專利名稱：廣藿香醇的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及廣藿香醇的新用途。
背景技術(shù)：
腺病毒AdV (Adneovirus),是無包膜雙鏈DNA病毒，由一個(gè)二十面體的蛋白質(zhì)外殼所包裹。腺病毒主要感染多種脊椎動物，當(dāng)中包括人類。其中，人腺病毒(Humanadenovirus, HAdv),屬于哺乳動物腺病毒屬。目前發(fā)現(xiàn)的HAdv有56個(gè)型別，分為7個(gè)種(A-G)，其中，B種腺病毒與人類致病性密切相關(guān)，尤其是B種腺病毒中的人3型腺病毒(又名人源腺病毒3型，HAdv-3)具有更高的毒性并且與嚴(yán)重的臨床癥狀相關(guān)(張其威，等，人3型腺病毒GZ13株的分離鑒定及六鄰體蛋白的分子進(jìn)化研究)。
目前發(fā)現(xiàn)，腺病毒是兒童呼吸道感染的常見病毒，可引起咽炎、結(jié)膜炎、肺炎、腦炎、角膜炎、腸炎等，還可致終年性、流行性感染，容易在幼兒園、學(xué)校和軍營新兵中暴發(fā)流行。腺病毒感染，多見于小于3歲的嬰幼兒，年齡越小越易感染。最常引起的感染性疾病是咽扁桃體炎，其次為肺炎、胃腸炎、支氣管炎及中耳炎等，嚴(yán)重者可并發(fā)肺外臟器損害，包括肝炎、腦炎、結(jié)膜炎及凝血功能異常，預(yù)后較差。其中，腺病毒肺炎是嬰幼兒肺炎的嚴(yán)重類型，曾于1958年、1963年在我國北方流行，病死率甚高。20世紀(jì)90年代以來，研究人員發(fā)現(xiàn)不少新的抗病毒藥物，目前在臨床上應(yīng)用的抗病毒藥物已超過20余種，但其確切療效仍有很大爭議。因?yàn)椴《臼羌纳谒拗骷?xì)胞內(nèi)，要保證抗病毒的藥物具有高度選擇性，既要能進(jìn)入細(xì)胞，選擇性地有效干擾病毒的復(fù)制過程，又要避免傷害宿主細(xì)胞，這是抗病毒尤其呼吸道病毒西藥中多存在選擇性高和毒副作用高的主要原因。如阿昔洛韋，對哺乳動物宿主細(xì)胞有一定毒性，大劑量注射可致動物睪丸萎縮和精子數(shù)減少。因此，抗病毒藥物的研究具有重要的實(shí)際意義，尋找一種高效、安全、副作用少的抗病毒藥物的研究勢在必行。廣藿香醇，為廣藿香揮發(fā)油的主要成分，是歷版《中國藥典》規(guī)定的評價(jià)廣藿香藥材及廣藿香油質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的指標(biāo)性成分。廣藿香醇又稱百秋李醇，是一種存在天然植物中的三環(huán)倍半萜化合物，其分子式為C15H26O,分子量為222. 37，結(jié)構(gòu)如下
CH3
K中個(gè)、
HgG CH^廣藿香醇單體為無色晶體，有較淡的廣藿香香氣，其熔點(diǎn)為55 56°C，沸點(diǎn)2800C (常壓下)，相對密度為I. 0284，旋光度-97. 4° (c = 24，氯仿);不溶于水，溶于醇、醚和常用有機(jī)溶劑。現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)表明，廣藿香醇具有抗炎、抑菌、抗雛蟲、抗氧化、拮抗鈣離子異常升高等藥理活性，有一定的新藥開發(fā)價(jià)值。目前，還未見使用廣藿香醇抗腺病毒以及治療腺病毒感染性疾病的相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供廣藿香醇的醫(yī)藥新用途。本發(fā)明提供了廣藿香醇在制備抗腺病毒的藥物中的用途。其中，所述腺病毒為哺乳動物腺病毒。進(jìn)一步地，所述腺病毒為人腺病毒。更進(jìn)一步地，所述腺病毒為人腺病毒B亞群。 進(jìn)一步優(yōu)選地,所述腺病毒為人源腺病毒3型Human adenovirus 3。其中，所述藥物是治療腺病毒感染性疾病的藥物。進(jìn)一步地，所述藥物是治療腺病毒所致的呼吸道感染性疾病、眼部感染性疾病或胃腸道感染性疾病的藥物。進(jìn)一步地，所述呼吸道感染疾病是鼻炎、咽炎、扁桃體炎、喉炎、氣管炎或/和支氣管炎。其中，所述藥物是由廣藿香醇為活性成分，加入藥學(xué)上常用的輔料制備而成的制劑。進(jìn)一步地，所述制劑為口服制劑、注射制劑或外用制劑。廣藿香醇能夠有效抑制人3型腺病毒合成，具有一定的抗腺病毒作用，可用于治療腺病毒感染性疾病，尤其是人3型腺病毒感染性疾病；同時(shí)，廣藿香醇對宿主細(xì)胞毒性遠(yuǎn)低于陽性藥物阿昔洛韋，毒副作用更低，為臨床用藥提供了一種安全有效的新選擇。
具體實(shí)施例方式廣藿香醇，可通過購買市售商品得到，也可通過現(xiàn)有分離純化方法制備得到。本發(fā)明具體實(shí)施方式
中所用廣藿香醇，經(jīng)鑒定后，純度大于95%。實(shí)施例I抗病毒制劑的制備取廣藿香醇，加入適量可溶性淀粉、糊精，制粒，即得本發(fā)明抗病毒顆粒劑。實(shí)施例2廣藿香醇抗腺病毒的作用I、材料及儀器I. I細(xì)胞株和病毒株I. I. I 細(xì)胞株Hep-2細(xì)胞(人喉癌上皮細(xì)胞)，購自中國藥品與生物制品檢定所。I. I. 2 病毒株腺病毒選用常見的人3型腺病毒(HAdv-3)，是由甘肅省疾控中心饋贈的臨床分離株。I. 2藥物及對照藥物試驗(yàn)藥物廣藿香醇。陽性藥物注射用阿昔洛韋規(guī)格為O. 25g/瓶，天津藥業(yè)焦作有限公司生產(chǎn)。批準(zhǔn)文號國藥準(zhǔn)字H20034034，生產(chǎn)批號10122403。
I. 3培養(yǎng)基、試劑及耗材DMEM培養(yǎng)基(Gibco 公司，批號1345538);胎牛血清(HyClone生物化學(xué)制品(北京)有限公司，批號NVM0347);胰蛋白酶(Amresco公司);青霉素G鈉、鏈霉素?zé)o菌細(xì)胞培養(yǎng)瓶和96孔細(xì)胞培養(yǎng)板(美國Corning公司)。l、5、10ml —次性吸管，200 μ I、Iml —次性槍頭(江蘇海門生物耗材公司)I. 4主要儀器隔水式恒溫CO2培養(yǎng)箱(型號MC0-15AC,日本三洋公司)；酶標(biāo)儀(型號Varioskan Flash,美國 Thermo Scientific 公司)；OLYMPUS倒置顯微鏡(型號CKX41，日本奧林巴斯公司)；微量移液器(法國GILSON公司生產(chǎn))； 隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱(型號GSV-DA-I，湖北省黃石市醫(yī)療器械廠)；水平離心機(jī)(型號LXJ-II，上海醫(yī)用分析儀器廠)；電子天平(型號JA-2603，上海天平儀器廠)2、試驗(yàn)方法2. I藥物及陽性對照的前處理將廣藿香醇先與大豆油以2:1的體積比混合，然后加O. 5%吐溫-80助溶為白色液體制劑，其初始濃度為100mg/ml,過濾除菌后備用。將用于腺病毒的陽性對照藥物注射用阿昔洛韋用無菌水做1/10稀釋(S卩IOmg/ml)以備用。2. 2 50%組織細(xì)胞感染劑量的測定腺病毒用3%胎牛血清DMEM，稀釋成不同濃度的病毒液。腺病毒接種!fep-2細(xì)胞，于37°C，5%C02孵箱中培養(yǎng)7d后觀察感染細(xì)胞圓縮、脫落等細(xì)胞病變(cytopathiceffect，CPE)情況，以測定各病毒引起50%組織細(xì)胞病變的感染劑量(50%tissue culture infective dose, TCID50X2. 3細(xì)胞毒性測定將配制好備用的廣藿香醇預(yù)先100倍稀釋，然后與陽性對照藥阿昔洛韋用DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液做連續(xù)對倍稀釋，共7個(gè)稀釋濃度，加入到Hep-2單層細(xì)胞中，不同稀釋度各藥物均重復(fù)3孔。37°C、5%C02培養(yǎng)5天，每天觀察細(xì)胞病變情況(CPE)。以引起半數(shù)細(xì)胞發(fā)生病變的藥物濃度判定為半數(shù)毒性濃度(TC5tl),以完全不引起細(xì)胞發(fā)生病變的藥物濃度判定為最大無毒濃度(TCtl)15實(shí)驗(yàn)設(shè)連續(xù)對倍稀釋的0. 5%吐溫-80和正常細(xì)胞對照。2. 4抗病毒實(shí)驗(yàn)根據(jù)病毒的復(fù)制周期，設(shè)計(jì)廣藿香醇抗病毒作用的三種途徑，每種病毒進(jìn)行三組給藥途徑實(shí)驗(yàn)，每一組都設(shè)正常細(xì)胞對照組、病毒對照組和陽性藥物對照組。具體操作如下2. 4. I藥物抗病毒生物合成實(shí)驗(yàn)(先上毒)將100μ 1XTCID50的相應(yīng)病毒液加入生長完好的對應(yīng)單層細(xì)胞培養(yǎng)板中，37°C，5%C02孵育2h后，棄去病毒液，再加入不同濃度的廣藿香醇液100 μ I和細(xì)胞維持液繼續(xù)培養(yǎng)。2. 4. 2藥物抗病毒吸附實(shí)驗(yàn)(先上藥)
將不同濃度的廣藿香醇培養(yǎng)液100μ I加入生長完好的單層細(xì)胞培養(yǎng)板中，37°C，5%C02孵育2h后，棄去含藥培養(yǎng)液，再加入100 μ I X TCID50的相應(yīng)病毒液，37°C，5%C02孵育2h后，棄去病毒液，再加入細(xì)胞維持液繼續(xù)培養(yǎng)。2. 4. 3藥物直接作用實(shí)驗(yàn)(中和)將不同濃度的100μ I廣藿香醇培養(yǎng)液和100μ 1XTCID50的相應(yīng)病毒液混合，37°C，5%C02孵育2h后，再加入到生長完好的對應(yīng)單層細(xì)胞培養(yǎng)板中，37°C，5%C02孵育2h后，棄去含藥與病毒培養(yǎng)液，再加入細(xì)胞維持液繼續(xù)培養(yǎng)。各培養(yǎng)板于37°C、5%C02繼續(xù)培養(yǎng)5d，每天顯微鏡下觀察CPE。應(yīng)用Reed-Muench法計(jì)算各藥物的50%細(xì)胞病變抑制濃度(50%inhibiting concentration, IC50),以藥物最高稀釋度出現(xiàn)的IC50值作為抗病毒效果判斷的終點(diǎn)。以上廣藿香醇的每個(gè)濃度做3個(gè)復(fù)孔，每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。
3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果及藥效學(xué)指標(biāo)計(jì)算3. I各病毒的TCID5。值腺病毒Ad-3接種Hep-2細(xì)胞后約5天出現(xiàn)CPE。腺病毒Ad_3的TCID5tl效價(jià)均為1(Γ12。3. 2廣藿香醇的細(xì)胞毒性在受試時(shí)間內(nèi)，正常對照孔的細(xì)胞形態(tài)正常。廣藿香醇對三種細(xì)胞的毒性試驗(yàn)結(jié)果見表I。表I廣藿香醇和阿昔洛韋的細(xì)胞毒性測定結(jié)果
權(quán)利要求
1.廣藿香醇在制備抗腺病毒的藥物中的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的用途，其特征在于所述腺病毒為哺乳動物腺病毒。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于所述腺病毒為人腺病毒。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于所述腺病毒為人腺病毒B亞群。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于所述腺病毒為人源腺病毒3型Humanadenovirus 3。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的用途，其特征在于所述藥物是治療腺病毒感染性疾病的藥物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用途，其特征在于所述藥物是治療腺病毒所致的呼吸道感染性疾病、眼部感染性疾病或胃腸道感染性疾病的藥物。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用途，其特征在于所述呼吸道感染疾病是鼻炎、咽炎、扁桃體炎、喉炎、氣管炎或/和支氣管炎。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的用途，其特征在于所述藥物是由廣藿香醇為活性成分，加入藥學(xué)上常用的輔料制備而成的制劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的用途，其特征在于所述制劑為口服制劑、注射制劑或外用制劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了廣藿香醇在制備抗腺病毒的藥物中的用途。廣藿香醇能夠有效抑制人3型腺病毒合成，具有一定的抗腺病毒作用，可用于治療腺病毒感染性疾病，尤其是人3型腺病毒感染性疾?。煌瑫r(shí)，廣藿香醇對宿主細(xì)胞毒性遠(yuǎn)低于陽性藥物阿昔洛韋，毒副作用更低，為臨床用藥提供了一種安全有效的新選擇。
文檔編號A61P31/20GK102895218SQ20121042129
公開日2013年1月30日 申請日期2012年10月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月29日
發(fā)明者彭成, 魏曉露, 熊亮, 萬峰 申請人:成都中醫(yī)藥大學(xué)