏡檢查以及血清葉酸水平檢測。2)對照組430例，口服不含葉酸的維生素片(多維片，中美上海施貴寶制藥有限公司)，3年后做腸鏡檢查以及血清葉酸水平檢測。研究的主要終點(diǎn)為CRA的發(fā)生率。比較兩個試驗(yàn)組的腺瘤發(fā)生率、數(shù)量、發(fā)生部位、大小和組織學(xué)類型。研究的次要終點(diǎn)為血清葉酸濃度。在干預(yù)初始和結(jié)束時分別收集試驗(yàn)對象的血清，-20°C儲存,用化學(xué)發(fā)光體系(ACS 180 ；Chiron Diagnostics Corporation,East Walpole, MA, USA)檢測血清葉酸濃度，評估血清基礎(chǔ)葉酸水平與CRA發(fā)生的關(guān)系，計(jì)算達(dá)到有效預(yù)防效果的血清葉酸的升高濃度差。統(tǒng)計(jì)方法用卡方檢驗(yàn)比較兩組CRA發(fā)生率的差異。對試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行意向性分析、完成治療分析及Cox回歸分析。用獨(dú)立樣本和配對t檢驗(yàn)評估血清基礎(chǔ)葉酸水平和CRA發(fā)生率之間的關(guān)系。發(fā)明人通過受試者操作特征曲線(R0C曲線)、受試者操作特征曲線下面積(AUR0CC)，以及Youden最高指數(shù)(最佳分界點(diǎn))來估測葉酸有效治療濃度。研究結(jié)果I)隨訪3年后791人(91. 98%)接受了腸鏡檢查，另外69個受試者脫落或未堅(jiān)持服藥。每組各有2人發(fā)生大腸癌。表I.受試者的年齡、性別和血清基礎(chǔ)葉酸水平葉酸組對照組 Fl
(n=430)(n=430)
(±SD, vears)60.79=7.5360.26±7.11 0^2V J )
男性(%)50.92%49.75%0 85
血清葉酸濃度(ng/ml)5.045 %0.092)經(jīng)過3年的隨訪，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)補(bǔ)充葉酸可以降低CRA的發(fā)生率。葉酸組中64 例受試者發(fā)生 CRA (14. 88%)；對照組中 132 例發(fā)生 CRA (30. 70%) (RR, O. 485 ；95%CI，O. 371-0. 633 ；P < O. 01)(表2)。葉酸組和對照組分別有14人(3. 26%)和20人(4. 65%)發(fā)現(xiàn)多發(fā)性腺瘤(3個或以上)(RR，O. 70 ；95%CI,0. 358-1. 768 ；P = O. 382)。葉酸組和對照組發(fā)生左半結(jié)腸腺瘤的人數(shù)具有顯著差異，分別為42和78人(RR，0. 538 ;95%CI，0. 379-0. 764 ；P = 0.001)。然而，兩組的右半結(jié)腸腺瘤發(fā)生率沒有顯著差異葉酸組16例，對照組29例(RR，0. 552 ；95%CI,0. 304-1. 001 ；P = O. 065)。發(fā)明人同時評估了葉酸對高級腺瘤發(fā)生率的影響。高級腺瘤定義為直徑大于或等于I厘米；含有明顯的絨毛組織O 25%)或有高級別異型增生的腺瘤。葉酸組和對照組的高級腺瘤人數(shù)分別為8人(I. 86%)和22人(5. 17%)，具有顯著差異(RR，0. 364 ;95%CI，0. 164-0. 808 ；P = 0.014)。完成治療分析的結(jié)果與意向性分析相近。修正后的RR見圖2。表2.受試者的CRA發(fā)生率
權(quán)利要求
1.葉酸作為唯一活性成份在制備預(yù)防大腸腺瘤初發(fā)藥物中的應(yīng)用。
2.一種實(shí)現(xiàn)權(quán)利要求I所述的應(yīng)用的葉酸，其特征在于所述的葉酸包含在片劑中。
全文摘要
本發(fā)明公開了葉酸作為唯一活性成份在制備預(yù)防大腸腺瘤初發(fā)藥物中的應(yīng)用。解決了現(xiàn)有技術(shù)中預(yù)防大腸腺瘤初發(fā)的藥物效果不佳和副作用大的技術(shù)問題。本發(fā)明的預(yù)防方法為至少3年口服治療劑量的葉酸。本發(fā)明能夠降低大腸腺瘤的發(fā)生率，從而進(jìn)一步的預(yù)防大腸癌的發(fā)生。本發(fā)明對于不同部位不同時期的大腸腺瘤預(yù)防效果不同左半結(jié)腸腺瘤和高級腺瘤預(yù)防效果更佳。本發(fā)明對不同血清基礎(chǔ)葉酸水平者預(yù)防的影響程度亦不同，補(bǔ)充葉酸后，血清葉酸濃度比基礎(chǔ)值至少提高1.85ng/ml才能有效預(yù)防大腸腺瘤的發(fā)生。
文檔編號A61K31/519GK102861020SQ20121036244
公開日2013年1月9日 申請日期2012年9月25日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月25日
發(fā)明者房靜遠(yuǎn), 陳慧敏, 高琴琰, 唐潔婷, 盛劍秋, 房殿春, 于成功, 鄭萍 申請人:上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院