專利名稱：藥物綴合物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及包含與類美坦素(maytansinoid)化學(xué)偶聯(lián)的抗體的綴合物和其使用方法。
背景技術(shù)：
隨著更有效靶向和殺死癌細(xì)胞的藥物的開發(fā)，癌癥的治療已經(jīng)取得顯著的進(jìn)展。為此，研究人員利用被癌細(xì)胞選擇性表達(dá)的細(xì)胞表面受體和抗原來開發(fā)基于結(jié)合腫瘤-特異性或腫瘤-相關(guān)性抗原的抗體的藥物。在這一點(diǎn)上，已經(jīng)使細(xì)胞毒性分子、例如細(xì)菌與植物毒素、放射性核素和某些化療藥物在化學(xué)上與結(jié)合腫瘤-特異性或腫瘤-相關(guān)性細(xì)胞表面抗原的單克隆抗體連接(例如參見國(guó)際(PCT)專利申請(qǐng)NO.W000/02587、W002/060955 和 W002/092127，美國(guó)專利 5，475，092,6, 340，701,6, 171，586，美國(guó)專利申請(qǐng)公報(bào) No. 2003/0004210A1，和 Ghetie 等人，J. Immunol. Methods, 112，267-277 (1988))。這類化合物通常分別被稱為毒素、放射性核素和藥物“綴合物(conjugate) ”。經(jīng)常，它們也被稱為免疫綴合物、放射性免疫綴合物和免疫毒素。腫瘤細(xì)胞的殺死發(fā)生在藥物綴合物與腫瘤細(xì)胞的結(jié)合和類美坦素細(xì)胞毒性活性的活化之后。由藥物綴合物所提供的選擇性減少對(duì)正常細(xì)胞的毒性，由此增強(qiáng)藥物在患者中的耐受性。盡管藥物綴合物提供腫瘤選擇性，不過藥物綴合物在臨床背景下的應(yīng)用仍然受到一些因素的限制。在這方面，藥物綴合物制劑通?；诳贵w的已知制劑，從該制劑制造藥物綴合物，而沒有考慮所綴合的細(xì)胞毒性分子可能對(duì)抗體穩(wěn)定性具有什么影響。因此，目前的藥物綴合物組合物不如含有單獨(dú)腫瘤-特異性抗體的組合物那么穩(wěn)定。因而，鑒于上述，仍然需要含有高度細(xì)胞毒性藥物的藥物綴合物組合物，它們比目前可用的藥物綴合物組合物更穩(wěn)定。也仍然需要使用這類藥物綴合物組合物治療與細(xì)胞增殖有關(guān)的人類疾病、例如癌癥的方法。本發(fā)明提供這樣一種組合物和方法。本發(fā)明的這些和其他優(yōu)點(diǎn)以及另外的發(fā)明特征將因本文所提供的發(fā)明說明而顯而易見。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供組合物，包含(i)治療有效量的綴合物，包含與類美坦素化學(xué)偶聯(lián)的抗體，(ii)緩沖劑，(iii)張力調(diào)節(jié)量(滲透壓調(diào)節(jié)量，tonicifying amount)的氯化鈉，(iv)水，和可選的(V)表面活性劑，其中該組合物具有約5-6的pH。本發(fā)明也提供凍干組合物，包含(i)治療有效量的綴合物，包含與類美坦素化學(xué)偶聯(lián)的抗體，( )緩沖劑，(iii)低溫保護(hù)劑(冷凍保護(hù)劑,cryoprotectant), (iv)填充劑,和可選的(V)表面活性劑，其中當(dāng)用水重構(gòu)時(shí)該組合物具有約5-6的pH。本發(fā)明進(jìn)一步提供殺死人體細(xì)胞的方法，包含對(duì)人體給予兩種上述組合物之一，以便抗體與細(xì)胞表面結(jié)合，激活類美坦素的細(xì)胞毒性，由此殺死細(xì)胞。因此，本發(fā)明具體地涉及I、組合物，包含(i)治療有效量的綴合物，該綴合物包含與類美坦素化學(xué)偶聯(lián)的抗體，( )緩沖劑，(iii)表面活性劑，(iv)張力調(diào)節(jié)量的氯化鈉，和(V)水，其中該組合物具有約5-6的pH。2、根據(jù)第I項(xiàng)的組合物，其中該綴合物在組合物中的濃度是約O. lmg/mL至約5mg/
mLo3、根據(jù)第2項(xiàng)的組合物，其中該綴合物在組合物中的濃度是約lmg/mL或以上。4、根據(jù)第2項(xiàng)的組合物，其中該綴合物在組合物中的濃度是約5mg/mL。5、根據(jù)第1-4項(xiàng)任一項(xiàng)的組合物，其中該緩沖劑選自由檸檬酸鹽緩沖劑、乙酸鹽緩沖劑、琥珀酸鹽緩沖劑、磷酸鹽緩沖劑和組氨酸緩沖劑組成的組。6、根據(jù)第5項(xiàng)的組合物，其中該緩沖劑在組合物中的濃度是約2mM至約50mM。7、根據(jù)第6項(xiàng)的組合物，其中該組合物包含濃度約IOmM的檸檬酸鈉緩沖劑，該組合物的PH是約5.5。8、根據(jù)第1-7項(xiàng)任一項(xiàng)的組合物，其中該表面活性劑是聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。9、根據(jù)第8項(xiàng)的組合物，其中該表面活性劑在組合物中的濃度占組合物總體積的約 O. 002%至約 O. 1%ο10、根據(jù)第9項(xiàng)的組合物，其中該表面活性劑是聚山梨醇酯20。11、根據(jù)第10項(xiàng)的組合物，其中聚山梨醇酯20在組合物中的濃度占組合物總體積的約O. 01%。12、根據(jù)第1-11項(xiàng)任一項(xiàng)的組合物，其中氯化鈉在組合物中的濃度是約50mM至約500mMo13、根據(jù)第12項(xiàng)的組合物，其中氯化鈉在組合物中的濃度是約IOOmM至約200mM。14、根據(jù)第13項(xiàng)的組合物，其中氯化鈉在組合物中的濃度是約120mM。15、根據(jù)第I項(xiàng)的組合物，其中該組合物包含(i)約5mg/mL綴合物，包含與DMl化學(xué)偶聯(lián)的huN901，(ii)約IOmM檸檬酸鈉緩沖劑，(iii)約O. 01 %聚山梨醇酯20，(iv)約1200mM氯化鈉，和(V)水，其中組合物的pH是約5. 5。16、根據(jù)第I項(xiàng)的組合物，其中該組合物包含(i)約lmg/mL或以上綴合物，包含與DMl化學(xué)偶聯(lián)的huMy9-6，(ii)約IOmM檸檬酸鈉緩沖劑，(iii)約O. 01 %聚山梨醇酯20，(iv)約135mM氯化鈉，和(V)水，其中組合物的pH是約5. 5。17、根據(jù)第I項(xiàng)的組合物，其中該組合物包含⑴約lmg/mL或以上綴合物，包含與DM4化學(xué)偶聯(lián)的huMy9-6，(ii)約IOmM檸檬酸鈉緩沖劑，(iii)約O. 01 %聚山梨醇酯20，(iv)約135mM氯化鈉，和(V)水，其中組合物的pH是約5. 5。18、根據(jù)第1-17項(xiàng)任一項(xiàng)的組合物，其中該組合物進(jìn)一步包含抗氧化劑。19、根據(jù)第18項(xiàng)的組合物，其中該抗氧化劑在組合物中的濃度是約100 μ M至約IOOmM020、根據(jù)第19項(xiàng)的組合物，其中該抗氧化劑選自由超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶、生育三烯酚、多元酚、鋅、錳、硒、維生素C、維生素Ε、β胡蘿下素、半胱氨酸和甲 硫氨酸組成的組。21、根據(jù)第20項(xiàng)的組合物，其中該抗氧化劑是甲硫氨酸。22、根據(jù)第21項(xiàng)的組合物，其中甲硫氨酸在組合物中的濃度是約10mM。23、根據(jù)第1-22項(xiàng)任一項(xiàng)的組合物，其中該組合物包含蔗糖。24、根據(jù)第23項(xiàng)的組合物，其中蔗糖在組合物中的濃度占組合物總體積的約 O. 1% 至約 10%。25、根據(jù)第24項(xiàng)的組合物，其中蔗糖在組合物中的濃度占組合物總體積的約5%。26、帶包裝的組合物，包含密封的容器和分散其中的根據(jù)第1-26項(xiàng)任一項(xiàng)的組合 物和惰性氣體覆蓋層。27、根據(jù)第26項(xiàng)的帶包裝的組合物，其中該惰性氣體是氮或氬。28、殺死人體細(xì)胞的方法，包含對(duì)人體給予一種組合物，該組合物包含(i)治療有 效量的綴合物，該綴合物包含與類美坦素化學(xué)偶聯(lián)的抗體，(ii)緩沖劑，(iii)表面活性 齊U，(iv)張力調(diào)節(jié)量的氯化鈉，和(V)水，其中該組合物具有約5-6的pH，以便抗體與細(xì)胞 表面結(jié)合，激活類美坦素的細(xì)胞毒性，由此殺死細(xì)胞。29、根據(jù)第28項(xiàng)的方法，其中該綴合物在組合物中的濃度是約O. lmg/mL至約5mg/
mLo30、根據(jù)第29項(xiàng)的方法，其中該綴合物在組合物中的濃度是約lmg/mL或以上。31、根據(jù)第29項(xiàng)的方法，其中該綴合物在組合物中的濃度是約5mg/mL。32、根據(jù)第28-31項(xiàng)任一項(xiàng)的方法，其中該表面活性劑是聚山梨醇酯20或聚山梨 醇酯80。33、根據(jù)第29項(xiàng)的方法，其中該表面活性劑是聚山梨醇酯20。34、根據(jù)第28-33項(xiàng)任一項(xiàng)的方法，其中該組合物進(jìn)一步包含抗氧化劑。35、根據(jù)第34項(xiàng)的方法，其中該抗氧化劑選自由超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧 化物酶、生育三烯酚、多元酚、鋅、錳、硒、維生素C、維生素Ε、β胡蘿卜素、半胱氨酸和甲硫 氨酸組成的組。36、根據(jù)第35項(xiàng)的方法，其中該抗氧化劑是甲硫氨酸。37、根據(jù)第28-36項(xiàng)任一項(xiàng)的方法，其中該組合物包含蔗糖。38、凍干組合物，包含(i)治療有效量的綴合物，該綴合物包含與類美坦素化學(xué)偶 聯(lián)的抗體，( )緩沖劑，(iii)表面活性劑，(iv)低溫保護(hù)劑，和(V)填充劑，其中當(dāng)用水重 構(gòu)時(shí)該組合物具有約5-6的pH。39、根據(jù)第1-14項(xiàng)任一項(xiàng)或根據(jù)第38項(xiàng)的組合物，其中該抗體是單克隆抗體。40、根據(jù)第39項(xiàng)的組合物，其中該抗體是人源化單克隆抗體。41、根據(jù)第39項(xiàng)的組合物，其中該抗體選自由huN901、huMy9_6、huB4、huC242、 trastuzumab、bivatuzumab、sibrotuzumab 和 rituximab 組成的組。42、根據(jù)第1-14項(xiàng)任一項(xiàng)或根據(jù)第38-41項(xiàng)任一項(xiàng)的組合物，其中該類美坦素包 含硫醇基團(tuán)。43、根據(jù)第42項(xiàng)的組合物，其中該類美坦素是DMl。44、根據(jù)第42項(xiàng)的組合物，其中該類美坦素是DM4。
45、根據(jù)第1-14項(xiàng)任一項(xiàng)或根據(jù)第38_44項(xiàng)任一項(xiàng)的組合物，其中該抗體與類美坦素經(jīng)由化學(xué)鍵化學(xué)偶聯(lián)，該化學(xué)健選自由二硫健、酸不穩(wěn)定健、光不穩(wěn)定鍵、肽酶不穩(wěn)定鍵、硫醚鍵和酯酶不穩(wěn)定鍵組成的組。46、根據(jù)第38-45項(xiàng)任一項(xiàng)的組合物，其中該緩沖劑選自由檸檬酸鹽緩沖劑、乙酸鹽緩沖劑、琥珀酸鹽緩沖劑、磷酸鹽緩沖劑和組氨酸緩沖劑組成的組。47、根據(jù)第46項(xiàng)的組合物，其中該組合物包含約O. Img至約2mg緩沖劑每mg綴合物。48、根據(jù)第47項(xiàng)的組合物，其中該組合物包含約O. 3mg琥珀酸鈉緩沖劑每mg綴合物。49、根據(jù)第38-48項(xiàng)任一項(xiàng)的組合物，其中該表面活性劑是聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。50、根據(jù)第49項(xiàng)的組合物,其中該組合物包含約O. 005mg至約O. Img表面活性劑
每mg綴合物。51、根據(jù)第50項(xiàng)的組合物，其中該表面活性劑是聚山梨醇酯20。52、根據(jù)第51項(xiàng)的組合物，其中該組合物包含約O. 02mg聚山梨醇酯20每mg綴合物。53、根據(jù)第38-52項(xiàng)任一項(xiàng)的組合物，其中該組合物包含約O. 5mg至約5mg低溫保護(hù)劑每mg綴合物。54、根據(jù)第53項(xiàng)的組合物，其中該低溫保護(hù)劑是蔗糖。55、根據(jù)第54項(xiàng)的組合物,其中該組合物包含約Img鹿糖每mg綴合物。56、根據(jù)第38-55項(xiàng)任一項(xiàng)的組合物，其中該組合物包含約2mg至約20mg填充劑每mg綴合物。57、根據(jù)第56項(xiàng)的組合物，其中該填充劑是甘氨酸。58、根據(jù)第57項(xiàng)的組合物，其中該組合物包含約3. 8mg甘氨酸每mg綴合物。59、根據(jù)第38項(xiàng)的組合物，其中該組合物包含(i)綴合物，該綴合物包含與DMl化學(xué)偶聯(lián)的huN901，(ii)約O. 3mg琥珀酸鈉緩沖劑每mg綴合物，(iii)約O. 02mg聚山梨醇酯20每mg綴合物，(iv)約Img蔗糖每mg綴合物，和(V)約3. 8mg甘氨酸每mg綴合物。60、殺死人體細(xì)胞的方法，包含(a)提供根據(jù)第38_59項(xiàng)任一項(xiàng)的凍干組合物，(b)向該凍干組合物加入水，提供重構(gòu)組合物，和(C)對(duì)人體給予該重構(gòu)組合物，以便抗體與細(xì)胞表面結(jié)合，激活類美坦素的細(xì)胞毒性，由此殺死細(xì)胞?？贵w。
61、根據(jù)第28-37項(xiàng)任一項(xiàng)或根據(jù)第60項(xiàng)的方法，其中該細(xì)胞是腫瘤細(xì)胞。
62、根據(jù)第28-37項(xiàng)任一項(xiàng)或根據(jù)第60-61項(xiàng)任一項(xiàng)的方法，其中該抗體是單克隆
63、根據(jù)第62項(xiàng)的方法，其中該抗體是人源化單克隆抗體。
64、根據(jù)第62項(xiàng)的方法，其中該抗體選自由huN901、huMy9_6、huB4、huC242、trastuzumab、bivatuzumab、sibrotuzumab 和 rituximab 組成的組。65、根據(jù)第28-37項(xiàng)任一項(xiàng)或根據(jù)第60_64項(xiàng)任一項(xiàng)的方法，其中該類美坦素包含
硫醇基團(tuán)。66、根據(jù)第65項(xiàng)的方法，其中該類美坦素是DMl。
67、根據(jù)第65項(xiàng)的方法，其中該類美坦素是DM4。68、根據(jù)第28-37項(xiàng)任一項(xiàng)或根據(jù)第60_67項(xiàng)任一項(xiàng)的方法，其中該抗體與類美坦素經(jīng)由化學(xué)鍵化學(xué)偶聯(lián)，該化學(xué)鍵選自由二硫鍵、酸不穩(wěn)定鍵、光不穩(wěn)定鍵、肽酶不穩(wěn)定鍵、硫醚鍵和酯酶不穩(wěn)定鍵組成的組?！?br> 69、根據(jù)第28-37項(xiàng)任一項(xiàng)或根據(jù)第60_68項(xiàng)任一項(xiàng)的方法，其中該抗體與存在于細(xì)胞表面上的抗原結(jié)合。70、根據(jù)第69項(xiàng)的方法，其中該抗原選自由NCAM/⑶56、⑶33、⑶19、OT3、CanAg,PSMA, α -葉酸受體、Her2/neu、CD44v6、胎兒腺泡胰腺(FAP)抗原、Cripto-U CA6、CD20、CAS5. UMN/CA IX和硫酸軟骨素蛋白聚糖。71、根據(jù)第60-70項(xiàng)任一項(xiàng)的方法，其中該綴合物在重構(gòu)組合物中的濃度是約O. lmg/mL 至約 5mg/mL。72、根據(jù)第71項(xiàng)的方法，其中該綴合物在重構(gòu)組合物中的濃度是約lmg/mL或以上。73、根據(jù)第71項(xiàng)的方法，其中該綴合物在重構(gòu)組合物中的濃度是約5mg/mL。74、根據(jù)第60-73項(xiàng)任一項(xiàng)的方法，其中該緩沖劑選自由檸檬酸鹽緩沖劑、乙酸鹽緩沖劑、琥珀酸鹽緩沖劑、磷酸鹽緩沖劑和組氨酸緩沖劑組成的組。75、根據(jù)第74項(xiàng)的方法，其中該緩沖劑在重構(gòu)組合物中的濃度是約2mM至約50mM。76、根據(jù)第75項(xiàng)的方法，其中該重構(gòu)組合物包含濃度約IOmM的琥珀酸鈉緩沖劑，該重構(gòu)組合物的pH是約5. 5。77、根據(jù)第60-76項(xiàng)任一項(xiàng)的方法，其中該表面活性劑是聚山梨醇酯20或聚山梨
醇酯80。78、根據(jù)第77項(xiàng)的方法，其中該表面活性劑在重構(gòu)組合物中的濃度占重構(gòu)組合物總體積的約O. 002%至約O. 1%。79、根據(jù)第78項(xiàng)的方法，其中該表面活性劑是聚山梨醇酯20。80、根據(jù)第79項(xiàng)的方法，其中聚山梨醇酯20在重構(gòu)組合物中的濃度占重構(gòu)組合物總體積的約O. 01%。81、根據(jù)第60-80項(xiàng)任一項(xiàng)的方法，其中該低溫保護(hù)劑在重構(gòu)組合物中的濃度占重構(gòu)組合物總體積的約O. 1%至約3%。82、根據(jù)第81項(xiàng)的方法，其中該低溫保護(hù)劑是蔗糖。83、根據(jù)第82項(xiàng)的方法，其中蔗糖在重構(gòu)組合物中的濃度占重構(gòu)組合物總體積的約 O. 5%。84、根據(jù)第60-83項(xiàng)任一項(xiàng)的方法，其中該填充劑在重構(gòu)組合物中的濃度是約50mM 至約 500mM。85、根據(jù)第84項(xiàng)的方法，其中該填充劑是甘氨酸。86、根據(jù)第85項(xiàng)的方法，其中甘氨酸在重構(gòu)組合物中的濃度是約250mM。87、根據(jù)第28-37項(xiàng)任一項(xiàng)或根據(jù)第60_86項(xiàng)任一項(xiàng)的方法，其中該組合物是對(duì)人體靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)或腫瘤內(nèi)給藥的。88、組合物，包含(i)治療有效量的綴合物，該綴合物包含與類美坦素化學(xué)偶聯(lián)的抗體，( )緩沖劑，(iii)張力調(diào)節(jié)量的氯化鈉，和(iv)水，其中該組合物具有約5-6的pH。
89、殺死人體細(xì)胞的方法，包含對(duì)人體給予一種組合物，該組合物包含(i)治療有效量的綴合物，該綴合物包含與類美坦素化學(xué)偶聯(lián)的抗體，( )緩沖劑，(iii)張力調(diào)節(jié)量的氯化鈉，和(iv)水，其中該組合物具有約5-6的pH，以便抗體與細(xì)胞表面結(jié)合，激活類美坦素的細(xì)胞毒性，由此殺死細(xì)胞。90、凍干組合物，包含(i)治療有效量的綴合物，該綴合物包含與類美坦素化學(xué)偶聯(lián)的抗體，( )緩沖劑，(iii)低溫保護(hù)劑，和(iv)填充劑，其中當(dāng)用水重構(gòu)時(shí)該組合物具有約5-6的pH。發(fā)明的詳細(xì)說明本發(fā)明提供組合物，包含(i)治療有效量的綴合物，包含與類美坦素化學(xué)偶聯(lián)的抗體，( )緩沖劑，(iii)張力調(diào)節(jié)量的氯化鈉，(iv)水，和可選的(V)表面活性劑，其中該組合物具有約5-6的pH。本發(fā)明組合物含有綴合物，它包含與類美坦素化學(xué)偶聯(lián)的抗體。本文所用的術(shù)語(yǔ)“抗體”表示任意免疫球蛋白，任意免疫球蛋白片段，例如Fab、F(ah' )2、dsFv、sFv、二體(diabodies)和三體(triabodies),或免疫球蛋白嵌合體,它們能夠與細(xì)胞表面上的抗原結(jié)合(例如含有互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR))。在本發(fā)明組合物中可以使用任意適合的抗體。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將領(lǐng)會(huì)到，適當(dāng)抗體的選擇將依賴于所要靶向的細(xì)胞群。在這一點(diǎn)上，在特定細(xì)胞群(通常和優(yōu)選為患病細(xì)胞群)中被選擇性表達(dá)的細(xì)胞表面分子(即抗原)的類型和數(shù)量將支配適用于本發(fā)明組合物的抗體的選擇。多種細(xì)胞類型的細(xì)胞表面表達(dá)方式都是已知的，包括腫瘤細(xì)胞類型，或者如果未知，可以利用常規(guī)分子生物學(xué)和組織化學(xué)技術(shù)來測(cè)定?？贵w可以是單克隆的或多克隆的，但是最優(yōu)選單克隆抗體。本文所用的“多克隆”抗體表示抗體的雜合群，通常包含在致免疫動(dòng)物的血清中?！皢慰寺　笨贵w表示抗體分子的純合群，它們是特定抗原特異性的。單克隆抗體通常是由B淋巴細(xì)胞(“B細(xì)胞”)的單一克隆體產(chǎn)生的。可以利用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的多種技術(shù)得到單克隆抗體，包括標(biāo)準(zhǔn)雜交瘤技術(shù)(例如參見 Kohler and Milstein,Eur. J. ImmuRol. , 5, 511-519 (1976) ,Harlow andLane (Eds. ), AntibodiEs A Laboratory Manual, CSH Press (1988)和 C. A. Janeway 等人(eds.), Immunobiology, 5th Ed. , Garland Publishing, New York, NY (2001)) 簡(jiǎn)而言之，生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤法通常牽涉向任意適合的動(dòng)物、通常和優(yōu)選為小鼠注射抗原(即“免疫原”)。隨后處死動(dòng)物，從其脾臟分離的B細(xì)胞與人骨髓瘤細(xì)胞融合。產(chǎn)生雜合細(xì)胞(即“雜交瘤”)，它無限地增殖，連續(xù)分泌具有所需體外特異性的高效價(jià)抗體?？梢岳帽绢I(lǐng)域已知的任意適當(dāng)方法來鑒定產(chǎn)生具有所需特異性的抗體的雜交瘤細(xì)胞。這類方法例如包括酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)、蛋白質(zhì)印跡(Western blot)分析和放射性免疫測(cè)定。篩選雜交瘤群，以分離單獨(dú)的克隆體，它們各自分泌單一的抗體品種針對(duì)抗原。因?yàn)槊糠N雜交瘤是從與單一 B細(xì)胞融合衍生的克隆體，它產(chǎn)生的所有抗體分子在結(jié)構(gòu)上都是相同的，包括它們的抗原結(jié)合位點(diǎn)和同種型。也可以利用其他適合的技術(shù)生成單克隆抗體，包括EBV-雜交瘤技術(shù)(例如參見 Haskard 和 Archer, J. Immunol. Methods, 74 (2)，361-67 (1984)和 Roder等人，Methods EnzymoI. , 121,140-67 (1986)),或者卩遼菌體載體表達(dá)系統(tǒng)(例如參見Huse等人，Science，246，1275-81 (1989))。為了制備單克隆抗體片段，通常采用重組方法。單克隆抗體可以是從任意適合的動(dòng)物中分離的或者是在任意適合的動(dòng)物中產(chǎn)生的，但是優(yōu)選地是在哺乳動(dòng)物中產(chǎn)生的，更優(yōu)選小鼠，最優(yōu)選人。在小鼠中產(chǎn)生抗體的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，本文有所描述。關(guān)于人抗體，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將領(lǐng)會(huì)到，可以從用適當(dāng)抗原接種疫苗或者致免疫的人類受試者血清中分離多克隆抗體?；蛘呖梢酝ㄟ^采用在非人類動(dòng)物、例如小鼠中產(chǎn)生人抗體的已知技術(shù)，生成人抗體(例如參見美國(guó)專利5，545，806,5, 569，825 和 5，714，352，和美國(guó)專利申請(qǐng)公報(bào) No. 2002/0197266A1)。
盡管是人類治療性應(yīng)用的理想選擇，人抗體、特別是人單克隆抗體通常比小鼠單克隆抗體更加難以生成。不過，當(dāng)對(duì)人類給藥時(shí)小鼠單克隆抗體誘導(dǎo)迅速的宿主抗體應(yīng)答，這會(huì)降低抗體-藥物綴合物的治療或診斷潛力。為了回避這些復(fù)雜情況，單克隆抗體優(yōu)選地不被人免疫系統(tǒng)識(shí)別為“外來物”。為此，可以利用噬菌體展示生成抗體。在這一點(diǎn)上，可以利用標(biāo)準(zhǔn)分子生物學(xué)和重組DNA技術(shù)生成編碼抗體的抗原-結(jié)合性可變(V)結(jié)構(gòu)域的噬菌體文庫(kù)(例如參見 Sambrook等人(eds. ) ,Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 3dEdition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York(2001)) 選擇編碼具有所需特異性的可變區(qū)域的噬菌體與所需抗原特異性結(jié)合，重建包含所選擇的可變結(jié)構(gòu)域的完整人抗體。向適合的細(xì)胞系引入編碼所重建的抗體的核酸序列，例如用于雜交瘤產(chǎn)生的骨髓瘤細(xì)胞，以便由該細(xì)胞分泌具有單克隆抗體特征的人抗體(例如參見J aneway等人,見上,Huse等人，見上和美國(guó)專利6，265，150)?；蛘撸梢詮男∈笊蓡慰寺】贵w，所述小鼠是特異性人重鏈與輕鏈免疫球蛋白基因轉(zhuǎn)基因的。這類方法是本領(lǐng)域已知的，例如描述在美國(guó)專利5，545，806和5，569，825，和Janeway等人，見上。最優(yōu)選地，抗體是人源化抗體。本文所用的“人源化”抗體是這樣的，其中構(gòu)成抗體的抗原結(jié)合環(huán)的、小鼠單克隆抗體的互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR)被移植到人抗體分子的構(gòu)架上。由于小鼠與人抗體框架的相似性，一般為本領(lǐng)域所接受的是這種方法產(chǎn)生這樣一種單克隆抗體，它在抗原性上等同于人抗體，但是與從中衍生出CDR序列的小鼠單克隆抗體結(jié)合相同的抗原。生成人源化抗體的方法是本領(lǐng)域熟知的，例如詳細(xì)描述在Janeway等人，見上，美國(guó)專利5，225，539，5，585，089和5，693，761，歐洲專利No. 0239400B1和英國(guó)專利No. 2188638中。也可以利用抗體表面重整技術(shù)生成人源化抗體，如美國(guó)專利 5, 639, 641 和 Pedersen 等人，J. Mol. Biol.，235，959-973 (1994)所述。盡管用在本發(fā)明組合物的綴合物中的抗體最優(yōu)選地是人源化單克隆抗體，不過如上所述的人單克隆抗體或小鼠單克隆抗體也屬于本發(fā)明的范圍。具有至少一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)、從而識(shí)別和結(jié)合至少一種存在于靶細(xì)胞表面上的抗原或受體的抗體片段也屬于本發(fā)明的范圍。在這方面，完整抗體分子的蛋白水解性裂解能夠產(chǎn)生多種保留識(shí)別和結(jié)合抗原的能力的抗體片段。例如，用木瓜蛋白酶限制性消化抗體分子通常產(chǎn)生三個(gè)片段，其中兩個(gè)是等同的，被稱為Fab片段，因?yàn)樗鼈儽Ａ裟阁w抗體分子的抗原結(jié)合活性。用胃蛋白酶裂解抗體分子在正常情況下產(chǎn)生兩個(gè)抗體片段，其中一個(gè)保留抗體分子的兩支抗原結(jié)合臂，因而被稱為F(ab’)2片段。利用常規(guī)重組DNA技術(shù)可以生成單鏈可變區(qū)片段(sFv)的抗體片段，它由截短的Fab片段組成，F(xiàn)ab片段包含經(jīng)由合成肽與抗體輕鏈可變(V)結(jié)構(gòu)域連接的抗體重鏈V結(jié)構(gòu)域(例如參見Janeway等人，見上)。類似地，借助重組DNA技術(shù)可以制備二硫化物-穩(wěn)定化的可變區(qū)片段(dsFv)(例如參見Reiter等人，ProteinEngineering, 7,697-704 (1994))。不過,本發(fā)明的抗體片段不限于這些示范類型的抗體片段。可以采用任意適合的識(shí)別和結(jié)合所需細(xì)胞表面受體或抗原的抗體片段。利用任意適合的本領(lǐng)域已知的方法可以測(cè)定抗體-抗原結(jié)合，例如放射性免疫測(cè)定(RIA)、ELISA、蛋白質(zhì)印跡、免疫沉淀和競(jìng)爭(zhēng)性抑制測(cè)定(例如參見Janeway等人，見上和美國(guó)專利申請(qǐng)公報(bào) No. 2002/0197266A1)。另外，抗體可以是嵌合抗體?！扒逗稀币馕吨贵w包含從至少兩種不同品種獲得或衍生的至少兩種免疫球蛋白或其片段(例如兩種不同的免疫球蛋白，人免疫球蛋白恒定區(qū)與鼠免疫球蛋白可變區(qū)結(jié)合)。在本發(fā)明組合物中可以使用任意適合的抗體。特別優(yōu)選的抗體是人源化單克隆抗體，其實(shí)例包括 huN901、huMy9_6、huB4、huC242、trastuzumab、bivatuzumab、sibrotuzumab和rituximab (例如參見美國(guó)專利5，639，641，美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)No. 60/424，332，國(guó)際(PCT專利申請(qǐng) No.TO02/16401，Pedersen 等人，J. Mol. Biol.，235，959-973 (1994)，Roguska 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91,969-73 (1994)，Liu 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93,8618-8623(1996)，Nadler 等人，J. Immunol.，131，244-250 (1983)，ColomEr 等人，CancerInyest.，19，49-56 (2001)，Heider 等人，Eur. J. Cancer, 31A, 2385-2391 (1995)，Welt 等人，J. Clin. Oncol.，12，1193-1203(1994)，Maloney 等人，Blood, 90, 2188-2195 (1997)和美國(guó)專利5，665，357)。最優(yōu)選地，抗體是huN901人源化單克隆抗體或huMy9_6人源化單克隆抗體。其他人源化單克隆抗體是本領(lǐng)域已知的，也可以用于本發(fā)明組合物。按照本發(fā)明，上述抗體與任意適合的細(xì)胞毒性劑化學(xué)偶聯(lián)，特別是誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性的細(xì)胞毒性劑，生成如上所述的綴合物。作為正常藥理廓清(清除)機(jī)理的結(jié)果，用在藥物綴合物中的抗體僅以有限的量接觸和結(jié)合靶細(xì)胞。因此，用在綴合物中的細(xì)胞毒性劑必須是高度細(xì)胞毒性的，以便充分地殺死細(xì)胞，引發(fā)治療效果。這類細(xì)胞毒性劑的實(shí)例包括新穎的紫杉烷(例如參見國(guó)際(PCT)專利申請(qǐng)No.WOOl/38318和PCT/US03/02675)、DNA-燒基化劑(例如CC-1065類似物)、蒽環(huán)素(anthracyclines)、tubulysin類似物、duocarmycin類似物、auristatinE和包含反應(yīng)性聚乙二醇部分的細(xì)胞毒性劑(例如參見Sasse 等人，J. Antibiot. (Tokyo), 53,879-85 (2000), Suzawa 等人，Bioorg. Med. Chem.，8,2175-84 (2000), Ichimura 等人，J. Antibiot. (Tokyo)，44，1045-53(1991), Francisco等人，Blood(2003)(先于印刷出版物的電子出版物)，美國(guó)專利5，475，092，6，340，701，6，372，738和6,436,931，美國(guó)專利申請(qǐng)公報(bào)No. 2001/0036923A1,未決美國(guó)專利申請(qǐng)No. 10/024，290和10/116，053和國(guó)際(PCT)專利申請(qǐng)No. WO 01/49698)?；蛘吆妥顑?yōu)選地，抗體與類美坦素化學(xué)偶聯(lián)，生成本發(fā)明組合物的綴合物。類美坦素最初是從東部非洲Maytenus屬灌木分離的，但是隨后也在土壤細(xì)菌的代謝產(chǎn)物中被發(fā)現(xiàn)，例如珍貴束絲放線菌(Actinosynnema pretiosum)(例如參見美國(guó)專利3，896，111)。類美坦素通過抑制有絲分裂誘導(dǎo)細(xì)胞毒性。實(shí)驗(yàn)證據(jù)顯示，類美坦素通過抑制微管蛋白聚合、由此防止微管生成來抑制有絲分裂(例如參見美國(guó)專利6，441，163和Remillard等人，Science，189，1002-1005 (1975))。體外利用細(xì)胞培養(yǎng)模型和體內(nèi)利用實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物系統(tǒng)已經(jīng)顯示類美坦素抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。而且，類美坦素的細(xì)胞毒性比常規(guī)化療劑大1，000倍，例如甲氨蝶呤、柔紅霉素和長(zhǎng)春新堿(例如參見美國(guó)專利5，208，020)。本領(lǐng)域已知類美坦素包括美坦素、美坦醇、美坦醇的C-3酯和其他美坦醇類似物與衍生物(例如參見美國(guó)專利5，208，020和6，441，163)。美坦醇的C-3酯可以是天然存在的或合成衍生的。而且，天然存在的和合成的C-3美坦醇酯可以分為簡(jiǎn)單羧酸的C-3酯或者N-甲基-L-丙氨酸衍生物的C-3酯，后者比前者有更多細(xì)胞毒性。合成的類美坦素類似物也是本領(lǐng)域已知的，例如描述在Kupchan等人，J. Med. Chem.，21，31-37 (1978)中。生成美坦醇和其類似物與衍生物的方法例如描述在美國(guó)專利4，151，042中。適合用在本發(fā)明組合物中的類美坦素可以是利用本領(lǐng)域已知的方法從天然來源分離的、合成生產(chǎn)的或半合成生產(chǎn)的。而且，可以按任意適合的方式修飾類美坦素，只要在 最終的綴合物分子中保存充分的細(xì)胞毒性。在這一點(diǎn)上，類美坦素缺乏適合與抗體連接的官能團(tuán)。需要利用連接部分以連接類美坦素與抗體，生成綴合物。連接部分含有化學(xué)鍵，允許類美坦素細(xì)胞毒性在特定部位的活化。適合的化學(xué)鍵是本領(lǐng)域熟知的，包括二硫鍵、酸不穩(wěn)定鍵、光不穩(wěn)定鍵、肽酶不穩(wěn)定鍵、在巰基與馬來酰亞胺基團(tuán)之間所生成的硫醚鍵和酯酶不穩(wěn)定鍵。最優(yōu)選地，連接部分包含二硫鍵或硫醚鍵。按照本發(fā)明，連接部分優(yōu)選地包含反應(yīng)性化學(xué)基團(tuán)。特別優(yōu)選的反應(yīng)性化學(xué)基團(tuán)是N-琥珀酰亞氨基酯和N-磺基琥珀酰亞氨基酯。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，反應(yīng)性化學(xué)基團(tuán)可以經(jīng)由硫醇基團(tuán)之間的二硫鍵與類美坦素共價(jià)結(jié)合。因而，如本文所述經(jīng)過修飾的類美坦素優(yōu)選地包含硫醇基團(tuán)。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將領(lǐng)會(huì)到，硫醇基團(tuán)含有與氫原子鍵合的硫原予，通常在本領(lǐng)域中也被稱為巰基，可以表示為 “-SH” 或 “RSH”。特別優(yōu)選的包含含有反應(yīng)性化學(xué)基團(tuán)的連接部分的類美坦素是美坦醇的c-3酯及其類似物，其中該連接部分含有二硫鍵，該化學(xué)反應(yīng)性基團(tuán)包含N-琥珀酰亞氨基或N-磺基琥珀酰亞氨基酯。類美坦素上有很多位置都能充當(dāng)在化學(xué)上連接該連接部分的位置。例如，具有羥基的C-3位、用羥甲基修飾的C-14位、用羥基修飾的C-15位和具有羥基的C-20位都是有用的。連接部分最優(yōu)選地與美坦醇的C-3位連接。最優(yōu)選地，用于本發(fā)明組合物的類美坦素是N2’ -脫乙酰-N2’ -(3-巰基-I-氧代丙基)美坦素(DMl)或N2’ -脫乙酰-N2，-(4-巰基-4-甲基-I-氧代戊基)美坦素(DM4)。具有其他化學(xué)鍵的連接部分也能用在本發(fā)明的背景下，正如其他類美坦素也是如此。其他化學(xué)鍵的具體實(shí)例包括酸不穩(wěn)定鍵、硫醚鍵、光不穩(wěn)定鍵、肽酶不穩(wěn)定鍵和酯酶不穩(wěn)定鍵。生產(chǎn)具有連接部分的類美坦素的方法例如描述在美國(guó)專利5，208，020,5, 416，064和 6，333，410 中。類美坦素的連接部分通常和優(yōu)選地是用于連接抗體與類美坦素的更大連接劑分子的一部分。任意適合的連接劑分子可以用于本發(fā)明，只要連接劑分子分別提供細(xì)胞毒性的保持和類美坦素與抗體的靶向特征。連接劑分子通過化學(xué)鍵(如上所述)連接類美坦素與抗體，以便類美坦素和抗體彼此化學(xué)偶聯(lián)(例如共價(jià)鍵合)。合乎需要的是，連接劑分子通過二硫鍵或硫醚鍵化學(xué)偶聯(lián)類美坦素與抗體。最優(yōu)選地，抗體經(jīng)由二硫鍵與類美坦素化學(xué)偶聯(lián)。特別優(yōu)選的連接劑分子例如包括N-琥珀酰亞氨基3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)(例如參見 Carlsson 等人，Biochem. J.，173，723-737 (1978))、N-琥珀酰亞氨基4-(2-吡啶基二硫代)丁酸酯(SPDB)(例如參見美國(guó)專利4，563，304)、N-琥珀酰亞氨基4-(2-吡啶基二硫代)戊酸酯(SPP)(例如參見CAS登錄號(hào)341498-08-6)、N-琥珀酰亞氨基4-(N-馬來酰亞氨基甲基)環(huán)己烷-I-羧酸酯(SMCC)(例如參見Yoshitake等人，Eur.J. Biochem.，101，395-399 (1979))和 N-琥珀酰亞氨基 4-甲基 _4_ [2-(5-硝基吡啶基)二硫代]戊酸酯(SMNP)(例如參見美國(guó)專利4，563，304)。最優(yōu)選用在本發(fā)明組合物中的連接劑分子是SPP、SMCC和SPDB。CN 102940889 A
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10/22 頁(yè)本發(fā)明組合物包含治療有效量的綴合物，所述綴合物包含與類美坦素化學(xué)偶聯(lián)的抗體?！爸委熡行Я俊北硎咀阋栽趥€(gè)體中顯示有意義的益處的量，例如促進(jìn)至少一個(gè)方面的腫瘤細(xì)胞細(xì)胞毒性，或者治療、治愈、預(yù)防或改善其他與特定癌癥有關(guān)的相關(guān)醫(yī)學(xué)狀態(tài)。治療有效量可以因在個(gè)體中所需的生物學(xué)效果、所要治療的病癥和/或綴合物的具體特征和個(gè)體而異。因而，按照本文所述的方法，主治醫(yī)師(或其他負(fù)責(zé)給予組合物的醫(yī)藥專業(yè)人員)將通常決定用以治療每一個(gè)別患者的量。合乎需要的是，綴合物在本發(fā)明組合物中的濃度是約O. lmg/mL至約5mg/mL(例如約O. 5mg/mL、約2mg/mL或約5mg/mL)。在優(yōu)選的實(shí)·施方式中，綴合物在本發(fā)明組合物中的濃度是約lmg/mL或更高(例如約2mg/mL或更高、約3mg/mL或更高或者約4mg/mL或更高)。最優(yōu)選地，綴合物在本發(fā)明組合物中的濃度是約5mg/mL。盡管包含至少lmg/mL綴合物的組合物是特別優(yōu)選的，不過濃度小于lmg/mL (例如濃度為約O. lmg/mL至約O. 9mg/mL)的綴合物也能在本發(fā)明組合物中保持穩(wěn)定，因而屬于本發(fā)明的范圍。包含大于lmg/mL綴合物分子的組合物有利于臨床和商業(yè)應(yīng)用之處在于這類濃度能夠在更適宜(即更小)的給藥體積中制備單一劑量的組合物。合乎需要的是，將本發(fā)明組合物配制成藥學(xué)應(yīng)用可接受的制劑，例如對(duì)需要的人類宿主給藥的制劑。為此，優(yōu)選地將綴合物分子配制成包含生理學(xué)上可接受的載體(例如賦形劑或稀釋劑)的組合物。生理學(xué)上可接受的載體是熟知的和容易獲得的，包括緩沖劑、抗氧化劑、制菌劑、鹽和賦予制劑與人類患者血液或其他體液等滲的溶質(zhì)，和水性與非水性無菌懸液，其中可以包括懸浮劑、增溶劑、增稠劑、穩(wěn)定劑(例如表面活性劑)和防腐劑。載體的選擇至少在部分程度上將取決于靶組織和/或細(xì)胞的位置，和用于給予組合物的特定方法。適合用在藥物綴合物制劑中的載體和賦形劑的實(shí)例例如公開在國(guó)際(PCT)專利申請(qǐng)No. W000/02587, W002/060955 和 W002/092127 和 Ghetie 等人，J. Immunol. Methods, 112，267-277 (1988)中。最優(yōu)選地，本發(fā)明組合物包含緩沖劑、表面活性劑、張力調(diào)節(jié)量的氯化鈉和水。任意適合的藥學(xué)上可接受的緩沖劑都可以用于本發(fā)明組合物。特別優(yōu)選的緩沖劑的實(shí)例包括檸檬酸鹽、乙酸鹽、琥珀酸鹽、磷酸鹽和組氨酸。不過，本發(fā)明組合物不限于這些示范性緩沖劑。緩沖劑可以以任意適合的濃度存在于本發(fā)明組合物中，只要組合物在所需條件下達(dá)到充分的穩(wěn)定性。在這一點(diǎn)上，緩沖劑在組合物中的濃度優(yōu)選地是約2mM至約50mM (例如約 2-10mM、約 10_20mM、約 20_30mM、約 30_40mM 或約 40_50mM)。最優(yōu)選地，緩沖劑在組合物中的濃度是約5-15mM(例如約IOmM)。合乎需要的緩沖劑是琥珀酸鈉或乙酸鈉，但是最優(yōu)選地是檸檬酸鈉。緩沖劑在本發(fā)明組合物中的含量通常使PH維持在所需的范圍內(nèi)。在這方面，本發(fā)明組合物優(yōu)選地具有約5-6的pH(例如約5、5. 5或6)。據(jù)信pH較高(例如約PH6或更高)的組合物不如pH較低(也就是約pH6或以下)的組合物穩(wěn)定。因而，本發(fā)明組合物最優(yōu)選地具有約5. 5的pH。除了如上討論的緩沖劑以外，本發(fā)明組合物還可選地含有表面活性劑。任意適合的表面活性劑都可以用于本發(fā)明。適合的表面活性劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。按照本發(fā)明組合物，合乎需要的表面活性劑是聚山梨醇酯，優(yōu)選地是聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。最優(yōu)選地,表面活性劑是聚山梨醇酯20。表面活性劑可以以任意適合的濃度存在于本發(fā)明組合物中，只要組合物在所需條件下達(dá)到充分的穩(wěn)定性。在這一點(diǎn)上，表面活性劑在組合物中的濃度優(yōu)選地占組合物總體積的約O. 002%至約O. 1% wt. /vol.(例如約
15O.002-0. 01 %、約O. 005-0. 02%或約O. 01-0. l%wt. /vol.)。最優(yōu)選地，表面活性劑在組合物中的濃度占組合物總體積的約O. 005-0. 02% wt. /vol.(例如約O. 01% wt. /vol.)。盡管用表面活性劑配制的組合物是優(yōu)選的，不過不用表面活性劑配制的組合物也屬于本發(fā)明的范圍。作為另外的穩(wěn)定劑，還向本發(fā)明組合物加入氯化鈉。在這一點(diǎn)上，本發(fā)明組合物包含適量、優(yōu)選張力調(diào)節(jié)量的氯化鈉(NaCl)。措辭“張力調(diào)節(jié)量的氯化鈉”意味著NaCl在組合物中的濃度是這樣的，組合物的張性與人血液的張性是相同的(即等滲的)。在這一點(diǎn)上，NaCl可以以任意適合的濃度存在于本發(fā)明組合物中，只要在本發(fā)明組合物中達(dá)到充分的張性和穩(wěn)定性。合乎需要的是，氯化鈉在組合物中的濃度是約50mM至約500mM(例如約 50-100mM、約 100-150mM、約 150_250mM、約 250_350mM 或約 350_450mM)。盡管較高濃度的氯化鈉(例如約150mM或以上)可能賦予本發(fā)明組合物高滲性而非等滲性，不過在對(duì)人給藥之前用任意適合的等滲溶劑、例如優(yōu)選5%葡萄糖的水溶液("D5W")或生理鹽水("NS")稀釋這類組合物將賦予這類組合物僅僅輕微的高滲性，適合用在本發(fā)明中。優(yōu)選地，氯化鈉在組合物中的濃度是約IOOmM至約200mM (例如約100_140mM、約130_170mM或約160-200mM)。最優(yōu)選地，氯化鈉在組合物中的濃度是約110_150mM(例如約110mM-130mM或約 120mM)。在特別優(yōu)選的發(fā)明實(shí)施方式中，組合物包含(i)約5mg/mL綴合物，該綴合物包含與DMl化學(xué)偶聯(lián)的huN901, (ii)約IOmM檸檬酸鈉緩沖劑，(iii)約O. 01%聚山梨醇酯20，(iv)約120mM氯化鈉，和(V)水(優(yōu)選注射用水(WFI))，其中組合物的pH是約5. 5。在另一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，組合物包含⑴約lmg/mL或以上(例如約lmg/mL、約2mg/mL、3mg/mL、約5mg/mL或者它們之間的范圍)綴合物，包含與DMl化學(xué)偶聯(lián)的huMy9-6，(ii)約IOmM檸檬酸鈉緩沖劑，(iii)可選的約O. 01%聚山梨醇酯20，(iv)約135mM氯化鈉，和(V) /K，其中組合物的pH是約5. 5。在另一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，組合物包含(i)約lmg/mL或以上(例如約lmg/mL、約2mg/mL、3mg/mL、約5mg/mL或者它們之間的范圍)綴合物，包含與DM4化學(xué)偶聯(lián)的huMy9-6，(ii)約IOmM檸檬酸鈉緩沖劑，(iii)可選的約O. 01%聚山梨醇酯20，(iv)約135mM氯化鈉，和(V)水，其中組合物的pH是約5. 5。在另外優(yōu)選的實(shí)施方式中，組合物包含(i)約lmg/mL或以上(例如約lmg/mL、約2mg/mL、3mg/mL、約5mg/mL或者之間的范圍)綴合物，包含經(jīng)由SMCC連接劑與DMl化學(xué)偶聯(lián)的huN901，(ii)約IOmM檸檬酸鈉緩沖劑，(iii)可選的約O. 01%聚山梨醇酯20，(iv)約130mM氯化鈉，和(V)水，其中組合物的pH是約5. 5。含有抗體(或一般而言蛋白質(zhì))的組合物因氧化作用而不穩(wěn)定。因而，在另一種本發(fā)明實(shí)施方式中，組合物進(jìn)一步包含抗氧化劑。任意適合的抗氧化劑都可以用在本發(fā)明組合物中。適合的抗氧化劑是本領(lǐng)域已知的，例如包括超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶、生育三烯酚、多元酚、鋅、錳、硒、維生素C、維生素Ε、β胡蘿卜素、半胱氨酸和甲硫氨酸。用于本發(fā)明組合物的抗氧化劑最優(yōu)選地是甲硫氨酸?？寡趸瘎┛梢砸匀我膺m合的濃度存在于組合物中。合乎需要的是，抗氧化劑在組合物中的濃度是約100 μ M至約100mM(例如約
O.25-lmM、約O. 5_2mM、約5-15mM、約20_70mM或約60_90mM)。最優(yōu)選地，抗氧化劑在組合物中的濃度是約5-15mM(例如約IOmM)。除了抗氧化劑以外，還可以借助蔗糖的加入進(jìn)一步使本發(fā)明組合物穩(wěn)定。蔗糖使CN 102940889 A
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抗體制劑穩(wěn)定的應(yīng)用是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。任意適量蔗糖都可以用在本發(fā)明組合物中，但是合乎需要的是蔗糖在組合物中的濃度占組合物總體積的約O. 1%至約10% wt. /vol.(例如約O. 1-1%、約2-5%或約7-10% wt./vol.)。最優(yōu)選地，蔗糖在組合物中的濃度占組合物總體積的約4-6% wt. /vol.(例如約5% wt. /vol.)。
本發(fā)明進(jìn)一步提供帶包裝的組合物，包含密封的容器，其中分散有本發(fā)明組合物，和惰性氣體覆蓋層。帶包裝的組合物可以用任意適合的惰性氣體覆蓋，只要本發(fā)明組合物在帶包裝的組合物內(nèi)保持穩(wěn)定。惰性氣體優(yōu)選地是氮或氬。帶包裝的組合物可以呈現(xiàn)為在單劑或多劑密封容器中，例如安瓿或小瓶。除了本文所述的含水組合物(本文也稱為“液體”或“水性”(含水)組合物)以外，本發(fā)明還提供凍干組合物，包含(i)治療有效量的綴合物，該綴合物包含與類美坦素化學(xué)偶聯(lián)的抗體，( )緩沖劑，(iii)表面活性劑，(iv)低溫保護(hù)劑，和(V)填充劑，其中當(dāng)用水重構(gòu)時(shí)該組合物具有約5-6的pH。“凍干”意味著組合物已在真空下冷凍干燥。凍干通常是這樣完成的，冷凍特定的制劑，以致溶質(zhì)從溶劑中分離出來。然后升華除去溶劑(即初級(jí)干燥)，其次解吸(即次級(jí)干燥)。上述與其他本發(fā)明實(shí)施方式有關(guān)的綴合物(也就是與類美坦素化學(xué)偶聯(lián)的抗體)、緩沖劑、表面活性劑及其組分的說明也適用于上述凍干組合物的相同方面。在凍干組合物的重構(gòu)之前，構(gòu)成本發(fā)明凍干組合物的每種組分的相對(duì)量可以用每mg綴合物所用的賦形劑(例如緩沖劑、表面活性劑、填充劑、低溫保護(hù)劑)的mg數(shù)來描述。盡管本文所述任意適合的緩沖劑都可以用于本發(fā)明凍干組合物，不過本發(fā)明凍干組合物優(yōu)選地包含琥珀酸鈉緩沖劑。緩沖劑可以以任意適合的量存在于本發(fā)明凍干組合物中。確切而言，合乎需要的是，凍干組合物包含約O. Img至約2mg緩沖劑每mg綴合物(例如約O. Img至約O. 5mg緩沖劑每mg綴合物、約O. 5mg至約Img緩沖劑每mg綴合物或約Img至約2mg緩沖劑每mg綴合物)。最優(yōu)選地，凍干組合物包含約O. 3mg琥珀酸鈉緩沖劑每mg綴合物。盡管本文所述任意適合的表面活性劑都可以用于本發(fā)明凍干組合物，不過合乎需要的表面活性劑是聚山梨醇酯，優(yōu)選地是聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。最優(yōu)選地,表面活性劑是聚山梨醇酯20。表面活性劑可以以任意適合的量存在于本發(fā)明凍干組合物中，只要凍干組合物在所需條件下達(dá)到充分的穩(wěn)定性。在這一點(diǎn)上，合乎需要的凍干組合物包含約O. 005mg至約O. Img表面活性劑每mg綴合物(例如約O. 005mg至約O. Olmg表面活性劑每mg綴合物、約O. Olmg至約O. 05mg表面活性劑每mg綴合物或約O. 05mg至約O. Img表面活性劑每mg綴合物)。當(dāng)表面活性劑是聚山梨醇酯20時(shí)，凍干組合物優(yōu)選地包含約O. 02mg聚山梨醇酯20每mg綴合物。為了防止組合物活性成分在冷凍和干燥期間降解，本發(fā)明凍干組合物進(jìn)一步包含低溫保護(hù)劑，優(yōu)選無定形低溫保護(hù)劑。本文所用的術(shù)語(yǔ)“低溫保護(hù)劑”表示在冷凍期間保護(hù)不穩(wěn)定分子的賦形劑。適合用在本發(fā)明組合物中的低溫保護(hù)劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，例如包括甘油、二甲基亞砜(DMSO)、聚乙二醇(PEG)、葡聚糖、葡萄糖、海藻糖和蔗糖。最優(yōu)選地，低溫保護(hù)劑是蔗糖。低溫保護(hù)劑可以以任意適合的量存在于本發(fā)明凍干組合物中。合乎需要的是，凍干組合物包含約O. 5mg至約5mg(例如約O. 5mg至約2mg)低溫保護(hù)劑每mg綴合物(例如約O. 8mg低溫保護(hù)劑每mg綴合物、約2mg低溫保護(hù)劑每mg綴合物或約4mg
17低溫保護(hù)劑每mg綴合物)。當(dāng)?shù)蜏乇Ｗo(hù)劑是蔗糖時(shí)，凍干組合物優(yōu)選地包含約O. 5mg至約2mg (例如約Img)鹿糖每mg綴合物。本發(fā)明凍干組合物可以進(jìn)一步含有填充劑，優(yōu)選可結(jié)晶的填充劑。填充劑通常在本領(lǐng)域中用于為作為凍干結(jié)果所形成的“餅”提供結(jié)構(gòu)和重量。本領(lǐng)域已知的任意適合的填 充劑都可以用于本發(fā)明凍干組合物。適合的填充劑例如包括甘露糖醇、葡聚糖和甘氨酸。用在本發(fā)明組合物中的填充劑最優(yōu)選地是甘氨酸。凍干組合物可以含有任意適量的填充劑，但是優(yōu)選地凍干組合物包含約2mg至約20mg填充劑每mg綴合物(例如約2mg至約IOmg填充劑每mg綴合物、約5mg至約IOmg填充劑每mg綴合物、約IOmg至約15mg填充劑每mg綴合物或約15mg至約20mg填充劑每mg綴合物)。當(dāng)填充劑是甘氨酸時(shí)，凍干組合物優(yōu)選地包含約3. 8mg甘氨酸每mg綴合物。因而，按照本發(fā)明，所要重構(gòu)成含有5mg/mL綴合物(例如優(yōu)選包含與DMl化學(xué)偶聯(lián)的huN901的綴合物)的凍干組合物成分優(yōu)選地包含(i)約O. 3mg琥拍酸鈉緩沖劑每mg綴合物，(ii)約O. 02mg聚山梨醇酯20每mg綴合物，(iii)約Img蔗糖每mg綴合物，和(iv)約3. 8mg甘氨酸每mg綴合物。一旦用水重構(gòu),這樣一種凍干組合物優(yōu)選地具有約5. 5的pH。而且，當(dāng)將凍干組合物用水重構(gòu)時(shí)，上述與本發(fā)明液體組合物有關(guān)的綴合物、緩沖劑和表面活性劑的相對(duì)濃度的說明也適用于上述凍干組合物。凍干方法是本領(lǐng)域熟知的，例如描述在Wang，ff.，Int. J. Pharm. ,203,1-60(2000)中。例如，可以利用包含下列步驟的凍干循環(huán)生產(chǎn)本發(fā)明凍干組合物(1)在4°C貯藏溫度和環(huán)境室壓力下預(yù)冷卻2. 5小時(shí)，(2)在_50°C貯藏溫度和環(huán)境室壓力下冷凍14小時(shí)，(3)在_20°C貯藏溫度和環(huán)境室壓力下甘氨酸重結(jié)晶6小時(shí)，(4)在_50°C貯藏溫度和環(huán)境室壓力下再冷凍16小時(shí)，(5)在_13°C貯藏溫度和IOOmTorr壓力下初級(jí)干燥24小時(shí)，(6)在24°C貯藏溫度和IOOmTorr壓力下次級(jí)干燥10小時(shí)，和(7)在24°C貯藏溫度和環(huán)境室壓力下的終止期。不過，本發(fā)明凍干組合物不限于由上述方法所生產(chǎn)的組合物。事實(shí)上，任意適合的凍干方法都可以用于生產(chǎn)本發(fā)明凍干組合物，對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員將顯而易見的是所選擇的凍干參數(shù)(例如干燥時(shí)間)將因多種因素而異，包括所要凍干的溶液的體積。除了本文所述優(yōu)選的實(shí)施方式以外，本發(fā)明組合物(無論液體還是凍干形式)可以包含另外的治療劑或生物活性劑。例如，可以含有可用于治療特定適應(yīng)癥(例如癌癥)的治療因子?？刂蒲装Y的因子、例如布洛芬或類固醇可以作為組合物的一部分以減少與組合物體內(nèi)給藥有關(guān)的腫脹和炎癥以及生理痛苦。在組合物中可以包括免疫增強(qiáng)劑，以增量調(diào)節(jié)機(jī)體對(duì)疾病的天然防御?？梢耘c組合物共同給予維生素與礦物質(zhì)、抗氧化劑和微量營(yíng)養(yǎng)素?？梢院锌股?，即殺微生物劑和殺真菌劑，以減少涉及與組合物給藥有關(guān)的程序的感染和其他障礙的危險(xiǎn)。本發(fā)明進(jìn)一步提供殺死人體細(xì)胞的方法，包含對(duì)人體給予一種組合物，該組合物包含(i)治療有效量的綴合物，該綴合物包含與類美坦素化學(xué)偶聯(lián)的抗體，(ii)緩沖劑，
(iii)表面活性劑，(iv)張力調(diào)節(jié)量的氯化鈉，和(V)水，其中該組合物具有約5-6的pH，以便抗體與細(xì)胞表面結(jié)合，激活類美坦素的細(xì)胞毒性，由此殺死細(xì)胞。上述與其他本發(fā)明實(shí)施方式有關(guān)的綴合物(即與類美坦素化學(xué)偶聯(lián)的抗體)、賦形劑(例如緩沖劑、表面活性劑、氯化鈉等)及其組分的說明也適用于上述本發(fā)明方法的相同方面。本發(fā)明方法牽涉時(shí)人體給予本發(fā)明組合物。理想地，本發(fā)明方法用于靶向和殺死
18受疾病影響的細(xì)胞，特別是與細(xì)胞增殖水平升高有關(guān)的疾病，例如癌癥。因而在這一點(diǎn)上，本發(fā)明方法優(yōu)選地用于殺死人體腫瘤細(xì)胞，由此導(dǎo)致癌癥的預(yù)防、改善和/或治愈。 盡管任意適合的對(duì)人體給予組合物的手段都可以用在本發(fā)明的背景中，不過通常和優(yōu)選地經(jīng)由注射對(duì)人體給予本發(fā)明組合物，最優(yōu)選經(jīng)由輸注。術(shù)語(yǔ)“注射”意味著向人體靶組織強(qiáng)行引入組合物。術(shù)語(yǔ)“輸注”意味著向人體組織、通常和優(yōu)選為靜脈引入組合物?？梢越柚我膺m合的途徑對(duì)人體給予組合物，但是優(yōu)選地對(duì)人體靜脈內(nèi)或腹膜內(nèi)給藥。不過當(dāng)本發(fā)明方法用于殺死腫瘤細(xì)胞時(shí)，本發(fā)明組合物的腫瘤內(nèi)給藥是特別優(yōu)選的。當(dāng)通過注射給予本發(fā)明組合物時(shí)，可以利用任意適合的注射裝置向腫瘤直接給予組合物。例如，可以利用普通醫(yī)用注射器直接注射組合物至皮下腫瘤中?；蛘?，使腫瘤浸潰在本發(fā)明液體組合物中，可以將組合物局部應(yīng)用至腫瘤。同樣，利用任意適合的遞送裝置，例如導(dǎo)管，可以用本發(fā)明組合物灌注腫瘤歷經(jīng)一段時(shí)間。盡管不太優(yōu)選，其他給藥途徑也可以用于向人體遞送組合物。事實(shí)上，盡管一種以上途徑可以用于給予本發(fā)明組合物，不過一種特定途徑可以比另一種途徑提供更及時(shí)的和更有效的反應(yīng)。例如，盡管不是特別優(yōu)選的，可以將本發(fā)明組合物應(yīng)用或滴注到體腔內(nèi)、吸收進(jìn)入皮膚、吸入或者例如經(jīng)由肌內(nèi)或動(dòng)脈內(nèi)給藥而腸胃外給予。優(yōu)選地，對(duì)人體腸胃外給予的本發(fā)明組合物明確靶向特定的細(xì)胞，例如癌細(xì)胞。如本文所述，綴合物包含抗體，它優(yōu)選地是人源化單克隆抗體，例如huN901、huMy9_6、huB4 或 huC242。其他適合的抗體例如包括 trastuzumab、bivatuzumab、sibrotuzumab和rituximab。當(dāng)在本發(fā)明方法中采用包含這類綴合物的組合物時(shí),抗體通過與在細(xì)胞(例如腫瘤細(xì)胞)表面上表達(dá)的抗原(例如腫瘤-特異性抗原)的相互作用使綴合物靶向所需細(xì)胞(例如腫瘤細(xì)胞)?，F(xiàn)有技術(shù)已經(jīng)對(duì)多種腫瘤廣泛描述過腫瘤-特異性抗原，例如包括上皮癌(例如MUC1)和乳腺與卵巢癌(例如HER2/neu)(例如參見Bartnes, Tidsskr. Nor. Laegeforen. , 121, 2941-5 (2001)和 Von Mensdorff-Pouilly 等人，Int. J. Biol. Markers,15,343—356 (2000))。在優(yōu)選的發(fā)明實(shí)施方式中，抗體(例如huMy9_6)與CD33抗原結(jié)合，該抗原例如被急性骨髓性白血病細(xì)胞表達(dá)。在另一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，抗體(例如huB4)與CD19抗原結(jié)合，該抗原例如被人B-細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞表達(dá)?；蛘?，抗體(例如huC242)與CanAg抗原結(jié)合，該抗原被一些癌細(xì)胞類型表達(dá)，例如包括結(jié)腸直腸、胰腺、胃和其他胃腸癌，和大多數(shù)非小細(xì)胞肺癌。最優(yōu)選地，抗體(例如huN901)與NCAM/CD56抗原結(jié)合，該抗原例如被小細(xì)胞肺癌(SCLC)細(xì)胞和其他神經(jīng)內(nèi)分泌來源的癌癥所表達(dá)。其他優(yōu)選的能夠與抗體結(jié)合的抗原包括⑶3抗原、PSMA、α -葉酸受體、Her2/neu、⑶44v6、胎兒腺泡胰腺(FAP)抗原、Cripto-I抗原、CA6抗原、⑶20、CA55. I、MN/CA IX和硫酸軟骨素蛋白聚糖(例如參見Chang 等人，Cancer Res.，59，3192-98 (1999)，Miotti 等人，Int. J. CanCer, 39，297-303，(1987), Colomer 等人，見上，Heider 等人，見上，Welt 等人，見上，LePage 等人，AmericanAssn. For Cancer Research (AACR),2003AnuualMEEting, Poster Abstact No. 749, Kearse等人，Int. J. Cancer, 88,866-72 (2000)，MalonEy 等人，見上，Opavsky 等人，Genomics, 33,480-87(1996)，Behm 等人，Blood，87，1134-39(1996)和美國(guó)專利 5，665，357)。在綴合物經(jīng)由本文所述任意腫瘤特異性抗原或受體與靶(即腫瘤)結(jié)合后，激活類美坦素的細(xì)胞毒性?？梢约せ铑惷捞顾丶?xì)胞毒性的機(jī)理的實(shí)例包括經(jīng)由抗體與類美坦素之間二硫鍵的裂解向細(xì)胞內(nèi)部釋放游離類美坦素、細(xì)胞內(nèi)的抗體降解和類美坦素細(xì)胞毒性在細(xì)胞表面的活化。不過，本發(fā)明方法不限于這些示范性的類美坦素活化模式。事實(shí)上，任意激活類美坦素細(xì)胞毒性的機(jī)理都屬于本發(fā)明方法的范圍。出于人體給藥的目的，本文所述本發(fā)明液體組合物可以直接對(duì)人體給藥(例如輸注)，或者在給藥前不久用適合的稀釋劑稀釋。適合的稀釋劑是本領(lǐng)域已知的，包括D5W和生理鹽水(NS)。與適合的稀釋劑的稀釋比例有可能是I : 1、1 2、1 3或以上(例如I : 5、1 : 10或者甚至I : 50)。合乎需要的是，本發(fā)明組合物的稀釋不降低綴合物分子在組合物中的濃度低于約O. lmg/mL。在稀釋本發(fā)明液體組合物后，組合物每一組分(例如緩沖劑、表面活性劑和氯化鈉)的前述濃度相應(yīng)地降低了。當(dāng)本文所述本發(fā)明凍干組合物對(duì)人體給藥時(shí)，必須首先使組合物重構(gòu)，在使用前不久加入無菌液體賦形劑，例如注射用水、DSW或NS。因而，本發(fā)明進(jìn)一步提供殺死人體細(xì)胞的方法，包含(a)提供如本文所述的凍干組合物，(b)向凍干組合物加入水，提供重構(gòu)組合物，和(C)對(duì)人體給予重構(gòu)組合物，以便抗體與細(xì)胞表面結(jié)合，類美坦素被細(xì)胞內(nèi)在化(internalized),由此殺死細(xì)胞。上述與其他本發(fā)明實(shí)施方式有關(guān)的凍干組合物、給藥途徑、腫瘤特異性抗原和其組分也適用于上述本發(fā)明方法的相同方面。而且，正如本文所討論的，在用水重構(gòu)生本發(fā)明凍干組合物之后，上述與本發(fā)明液體組合物有關(guān)的綴合物和賦形劑(例如緩沖劑、表面活性劑、低溫保護(hù)劑和填充劑)的相對(duì)濃度的說明也適用于上述本發(fā)明方法的相同方面。正如本文所討論的，本發(fā)明方法無論采用液體組合物還是凍干組合物，都優(yōu)選地用于治療癌癥。本發(fā)明方法可以用于治療任意類型的癌癥，例如包括肺、乳腺、結(jié)腸、前列腺、腎、胰腺、卵巢、血液和淋巴器官的癌癥。盡管不太優(yōu)選，本發(fā)明組合物還可以用于治療其他與細(xì)胞增殖有關(guān)的疾病，包括自體免疫疾病(例如系統(tǒng)性狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和多發(fā)性硬化)、移植排斥(例如腎移植排斥、肝移植排斥、肺移植排斥、心臟移植排斥和骨髓移植排斥)、移植物對(duì)宿主的疾病、病毒感染(例如CMV感染、HIV感染、AIDS等)和寄生蟲感染(例如賈第蟲病、阿米巴病、血吸蟲病)等等。下列實(shí)施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明，但是當(dāng)然不應(yīng)被解釋為以任意方式限制其范圍。實(shí)施例I本實(shí)施例證明組合物的生產(chǎn)，該組合物包含綴合物、緩沖劑、表面活性劑、張力調(diào)節(jié)量的氯化鈉和水，該綴合物包含與類美坦素化學(xué)偶聯(lián)的抗體。包含與類美坦素DMl經(jīng)由二硫鍵化學(xué)偶聯(lián)的huN901單克隆抗體(“huN901 =DMlO的綴合物的生成以前已有描述(例如參見美國(guó)專利6，441，163)。分別在各種上述賦形劑存在下制備制劑，制劑含有l(wèi)mg/mL或5mg/mL huN901 :DM1綴合物。利用下列測(cè)定法評(píng)估每一制劑的穩(wěn)定性肉眼觀察以檢測(cè)微粒，色譜方法以測(cè)量游離藥物-相關(guān)性種類，和HPLC體積排阻色譜(SEC-HPLC)以檢測(cè)高與低分子量綴合物-相關(guān)性種類。關(guān)于肉眼觀察，微粒的存在說明不穩(wěn)定，因此被視為不可取的，而澄清的溶液說明是穩(wěn)定的制劑。色譜測(cè)定法用于測(cè)量4°C和25°C下的游離藥物量。每一這些測(cè)定法的結(jié)果提示了含有約5mg/mLhuN901 DM1綴合物、約IOmM檸檬酸鈉、約O. 01%聚山梨醇酯和氯化鈉的pH5. 5制劑(即本發(fā)明液體組合物)將具有優(yōu)異的穩(wěn)定性。為了證實(shí)上述制劑關(guān)于也是不穩(wěn)定性指標(biāo)的二聚物生成的穩(wěn)定性，將huN901 DMl綴合物濃縮，配制在磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)，pH6. 5(制劑1A-1C)或者IOmM檸檬酸鈉、O. 01%聚山梨醇酯20、60mM NaCl，pH5. 5 (制劑ID)中。在4°C或25C下6個(gè)月后，用SEC-HPLC測(cè)定樣品。這種分析的結(jié)果如表I所述。表I
權(quán)利要求
1.組合物，包含(i)包含與類美坦素化學(xué)偶聯(lián)的抗體的綴合物，( )約2mM至約50mM的緩沖劑，其選自由檸檬酸鹽緩沖劑、乙酸鹽緩沖劑、琥珀酸鹽緩沖劑和組氨酸緩沖劑組成的組，(iii)選自甘油、二甲亞砜、聚乙二醇、葡聚糖、葡萄糖、海藻糖和蔗糖的賦形劑，(iv)表面活性劑和(V)水，其中該組合物具有約5-6的pH。
2.權(quán)利要求I的組合物，其中所述賦形劑的濃度占組合物總體積的約O.1%至約3%重量/體積。
3.權(quán)利要求I或2的組合物，其中所述賦形劑是海藻糖。
4.權(quán)利要求I的組合物，其中所述賦形劑是蔗糖。
5.權(quán)利要求4的組合物，其中蔗糖的濃度占組合物總體積的約O.1%至約10%重量/體積。
6.權(quán)利要求5的組合物，其中蔗糖的濃度占組合物總體積的約7%至約10%重量/體積。
7.組合物，包含(i)包含與類美坦素化學(xué)偶聯(lián)的抗體的綴合物，(ii)約2mM至約50mM的緩沖劑，其選自由檸檬酸鹽緩沖劑、乙酸鹽緩沖劑、琥珀酸鹽緩沖劑和組氨酸緩沖劑組成的組，(iii)選自甘油、二甲亞砜、聚乙二醇、葡聚糖、葡萄糖、海藻糖和蔗糖的第一賦形劑，(iv)選自甘氨酸、甘露醇和葡聚糖的第二賦形劑，(v)表面活性劑和(Vi)水，其中該組合物具有約5-6的pH。
8.權(quán)利要求7的組合物，其中所述第一賦形劑的濃度占組合物總體積的約O.1%至約3%重量/體積。
9.權(quán)利要求8的組合物，其中所述第一賦形劑的濃度占組合物總體積的約O.5%重量/體積。
10.權(quán)利要求7-9任一項(xiàng)的組合物，其中所述第一賦形劑是甘油。
11.權(quán)利要求7的組合物，其中所述第一賦形劑是蔗糖。
12.權(quán)利要求11的組合物,其中蔗糖的濃度占組合物總體積的約O.1%至約10%重量/體積。
13.權(quán)利要求12的組合物，其中蔗糖的濃度占組合物總體積的約O.1%至約3%重量/體積,約2 %至約5 %重量/體積，或約4 %至約6 %重量/體積。
14.權(quán)利要求7-13任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二賦形劑是甘氨酸。
15.權(quán)利要求7-13任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二賦形劑是甘露醇。
16.權(quán)利要求7-15任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二賦形劑的濃度為約5 OmM至約500mMo
17.權(quán)利要求16的組合物，其中所述第二賦形劑的濃度為約250mM。
18.組合物，包含(i)包含與類美坦素化學(xué)偶聯(lián)的抗體的綴合物，(ii)約2mM至約50mM的緩沖劑，其選自由檸檬酸鹽緩沖劑、乙酸鹽緩沖劑、琥珀酸鹽緩沖劑和組氨酸緩沖劑組成的組，(iii)約50mM至約500mM的氯化鈉，(iv)表面活性劑和(V)水，其中該組合物具有約5-6的pH。
19.權(quán)利要求18的組合物，其中氯化鈉的濃度是約50mM至約100mM。
20.權(quán)利要求18的組合物，其中氯化鈉的濃度是約IOOmM至約200mM。
21.權(quán)利要求18-20任一項(xiàng)的組合物，其中所述組合物進(jìn)一步包含蔗糖。
22.權(quán)利要求21的組合物，其中蔗糖的濃度占組合物總體積的約O.1%至約10%重量/體積。
23.權(quán)利要求22的組合物，其中蔗糖的濃度占組合物總體積的約2%至約5%重量/體積。
24.權(quán)利要求1-23任一項(xiàng)的組合物，其中所述表面活性劑的濃度占組合物總體積的約O. 002 %至約O. I %重量/體積。
25.權(quán)利要求24的組合物，其中所述表面活性劑的濃度占組合物總體積的約O.01%重量/體積。
26.權(quán)利要求1-25任一項(xiàng)的組合物，其中所述表面活性劑是聚山梨醇酯80。
27.權(quán)利要求1-25任一項(xiàng)的組合物，其中所述表面活性劑是聚山梨醇酯20。
28.權(quán)利要求1-27任一項(xiàng)的組合物，其中所述緩沖劑的濃度是約IOmM至約20mM。
29.權(quán)利要求1-27任一項(xiàng)的組合物，其中所述緩沖劑的濃度是約5mM至約15mM。
30.權(quán)利要求29的組合物，其中所述緩沖劑的濃度是約10mM。
31.權(quán)利要求1-30任一項(xiàng)的組合物,其中所述綴合物的濃度是約O.lmg/mL至約5mg/mLo
32.權(quán)利要求31的組合物，其中所述綴合物的濃度是約lmg/mL。
33.權(quán)利要求31的組合物，其中所述綴合物的濃度是約5mg/mL。
34.權(quán)利要求1-33任一項(xiàng)的組合物，其中所述組合物的pH為約5.5。
35.權(quán)利要求1-34任一項(xiàng)的組合物,其中所述組合物進(jìn)一步包含抗氧化劑。
36.權(quán)利要求35的組合物，其中所述抗氧化劑的濃度是約100μ M至約lOOmM。
37.權(quán)利要求35或36的組合物，其中所述抗氧化劑選自由超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶、生育三烯酚、多元酚、鋅、錳、硒、維生素C、維生素Ε、β胡蘿卜素、半胱氨酸和甲硫氨酸組成的組。
38.權(quán)利要求1-34任一項(xiàng)的凍干的組合物。
39.帶包裝的組合物，包含密封的容器和分散于其中的權(quán)利要求1-38任一項(xiàng)的組合物和惰性氣體覆蓋層。
40.權(quán)利要求39的帶包裝的組合物，其中所述惰性氣體是氮或氬。
41.權(quán)利要求1-37任一項(xiàng)的組合物在制備用于治療與升高的細(xì)胞增殖水平相關(guān)的疾病的藥物中的用途，其中所述組合物被施用以便抗體可以與細(xì)胞表面上的抗原結(jié)合且可以激活類美坦素的細(xì)胞毒性，由此殺死細(xì)胞。
42.權(quán)利要求41的用途，其中所述藥物靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)或腫瘤內(nèi)施用。
43.凍干組合物，包含(i)治療有效量的綴合物，該綴合物包含與類美坦素化學(xué)偶聯(lián)的抗體，( )約O. Img至約2mg的緩沖劑,其選自由朽1檬酸鹽緩沖劑、乙酸鹽緩沖劑、琥拍酸鹽緩沖劑和組氨酸緩沖劑組成的組，(iii)選自甘油、二甲亞砜、聚乙二醇、葡聚糖、葡萄糖、海藻糖和蔗糖的第一賦形劑，(iv)選自甘氨酸、甘露醇和葡聚糖的第二賦形劑和(V)表面活性劑，其中當(dāng)用水重構(gòu)時(shí)該組合物具有約5-6的pH。
44.權(quán)利要求43的組合物，其中所述組合物包含約O.Img至約O. 5mg緩沖劑每mg綴合物。
45.權(quán)利要求44的組合物，其中所述組合物包含約O.3mg緩沖劑每mg綴合物。
46.權(quán)利要求43-45任一項(xiàng)的組合物,其中所述組合物包含約O.5mg至約5mg第一賦形劑每mg綴合物。
47.權(quán)利要求43-46任一項(xiàng)的組合物，其中所述第一賦形劑是蔗糖。
48.權(quán)利要求43-47任一項(xiàng)的組合物，其中所述組合物包含約2mg至約20mg第二賦形劑每mg綴合物。
49.權(quán)利要求43-48任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二賦形劑是甘氨酸。
50.權(quán)利要求43-48任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二賦形劑是甘露醇。
51.權(quán)利要求43-50任一項(xiàng)的組合物，其中所述組合物包含約O.005mg至約O. Img表面活性劑每mg綴合物。
52.權(quán)利要求43-51任一項(xiàng)的組合物，其中所述表面活性劑是聚山梨醇酯20。
53.權(quán)利要求43-51任一項(xiàng)的組合物，其中所述表面活性劑是聚山梨醇酯80。
54.權(quán)利要求43的組合物，其中所述組合物包含約O.3mg緩沖劑每mg綴合物，約Img第一賦形劑每mg綴合物，約3. Smg第二賦形劑每mg綴合物，和約O. 02mg表面活性劑每mg綴合物。
55.帶包裝的組合物，包含密封的容器和分散于其中的權(quán)利要求43-54任一項(xiàng)的組合物和惰性氣體覆蓋層。
56.權(quán)利要求55的帶包裝的組合物，其中所述惰性氣體是氮或氬。
57.重構(gòu)的組合物，包含(a)權(quán)利要求43-54任一項(xiàng)的凍干的組合物，和(b)水。
58.權(quán)利要求57的組合物在制備用于治療與升高的細(xì)胞增殖水平相關(guān)的疾病的藥物中的用途，其中所述組合物被施用以便抗體可以與細(xì)胞表面上的抗原結(jié)合且可以激活類美坦素的細(xì)胞毒性，由此殺死細(xì)胞。
59.權(quán)利要求58的用途，其中所述藥物靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)或腫瘤內(nèi)施用。
60.權(quán)利要求1-59任一項(xiàng)的組合物，其中所述抗體是單克隆抗體。
61.權(quán)利要求1-59任一項(xiàng)的組合物，其中所述抗體是人源化單克隆抗體或嵌合抗體。
62.權(quán)利要求1-61任一項(xiàng)的組合物，其中所述抗體結(jié)合選自NCAM/⑶56、⑶33、⑶19、⑶3、CanAg、PSMA、α -葉酸受體、Her2/neu、CD44v6、胎兒腺泡胰腺(FAP)抗原、Cripto-1、CA6、⑶20、CA55. K MN/CA IX和硫酸軟骨素蛋白聚糖的抗原。
63.權(quán)利要求1-59任一項(xiàng)的組合物，其中所述抗體選自由huN901、huMy9_6、huB4、huC242、trastuzumab、bivatuzumab、sibrotuzumab 和 rituximab 組成的組。
64.權(quán)利要求1-63任一項(xiàng)的組合物，其中所述類美坦素是N2’-脫乙酰-N2’ -(3-巰基_1_氧代丙基)美坦素(DMl)。
65.權(quán)利要求1-63任一項(xiàng)的組合物，其中所述類美坦素是N2’-脫乙酰-N2’ -(4-巰基-4-甲基-I-氧代戊基)美坦素(DM4)。
66.權(quán)利要求1-65任一項(xiàng)的組合物，其中所述抗體與類美坦素經(jīng)由化學(xué)鍵化學(xué)偶聯(lián)，該化學(xué)鍵選自由二硫鍵、酸不穩(wěn)定鍵、光不穩(wěn)定鍵、肽酶不穩(wěn)定鍵、硫醚鍵和酯酶不穩(wěn)定鍵組成的組。
67.權(quán)利要求1-65任一項(xiàng)的組合物，其中所述抗體與類美坦素經(jīng)由連接劑分子偶聯(lián)，該連接劑分子選自N-琥珀酰亞氨基-4- (2-吡啶基二硫代)丁酸酯(STOB)、N-琥珀酰亞氨基-4-(2-吡啶基二硫代)戊酸酯(SPP)和N-琥珀酰亞氨基-4-(N-馬來酰亞氨基甲基)環(huán)己烷-I-羧酸酯(SMCC)。
68.權(quán)利要求7的組合物，其中所述組合物包含(i)lmg/ml與N2’-脫乙酰-N2’(3-巰基-I-氧代丙基)美坦素(DMl)化學(xué)偶聯(lián)的huN901，(ii) IOmM的檸檬酸鈉，(iii)O. 5%重量/體積的蔗糖，(iv)250mM的甘氨酸，(V) O. 01 %重量/體積的聚山梨醇酯20，和(vi)水，其中該組合物具有5. 5的pH。
69.權(quán)利要求43的組合物，其中所述組合物包含(i)包含與N2’-脫乙酰-N2’-(3-巰基-I-氧代丙基)美坦素(DMl)化學(xué)偶聯(lián)的huN901的綴合物，(ii)約O. 3mg琥珀酸鈉緩沖劑每mg綴合物，(iii)約Img鹿糖每mg綴合物，(iv)約3. 8mg甘氨酸每mg綴合物,和(V)約O. 02mg聚山梨醇酯20每mg綴合物。
全文摘要
本發(fā)明提供液體組合物和凍干組合物，該組合物包含治療有效量的綴合物，該綴合物包含與類美坦素(maytansinoid)化學(xué)偶聯(lián)的抗體。本發(fā)明進(jìn)一步提供殺死人體細(xì)胞的方法，包含對(duì)人體給予兩種組合物之一，以便抗體與細(xì)胞表面結(jié)合，激活類美坦素的細(xì)胞毒性，由此殺死細(xì)胞。
文檔編號(hào)A61K31/537GK102940889SQ20121043954
公開日2013年2月27日 申請(qǐng)日期2004年5月14日 優(yōu)先權(quán)日2003年5月14日
發(fā)明者G·安普萊特, W·張, M·弗萊明, H－W·秦 申請(qǐng)人:伊繆諾金公司