專利名稱：P53基因的新應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于生物制藥領域，涉及P53基因的新應用，更具體的涉及P53基因在制備治療血糖代謝異常性疾病藥物中的應用。
背景技術：
P53基因作為一種重要的腫瘤抑制基因，近三十多年以來，被各國學者廣泛研究，據(jù)報道，人類癌癥中約有一半是由于該基因發(fā)生突變失活而導致的。P53基因是因編碼一種分子量為53kDa的蛋白質而得名。其表達產物為基因調節(jié)蛋白(P53蛋白)，當DNA受到損傷時表達產物急劇增加，可抑制細胞周期進一步運轉。一旦P53基因發(fā)生突變，則會導致P53蛋白失活，細胞分裂失去節(jié)制，機體便發(fā)生癌變。因此p53能使癌細胞自殺，防止癌變；還具有幫助細胞基因修復缺陷的功能。P53的其他功能還在被陸續(xù)的發(fā)現(xiàn)中。 2003年，國產的重組人p53腺病毒注射液上市，商品名"今又生"，是世界上第一個獲準上市的腫瘤基因治療藥，它是由正常人P53腫瘤抑制基因和改構的5型腺病毒基因重組而成。前者是"今又生"發(fā)揮腫瘤治療作用的主體結構，后者主要起載體作用，攜帶治療基因P53進入腫瘤細胞內發(fā)揮作用。重組人p53腺病毒(rAd-p53)是一種廣譜的抗腫瘤藥物，目前已有多篇"今又生"治療全身各主要系統(tǒng)惡性實體瘤的研究論文在國內外發(fā)表。P53已經(jīng)作為治療腫瘤的基因藥物被廣泛應用，充分證明了其具有良好的安全性。糖尿病(diabetes)是由遺傳因素、免疫功能紊亂、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各種致病因子作用于機體導致胰島功能減退、胰島素抵抗等而引發(fā)的糖、蛋白質、脂肪、水和電解質等一系列代謝紊亂綜合征，臨床上以高血糖為主要特點，典型病例可出現(xiàn)多尿、多飲、多食、消瘦等表現(xiàn)，即“三多一少”癥狀。目前有研究已經(jīng)明確表明糖尿病的發(fā)病確與體內有易感基因或有缺陷基因存在有關。糖尿病(Diabetes)分一型糖尿病和二型糖尿病。在糖尿病患者中，二型糖尿病所占的比例約為95%。其中一型糖尿病人，因胰島素分泌缺乏，依賴外源性胰島素補充以維持生命。二型糖尿病人，體內產生胰島素的能力并非完全喪失，有的患者體內胰島素甚至產生過多，但胰島素的作用效果差，因此患者體內的胰島素可能處于一種相對缺乏的狀態(tài)?？梢酝ㄟ^某些口服藥物刺激體內胰島素的分泌。

發(fā)明內容
發(fā)明人在應用重組人p53腺病毒治療惡性腫瘤過程中，發(fā)現(xiàn)其對糖尿病血糖水平的影響。于是進行臨床基礎研究，經(jīng)多年的研究發(fā)現(xiàn)，P53基因具有調節(jié)血糖代謝異常，降低糖尿病病人的血糖水平的作用。此項研究不僅填補了國內外的空白，而且給糖尿病患者帶來了治愈的希望。經(jīng)過對P53基因的進一步研究和試驗，本發(fā)明所采用的技術方案如下本發(fā)明的一方面在于，公開P53基因的一種新應用即P53基因或者P53基因所編碼的P53蛋白，在制備治療血糖代謝異常性疾病藥物，或者制備有效改善病人因血糖代謝異常而繼發(fā)的綜合征的藥物中的應用。
本發(fā)明中，對于上文所述的血糖代謝異常性疾病主要是指糖尿病，尤其是在治療二型糖尿病中的應用。對于上文所述的P53基因的應用，最為優(yōu)選的情況下，所述的P53基因藥物是指重組人P53腺病毒。本發(fā)明實施例中所應用的重組人P53腺病毒注射液是市售的，由深圳市賽百諾基因技術有限公司生產的國藥準字號商品。本發(fā)明實施例的內容中數(shù)據(jù)證明了 重組人P53腺病毒注射液在治療二型糖尿病方面的應用，效果顯著。除了上文所述的重組人P53腺病毒之外，本領域技術人員也可以通過將P53基因與其他基因載體重組，從而制備出具有有效控制病人血糖代謝異常的藥物，或者制備因血糖代謝異常而繼發(fā)的綜合征的藥物，即調節(jié)病人血糖水平的藥物。對于上文所述的藥物，其劑型可以為注射劑型或口服劑型。作為產品新應用的開發(fā)，本發(fā)明中選擇了由深圳市賽百諾基因技術有限公司生產的，國藥準字S20040004，重組人P53腺病毒注射液，并且針對二型糖尿病小鼠模型——db/db鼠，研究p53基因降糖作用。同時，在實施例中還提供了 6例二型糖尿病病人的應用效果對照數(shù)據(jù)(治療前病人簽署特殊用藥使用同意書)。進而，從多方面證明了所述的P53基因藥物的應用效果。本領域技術人員可以依據(jù)本發(fā)明實施例的數(shù)據(jù)，對藥物的應用劑量和給藥間隔，用藥療程等因素，進行合理的改變并通過有限次的試驗獲得更多的數(shù)據(jù)。其他的任何未背離本發(fā)明的精神實質與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應為等效的置換方式，都應該包含在本發(fā)明的保護范圍之內。本發(fā)明實施例中，對二型糖尿病病人的治療方法為按照O天、2天、4天、6天的時間間隔，每人每次的治療劑量為重組人P53腺病毒注射液2 4X1012VP，加入至IOOml生理鹽水中，靜脈點滴，效果顯著。本發(fā)明實施例中，雖然未涉及一型糖尿病以及其他血糖代謝異常性疾病的具體實施例，但依照血糖代謝異常性疾病發(fā)病機制中存在基因缺陷的研究結論，申請人合理預期P53基因對于一型糖尿病以及其他血糖代謝異常性疾病也將有良好的治療作用，都應該包含在本發(fā)明的保護范圍之內。關于作用機理依賴于相關多領域基因水平進一步研究的進 展，從而推動在分子水平上更詳盡的探索體內糖代謝過程中的相關酶和調節(jié)因子的編碼基因與P53基因作用關系，這也是發(fā)明人希望看到的學術意義。有益效果此項研究提出了對于糖尿病治療的新思路，結合糖尿病發(fā)病機制基因水平的研究成果與P53基因所具有的對多組下游基因的調節(jié)作用，從而給糖尿病患者帶來了治愈的希望。P53基因或者P53基因所編碼的P53蛋白，屬于基因工程、生物技術制藥領域的產品，其藥物的生產工藝簡單，易于擴大規(guī)模生產，工藝條件容易控制，生產周期短。
具體實施例方式下述非限制性實施例可以使本領域的普通技術人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。實施例I一、材料
I、受試物重組人P53腺病毒注射液，國藥準字S20040004，主要成分重組腺病毒-P53基因顆粒；輔料三羥基氨基甲烷，丙三醇。規(guī)格1X1012VP/支。購自市售的重組人P53腺病毒注射液，由深圳市賽百諾基因技術有限公司生產，批號20070901。2、動物db/db鼠二型糖尿病小鼠模型，購自南京鵬晟生物科技發(fā)展有限公司，研究p53基因的降血糖作用。db/m小鼠購自南京鵬晟生物科技發(fā)展有限公司，為正常小鼠對照組。二、方法
取6周齡db/db鼠50只，體重45. 8 ±3. 3g,隨機分成五組，每組10只，分別為p53基因低劑量組，P53基因高劑量組，吡格列酮組，腺病毒組，模型組。另取db/m小鼠10只，體重26. 55±2. 32g，為正常組。具體的分組情況如下①p53基因低劑量組，腹腔注射重組人p53腺病毒注射液，計量為2. 5 X 1010VP/kgbw ；②p53基因高劑量組，腹腔注射重組人p53腺病毒注射液，計量為5X 101C)VP/kgbw ；③腺病毒組腹腔注射作為p53基因載體的單純腺病毒(由深圳市賽百諾基因技術有限公司無償提供)，計量為5X101(lVP/kg bw ；④吡格列酮組，灌胃給藥鹽酸吡格列酮片(市購，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司生產，國藥準字H20040631)計量為4mg/kg bw ；⑤模型組和正常組，腹腔注射生理鹽水，計量為10ml/kg. bw。各組均按照O天、2天、4天、6天給藥。于28天后檢測空腹血糖，數(shù)據(jù)應用SPSS10. O統(tǒng)計軟件分析，檢驗水準為p〈0. 05時，差異有統(tǒng)計學意義。三、結果p53基因對db/db鼠空腹血糖的影響結果見表1，從表中統(tǒng)計的數(shù)據(jù)可知與正常組相比，模型組空腹血糖明顯升高(p〈0. 05)。P53基因組和吡格列酮組與模型組比較，空腹血糖明顯下降(p〈0. 05)。表1ρ53基因對db/db鼠空腹血糖的影響
組別n 試驗前(mmol/L) 試驗后(mmol/L)
正常組109.17士0.459.15±0.65
模型組1020.32±1.0521.02±1.12腺病毒組1021.18 士 1.0221.53士 1.12 吡格列酮組 10 21.37士 1.25 16.48士 0.83
P53 基因低劑量組 1021.28±1.3315.61±1.01
P53 基因高劑量組 1021.08±0.7713.37士0.87
四、結果分析本發(fā)明均以db/db鼠為研究對象，結果分析如下I、正常組、模型組和腺病毒組中，無論是腹腔注射生理鹽水還是單純腺病毒制劑均無降低空腹血糖作用。2、吡格列酮組給藥后具有降低血糖作用，說明本研究對象一db/db鼠對降糖治 療藥物具有良好反應性。3、無論是P53基因低劑量組還是高劑量組，腹腔注射P53基因后，db/db鼠空腹血糖均顯著下降(P < O. 05)，表明P53基因經(jīng)腹腔注射方法治療二型糖尿病動物模型是有效的。但最佳的P53基因給藥濃度還需要進一步研究。本發(fā)明結果結果顯示，重組人p53腺病毒注射液中只具有載體作用的腺病毒單獨應用并無治療二型糖尿病作用。但重組人P53腺病毒注射液經(jīng)腹腔注射具有確切的降低db/db鼠的空腹血糖水平作用。上述結果可以證實，重組人p53腺病毒注射液中P53基因對二型糖尿病具有治療作用，而且，重組人P53腺病毒注射液中P53基因是治療的關鍵因素。本發(fā)明為擴大重組人P53腺病毒注射液治療疾病的適應癥，即重組人p53腺病毒注射液具有治療二型糖尿病作用提供可靠的實驗依據(jù)。實施例2一、材料I、受試物重組人P53腺病毒注射液，國藥準字S20040004，主要成分重組腺病毒-P53基因顆粒；輔料三羥基氨基甲烷，丙三醇。規(guī)格1X1012VP/支。購自市售的重組人P53腺病毒注射液，由深圳市賽百諾基因技術有限公司生產，批號20070901。2、治療人群二型糖尿病病人6例，均為男性，年齡43 76歲，平均56. 7歲。空腹血糖8. 9 12. 3umol/L，平均10. 6umol/L，均使用胰島素治療，應用胰島素時間為I 5年，平均2.6年，胰島素用量12u 48u，平均每天用量為26u。治療前病人簽署特殊用藥使用同意書。治療方法重組人P53腺病毒注射液2 4X IO12VP,加入IOOml生理鹽水中，按照O天、2天、4天、6天，靜點。治療中并發(fā)熱，最高至39. 7，經(jīng)常規(guī)支持、對癥治療。I個月后復查空腹血糖，經(jīng)自身對照，均有不同程度下降，隨訪3個月，病情穩(wěn)定，停止應用胰島素。統(tǒng)計結果見表2 表2 二型糖尿病病人的應用效果統(tǒng)計數(shù)據(jù)
權利要求
1.P53基因的新應用，其特征在于利用P53基因或者P53基因所編碼的P53蛋白，在制備治療血糖代謝異常性疾病的藥物，或者制備因血糖代謝異常而繼發(fā)的綜合征的藥物中的應用。
2.根據(jù)權利要求I所述的P53基因的新應用，其特征在于所述的血糖代謝異常性疾病是指糖尿病。
3.根據(jù)權利要求2所述的P53基因的新應用，其特征在于所述的糖尿病為二型糖尿病。
4.根據(jù)權利要求I或2所述的P53基因的新應用，其特征在于所述的P53基因藥物是指重組人P53腺病毒。
5.根據(jù)權利要求I或2所述的P53基因的新應用，其特征在于所述的藥物，其劑型為注射劑型或口服劑型。
全文摘要
本發(fā)明公開一種p53基因的新應用，更具體的涉及P53基因在制備治療糖代謝異常性疾病藥物中的應用，本發(fā)明屬于生物制藥領域。本發(fā)明的實施例中，以db/db鼠為研究對象，證實p53基因具有良好降糖作用。繼而，又治療了6例二型糖尿病病人，同樣獲得顯著療效。結合近年來對于糖尿病發(fā)病機制基因水平的研究結論和p53基因作為體內關鍵的異?；虻恼{控基因，相信其通過調控異常糖代謝過程中相關調節(jié)因子對應的編碼基因的方法，獲得對異常糖代謝的糾正。本發(fā)明解決了糖代謝異常類疾病的基因治療問題。公開了p53基因在糖尿病的治療方面有廣泛的應用前景。
文檔編號A61P3/10GK102895676SQ201210417288
公開日2013年1月30日 申請日期2012年10月26日 優(yōu)先權日2012年10月26日
發(fā)明者張躍偉 申請人:張躍偉