專利名稱：治療豬呼吸道疾病綜合征的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及包含豬2型圓環(huán)病毒(PCV2)抗原的免疫原性組合物用于預防及治療動物、尤其豬的豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)的用途。
背景技術：
豬2型圓環(huán)病毒(PCV2)為小型(直徑為17nm-22nm) 二十面體無包膜DNA病毒，其含有單鏈環(huán)狀基因組。PCV2與豬I型圓環(huán)病毒(PCVl)共有大約80%之序列一致性。然而，與通常為非致病性之PCVl不同，豬感染PCV2近來已與多種疾病綜合癥(其共同稱作豬圓環(huán)病毒疾病(PCVD)(亦稱作豬圓環(huán)病毒相關疾病(PCVAD)))相關(Allan等人，2006，IPVSCongress)。通常認為離乳后多系統(tǒng)消耗性綜合癥(Postweaning MultisystemicWasting Syndrome ；PMWS)為 PCVD 之主要臨床表現(Harding 等人，1997，Swine HealthProd; 5:201-203 !Kennedy 等人，2000，J Comp Pathol; 122:9-24)。PMWS侵襲介于 5-18 周齡之豬。PMWS之臨床特征在于消瘦、皮膚蒼白、生長遲滯、呼吸窘迫、腹瀉、黃疸及黃膽。在一些受感染之豬中，將顯而易見所有癥狀之組合，而其它受感染之豬將僅具有所述癥狀中之一或兩者(Muirhead，2002，Vet. Rec. ; 150:456)。在尸檢期間，顯微鏡可見及肉眼可見之病灶亦出現于多個組織及器官上，其中淋巴器官為最常見之病灶部位(Allan及Ellis，2000; JVet. Diagn. Invest.，12:3-14)。已觀測到PCV2核酸或抗原之量與顯微鏡可見淋巴病灶嚴重性之間的較強相關性。感染PCV2之豬之死亡率可達80%。目前對PCV2參與除PMWS之外的豬疾病中的程度尚不甚了解(Chae，VeterinaryJ.，2005;169:326-336)。存在若干種在文獻中報導之潛在相關病狀，其包括豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)、豬皮膚病及腎病綜合癥(TONS)、繁殖障礙、肉芽腫性腸炎及潛在先天性震顫(CT-AII)及周產期心肌炎(Chae, Veterinary J.，2005; 169:326-336)。其中，由于 PRDC之一般高流行性、高發(fā)病率(在感染農場為30%-70%)及死亡率(在感染農場為4%-6%)，認為其在歐洲具有最大經濟影響(Kim等人，Veterinary J.，2003; 166:251-256)。罹患PRDC的豬的肺炎是由于病毒性病原體和細菌性病原體組合所致，所述病原體如 PRRSV、豬流感病毒(Swine influenza virus ;SIV)、豬肺炎支原體(Mycoplasmahyopneumoniae)、胸膜肺炎放線桿菌(Actinobacillus pIeuropneumoniae)及多殺巴斯德氏菌(Pasteurella multocida)。盡管病因學涉及多種病原體且在各農場之間不同,但PRRSV及豬肺炎支原體為兩種最常見的從表現PRDC的PCV2陽性豬分離到的病原體(Kim等人，Veterinary J.，2003; 166:251-256)。仍未知 PCV2 是否在 PRDC 之病因或 PRDC 之臨床跡象(clinical sign)之表現、嚴重性或延長中起任何作用。與其它病毒性病原體相比，在罹患PRDC之豬之肺病灶中一致診斷出PCV2。前瞻性研究已證明由共同感染PCV2及PRRSV產生之肺炎及通常系統(tǒng)性疾病比與單獨感染任一病原體相關之疾病更嚴重。因此可假定在PCV2與其它病原體之間存在明顯協(xié)同效應，其已在該領域中之呼吸道疾病病例中觀測到(Ellis等人，VeterinaryMicrobiol.，2004;98:159-163)。然而，仍未知PCV2(若存在于罹患PRDC之豬中)是否對豬之PRDC之臨床跡象具有任何影響。由于在肥育(fattening)結束時具有高達100%血清反應陽性之PCV2動物普遍存在，類似地PCV2可對PRDC之疾病表現完全無影響，但僅為不相關共感染病原體。盡管PMWS通常侵襲幼豬(通常介于5與12周齡之間)，但PRDC主要可見于生長至肥育豬(通常約為16至22周齡)中。發(fā)病率在30%-70%范圍內，其中平均死亡率為 4%-6%(Kim 等人，Veterinary J. , 2003; 166:251-256) PRDC 之臨床跡象為難以用抗生 素療法治愈之長期且異常嚴重之咳嗽及呼吸困難(dyspnea)、生長緩慢、飼料效率(feedefficiency)降低、昏睡(lethargy)、厭食(anorexia)及在肥育中期至后期死亡率顯著增加。顯微鏡可見病灶PRDC之特點為具有支氣管周及細支氣管周纖維化之支氣管性間質性肺炎。巨噬細胞之浸潤顯著增厚肺泡隔(Chae，Veterinary J.，2005; 169:326-336)。基于DNA疫苗之治療PCV2感染之方法描述于美國專利第6，703，023號中。在WO03/049703中描述嵌合活疫苗的制備，該嵌合活疫苗包含PCV-I骨架，且該骨架中有基因被致病性PCV2病毒株的免疫原性基因置換。W099/18214已提供若干種PCV2病毒株及用于制備PVC2滅活疫苗的方法。但未曾報導功效資料。WO 06/072065已報導有效的基于0RF-2的亞單位疫苗。任一種上述疫苗都意欲用于3周齡以上的豬的疫苗接種/治療。任何所述疫苗均未描述用于免疫預防或治療罹患PRDC之豬、尤其罹患PRDC之PCV2陽性豬。此外，尚無人描述所述疫苗賦予抗PCV2感染的保護性免疫力，或降低、減輕已具有抗PCV2抗體(優(yōu)選具有母體抗PC2抗體)的豬中與其相關之任何臨床癥狀的嚴重性，或治愈與其相關之任何臨床癥狀。


圖I :按周數分組的各個組之間體重增加程度的差異。圖2 :研究過程中體重差異(IVP-CP)及平均病毒負載量(log 10)的變化。

發(fā)明內容
本發(fā)明涉及下述各項。I. PCV2抗原或含PCV2抗原的免疫原性組合物的制藥用途，所述藥物是用于預防及治療動物的豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和/或任何與PRDC相關的臨床跡象的藥物。2.項I的用途，所述藥物以治療有效量施用需要此治療之動物。3.項I或2的用途，其中與PRDC相關的臨床跡象選自由咳嗽及呼吸困難、生長緩慢、飼料效率降低、昏睡、厭食和/或在肥育中期至后期死亡率顯著增加組成的組。4.項3的用途，其中該咳嗽及呼吸困難是難以用抗生素療法治愈的咳嗽及呼吸困難。5.項1-4之一的用途，其中該PRDC與PCV2感染相關。6.項5的用途，其中該PRDC由PCV2造成。7.項6的用途，其中該 PRDC進一步與下列病原體的感染相關和/或由下列病原體的感染造成PRRSV、豬肺炎支原體(Mycoplasma hyopneumoniae)、支氣管敗血性博德特氏菌(Bordetella bronchiseptica)、豬流感病毒(Swine influenza virus)、胸膜肺炎放線桿菌(Actinobacillus pleuropneumoniae)、豬鼻支原體(Mycoplasma hyorhinis)、豬鏈球菌(Streptococcus suis)和 / 或多殺巴斯德氏菌(Pasteurella multocida)。8.項1-7之一的用途，其中該動物屬于PCV2陽性的畜群。9.項1-8之一的用途，其中該動物屬于PCV2及一或多種選自下組的其它病原體陽性的畜群PRRSV、豬肺炎支原體、支氣管敗血性博德特氏菌、豬流感病毒、豬鼻支原體、豬鏈球菌和/或多殺巴斯德氏菌。10.項1-9之一的用途，其中該動物屬于PCV2陽性農場的動物。11.項1-10之一的用途，其中該動物屬于PCV2及一或多種選自下組的其它病原體陽性的農場PRRSV、豬肺炎支原體、支氣管敗血性博德特氏菌、豬流感病毒、豬鼻支原體、豬鏈球菌和/或多殺巴斯德氏菌。12.項1-11之一的用途，其中該PCV2抗原是與PCV2的0RF-2具有至少80%同源性的多肽。13.項1-12之一的用途，其中該PCV-2抗原是由重組桿狀病毒表達的PCV2 0RF-2。14.項 1-13 之一的用途，其中該 PCV2 抗原為 Illgel vac⑧ CircoFLEX 。15.項1-14之一的用途，其中該動物為豬。16.預防及治療動物之豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和/或與PRDC相關之任何臨床跡象的方法，包括對需要此種治療的動物施用治療有效量的PCV2抗原或含PCV2抗原的免疫原性組合物。17.項16的方法，其中與PRDC相關之臨床跡象系選自由咳嗽及呼吸困難、生長緩慢、飼料效率降低、昏睡、厭食和/或在肥育中期至后期死亡率顯著增加組成的組。18.項17的方法，其中該咳嗽及呼吸困難是難以用抗生素療法治愈的咳嗽及呼吸困。19.項16至18之一的方法，其中該PRDC與PCV2感染相關。20.項19的方法，其中該PRDC由PCV2造成。21.項20的方法，其中該PRDC進一步與下列病原體的感染相關和/或由下列病原體的感染造成PRRSV、豬肺炎支原體、支氣管敗血性博德特氏菌、豬流感病毒、胸膜肺炎放線桿菌、豬鼻支原體、豬鏈球菌和/或多殺巴斯德氏菌。22.項16至21之一的方法，其中該動物屬于PCV2陽性的畜群。23.項16至22之一的方法，其中該動物屬于PCV2及一或多種選自下組的其它病原體陽性的畜群PRRSV、豬肺炎支原體、支氣管敗血性博德特氏菌、豬流感病毒、豬鼻支原體、豬鏈球菌和/或多殺巴斯德氏菌。24.項16至23之一的方法，其中該動物屬于PCV2陽性的農場。25.項16至24之一的方法，其中該動物屬于PCV2及一或多種選自下組的其它病原體陽性的農場PRRSV、豬肺炎支原體、支氣管敗血性博德特氏菌、豬流感病毒、豬鼻支原體、豬鏈球菌和/或多殺巴斯德氏菌。26.項16至25之一的方法，其中該PCV2抗原是與PCV2 0RF-2具有至少80%同源性的多肽。27.項16至26之一的方法，其中該PCV-2抗原是由重組桿狀病毒表達的PCV20RF-2。28.項 16 至 27 之一的方法，其中該 PCV2 抗原為ingelvac CircoFLEX 。29.項16至28之一的方法，其中該動物為豬。PRDC之特征在于多種臨床跡象，其包括難以用抗生素療法治愈之長期且異常嚴重之咳嗽及呼吸困難、生長緩慢、飼料效率降低、昏睡、厭食及在肥育中期至后期死亡率顯著增加。這些臨床跡象與多種不同病原體有關。迄今未知是否PCV2參與PRDC及(若參與時) PCV2參與PRDC的程度。已意外發(fā)現在各種病原體中，PCV2亦在PRDC之臨床跡象之表現、嚴重性及延長中起重要作用。因此在各種病原體中，PCV2是豬PRDC的其中一種病原體。一般而言，一種病原體對如PRDC之多病因疾病(等于多因素疾病)之影響不可預測。病原體可無影響，但亦轉移、抑制、替代、覆蓋或加強其它病原體對多因素疾病(如PRDC)之臨床跡象之表現、嚴重性及延長的影響。舉例而言，若存在至少一種其它病原體，則多因素疾病(如PRDC)之一種病原體之減少或消除可對彼疾病之臨床征兆無影響，但亦可顯著減少彼疾病之臨床癥狀，即使在任何其它病原體存在下亦如此。所涉及之病原體之數目愈多，則僅一種病原體之減少或消除對疾病之表現持續(xù)時間、嚴重性或延長之正面影響的期望愈低。如今已意外發(fā)現藉由用PCV2抗原免疫預防或治療受威脅或受感染動物可減輕或降低豬之PRDC臨床跡象之表現、嚴重性及延長。詳言之，在感染PCV2以及已知造成豬之PRDC或與其相關之病原體(諸如PRRSV、豬肺炎支原體、支氣管敗血性博德特氏菌、豬流感病毒、豬鼻支原體和/或多殺巴斯德氏菌)之豬中，PRDC之臨床跡象或與其相關之臨床跡象之嚴重性及延長可強烈減輕及降低。換言之，用PCV2抗原來免疫預防及治療罹患PRDC之豬對豬之整體健康、肥育期間之體重增加及豬肥育中期至晚期之死亡率具有正面影響，尤其因為已知所述因素(整體健康、體重增加、死亡率)受PRRSV、豬肺炎支原體、支氣管敗血性博德特氏菌、豬流感病毒、豬鼻支原體和/或多殺巴斯德氏菌負面影響。因此，根據一方面，本發(fā)明提供一種免疫預防及治療動物之豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和/或與PRDC相關之任何臨床跡象之方法，其包含向需要此治療之動物施用治療有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物的步驟。與PRDC相關之臨床跡象選自由咳嗽及呼吸困難、生長緩慢、飼料效率降低、昏睡、厭食和/或在肥育中期至后期死亡率顯著增加組成的組。因此根據另一方面，本發(fā)明涉及一種免疫預防及治療動物之咳嗽及呼吸困難、生長緩慢、飼料效率降低、昏睡、厭食和/或與PRDC相關之死亡率顯著增加的方法，其包含向需要此治療之動物施用治療有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物的步驟。優(yōu)選地，該咳嗽及呼吸困難系難以用抗生素療法治愈。本文中術語"抗原〃系指引起宿主免疫反應之氨基酸序列。本文中，抗原包括任何PCV2蛋白之全長序列、其類似物或其免疫原性片段。術語"免疫原性片段"系指包括一或多個表位且由此引起宿主免疫反應之蛋白質片段?？墒褂帽绢I域已知的任何數目之表位定位技術來鑒別所述片段。例如參見 Epitope Mapping Protocols in Methods in MolecularBiology,第 66 卷(Glenn E. Morris 編，1996) Humana Press, Totowa, New Jersey。舉例而言，可藉由(例如)同時在固體支撐物上合成大量肽(所述肽對應于蛋白質分子的各個部分)且使所述肽與抗體反應(同時所述肽仍與支撐物連接)來測定線性表位。所述技術為本領域已知且描述于(例如)美國專利第4，708, 871號；Geysen等人(1984)Proc. Natl.Acad. Sci. USA 81:3998-4002 ;Geysen 等人(1986)Molec. Immunol. 23:709-715 中。同樣地，構象性表位易于通過用X射線晶體學及2維核磁共振等方法測定氨基酸的空間構形而加以鑒別。例如參見 Epitope Mapping Protocols,同上。合成抗原亦包括于該定義中，例如多表位、側接表位及其它重組或合成得到之抗原。例如參見 Bergmann 等人(1993)Eur. J. Immunol. 23:2777-2781 ；Bergmann等人(1996)，J.Immunol. 157:3242-3249 ;Suhrbier,A. (1997)，Immunol, and Cell Biol. 75:402-408 ;Gardner 等人，(1998) 12th World AIDS Conference, Geneva, Switzerland, 1998年6月28日-7月3日?！庖叻磻ㄒ庵^(但不限于)在宿主中發(fā)生抗目標抗原、免疫原性組合物或疫苗的細胞和/或抗體介導的免疫反應。通常，〃免疫反應〃包括(但不限于)一或多種以下效應特異性針對目標組合物或疫苗中所包括之一或多種抗原之抗體、B細胞、輔助T細胞、抑制T細胞和/或細胞毒性T細胞的產生或活化。優(yōu)選地,宿主將顯示治療性或保護性免疫學(記憶)反應以使得對新感染之抗性將增強和/或疾病之臨床嚴重性降低。此保護將由PCV2感染之數目或嚴重性的降低或一或多種與PCV2感染相關之癥狀之缺乏、病毒血癥發(fā)作之延遲、病毒持續(xù)性降低、總病毒負載量降低和/或病毒性排泄物減少來證實。本文中術語〃免疫原性組合物〃或"疫苗〃(兩種術語系同義使用)系指含有PCV2抗原之任何藥物組合物，該組合物可用于預防或治療受檢者之PCV2感染相關疾病或病狀。優(yōu)選免疫原性組合物可誘發(fā)、刺激或增強針對PCV2之免疫反應。因此該術語涵蓋如下所述之亞單位免疫原性組合物，以及含有全滅活或減毒和/或失活PCV2之組合物。因此根據另一方面，本發(fā)明涉及一種免疫預防及治療動物之豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和/或與PRDC相關之任何臨床跡象的方法，其包含向需要此治療的動物施用有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物的步驟，其中該免疫原性組合物為亞單位免疫原性組合物、含有全滅活或減毒和/或失活PCV2之組合物。本文中術語〃亞單位免疫原性組合物〃系指含有至少一種來源于PCV2之抗原或與PCV2之抗原同源的免疫原性多肽或抗原、而非所有抗原的組合物。此組合物大體上不含完整PCV2。因此，〃亞單位免疫原性組合物〃系由來自PCV2或其重組類似物之至少部分純化或分級分離(優(yōu)選大體上純化)之免疫原性多肽制備。亞單位免疫原性組合物可包含大體上不含來自PCV2之其它抗原或多肽或呈分級分離形式的目標亞單位抗原。優(yōu)選免疫原性亞單位組合物包含如下所述之PCV2 0RF-2蛋白質。最優(yōu)選者為免疫原性亞單位組合物，其包含WO 06/072065中提供之PCV2抗原中之任一者，該文獻系以引用的方式全部并入本文中。根據其它方面，本文所述免疫原性組合物最優(yōu)選包含由PCV2 0RF-2表達之多肽或其片段。在本文中用于制備組合物且在本文所述方法中的PCV20RF-2DNA及蛋白質為PCV2分離株內高度保守之域，且進而任何PCV20RF-2可有效作為如本文中使用之PCV 0RF-2DNA和/或多肽的來源。優(yōu)選PCV2 0RF-2蛋白質為WO 06/072065之SEQ ID N0:lliPCV2 0RF-2蛋白質。另一優(yōu)選PCV 0RF-2多肽系以WO 06/072065之SEQ ID N0:5形式提供。然而，本領域技術人員應了解此序列可在序列同源性方面改變多達6%-10%且仍保持使其適用于免疫原性組合物中之抗原特征。免疫學組合物之抗原特征可(例如)由如由WO 06/072065之實例4提供之激發(fā)實驗評估。此外，與如WO 06/072065中提供之SEQ ID N0:3或SEQID NO:4之多核苷酸序列編碼的PCV2 0RF-2蛋白質相比，當經修飾抗原賦予至少70%、優(yōu)選80%、更優(yōu)選90%之保護免疫性時，經修飾抗原之抗原特征仍得以保持。因此根據另一方面，本發(fā)明提供一種免疫預防及治療動物之豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和/或與PRDC相關之任何臨床跡象之方法，其包含向需要此治療的動物施用有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物的步驟，其中該PCV2抗原為抗原PCV20RF-2蛋白質，與如由WO 06/072065中提供之SEQ ID N0:3或SEQ ID N0:4之多核苷酸序列編碼的PCV2 0RF-2蛋白質相比，其具有至少70%、優(yōu)選80%、甚至更優(yōu)選90%之保護免疫性。該 PCV2 0RF-2 優(yōu)選具有 WO 06/072065 之 SEQ ID NO: 11 或 SEQ ID NO: 5 之序列。 在一些形式中，PCV2 0RF-2蛋白質之免疫原性部分系用作包含PCV2抗原之免疫原性組合物中的抗原組份。本文中術語〃免疫原性部分〃系指PCV20RF-2蛋白質和/或多核苷酸各自之截短形式和/或經取代形式或片段。優(yōu)選地，所述截短形式和/或經取代形式或片段應包含全長0RF-2多肽之至少6個連續(xù)氨基酸。更優(yōu)選地，截短形式或經取代形式或片段應具有全長PCV0RF-2多肽之至少10個，更優(yōu)選至少15個且更優(yōu)選至少19個連續(xù)氨基酸。此方面中之兩個優(yōu)選序列系以WO 06/072065之SEQ ID N0:9及SEQ ID NO: 10形式提供。應進一步了解所述序列可為較大片段或截短形式之部分。如上所述，另一優(yōu)選PCV2 0RF-2多肽為由SEQ ID N0:3或SEQ ID N0:4之核苷酸序列編碼之任一多肽。然而，本領域技術人員應了解此序列可在序列同源性方面改變多達6%-20%且仍保持使其適用于免疫原性組合物中之抗原特征。在一些形式中，此PVC2 0RF-2多肽之截短或經取代形式或片段系用作組合物中之抗原組份。優(yōu)選地，所述截短或經取代形式或片段應包含(例如)SEQ ID N0:3或SEQ ID N0:4之全長PCV2 0RF-2核苷酸序列之至少18個連續(xù)核苷酸。更優(yōu)選地，所述截短或經取代形式或片段應具有(例如)SEQ IDNO: 3或SEQ ID勵:4之全長？(^2 0RF-2核苷酸序列之至少30個、更優(yōu)選至少45個且更優(yōu)選至少57個連續(xù)核苷酸。本領域已知的〃序列一致性〃系指兩個或兩個以上多肽序列或兩個或兩個以上多核苷酸序列(亦即參考序列與待與參考序列比較之給定序列)之間之關系。如由所述序列之間的匹配所測定，序列一致性系在序列經最優(yōu)選比對以產生最高序列相似度后，藉由比較給定序列與參考序列而測定。在此比對后，在位置-位置基礎上確定序列一致性，例如，若在一特定位置處核苷酸或氨基酸殘基一致，則所述序列在彼位置處"一致"。隨后將所述位置一致性之總數除以參考序列中核苷酸或殘基之總數以得到序列一致性百分比?？梢子谟梢阎椒▉碛嬎阈蛄幸恢滦?，所述方法包括(并不限于)以下文獻中描述之方法(Computational Molecular Biology, Lesk, A. N.編，Oxford UniversityPress, New York(1988) ；Biocomputing:Informatics and Genome Projects, Smith, D.ff.編，Academic Press, New York (1993) ；Computer Analysis of Sequence Data,部分 I, Griffin, A. M.及 Griffin, H. G.編，Humana Press, New Jersey (1994) ；SequenceAnalysis in Molecular Biology,von Heinge, G. , Academic Press (1987) ；SequenceAnalysis Primer, Gribskov, M.及 Devereux, J.編，M. Stockton Press, New York(1991)；R Carillo1H.及 Lipman, D.，SIAM J. Applied Math.，48:1073 (1988)，其教示內容系以引用的方式并入本文中。測定序列一致性之優(yōu)選方法經設計以得到所測試序列之間的最大匹配。測定序列一致性之方法已在測定給定序列之間的序列一致性之公開可用計算機程序中編碼。所述程序之實例包括(但不限于)GCG程序套件(Devereux, J.等人，NucleicAcids Research, 12 (I) : 387 (1984))、BLASTP、BLASTN 及 FASTA (Altschul, S. F.等人，J. Molec. Biol. , 215:403-410 (1990)) BLASTX 程序可公開獲自 NCBI 及其它來源(BLASTManual, Altschul, S.等人，NCVINLM NIH Bethesda, MD 20894, Altschul, S. F.等人，J. Molec. Biol.，215:403-410 (1990)，其教示內容系以引用的方式并入本文中)。所述程序使用預設空隙權重(default gap weight)最優(yōu)選比對序列以產生給定序列與參考序列之間的最高程度之序列一致性。舉例而言，具有與參考核苷酸序列具有至少(例如)85%、優(yōu)選90%、甚至更優(yōu)選95%"序列一致性〃之核苷酸序列之多核苷酸意謂除給定多核苷酸序列可在參考核苷酸序列之每各100個核苷酸中包括至多15個、優(yōu)選至多10個、甚至更優(yōu) 選至多5個點突變之外，給定多核苷酸之核苷酸序列與參考序列一致。換言之，在具有相對于參考核苷酸序列具有至少85%、優(yōu)選90%、甚至更優(yōu)選95%—致性之核苷酸序列之多核苷酸中，參考序列中之至多15%、優(yōu)選10%、甚至更優(yōu)選5%之核苷酸可缺失或經另一核苷酸取代，或可將參考序列中全部核苷酸之至多15%、優(yōu)選10%、甚至更優(yōu)選5%之多個核苷酸插入參考序列中。參考序列之所述突變可發(fā)生在參考核苷酸序列之5'或3'末端位置處或所述末端位置之間的任何地方，個別地散布于參考序列中之核苷酸之間或參考序列內之一或多個連續(xù)群中。同樣地，具有與參考氨基酸序列具有至少(例如)85%、優(yōu)選90%、甚至更優(yōu)選95%序列一致性之給定氨基酸序列之多肽意謂除給定多肽序列可在參考核苷酸序列之每各100個氨基酸中包括至多15、優(yōu)選至多10、甚至更優(yōu)選至多5個氨基酸變異之外，多肽之給定氨基酸序列與參考序列一致。換言之，為獲得與參考氨基酸序列具有至少85%、優(yōu)選90%、甚至更優(yōu)選95%序列一致性之給定多肽序列，參考序列中之至多15%、優(yōu)選至多10%、甚至更優(yōu)選至多5%之氨基酸殘基可缺失或經另一氨基酸取代，或可將參考序列中氨基酸殘基總數之至多15%、優(yōu)選至多10%、甚至更優(yōu)選至多5%之多個氨基酸插入參考序列中。參考序列之所述變異可發(fā)生于參考氨基酸序列之胺基末端或羧基末端位置處或所述末端位置之間的任何地方，個別地散布于參考序列中之殘基之間或參考序列內之一或多個連續(xù)群中。優(yōu)選地，不一致之殘基位置系因保守性氨基酸取代而不同。然而，當測定序列一致性時，不包括保守性取代作為匹配。 本文所述〃序列同源性〃系指一種測定兩個序列之相關性的方法。為測定序列同源性，最優(yōu)選比對兩個或兩個以上序列且必要時引入空隙。然而，與〃序列一致性〃不同，當測定序列同源性時，將保守性氨基酸取代計為匹配。換言之，為獲得與參考序列具有95%序列同源性之多肽或多核苷酸，參考序列中之85%、優(yōu)選90%、甚至更優(yōu)選95%之氨基酸殘基或核苷酸須與另一氨基酸或核苷酸匹配或包含經另一氨基酸或核苷酸之保守性取代，或可將參考序列中全部氨基酸殘基或核苷酸(不包括保守性取代)之至多15%、優(yōu)選至多10%、甚至更優(yōu)選至多5%之多個氨基酸或核苷酸插入參考序列中。同源序列優(yōu)選包含至少一段50個，甚至更優(yōu)選至少100個，甚至更優(yōu)選至少250個且甚至更優(yōu)選至少500個核苷酸。
〃保守性取代〃系指一個氨基酸殘基或核苷酸經另一個具有類似特征或性質(包括大小、疏水性等)之氨基酸殘基或核苷酸取代，以使得整體功能不顯著改變?！ǚ蛛x〃意謂〃藉由人工〃自其天然狀態(tài)改變，亦即若其存在于自然界中，則其已自原始環(huán)境改變或移出，或兩者。舉例而言，天然存在于活有機體中之多核苷酸或多肽系未經"分離"，當該術語用于本文中時，與天然狀態(tài)之共存物質分離之相同多核苷酸或多肽系經〃分離〃。因此，根據另一方面，本發(fā)明提供一種預防及治療動物之豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和/或與PRDC相關之任何臨床跡象之方法，其包含向需要此治療之動物施用有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物的步驟，其中該PCV2 0RF-2蛋白質為上述蛋白質中之任一者。該PCV2 0RF-2蛋白質優(yōu)選為i)包含 WO 06/07065 之 SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 9、SEQ ID N O: 10或SEQ ID NO: 11之序列的多肽；ii)與i)之多肽至少80%同源的任何多肽，iii) i)和/或ii)之多肽之任何免疫原性部分，iv) iii)之免疫原性部分，其包含包括于WO 06/072065之SEQ ID NO: 5, SEQ IDNO:6, SEQ ID NO:9, SEQ ID N0:10或SEQ ID NO: 11之序列中的至少10個連續(xù)氨基酸，V)由包含 WO 06/072065 之 SEQ ID N0:3 或 SEQ ID NO:4 之序列的 DNA 編碼之多肽，vi)由與V)之多核苷酸至少80%同源之多核苷酸編碼的任何多肽，vii)由V)和/或vi)之多核苷酸編碼之多肽的任何免疫原性部分，viii) vii)之免疫原性部分，其中編碼該免疫原性部分之多核苷酸包含包括于WO06/072065之SEQ ID N0:3或SEQ ID N0:4之序列中的至少30個連續(xù)核苷酸。所述免疫原性部分中之任一者優(yōu)選具有由WO 06/07065之SEQ ID N0:3或SEQ IDNO:4之序列編碼的PCV2 0RF-2蛋白質之免疫原性特征。根據另一方面，PCV2 0RF-2蛋白質系以可有效誘發(fā)所需免疫反應(亦即降低PRDC和/或與PRDC相關之任何臨床癥狀之發(fā)病率、減輕PRDC和/或與PRDC相關之任何臨床癥狀之嚴重性或預防或減少PRDC和/或與PRDC相關之任何臨床癥狀)之抗原包涵量提供于免疫原性組合物中。PCV2 0RF-2蛋白質包涵量優(yōu)選為每毫升最終免疫原性組合物至少O. 2 μ g抗原(μ g/ml)、更優(yōu)選約O. 2 μ g/ml至約400 μ g/ml、更優(yōu)選約O. 3 μ g/ml至約200 μ g/ml、甚至更優(yōu)選約O. 35 μ g/ml至約100 μ g/ml、更優(yōu)選約O. 4 μ g/ml至約50 μ g/ml、更優(yōu)選約O. 45 μ g/ml至約30 μ g/ml、更優(yōu)選約O. 6 μ g/ml至約15 μ g/ml、甚至更優(yōu)選約O. 75 μ g/ml至約8 μ g/ml、甚至更優(yōu)選約I. O μ g/ml至約6 μ g/ml、更優(yōu)選約I. 3 μ g/ml至約3. O μ g/ml、甚至更優(yōu)選約I. 4 μ g/ml至約2. 5 μ g/ml、甚至更優(yōu)選約I. 5 μ g/ml至約
2.O μ g/ml 且最優(yōu)選約 I. 6 μ g/ml。根據另一方面，PCV 0RF-2抗原包涵量為每劑最終抗原組合物至少O. 2微克如上所述之PCV2 0RF-2蛋白質(微克/劑)、更優(yōu)選約O. 2微克/劑至約400微克/劑、更優(yōu)選約O. 3微克/劑至約200微克/劑、甚至更優(yōu)選約O. 35微克/劑至約100微克/劑、更優(yōu)選約O. 4微克/劑至約50微克/劑、更優(yōu)選約O. 45微克/劑至約30微克/劑、更優(yōu)選約O. 6微克/劑至約15微克/劑、甚至更優(yōu)選約O. 75微克/劑至約8微克/劑、甚至更優(yōu)選約I. O微克/劑至約6微克/劑、更優(yōu)選約I. 3微克/劑至約3. O微克/劑、甚至更優(yōu)選約I. 4微克/劑至約2. 5微克/劑、甚至更優(yōu)選約I. 5微克/劑至約2. O微克/劑且最優(yōu)選約I. 6微克/劑。可以包括PCV2 0RF2之分離及純化、標準蛋白質合成及重組方法之任何方式獲得用于本發(fā)明之免疫原性組合物中之PCV2 0RF-2多肽。用于獲得PCV2 0RF-2多肽之優(yōu)選方法提供于WO 06/072065中，其教示及內容系以引用的方式全部并入本文中。簡言之，用含有PCV2 0RF-2DNA編碼序列之重組病毒載體感染易感細胞，由重組病毒表達PCV2 0RF-2多肽且藉由過濾自上清液回收所表達之PCV2 0RF-2多肽且由任何常規(guī)方法、優(yōu)選使用二元氮丙啶使其失活，隨后將其中和以終止失活過程。本文所述免疫原性組合物亦系指包含以下各物之組合物i)優(yōu)選具有上述濃度之上述PCV2 0RF-2蛋白質中之任一者，及ii)表達該PCV2 0RF-2蛋白質之病毒載體、優(yōu)選重組桿狀病毒之至少一部分。此外，免疫原性組合物可包含i)優(yōu)選具有上述濃度之上述PCV2 0RF-2蛋白質中之任一者，ii)表達該PCV2 0RF-2蛋白質之病毒載體、優(yōu)選重組桿狀 病毒之至少一部分，及iii) 一部分細胞培養(yǎng)物上清液。因此，根據另一方面，本發(fā)明提供一種免疫預防及治療動物之豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和/或與PRDC相關之任何臨床跡象之方法，其包含向需要此治療的動物施用有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物的步驟，其中該PCV2抗原為重組PCV20RF-2、優(yōu)選為桿狀病毒表達之PCV20RF-2。所述重組或桿狀病毒表達PCV2 0RF-2優(yōu)選具有如上所述之序列。本文所述免疫原性組合物亦系指包含以下各物之組合物i)優(yōu)選具有上述濃度之上述PCV2 0RF-2蛋白質中之任一者，ii)表達該PCV2 0RF-2蛋白質之病毒載體、優(yōu)選重組桿狀病毒之至少一部分，及iii) 一部分細胞培養(yǎng)物；其中約90%之組份具有小于I μ m之大小。本文所述免疫原性組合物亦系指包含以下各物之組合物i)優(yōu)選具有上述濃度之上述PCV2 0RF-2蛋白質中之任一者，ii)表達該PCV2 0RF-2蛋白質之病毒載體之至少一部分，iii) 一部分細胞培養(yǎng)物，iv)及使重組病毒載體失活之失活劑，優(yōu)選為BEI，其中約90%之組份i)至組份iii)具有小于Iym之大小。BEI優(yōu)選以可有效使桿狀病毒失活之濃度存在，優(yōu)選為2mM至約8mMBEI、優(yōu)選約5mM BEI之量。本文所述免疫原性組合物亦系指包含以下各物之組合物i)優(yōu)選具有上述濃度之上述PCV2 0RF-2蛋白質中之任一者，ii)表達該PCV2 0RF-2蛋白質之病毒載體之至少一部分，iii) 一部分細胞培養(yǎng)物，iv)使重組病毒載體失活之失活劑，優(yōu)選為BEI，及V)終止由失活劑所介導之失活之中和劑，其中約90%之組份i)至組份iii)具有小于Iym之大小。優(yōu)選地，若失活劑為BEI，則該組合物包含與BEI等量之硫代硫酸鈉。將多肽并入可施用對PCV2感染敏感之動物之組合物中。在優(yōu)選形式中，組合物亦可包括本領域技術人員已知之其它組份(亦參見Remington' s PharmaceuticalSciences. (1990)。第18版,Mack Publ.，Easton)。另外，該組合物可包括一或多種獸醫(yī)學上可接受之載劑。本文中，“獸醫(yī)學上可接受之載劑”包括任何及所有溶劑、分散介質、涂料、佐劑、穩(wěn)定劑、稀釋劑、防腐劑、抗細菌劑及抗真菌劑、等滲劑、吸收延遲劑及其類似載劑。在一優(yōu)選實施例中，免疫原性組合物包含優(yōu)選具有上述濃度之如由此提供之PCV20RF-2蛋白質，其系與佐劑(優(yōu)選Carbopol)及生理鹽水混合。本領域技術人員應了解本文中所用之組合物可并有已知可注射、生理學上可接受之無菌溶液。為制備用于非經腸注射或輸液之即用溶液，現成可用諸如鹽水或相應血漿蛋白質溶液之等滲水溶液。另外，本發(fā)明之免疫原性組合物及疫苗組合物可包括稀釋劑、等滲齊 、穩(wěn)定劑或佐劑。稀釋劑可包括水、鹽水、右旋糖、乙醇、甘油及其類似物。等滲劑尤其可包括氯化鈉、右旋糖、甘 露糖醇、山梨糖醇及乳糖。穩(wěn)定劑尤其包括白蛋白及乙二胺四乙酸之堿金屬鹽。本文所述〃佐劑〃可包括氫氧化鋁及磷酸鋁；皂素，例如Quil A.QS-21 (CambridgeBiotech Inc., Cambridge MA)、GPI-0100(Galenica Pharmaceuticals, Inc. , Birmingham, AL);油包水乳液；水包油乳液；水/油/水乳液。乳液尤其可基于輕液體石臘油(European Pharmacopea類型)；由烯烴、尤其異丁烯或癸烯之低聚合產生之類異戍二烯油，諸如角鯊烷油或角鯊烯油；含有直鏈烷基之酸或醇之酯，更特定言之植物油、油酸乙酯、丙二醇二 _(辛酸酯/癸酸酯)、甘油三_(辛酸酯/癸酸酯)或丙二醇二油酸酯；支鏈脂肪酸或醇之酯，尤其異硬脂酸酯。該油系與乳化劑組合使用以形成乳液。乳化劑優(yōu)選為非離子型界面活性劑，尤其視情況經乙氧基化之脫水山梨糖醇酯、二縮甘露醇酯(例如無水甘露糖醇油酸酯)、乙二醇酯、聚甘油酯、丙二醇酯，及油酸酯、異硬脂酸酯、蓖麻油酸酯或羥基硬脂酸酯，及聚氧化丙烯-聚氧化乙烯共聚物嵌段體，尤其泊洛尼克(Pluronic)產品，尤其為 L121。參見 Hunter 等人，The Theory and Practical Application ofAdjuvants (Stewart-Tull, D. E. S.編)· John Wiley and Sons, NY,第 51-94 頁(1995)及Todd 等人，Vaccine 15:564-570(1997)。舉例而言，有可能使用"VaccineDesign, The Subunit and AdjuvantApproach", M. Powell 及 M. Newman 編，Plenum Press, 1995 之第 147 頁所述之 SPT 乳液，及此同一本著作之第183頁所述之乳液MF59。佐劑之另一實例為選自丙烯酸或甲基丙烯酸之聚合物及順丁烯二酸酐及烯基衍生物之共聚物的化合物。有利佐劑化合物為尤其與糖或多元醇之聚烯基醚交聯(lián)之丙烯酸或甲基丙烯酸之聚合物。所述化合物稱為術語卡波姆(carbomer) (Phameuropa,第8卷，第2期，1996年6月)。本領域技術人員亦可參看美國專利第2，909，462號，其描述與具有至少3個羥基、優(yōu)選不超過8個羥基之多羥基化合物交聯(lián)的所述丙烯酸聚合物，其中至少三個羥基之氫原子經具有至少2個碳原子之不飽和脂族基團置換。優(yōu)選基團為含有2至4個碳原子之基團，例如乙烯基、烯丙基及其它烯系不飽和基團。所述不飽和基團可自身含有諸如甲基之其它取代基。以名稱Carbopol (BF Goodrich, Ohio, USA)銷售之產品尤其適合。其與烯丙基鹿糖或烯丙基異戍四醇交聯(lián)。其中，可提及Carbopol 974P、Carbopol 934P及Carbopol 971P。最優(yōu)選使用優(yōu)選每劑約500 μ g至約5mg之量、甚至更優(yōu)選每劑約750 μ g至約2. 5mg之量且最優(yōu)選每劑約Img之量的Carbopol,尤其使用Carbopol 971P。其它適合佐劑尤其包括(但不限于)RIBI佐劑系統(tǒng)(Ribi Inc·)、嵌段共聚物(CytRx, Atlanta GA)、SAF-M(Chiron, Emeryville CA)、單憐酸基脂質 A、安夫利定(Avridine)脂質胺佐劑、來自大腸桿菌(E. coli)之熱不穩(wěn)定腸毒素(重組或其它)、霍亂毒素、IMS 1314或胞壁酰二肽。優(yōu)選添加每劑約100 μ g至約IOmg佐劑。甚至更優(yōu)選添加每劑約100 μ g至約IOmg佐劑。甚至更優(yōu)選添加每劑約500 μ g至約5mg佐劑。甚至更優(yōu)選添加每劑約750 μ g至約
2.5mg佐劑。最優(yōu)選添加每劑約Img佐劑。另外，組合物可包括一或多種醫(yī)藥上可接受之載劑。本文中，〃醫(yī)藥上可接受之載劑"包括任何及所有溶劑、分散介質、涂料、穩(wěn)定劑、稀釋劑、防腐劑、抗細菌劑及抗真菌劑、等滲劑、吸收延遲劑及其類似物。由此提供之組合物最優(yōu)選含有自活體外培養(yǎng)細胞之上清液回收的PCV2 0RF-2蛋白質，其中所述細胞系經含有PCV2 0RF-2DNA且表達PCV2 0RF-2蛋白質之重組病毒載體感染，且其中該細胞培養(yǎng)物系經約2mM至約8mM BEI、優(yōu)選約5mM BEI處理以使病毒載體失活，且用相等濃度之中和劑(優(yōu)選硫代硫酸鈉溶液)處理至最終濃度為約2mM至約8mM、優(yōu)選約5mM。本發(fā)明亦涉及免疫原性組合物用于免疫預防或治療PRDC或減少與PRDC相關之任何臨床跡象的用途，該免疫原性組合物包含i)優(yōu)選具有上述濃度之上述PCV2 0RF-2蛋 白質中之任一者， )表達該PCV2 0RF-2蛋白質之病毒載體之至少一部分，iii) 一部分細胞培養(yǎng)物，iv)使重組病毒載體失活之失活劑，優(yōu)選為BEI，及V)終止由失活劑所介導之失活之中和劑，優(yōu)選為與BEI等量之硫代硫酸鈉 '及Yi)適當佐劑,優(yōu)選為上述量之Carbopol971 ;其中約90%之組份i)至組份iii)具有小于Iym之大小。根據另一方面，此免疫原性組合物進一步包含呈生理學上可接受之濃度的醫(yī)藥學上可接受之鹽、優(yōu)選磷酸鹽。優(yōu)選將該免疫原性組合物之PH值調節(jié)至生理pH值，意謂介于約6. 5與7. 5之間。本文所述免疫原性組合物亦系指一種組合物，其每一毫升包含i)至少I. 6 μ g上述PCV20 RF-2蛋白質；ii)表達該PCV2 0RF-2蛋白質之桿狀病毒之至少一部分；iii) 一部分細胞培養(yǎng)物；iv)約2mM至8mM ΒΕΙ ；v)與BEI等量之硫代硫酸鈉 '及γ )約Img Carbopol971 生理學上可接受之濃度之磷酸鹽；其中約90%之組份i)至組份iii)具有小于I μ m之大小且將該免疫原性組合物之pH值調節(jié)至約6. 5至7. 5。免疫原性組合物可進一步包括一或多種其它免疫調節(jié)劑，諸如白細胞介素、干擾素或其它細胞因子。免疫原性組合物亦可包括慶大霉素(Gentamicin)及硫柳汞(Merthiolate)。盡管本領域技術人員可易于確定適用于本發(fā)明情況下之佐劑及添加劑之量及濃度，但本發(fā)明涵蓋包含約50 μ g至約2000 μ g佐劑之組合物且優(yōu)選每毫升劑量疫苗組合物包含約250 μ g佐劑。因此，本文所述免疫原性組合物亦系指包含約I μ g/ml至約60 μ g/ml抗生素且更優(yōu)選小于約30 μ g/ml抗生素之組合物。本文所述免疫原性組合物亦系指包含以下各物之組合物i)優(yōu)選具有上述濃度之上述PCV2 0RF-2蛋白質中之任一者，ii)表達該PCV2 0RF-2蛋白質之病毒載體之至少一部分，iii) 一部分細胞培養(yǎng)物，iv)使重組病毒載體失活之失活劑，優(yōu)選為BEI，及V)終止由失活劑所介導之失活之中和劑，優(yōu)選為與BEI等量之硫代硫酸鈉；vi)適當佐劑，優(yōu)選為上述量之Carbopol 971 ；vii)醫(yī)藥學上可接受之濃度之鹽水緩沖液，優(yōu)選為磷酸鹽，及viii)抗微生物活性劑；其中約90%之組份i)至組份iii)具有小于I μ m之大小。本文所述免疫原性組合物亦系指丨ilge丨vac_ CircoFLEX (Boehringer IngelheimVetmedica Inc, St Joseph, MO, USA) >CircoVac (Merial SAS, Lyon, France) > PorcilisPCV(Intervet Inc. , Millsboro, DE, USA)或 Suvaxyn PCV_20ne Dose (Fort DodgeAnimal Health, Kansas City，KA，USA)。因此，本發(fā)明亦提供一種免疫預防及治療動物之豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和/或與PRDC相關之任何臨床跡象的方法，其包含向需要此治療之動物施用治療有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物的步驟，其中該包含 PCV2 抗原之免疫原性組合物為Ingelvac CircoFLEX 、CircoVac 、Porcilis PCV和 / 或 Suvaxyn PCV_20ne Dose ,其優(yōu)選為Ingelvac CircoFLEX 。如上所述，PCV2已經鑒別為PRDC之一種相關病原體。大多數罹患PRDC之豬對PCV2 呈陽性(例如 Kim 等人，Veterinary Journal (2003) 166:251-256)。用 PCV2 抗原來治療豬使得PRDC之呼吸道癥狀減少(參見實施例3)。因此根據另一方面，本發(fā)明提供一種免疫預防及治療動物之豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和/或與PRDC相關之任何臨床跡象的方法，其包含向需要此治療之動物施用治療有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物的步驟，其中該PRDC或與PRDC相關之所述臨床跡象系與PCV2相關或由PCV2造成。此外，本發(fā)明亦提供一種免疫預防及治療動物之豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和/或與PRDC相關之任何臨床跡象的方法，其包含向需要此治療之動物施用治療有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物的步驟，其中該PRDC或與PRDC相關之所述臨床跡象系與PCV2及PRRSV、胸膜肺炎放線桿菌、豬肺炎支原體、支氣管敗血性博德特氏菌、豬流感病毒、豬鼻支原體、豬鏈球菌(Streptococcus suis)和/或多殺巴斯德氏菌相關或由其造成。因為PCV2為PRDC之一種病原體，所以對PCV2呈陽性之畜群比不含PCV2之畜群具有更高的患上PRDC或患上更嚴重持續(xù)時間之具有嚴重臨床癥狀之PRDC的風險。本文中術語〃對PCV2呈陽性之畜群〃意謂畜群動物之至少1%、優(yōu)選10%、更優(yōu)選30%、甚至更優(yōu)選50%、最優(yōu)選70%感染有PCV2或在任何時間變?yōu)楦腥居蠵CV2。此未必意謂該畜群之任何動物均出現已知由PCV2造成之臨床癥狀(諸如PMWS或PRDC)。因此根據另一方面，本發(fā)明亦提供一種免疫預防及治療動物之豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和/或與PRDC相關之任何臨床跡象的方法，其包含向需要此治療之動物施用治療有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物的步驟，其中該動物屬于對PCV2呈陽性之畜群。PRDC和/或與PRDC相關之任何臨床跡象優(yōu)選系由PCV2造成。因為在共感染PRDC之其它致病性病原體之動物中，PRDC及PRDC之臨床癥狀亦可減輕或減少，所以本發(fā)明亦提供一種免疫預防及治療動物之豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和/或與PRDC相關之任何臨床跡象的方法，其包含向需要此治療之動物施用治療有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物的步驟，其中該動物屬于對PCV2及一或多種選自由PRRSV、豬肺炎支原體、胸膜肺炎放線桿菌、支氣管敗血性博德特氏菌、豬流感病毒、豬鼻支原體、豬鏈球菌和/或多殺巴斯德氏菌組成的組之其它病原體呈陽性的畜群。PRDC和/或與PRDC相關之任何臨床跡象優(yōu)選系由PCV2及至少一種其它PRDC致病性病原體造成。本文中術語〃對PCV2及一或多種選自由PRRSV、豬肺炎支原體、胸膜肺炎放線桿菌、支氣管敗血性博德特氏菌、豬流感病毒、豬鼻支原體、豬鏈球菌和/或多殺巴斯德氏菌組成的組之其它病原體呈陽性的畜群〃意謂畜群動物之至少10%、優(yōu)選30%、更優(yōu)選50%、甚至更優(yōu)選70%感染有PCV2及至少一種下文列出之其它病原體或在任何時間變?yōu)楦腥居蠵CV2及至少一種下文列出之其它病原體感染。此未必意謂該畜群之任何動物均出現已知由PCV2及至少一種上文列出之病原體造成之臨床癥狀(例如PRDC)。PRDC和/或與PRDC相關之任何臨床跡象優(yōu)選至少由PCV2造成。PRDC并非僅侵襲確定數目之動物，其通常侵襲畜群之所有動物(整個畜群)。換言之，若農場中至少一只動物發(fā)生PRDC，則PRDC之病原體持續(xù)存在于彼農場之牲畜中。因此根據另一方面，本發(fā)明亦提供一種免疫預防及治療動物之豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和/或與PRDC相關之任何臨床跡象的方法，其包含向需要此治療之動物施用治療有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物的步驟，其中該動物屬于對PCV2呈陽性之畜群。PRDC和/或與PRDC相關之任何臨床跡象優(yōu)選系由PCV2造成。本文中術語〃對PCV2呈陽性之畜群〃意謂畜群動物之至少1%、優(yōu)選10%、更優(yōu)選30%、甚至更優(yōu)選50%、最優(yōu)選70%感染有PCV2或在任何時間變?yōu)楦腥居蠵CV2。此未必意謂該農場之任何動物均出現已知由PCV2造成之臨床癥狀(諸如PMWS或PRDC)。PRDC和/或與PRDC相關之任何臨床跡象優(yōu)選系由PCV2造成。因為在共感染PRDC之其它致病性病原體之動物中，PRDC及PRDC之臨床癥狀亦可減輕或減少，所以本發(fā)明亦提供一種免疫預防及治療動物之豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和/或與PRDC相關之任何臨床跡象的方法，其包含向需要此治療之動物施用治療有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物的步驟，其中該動物屬于對PCV2及一或多種 選自由PRRSV、豬肺炎支原體、胸膜肺炎放線桿菌、支氣管敗血性博德特氏菌、猿流感病毒、豬鼻支原體、豬鏈球菌和/或多殺巴斯德氏菌組成的組之其它病原體呈陽性的農場。PRDC和/或與PRDC相關之任何臨床跡象優(yōu)選系由PCV2及至少一種其它PRDC致病性病原體造成。本文中術語〃對PCV2及一或多種選自由PRRSV、豬肺炎支原體、胸膜肺炎放線桿菌、支氣管敗血性博德特氏菌、豬流感病毒、豬鼻支原體、豬鏈球菌和/或多殺巴斯德氏菌組成的組之其它病原體呈陽性的畜群〃意謂畜群動物之至少10%、優(yōu)選30%、更優(yōu)選50%、甚至更優(yōu)選70%感染有PCV2及至少一種下文列出之其它病原體或在任何時間變?yōu)楦腥居蠵CV2及至少一種下文列出之其它病原體。此未必意謂該畜群之任何動物均出現已知由PCV2及至少一種上文列出之病原體造成之臨床癥狀(例如PRDC)。母源免疫性已顯示可賦予一定程度的對抗PCV2感染及與PCV2感染相關之臨床疾病之保護。此保護已顯示為效價依賴性較高效價通常具保護性，而較低效價不具保護性(McKeown 等人，2005; Clin. Diagn. Lab. Immunol. ; 12:1347-1351)。斷乳動物之平均抗體半衰期已估算為19. O天,在群體內PCV2被動抗體衰減窗相對較寬(Opriessnig等人，2004, J. Swine Health Prod. 12:186-191)。母源抗體之存在不僅可賦予一定程度的對抗病毒感染之保護(然而其不可預測)，而且已知亦可能削弱免疫作用之功效。已驚奇地發(fā)現抗PCV2抗體(尤其多至1:20480之抗PCV2抗體效價)之存在不影響PCV2治療之功效。因此，根據另一方面，本發(fā)明亦提供一種預防及治療動物之豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和/或與PRDC相關之任何臨床跡象的方法，其包含向具有抗PCV2抗體之需要此治療之動物施用治療有效量的PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物的步驟，優(yōu)選其中該動物具有達1:100、優(yōu)選大于1:100、甚至更優(yōu)選大于1:250、甚至更優(yōu)選大于1:500、甚至更優(yōu)選1:640、甚至更優(yōu)選大于1:750、最優(yōu)選大于1:1000之可檢測抗PCV2抗體效價。優(yōu)選地，該抗PCV2抗體效價在特異性抗PCV2免疫檢定中、優(yōu)選在如實施例2中所述之檢定中可檢測且可定量。檢測及定量抗PCV2抗體之方法為本領域已知。舉例而言，PCV2抗體之檢測及定量可由 Magar 等人，2000, Can. J. Vet Res. ; 64:184-186 或 Magar 等人，2000, J. Comp.Pathol. ; 123:258-269中所述之間接免疫熒光法進行。定量抗PCV2抗體之其它檢定描述于Opriessnig等人,2006，美國豬獸醫(yī)協(xié)會第37屆年會(371* Annual Meeting of theAmerican Association of Swine Veterinarians)中。此外，實施例 2 亦描述一種本領域技術人員可使用之間接免疫熒光檢定。在結果有爭議及有任何疑問之情況下，本文所提及之抗PCV2效價系指由/可由實施例2中所述之檢定估算出之抗PCV2效價。根據另一更通用方面，本發(fā)明提供一種免疫預防年幼動物中優(yōu)選與PCV2相關或由PCV2造成之PRDC，或減少由PRDC造成或與PRDC相關之臨床癥狀的方法，其包含向需要此治療之彼年幼動物施用有效量之PCV2抗原的步驟。本文中術語〃年幼動物〃系指I至22天齡之動物。術語年幼動物優(yōu)選意謂I至20天齡之動物。術語年幼動物更優(yōu)選系指I至15天齡、甚至更優(yōu)選I天齡至14天齡、甚至更優(yōu)選I至12天齡、甚至更優(yōu)選I至10天齡、甚至更優(yōu)選I至8天齡、甚至更優(yōu)選I至7天齡、甚至更優(yōu)選I至6天齡、甚至更優(yōu)選I至5天齡、甚至更優(yōu)選I至4天齡、甚至更優(yōu)選I至3天齡、甚至更優(yōu)選I或2天齡之動物，最優(yōu)選系指I天齡之動物。因此根據另一方面，本發(fā)明提供一種免疫預防年幼動物中優(yōu)選與PCV2相關或由PCV2造成之PRDC，或減少由 PRDC造成或與PRDC相關之臨床癥狀的方法，其包含向需要此治療之I至22天齡、優(yōu)選I至20天齡、更優(yōu)選I至15天齡、甚至更優(yōu)選I至14天齡、甚至更優(yōu)選I至12天齡、甚至更優(yōu)選I至10天齡、甚至更優(yōu)選I至8天齡、甚至更優(yōu)選I至7天齡、甚至更優(yōu)選I至6天齡、甚至更優(yōu)選I至5天齡、甚至更優(yōu)選I至4天齡、甚至更優(yōu)選I至3天齡、甚至更優(yōu)選I或2天齡、最優(yōu)選I天齡之動物施用有效量之PCV2抗原的步驟。舉例而言，有證據證明在19至22天齡時進行疫苗接種/治療展示高疫苗接種功效。此外，在12至18天齡時進行疫苗接種/治療亦已展示可極有效減少與PRDC相關或由PRDC造成之臨床癥狀、降低總病毒負載量、縮減病毒血癥之持續(xù)時間、延遲病毒血癥之發(fā)作、體重增加。由于PCV2在野外普遍存在，所以大多數年幼仔豬關于PCV2呈血清陽性。因此根據另一方面，本發(fā)明提供一種優(yōu)選在疫苗接種當天免疫預防具有抗PCV2抗體之年幼動物中優(yōu)選與PCV2相關或由PCV2造成之PRDC，或減少由PRDC造成或與PRDC相關之臨床癥狀的方法，其包含向需要此治療之I至22天齡、優(yōu)選I至20天齡、更優(yōu)選I至15天齡、甚至更優(yōu)選I至14天齡、甚至更優(yōu)選I至12天齡、甚至更優(yōu)選I至10天齡、甚至更優(yōu)選I至8天齡、甚至更優(yōu)選I至7天齡、甚至更優(yōu)選I至6天齡、甚至更優(yōu)選I至5天齡、甚至更優(yōu)選I至4天齡、甚至更優(yōu)選I至3天齡、甚至更優(yōu)選I或2天齡、最優(yōu)選I天齡之動物施用有效量之PCV2抗原的步驟。在疫苗接種/治療當天，所述年幼動物優(yōu)選具有在疫苗接種/治療當天高達1:100、優(yōu)選大于1:100、甚至更優(yōu)選大于1:250、甚至更優(yōu)選大于1:500、甚至更優(yōu)選1:640、甚至更優(yōu)選大于1:750、最優(yōu)選大于I : 1000之可檢測抗PCV2抗體效價。如上所述，用PCV2抗原對罹患PRDC之動物進行疫苗接種/治療使得與未經疫苗接種之對照動物相比病毒血癥階段縮短。與相同物種之未經疫苗接種之對照動物相比，平均縮短時間為15. 4天。因此，根據另一方面，本發(fā)明亦提供一種治療或免疫預防動物中優(yōu)選與PCV2相關或由PCV2造成之PRDC，或減少由PRDC造成或與PRDC相關之臨床癥狀的方法，其包含向需要此治療的動物施用有效量之PCV2抗原的步驟，其中與相同物種之未經治療對照組之動物相比，治療或免疫預防使得病毒血癥階段縮短5天或5天以上、優(yōu)選6天或6天以上、甚至更優(yōu)選7天或7天以上、甚至更優(yōu)選8天或8天以上、甚至更優(yōu)選9天、甚至更優(yōu)選10天、甚至更優(yōu)選12天、甚至更優(yōu)選14天、最優(yōu)選多于15天。
一般而言，對罹患PRDC之豬進行疫苗接種使得體重增加損失減小、臨床呼吸道征象(諸如咳嗽及呼吸困難)減少、病毒血癥持續(xù)時間較短、病毒血癥較早結束及病毒負載量較低。因此，根據另一方面，本發(fā)明提供一種治療或免疫預防動物中優(yōu)選與PCV2相關或由PCV2造成之PRDC，或減少與PRDC相關或由PRDC造成之臨床癥狀的方法，其包含向需要此治療之動物施用有效量之PCV2抗原的步驟，其中該治療或免疫預防使得與相同物種之未經治療對照組之動物相比疫苗功效參數得以改良，所述疫苗功效參數系選自由體重增加損失減小、臨床呼吸道征象(諸如咳嗽及呼吸困難)減少、病毒血癥持續(xù)時間較短、病毒血癥較早結束、較低病毒負載量或其組合組成的組。本文中術語〃有效量〃意謂(但不限于)在該有效劑量之PCV2抗原所施用之動物中引起或能夠引起免疫反應的抗原量。有效量視疫苗成份及投藥時程而定。通常，當在組合疫苗中使用失活病毒或經修飾活病毒制劑時，疫苗含有每劑約102_°至約109_° TCID5tl、優(yōu)選每劑約103_°至約108_°TCID5Q、更優(yōu)選每劑約IO4 ci至約108_ tlTCID5tl之量。詳言之，當在疫苗中使用經修飾活PCV2時，待施用易感動物之推薦劑量優(yōu)選為每劑約103_tlTCID5tl (組織培養(yǎng)物感染劑量50%終點)至每劑 約IO6 qTCID5q且更優(yōu)選為每劑約IO4 qTCID5q至每劑約105_°TCID5(I。一般而言，當使用經純化抗原時，抗原之量將介于O. 2微克與5000微克之間，且介于102_°與IO9 tlTCID5ci之間、優(yōu)選介于IO3 0與IO6 ciTCID5tl之間、更優(yōu)選介于IO4 0與IO5 ciTCID5tl之間。亞單位疫苗通常系以每劑至少O. 2 μ g抗原、優(yōu)選每劑約O. 2 μ g至約400 μ g、更優(yōu)選每劑約O. 3 μ g至約200 μ g、甚至更優(yōu)選每劑約O. 35 μ g至約100 μ g、更優(yōu)選每劑約
0.4 μ g至約50 μ g、更優(yōu)選每劑約O. 45 μ g至約30 μ g、更優(yōu)選每劑約O. 6 μ g至約16 μ g、甚至更優(yōu)選每劑約O. 75 μ g至約8 μ g、甚至更優(yōu)選每劑約l.Oyg至約6 μ g、更優(yōu)選每劑約
1.3 μ g至約3. O μ g之抗原含量施用。出人意料地發(fā)現前述免疫原性組合物之免疫預防用途可有效減少動物中優(yōu)選至少由PCV2造成之PRDC造成或與其相關的臨床癥狀。此外，本文中所述之抗原組合物降低總圓環(huán)病毒負載量，其包括較遲發(fā)作、較短持續(xù)時間、病毒血癥較早結束及病毒負載量降低及其在罹患PRDC之動物中之免疫抑制性影響，且進而產生較高程度之一般疾病抵抗性及降低之PRDC發(fā)病率。根據本發(fā)明之組合物可經皮內、氣管內或陰道內施用。該組合物優(yōu)選可經肌肉內或鼻內施用，最優(yōu)選經肌肉內施用。在動物體內，可證實經由靜脈內或藉由直接注射入靶組織中來施用上述藥物組合物為有利的。就全身性施用而言，靜脈內、血管內、肌肉內、鼻內、動脈內、腹膜內、經口或鞘內途徑優(yōu)選?？山浧は?、皮內、皮膚內、心臟內、小葉內、骨髓內、肺內或直接在待處理組織(結締組織、骨組織、肌肉組織、神經組織、上皮組織)中或其附近實現更局部施用。視治療之所需持續(xù)時間及有效性而定，可例如在每日基礎上一次或若干次(亦間歇地)歷時若干天、數周或數月且以不同劑量來施用根據本發(fā)明之組合物。優(yōu)選地，至少一個劑量之如上所述之免疫原性組合物系經肌肉內施用有需要之受檢者。根據另一方面，如本文中所述之PCV2抗原或包含任何此PCV2抗原之免疫原性組合物系裝入瓶中且以每劑一(l)mL之量施用。因此，根據另一方面，本發(fā)明亦提供一種包含如本文中所述之PCV-2抗原的Iml免疫原性組合物，其系用于治療或免疫預防動物中優(yōu)選由PCV2造成之豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和/或與其相關的任何臨床跡象，其包含向需要此治療的動物施用有效量之PCV2抗原的步驟。根據另一方面，向有需要之受檢者給予至少一個劑量之如上所述之免疫原性組合物的至少一次進一步投藥，其中該第二或任何進一步投藥系在初始或任何先前投藥后給予至少14天。免疫原性組合物優(yōu)選與免疫刺激物一起施用。該免疫刺激物優(yōu)選給予至少兩次。優(yōu)選地，在免疫刺激物之第一次投藥與第二次或任何進一步投藥之間為至少3天、更優(yōu)選至少5天、甚至更優(yōu)選至少7天。優(yōu)選地，在初始施用本文中提供之免疫原性組合物后給予免疫刺激物至少10天、優(yōu)選15天、甚至更優(yōu)選20天、甚至更優(yōu)選至少22天。優(yōu)選免疫刺激物為(例如)優(yōu)選用不完全佛氏佐劑(Freund' s adjuvant) (KLH/ICFA)乳化之匙孔螺血氰蛋白(keyhole limpet hemocyanin ;KLH)。然而，由此應了解亦可使用本領域技術人員已知之任何其它免疫刺激物。本文中術語"免疫刺激物"意謂優(yōu)選在未起始或增強特異性免疫反應(例如對抗特定病原體之免疫反應)之情況下，可觸發(fā)免疫反應之任何藥劑或組合物。進一步指示施用適合劑量之免疫刺激物。本發(fā)明亦涉及PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物用于制備藥物的用途，其中該藥物系用于免疫預防及治療動物之豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和/或與PRDC 相關之任何臨床跡象。PRDC或與PRDC相關之臨床跡象優(yōu)選系至少由PCV2、更優(yōu)選以及一或多種其它病原體造成，所述病原體系選自由PRRSV、豬肺炎支原體、胸膜肺炎放線桿菌、支氣管敗血性博德特氏菌、猿(Simian)流感病毒、豬鼻支原體、豬鏈球菌和/或多殺巴斯德氏菌組成的組。更優(yōu)選地，PCV2抗原為重組抗原、優(yōu)選PCV20RF-2、甚至更優(yōu)選Ingelvac' CircoFLEX 。本文所述〃動物〃意謂豬類(swine)、豬(pig)或仔豬(piglet)。因此，根據另一方面，本發(fā)明提供一種免疫預防及治療豬之豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和/或與PRDC相關之任何臨床跡象的方法，其包含向需要此治療之豬施用治療有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物的步驟。優(yōu)選地，PRDC系至少由PCV2、優(yōu)選以及至少一種已知造成PRDC之其它病原體(例如PRRSV、豬肺炎支原體、胸膜肺炎放線桿菌、支氣管敗血性博德特氏菌、豬流感病毒、豬鼻支原體、豬鏈球菌和/或多殺巴斯德氏菌)造成。PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物優(yōu)選為前述任一者，PCV2抗原最優(yōu)選為Ingeivac CircoFLEX 。優(yōu)選實施方式詳述以下實施例描述了本發(fā)明優(yōu)選的材料和方法。盡管在實施或測試本發(fā)明時可使用與本文所述類似或等效的任何方法和材料，但現在描述優(yōu)選的方法、裝置、以及材料。但應理解，這些實施例僅僅是舉例說明，不應被視為對本發(fā)明總體范圍的任何限制。實施例I制備PCV2 0RF-2 抗原將初始SF+細胞培養(yǎng)物從液氮儲存器中取出，在無菌旋轉燒瓶中的Excell 420培養(yǎng)基(JRH Biosciences, Inc. , Lenexa, KS)中懸浮培養(yǎng)，持續(xù)攪拌。使所述培養(yǎng)物在100-250mL旋轉燒瓶中含有25-150毫升Excell 420的無血清培養(yǎng)基中生長。當細胞增殖至細胞密度為I. 0-8. O X IO6細胞/ml時，將其以O. 5-1. 5 X IO6細胞/ml的種植密度分至新容器中。隨后使經過擴大培養(yǎng)的培養(yǎng)物在至多36升旋轉燒瓶中或在至多300升不銹鋼生物反應器中于25-29°C生長2-7天時間。
接種后，將燒瓶在27°C培育4小時。隨后，用含有PCV2 0RF-2基因(SEQ IDNO:4)的重組桿狀病毒對每個燒瓶進行接種。含有PCV2 0RF-2基因的重組桿狀病毒按WO06/072065所述制備。在接種桿狀病毒后，將所述燒瓶在27±2°C培育7天，期間以IOOrpm攪拌。所述燒瓶使用通風蓋以容許空氣流動。培育后，收獲所得上清液，將其過濾以移除細胞碎片并滅活。上清液通過將溫度升至37±2°C而滅活,添加二元氮丙唳(binary ethlylenimine, ΒΕΙ)至終濃度為5mM。隨后將樣品持續(xù)攪拌72-96小時。添加I. OM硫代硫酸鈉溶液，使最終最小濃度為5mM，以中和任何殘余BEI。在滅活后，添加約O. 5-2. 5毫克/劑的、經磷酸鹽緩沖液及Carpopol緩沖的PCV2 0RF-2。最終每一劑包含約16微克PCV2 0RF-2抗原。實施例2抗PCV-2免疫分析·
將WO 02/07721 所述 PK15 (例如 ATCC CCL-33)或 VIDO Rl 細胞接種至 96 孔板(約20. 000-60. 000個細胞/孔)。當單層約65%至85%鋪滿時，將細胞用PCV2分離物感染。將經感染的細胞培育48小時。移除培養(yǎng)基，用PBS將孔洗滌兩次。棄去洗滌緩沖劑，將細胞在約_20°C用冷50/50甲醇/丙酮固定劑(約100微升/孔)處理約15分鐘。棄去固定劑，所述板在空氣中干燥。在PBS中制備豬血清樣品的系列稀釋液，添加至所述板中，36. 5±1°C培育約I小時，若血清樣品中有抗體則能夠發(fā)生結合。抗PCV2的陽性及陰性對照樣品(陽性對照及陰性對照樣品)的系列稀釋液并行進行。隨后將所述板用PBS洗滌三次。棄去PBS。隨后將所述板用在PBS中以1:100稀釋的市售山羊抗豬FITC偶聯(lián)物染色，36. 5±1°C培育約I小時，這樣能夠檢測出與感染細胞結合的抗體。在培育完成后，自培育箱中移出微滴板，棄去偶聯(lián)物，用PBS將所述板洗兩次。通過UV顯微鏡檢讀板，將各孔讀為陽性或陰性。用陽性對照及陰性對照樣品監(jiān)測該測試系統(tǒng)。若對照在預期范圍內，則測試方法所用參數導致的結果是可接受的。用顯示特異性IFA反應性的最高稀釋度計算血清抗體效價，用適合的Reed-Muench公式計算每一稀釋度的陽性孔數或50%終點。實施例3PCV2 0RF-2 (Ingelvac CircoFLEXn)在 PRDC 治療中的功效目的此研究旨在證實Ingelvac' CircoFLEX控制PCV2相關PRDC的功效。研究的實施此研究中包括1542只普通豬(conventional pig),它們屬于三個連續(xù)周組(weekgroup)，每組有約500只豬。將這些豬按照體重、以及是否一窩所生區(qū)分開，隨機分配至一個疫苗接種組(n=769)及一個對照組(n=773)。-組I:在研究當天(第O天)，對約20日齡的豬進行單次肌肉接種，所接種的是，作為活性物質的含有PCV2 0RF-2蛋白(RP為I (每劑Iml))的Ingelvac CircoFLEX，及作為佐劑的Carbopol -組2:對照組接受Iml對照物品，其包含無PCV2 0RF-2蛋白的細胞培養(yǎng)物上清液及作為佐劑的Carbopol ,-組3:未經治療的豬。在肥育結束時(研究第22周)終止研究。
所記錄的參數參數記錄如下-個體體重(所有動物)-“僵豬(runt) ”率(所有動物)-臨床跡象(所有動物)-死亡率(所有動物)-血清中之PCV2病毒血癥病毒血癥之發(fā)作、結束、持續(xù)時間，病毒負載量(17%的研究動物)
-尸檢(若可能，每一只死亡或安樂死動物)農場之發(fā)病情況根據飼養(yǎng)及肥育農場的發(fā)病史，動物自肥育中期開始經歷與豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)相關之呼吸道癥狀。這些癥狀伴有肥育期間的體重增加程度降低(ADWG 750-780g)及死亡率增加(5. 5-6. 6%)。此時被認為涉及PRDC的病原體為PCV2、PRRSV、多殺巴斯德氏菌、支氣管敗血性博德特氏菌，有時還涉及SIV。此研究中還發(fā)現，豬肺炎支原體及豬鼻支原體與此疾病綜合征有關。有趣的是，此研究的結果表明，PRRSV和豬肺炎支原體的感染(infection)在PCV2病毒血癥發(fā)作的約4_6周前出現。然而，根據整個研究期間動物死亡數、以及PCV2病毒血癥發(fā)作前后呼吸道癥狀的頻率來看，這些動物一直未受這兩種感染性病原體影響(rather unaffected)。結果體重、體重增加、平均每日體重增加(ADWG)在研究啟始時兩個處理組之體重相當。在研究第17周及第22周，疫苗接種組之體重顯著高于安慰劑處理組之體重(分別為P=O. 0007及p〈0. 0001)。自研究啟始至研究第22周，疫苗接種組動物比安慰劑處理組動物多增重2. 8kg。此對應于，從研究啟始至研究第17周時疫苗接種組動物的ADWG高13g/d，至研究第22周時疫苗接種組動物的ADWG高18g/d。對于整個肥育期(研究第7-22周)而言，ADffG因此可從安慰劑處理組動物的777g/d(相當于過去的750-780g/d ADffG)增加至疫苗接種組動物的803g/d(表I及圖I)。表I :體重、體重增加及ADWG之比較(所有三個周組之匯集數據)
權利要求
1.PCV2抗原或含PCV2抗原的免疫原性組合物的制藥用途，所述藥物是用于預防動物的豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)和/或任何與PRDC相關的臨床跡象及治療動物的與PRDC相關的臨床跡象的藥物，其中與PRDC相關的臨床跡象選自由咳嗽及呼吸困難、生長緩慢、飼料效率降低、昏睡、厭食、病毒血癥和/或病毒負載組成的組。
2.權利要求I的用途，所述藥物以治療有效量施用需要此治療之動物。
3.權利要求I或2的用途，其中與PRDC相關的臨床跡象選自由咳嗽及呼吸困難、生長緩慢、飼料效率降低、昏睡、厭食和/或在肥育中期至后期死亡率顯著增加組成的組。
4.權利要求3的用途,其中該咳嗽及呼吸困難是難以用抗生素療法治愈的咳嗽及呼吸困難。
5.權利要求1-4之一的用途，其中該PRDC與PCV2感染相關。
6.權利要求5的用途，其中該PRDC由PCV2造成。
7.權利要求6的用途，其中該PRDC進一步與下列病原體的感染相關和/或由下列病原體的感染造成PRRSV、豬肺炎支原體(Mycoplasma hyopneumoniae)、支氣管敗血性博德特氏菌(Bordetella bronchiseptica)、豬流感病毒(Swine influenza virus)、胸膜肺炎放線桿菌(Actinobacillus pleuropneumoniae)、豬鼻支原體(Mycoplasma hyorhinis)、豬鏈球菌(Streptococcus suis)和 / 或多殺巴斯德氏菌(Pasteurella multocida)。
8.權利要求1-7之一的用途，其中該動物屬于PCV2陽性的畜群。
9.權利要求1-8之一的用途，其中該動物屬于PCV2及一或多種選自下組的其它病原體陽性的畜群PRRSV、豬肺炎支原體、支氣管敗血性博德特氏菌、豬流感病毒、豬鼻支原體、豬鏈球菌和/或多殺巴斯德氏菌。
10.權利要求1-9之一的用途，其中該動物屬于PCV2陽性農場的動物。
11.權利要求1-10之一的用途，其中該動物屬于PCV2及一或多種選自下組的其它病原體陽性的農場PRRSV、豬肺炎支原體、支氣管敗血性博德特氏菌、豬流感病毒、豬鼻支原體、豬鏈球菌和/或多殺巴斯德氏菌。
12.權利要求1-11之一的用途，其中該PCV2抗原是與PCV2的0RF-2具有至少80%同源性的多肽。
13.權利要求1-12之一的用途，其中該PCV-2抗原是由重組桿狀病毒表達的PCV20RF-2。
14.權利要求1-13之一的用途，其中該PCV2抗原為Ingelvac CircoFLEX 。
15.權利要求1-14之一的用途，其中該動物為豬。
全文摘要
本發(fā)明涉及治療豬呼吸道疾病綜合征。本發(fā)明涉及包含豬2型圓環(huán)病毒(PCV2)抗原的免疫原性組合物用于預防及治療動物、尤其豬的豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)的用途。
文檔編號A61K39/12GK102872457SQ201210377480
公開日2013年1月16日 申請日期2008年1月2日 優(yōu)先權日2007年1月3日
發(fā)明者維基.法欽格, 克努特.埃爾伯斯, 瑪麗昂.基克斯莫勒, 弗朗索瓦-澤維爾.奧維倫, 伊莎貝爾.弗賴因馮里奇索芬, 阿克塞爾.利謝夫斯基 申請人:貝林格爾.英格海姆維特梅迪卡有限公司