專利名稱：控釋組合物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及制備控釋組合物的方法；以及，具體而言涉及通過乳化方法使包含生物活性劑和聚合物的有機溶液與包含有機離子的含水溶液相接觸以產(chǎn)生控釋組合物的方法。本發(fā)明進一步提供包含聚合物、有機離子和生物活性劑的控釋組合物的使用方法。
背景技術(shù)：
目前市場上有多種包含各種生物活性劑如GnRH類似物、人類生長激素、利培酮(risperidone)和促生長素抑制素類似物例如醋酸奧曲肽(octreotide acetate)的控釋組合物。這些控釋組合物代表性地是由可生物降解、生物相容性的聚合物配制而成。這種組合物由于減少了多次注射的需要而成為衛(wèi)生保健工作者及其患者的首選。此外，由于一次注射可對患者具有較長時間的治療作用，因此衛(wèi)生保健機構(gòu)首選它們是因為其可減少患者就診的次數(shù)，這有利于減少衛(wèi)生保健的費用。不幸的是，當(dāng)前控釋組合物的生產(chǎn)方法與配制中存在許多問題。當(dāng)前許多制備方法不適于生產(chǎn)載藥量高的濃縮制品，從而不得不采用大體積的肌肉內(nèi)注射(2mL)，而這在給藥時令患者極不舒服。此外，許多方法在包封之前需要費時且復(fù)雜的過程以增溶生物活性劑；并且為包封而進行的增溶操作可導(dǎo)致有害的釋放性質(zhì)，以及生物活性劑自身的降解。例如，使用更高水溶性的生物活性劑例如在向患者給藥或被引入生理介質(zhì)中與含水溶液相接觸后，常常導(dǎo)致不良的生物活性劑的“突釋”。這種生物活性劑水平的急劇升高會對患者有害并且僅剩余少量的生物活性劑在所需的治療時間中用于以后的釋放。曾嘗試過各種各樣的方法以解決溶解度問題，但未曾有特別有效或有用的方法。一種嘗試是將生物活性劑與包含陰離子頭部和疏水性尾部的表面活性劑分子相結(jié)合，以在包封之前增加生物活性劑在有機相中的溶解度。另一種方法是將有機酸與生物活性劑相結(jié)合以在包封之前生成水不溶性的加成鹽。水不溶性加成鹽的使用在給藥時能減少“突釋”效應(yīng)；然而，這種方法要求額外的生產(chǎn)過程從而使得這些化合物的制備昂貴且低效。另一種方法包括對生物活性劑的醋酸鹽進行包封從而使大量的化學(xué)修飾或降解的生物活性劑在被置于含水的生理緩沖鹽中后釋放出來?；瘜W(xué)降解是采用不理想的生物活性劑?；男问竭M行的。非常需要能夠生成具有載藥量高、給藥時突釋效應(yīng)很小且生物活性劑的降解很少的產(chǎn)品的控釋組合物制備方法，以實現(xiàn)這些種類的組合物作為人類或獸醫(yī)治療法的真正益處。

發(fā)明內(nèi)容
根據(jù)此處具體描述且概描的本發(fā)明目的，一方面，本發(fā)明涉及制備及使用控釋組合物的方法。在一個具體實施方案中，該方法包括以下步驟在有機相中將生物活性劑與聚合物相結(jié)合；將有機離子結(jié)合入水相中；并使所得有機相和水相接觸以產(chǎn)生控釋組合物。在某一具體實施方案中，該方法包括以下步驟在有機相中將生物活性劑與聚合物結(jié)合；將有機離子結(jié)合入水相中；并將所得有機相和水相經(jīng)乳化過程以產(chǎn)生控釋組合物。在某一具體實施方案中，該方法包括使包含聚合物與生物活性劑的有機相與包含有機離子的水相接觸，其中有效量的有機離子離開水相而進入有機相。在一個具體實施方案中，該有機相包含一種選自但不限于二氯甲烷、乙酸乙酯、苯甲醇、丙酮、乙酸以及碳酸丙烯酯的溶劑。 在一個特定的具體實施方案中，該有機相還包含一種共溶劑。該共溶劑可以選自但不限于二甲基亞砜、二甲基甲酰胺、η-甲基吡咯烷酮、peg2QQ、peg_、甲醇、乙醇、異丙醇以及苯甲醇。在另一具體實施方案中，該水相還包含乳化劑。該乳化劑可以選自但不限于聚(乙烯醇)、白蛋白、卵磷脂、維生素E-D-α-生育酚-聚乙二醇(TPGS)以及聚山梨醇酯。在一個特定的具體實施方案中，該乳化劑存在的最終濃度范圍可為約O. I至10重量％。在某一具體實施方案中，該有機離子的最終濃度在約O. I至IOOOmM的范圍。在某一具體實施方案中，該控釋組合物選自但不限于微粒和納米粒。在一個特定的具體實施方案中，該微粒和納米粒為可生物降解的。在另一具體實施方案中，該聚合物可以選自但不限于以下組中聚(丙交酯)、聚(乙交酯)、聚(丙交酯-共-乙交酯)、聚(乳酸)、聚(羥基乙酸)、聚(乳酸-共-羥基乙酸)、聚己內(nèi)酯、聚碳酸酯、聚酯酰胺、聚酸酐、聚(氨基酸)、聚原酸酯、聚乙酰(polyacetyls)、聚氰基丙烯酸酯、聚醚酯、聚(二氧雜環(huán)己酮)、聚(亞烴基燒基化物)(poly (alkylene alkylate)S)、聚乙二醇和聚(丙交酯-共-乙交酯)的共聚物、可生物降解的聚氨基甲酸酯、它們的混合物及共聚物。在另一具體實施方案中，該生物活性劑可以選自但不限于以下組中蛋白質(zhì)、核酸、肽、小分子藥物、免疫原、能促進細胞和組織生長和存活的代謝前體、抗腫瘤藥物、激素、抗組胺劑、心血管藥物、抗?jié)兯幬?、支氣管擴張劑、血管擴張劑、中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物、麻醉劑拮抗藥等。在某一具體實施方案中，該乳化方法選自水包油以及水包油包水。在一個特定的具體實施方案中，本發(fā)明的方法可通過任何已知的乳化方法來實施。在一個特定的具體實施方案中，該有機離子選自陰離子和陽離子物質(zhì)。在一個特定的具體實施方案中，該有機離子選自雙羥萘酸根、三氟甲基-對-甲基苯甲酸根、膽酸根、
2-萘磺酸根、2，3-萘二甲酸根、I-羥基-2-萘甲酸根、3-羥基-2-萘甲酸根、2-萘甲酸根以及水楊酰水楊酸根。在另一具體實施方案中，降解包括?；?。在一個特定的具體實施方案中，該?；磻?yīng)包括生物活性劑的氨基直接親核進攻聚酯如聚(d，I-丙交酯-共-乙交酯)的羰基碳。據(jù)猜測，本組合物中該生物活性劑是通過促進潛在的親核體(如氨基)的質(zhì)子化來防止或減少降解，從而導(dǎo)致親核體較不易于參與同PLGA聚合物骨架或其片段的?；磻?yīng)。在另一具體實施方案中，降解包括聚合物的溶解(lysis)。過量溶解可能導(dǎo)致聚合物分子量的快速丟失以及生物活性劑的過早釋放。在另一具體實施方案中，相對于有機離子，該生物活性劑的摩爾化學(xué)計量范圍為約O. 5至2. O。在一個特定的具體實施方案中，相對于有機離子，該生物活性劑的摩爾化學(xué)計量范圍為約I. O至I. 5。在另一具體實施方案中，本發(fā)明提供一種控釋組合物，其包含聚合物以及與有機離子組成復(fù)合物形式的生物活性劑。當(dāng)有機離子和生物活性劑形成緊密物理結(jié)合時即可形成該復(fù)合物。在另一具體實施方案中，該生物活性劑含量相對于根據(jù)本發(fā)明方法在不含有機離子時制備的組合物的生物活性劑含量可有所提高。
在另一具體實施方案中，本發(fā)明包括一種將生物活性劑與有機相結(jié)合；將聚合物與同一有機相結(jié)合；將有機離子與水相結(jié)合；以及通過利用乳化方法使所述有機相與所述水相接觸的方法，以用于生成包封形式的生物活性劑。本發(fā)明的其它優(yōu)點將在下列的說明書中部分列出，并且部分將可由說明書明顯得出，或者將可通過本發(fā)明的實施而學(xué)到。根據(jù)所附權(quán)利要求書中具體指出的要素及組合將認識并實現(xiàn)本發(fā)明的優(yōu)點。應(yīng)理解前述的概述以及以下的詳述都只是示例性和解釋性，而并非對如權(quán)利要求書所要求的本發(fā)明的限制。
具體實施例方式定義為本發(fā)明目的，下列術(shù)語應(yīng)具有以下含義為本發(fā)明目的，術(shù)語“可生物降解的”是指聚合物在特定治療環(huán)境可接受的一段時期內(nèi)于體內(nèi)溶解或降解。這種溶解或降解的產(chǎn)品可能包括更小的化學(xué)物種?？赏ㄟ^如酶促、化學(xué)和/或物理方法導(dǎo)致降解。在暴露于生理pH和溫度如pH范圍為6至9且溫度范圍為22°C至38°C后，生物降解典型地需消耗少于五年，通常少于I年。為本發(fā)明目的，術(shù)語“有機相”和“非連續(xù)相”可以互換并且是指本發(fā)明方法中建立的溶劑、聚合物以及生物活性劑的溶液，之后它將通過乳化方法與水相接觸以生成本發(fā)明的控釋組合物。為本發(fā)明目的，術(shù)語“降解”是指對生物活性劑的任何不需要的修飾，如?；?，或?qū)酆衔锏男揎?，如溶解。為本發(fā)明目的，術(shù)語“水相”和“連續(xù)相”可以互換并且是指本發(fā)明方法中建立的水與有機離子劑的溶液，之后它將通過乳化方法與有機相接觸以用于生成本發(fā)明的控釋組合物。為本發(fā)明目的，術(shù)語“結(jié)合”是指任何將兩種或更多種物質(zhì)置于一起的方法。這種方法包括但不限于攪拌、摻和、混合、調(diào)合、均質(zhì)化、摻入、摻混、熔合、接合、摻雜、攪動、合并、結(jié)合、混淆、接合、組合等。為本發(fā)明目的，范圍在此處可表示為從“大約”或“近似地”某一特定值，和/或到“大約”或“近似地”另一特定值。當(dāng)表示這種范圍時，另一具體實施方案包括從該特定值和/或到另一特定值。類似地，當(dāng)利用修飾語(antecedent) “大約”將數(shù)值表示為近似值時，應(yīng)理解為該特定值形成另一具體實施方案。還應(yīng)進一步理解為各范圍的端點不但關(guān)于另一端點具有重要意義而且獨立于另一端點具有重要意義。為本發(fā)明目的，術(shù)語“生物活性劑”是指在體內(nèi)或在體外具有生物活性的任何物質(zhì)，其中生物活性可以作為全身健康狀況或者至少一種健康標記(即，癥狀)的可見變化、作為相關(guān)的替代生物學(xué)標記的變化、或者作為化學(xué)結(jié)構(gòu)或生理相關(guān)分子的構(gòu)型的變化而被檢測到。為本發(fā)明目的，術(shù)語“有機離子”是指陽離子或陰離子物質(zhì)。有機離子可以其鹽或酸的形式存在。示例性的有機離子包括雙羥萘酸根、萘甲酸根、膽酸根等。為本發(fā)明目的，“控釋組合物”應(yīng)該是指與自然的生物活性劑相比具有不同的釋放性質(zhì)的任何組合物。典型的釋放性質(zhì)將包括在至少一周、至少一月、至少45天、或者長于45天的一段時間內(nèi)的生物活性劑的生理學(xué)可檢測的濃度。 此外，為本發(fā)明目的，術(shù)語“一個”(a、an)實體是指一個或更多個實體；如“一種蛋白質(zhì)”或“一種肽”是指一種或多種那些化合物或者至少一種化合物。同樣地，術(shù)語“一”、“一個或更多個”以及“至少一個”在此處可以互相替換使用。還應(yīng)注意的是，術(shù)語“包含”、“包括”以及“含有”可以互相替換使用。而且，化合物“選自以下組中”(或選自)是指下面列出的一種或更多種化合物，包括兩種或更多種化合物的混合物(即，組合)。根據(jù)本發(fā)明，一種分離的或生物學(xué)純的生物活性劑是指已從天然環(huán)境中分離出來的化合物。同樣地，“分離的”和“生物學(xué)純的”不必反映化合物被純化的程度。本發(fā)明分離的化合物可以從其天然來源中獲得、可以利用分子生物學(xué)技術(shù)制備、或者可以通過化學(xué)合成來制備。以下將對本發(fā)明的某些具體實施方案加以詳細的說明，其實施例將結(jié)合實施例部分詳細闡述。此處所公開的是用于制備本發(fā)明控釋組合物的成分。這些和其它物質(zhì)在此處公開，并應(yīng)理解為當(dāng)公開這些物質(zhì)的組合、子集、相互作用、組等但可能并未明確具體提及這些化合物的各種單獨的以及共同的置換時，這些置換已于此處分別加以具體描述并涵蓋。例如，如果已公開并討論許多生物活性劑，并且討論了對許多分子包括生物活性劑可以進行許多修飾，除非另有說明，則應(yīng)理解為具體涵蓋了生物活性劑的各種以及所有的組合和置換以及可能的修飾。這樣，如果公開了一類分子A、B、與C以及一類分子D、EJP F以及組合分子的實例A-D，那么即使如果并未分別提及，但仍應(yīng)認為已公開A-E、A-F、B-D、B-E、B-F、C-D、C-E和C-F，它們單獨地以及共同地被認為都是所指的組合。同樣地，還公開了它們的任何子集或組合。這樣，應(yīng)認為已公開例如A-E、B-F和C-E的亞組。這種觀念應(yīng)用到本說明書的各個方面，包括但不限于制備及使用本發(fā)明的方法中的各個步驟。生物活性劑在本發(fā)明的一個具體實施方案中，所述生物活性劑選自蛋白質(zhì)、核酸、糖類、肽以及小分子藥物。本發(fā)明使用的蛋白質(zhì)包括但不局限于抗體、治療性蛋白質(zhì)、人類生長激素、胰島素、催產(chǎn)素、奧曲肽、促性腺素釋放激素、亮丙瑞林(leuprolide)、干擾素α、干擾素β、干擾素Y、胰島素、降血鈣素、白細胞介素-I、白細胞介素-2等。本發(fā)明使用的核酸包括DNA、RNA、化學(xué)修飾的DNA以及化學(xué)修飾的RNA、適體、反義核酸、RNA干擾、以及小RNA干擾。糖類包括肝素、低分子量肝素等。肽包括LHRH激動劑以及合成的類似物、亮丙瑞林、促生長素抑制素類似物、激素、奧曲肽、胰高血糖素樣肽、催產(chǎn)素等。小分子藥物包括但不限于抗感染藥、細胞毒素、抗高血壓藥物、抗真菌藥物、抗精神病藥、抗糖尿病藥、免疫刺激物、免疫抑制劑、抗生素、抗病毒藥、抗驚厥藥、抗組胺劑、心血管藥物、抗凝血劑、激素、抗瘧藥、止痛劑、麻醉劑、留體、非留體抗炎藥、止吐藥。在另一具體實施方案中，該生物活性劑為免疫原。該免疫原可以選自但不限于用于刺激抗肝炎、抗流感、抗麻疹、抗風(fēng)疹、抗破傷風(fēng)、抗小兒麻痹癥、抗狂犬病等的抗體的免疫原。在另一具體實施方案中，該生物活性劑是能夠促進細胞或組織生長和存活或增強細胞功能的物質(zhì)或代謝前體。這種物質(zhì)或代謝前體可以選自但不限于神經(jīng)生長促進物質(zhì)如神經(jīng)節(jié)苷脂、神經(jīng)生長因子等；硬或軟組織生長促進劑如纖連蛋白、人類生長激素、集落刺激因子、骨形態(tài)發(fā)生蛋白、血小板衍生生長因子(platelet-derived growth factor)、胰島素衍生生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子-α、轉(zhuǎn)化生長因子_β、表皮生長因子、成纖維細胞生長 因子、白細胞介素-I、血管內(nèi)皮生長因子、角質(zhì)形成細胞生長因子、骨粉物質(zhì)(dried bonematerial)等。在另一具體實施方案中，該生物活性劑為抗腫瘤藥物。在一個特定的具體實施方案中，該抗腫瘤藥物選自但不限于甲氨喋呤、5-氟尿喃唳、阿霉素(adriamycin)、長春堿、順鉬、結(jié)合至毒素的腫瘤特異性抗體、腫瘤壞死因子等。在其它具體實施方案中，該生物活性劑選自但不限于抗組胺劑如苯海拉明等；心血管藥物如罌粟堿(papverine)、鏈激酶等；抗?jié)兯幬锶绠惐怃@等；支氣管擴張劑如metaproternal sulfate、氨茶堿等；血管擴張劑如茶堿、煙酸、米諾地爾等；中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物如安定藥、β -腎上腺素能阻滯劑、多巴胺等；抗精神病藥如利培酮；麻醉劑拮抗藥如納曲酮、納洛酮、丁丙諾啡；以及其它類似物質(zhì)。在某一具體實施方案中，該生物活性劑在其所施用的生物系統(tǒng)中能夠提供局部或全身生物學(xué)、生理學(xué)或治療作用。例如，該物質(zhì)可以用于控制感染或炎癥、改善細胞生長和組織再生、控制腫瘤生長和提高骨生長、以及其它功能。在另一具體實施方案中，控釋組合物可以包含兩種或更多種生物活性劑的組合。在一個特定的具體實施方案中，控釋組合物包含五種或更少的生物活性劑。在另一具體實施方案中，控釋組合物包含一種生物活性劑。在一個特定的具體實施方案中，該生物活性劑是與有機離子的復(fù)合物形式。在另一具體實施方案中，本發(fā)明的生物活性劑可包含各種鹽形式以及包括共價結(jié)合到親水性聚合物如聚(乙二醇)和聚(丙二醇)上的衍生物。本發(fā)明包括生物活性劑的藥物學(xué)等價物。藥物學(xué)等價物在體外表現(xiàn)出類似于或高于生物活性劑本身的活性。在一個特定的實例中，藥物學(xué)等價物可以具有與生物活性劑相似的化學(xué)結(jié)構(gòu)，它僅僅包含生物活性劑的生物活性部分或者是生物活性劑的合成類似物。在一個特定的具體實施方案中，該生物活性劑可表現(xiàn)至少一個正電荷或負電荷或者同時表現(xiàn)正電荷和負電荷。在一個特定的具體實施方案中，該生物活性劑為水溶性的。在另一特定的具體實施方案中，該生物活性劑溶于任選地包含一種共溶劑的有機溶劑中。該生物活性劑可以溶于水或有機溶劑或者可溶于該兩者。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)意識到在特定的情況下所利用的生物活性劑的實際劑量將根據(jù)所利用的特定化合物、所配制的特定組合物、施用方法、以及所治療的特定位點和患者的不同而改變。對給定患者的劑量可以利用常規(guī)考慮因素來確定，例如通過適當(dāng)?shù)某Ｒ?guī)藥理學(xué)方案對目標化合物與已知的生物活性劑的不同活性的常規(guī)比較。確定藥物化合物劑量領(lǐng)域的醫(yī)師和配方設(shè)計師將很容易根據(jù)標準推薦來確定劑量。有機離子本發(fā)明使用的有機離子 包括陰離子和陽離子物質(zhì)。陰離子物質(zhì)包括但不局限于下列有機酸及其鹽雙羥萘酸、十二烷基硫酸、膽酸、三氟甲基-對-甲基苯甲酸、2-萘磺酸、2，3-萘二甲酸、I-羥基-2-萘甲酸、3-羥基-2-萘甲酸、2-萘甲酸以及水楊酰水楊酸。此外有機形式的硫酸根、磺酸根、磷酸根、以及膦酸根是合適的有機離子。陰離子物質(zhì)的鹽形式可以包括鈉、銨、鎂、鈣鹽等。陽離子分子包括但不局限于那些含有銨基或胍基或被取代的銨基的基團。有機陰離子物質(zhì)與具有一種或更多種含有或者能夠接受正電荷如銨基或胍基的官能團的生物活性劑一起使用。有機陽離子物質(zhì)可以與具有一種或更多種含有或者能夠接受負電荷如羧基、硫酸根、磺酸根、磷酸根、或膦酸根的官能團的生物活性劑一起使用。本發(fā)明使用的有機離子物質(zhì)可以提高包封率以及載藥量所需的程度溶于水并有機相中。在一個特定的具體實施方案中，提高包封率和載藥量可以通過減少生物活性劑的降解來實現(xiàn)。在一個特定的具體實施方案中，有機離子物質(zhì)在水相中的濃度范圍為約O. 5至lOOmM。在另一特定的具體實施方案中，該有機離子為約5至40mM?？缮锝到獾奈⒘Ｔ谀骋痪唧w實施方案中，該控釋組合物為微粒。在某一具體實施方案中，生物活性劑以微粒形式與可生物降解的聚合物結(jié)合。在一個特定的具體實施方案中，微粒具有低于I. Omm的直徑并且代表性地介于I. O至200. O微米之間。微粒包括微球和微囊兩者，并且可以近似為球形或者具有其它幾何形狀。微球代表性地在組成上近似均一而微囊包含組成不同于周圍的外殼的核。為本公開的目的，術(shù)語微球、微粒和微囊可相互替換使用。在某些具體實施方案中，微?？捎筛鞣N不同的可生物降解的聚合物制備。適當(dāng)?shù)纳锵嗳菪?、可生物降解的聚合物包括如?丙交酯)、聚(乙交酯)、聚(丙交酯-共-乙交酯)、聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-共-乙醇酸)、聚己內(nèi)酯、聚碳酸酯、聚酯酰胺、聚酸酐、聚(氨基酸)、聚原酸酯、聚乙酰、聚氰基丙烯酸酯、聚醚酯、聚(二氧雜環(huán)己酮)、聚(亞烴基烷基化物)、聚乙二醇與聚(丙交酯)或者聚(丙交酯-共-乙交酯)的共聚物、可生物降解的聚氨基甲酸酯、它們的混合物以及共聚物。在一個特定的具體實施方案中，該微粒是由聚(d，I-丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)制備。當(dāng)暴露于生理pH狀態(tài)時PLGA降解并水解形成乳酸和乙醇酸，它們是細胞代謝的正常副產(chǎn)物。PLGA聚合物的分解速率取決于聚合物分子量、聚合物鏈中丙交酯與乙交酯單體的比例、以及單體亞單位的立構(gòu)規(guī)整性。破壞聚合物結(jié)晶性的L與D立體異構(gòu)體的混合物將提高聚合物的分解速率。此外，微球可以包含兩種或更多種不同分子量和/或不同單體比例的可生物降解聚合物的混合物。在其它可選擇的具體實施方案中，包括連接到PLGA的親水性聚合物的衍生化的可生物降解聚合物可以用于制備微球。在特定的具體實施方案中，該親水性聚合物選自但不限于聚(乙二醇)、聚(丙二醇)、以及聚(乙二醇)和聚(丙二醇)的共聚物。 可生物降解的納米粒在某些具體實施方案中，所述控釋組合物為納米粒。在某些具體實施方案中，連接或不連接親水性聚合物的生物活性劑與用于控制生物活性劑釋放的可生物降解的亞微顆粒結(jié)合。納米粒的直徑范圍為20. O納米至約2. O微米，并且代表性地介于100. O納米與I. O微米之間。納米?？梢圆捎门c微粒相同的方式制備，但利用高速混合或勻化以將聚合物/生物活性劑乳滴的大小降低至低于2. O微米并且代表性地低于I. O微米。制備納米粒的其它方法為本領(lǐng)域所熟知并且可以用于本發(fā)明。控釋組合物的生產(chǎn)在一個具體實施方案中，包含一種或更多種溶劑、生物活性劑以及聚合物的有機相與包含有機離子的水相接觸。在一個特定的具體實施方案中，所述有機相還包含共溶劑。在另一特定具體實施方案中，水相還包含乳化劑。在另一特定具體實施方案中，該有機離子為有機酸的鹽。在另一具體實施方案中，該有機相與水相接觸形成乳液，其中該乳液包括分散于水相中的有機相小液滴。隨后從乳液小液滴中將溶劑除去以形成硬化的微粒。在一個特定的具體實施方案中，溶劑是通過蒸發(fā)除去。在另一特定具體實施方案中，溶劑是通過萃取至萃取液中而除去；例如，該萃取液可以為水。在另一特定具體實施方案中，溶劑是通過過濾來除去。之后，可以從水相中回收硬化的微粒并干燥。在另一具體實施方案中，該乳液是通過攪拌有機相和水相獲得。在另一具體實施方案中，該乳液是通過使用攪拌器來制備。在一個特定的具體實施方案中，該攪拌器為靜態(tài)攪拌器。在某一具體實施方案中，該乳液是通過湍流混合來制備。在另一具體實施方案中，該乳液未通過瑞流混合而制備。所述乳化方法可以在介于組分的沸點和凝固點之間的任何溫度下實施。在一個具體實施方案中，該溫度范圍為約0°c至100°C并且典型地為5°C至75°C之間。在一個特定的具體實施方案中，該乳化方法是在約15°C至約60°C之間實施。本發(fā)明的有機相可以包含但不局限于以下溶劑二氯甲烷、乙酸乙酯、苯甲醇、丙酮、乙酸、碳酸丙烯酯以及其它可生物降解的聚合物可溶于其中的溶劑。在一個特定的具體實施方案中，該有機相的溶劑可以選自乙酸乙酯和二氯甲烷。在一個特定的具體實施方案中，水相可以包括水和乳化劑。在某一具體實施方案中，可將共溶劑加入到有機相中。它們可以任選地使用以提高生物活性劑在有機相中的溶解度。在一個特定的具體實施方案中，它們可以選自但不限于二甲基亞砜、二甲基甲酰胺、η-甲基吡咯烷酮、PEG200、PEG400、甲醇、乙醇、異丙醇、以及苯甲醇。在另一特定具體實施方案中，該共溶劑可以有機相溶劑的O至90%重量比的量存在。在另一特定具體實施方案中，該共溶劑為有機相溶劑的O至50%重量比。該生物活性劑可以首先溶于適當(dāng)體積的溶劑中，之后將其加入至任選地溶有可生物降解聚合物的有機相溶劑中，從而形成有機相所有組分的溶液。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可調(diào)節(jié)各組分的體積及加入的順序以獲得所需要的生物活性劑和可生物降解聚合物的溶液。在某一具體實施方案中，該生物活性劑將以1-20重量％的濃度存在于有機相中。在一個特定的具體實施方案中，該可生物降解聚合物將以2-40重量％的濃度存在于有機相中。在另一特定的具體實施方案中，該可生物降解聚合物將以5-20重量％的濃度存在于有機相中。有機離子被溶于水相中。在某一具體實施方案中，它們以約O. ImM至約IOOOmM的濃度溶解。在一個特定的具體實施方案中，它們以約I mM至約IOOmM的濃度溶解?？梢愿鶕?jù)各特殊的有機離子物質(zhì)以及生物活性劑調(diào)節(jié)該濃度以獲得所需的載藥量及包封率?？梢韵蛩嘀屑尤胍环N或更多種乳化劑以穩(wěn)定乳液。乳化劑可以選自但不限于聚(乙烯醇)、白蛋白、卵磷脂、維生素E TPGS以及聚山梨醇酯。該乳化劑在水相中存在的濃度為O至10重量％。在一個特定的具體實施方案中，它們存在的濃度為O. 5至5重量％。本發(fā)明的有機離子包括但不局限于下列有機酸及其鹽雙羥萘酸、十二烷基硫酸、膽酸、三氟甲基-對-甲基苯甲酸、2-萘磺酸、2，3-萘二甲酸、I-羥基-2-萘甲酸、3-羥 基-2-萘甲酸、2-萘甲酸、以及水楊酰水楊酸或硫酸鹽、磺酸鹽、磷酸鹽、以及膦酸鹽的有機衍生物。藥物劑型除配制為非胃腸道給藥如靜脈內(nèi)或肌肉內(nèi)注射的化合物以外，也可以使用本發(fā)明的其它可選的給藥方法，包括但不局限于皮內(nèi)給藥、肺部給藥、含服給藥、透皮給藥、透粘膜給藥。透粘膜給藥可以包括但不局限于眼、陰道、直腸以及鼻內(nèi)給藥。所有這些給藥方法為本領(lǐng)域所熟知。在一個特定的具體實施方案中，本發(fā)明的控釋組合物可以如通過鼻用溶液劑或噴霧劑、氣霧劑或吸入劑鼻內(nèi)給藥。鼻用溶液劑為通常設(shè)計為以液滴或噴霧形式向鼻腔給藥的含水溶液。制備鼻用溶液劑使之在各方面與鼻分泌液類似。這樣，含水鼻用溶液劑通常為等滲并稍加緩沖以維持5. 5至6. 5的pH。如果需要，類似于用于眼科制劑的抗菌防腐劑以及適當(dāng)?shù)乃幬锓€(wěn)定劑可以包含在所有劑型中。防腐劑和其它添加劑可以選自但不限于抗菌劑、抗氧化劑、螯合劑、惰性氣體等。已知各種商業(yè)鼻用制劑，它們包括如抗生素與抗組胺劑，并用于預(yù)防哮喘。在另一具體實施方案中，本發(fā)明的控釋組合物用于局部施用。這種控釋組合物包括但不局限于洗液、軟膏、乳膏、凝膠、滴劑、栓劑、噴霧劑、液體制劑以及散劑。常用的藥物載體、含水、粉末或油性基質(zhì)、增稠劑等可能是必須或有利的。賦形劑、載體以及稀釋劑本發(fā)明的控釋組合物可以在生物系統(tǒng)或?qū)嶓w所能夠耐受的任何賦形劑中配制。這種賦形劑的實例包括水、鹽水、林格氏溶液、葡萄糖溶液、Hank’s溶液以及其它含水生理學(xué)平衡鹽溶液。非水載體也可以使用，如不揮發(fā)性油、聚乙二醇以及可注射有機酯如油酸乙酯。其它有用的劑型包括包含增粘劑如羧甲基纖維素鈉、山梨醇或右旋糖酐的混懸劑。賦形劑還可以包含少量添加劑，如提高等滲性和化學(xué)穩(wěn)定性的物質(zhì)。緩沖液的實例包括磷酸緩沖液、碳酸氫鹽緩沖液、以及Tris緩沖液，而防腐劑的實例包括硫柳汞(thimerosal)、甲酌■、福爾馬林、苯甲醇。本發(fā)明用于控釋組合物的藥物載體為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。最常用的那些載體很可能為用于向人類給藥的標準載體，包括溶液如無菌水、鹽水以及生理PH的緩沖溶液。本發(fā)明的控釋組合物可以混懸在任何含水溶液或者其它用于向需要治療的人類或動物患者注射的稀釋劑中。含水稀釋劑溶液可以進一步包含選自羧甲基纖維素鈉、蔗糖、甘露醇、葡萄糖、海藻糖的增粘劑以及其它生物相容性粘度增強劑。粘度可以調(diào)節(jié)至介于2厘泊(cp)與IOOcp之間，更優(yōu)選為介于4和40cp之間。在一個特定的具體實施方案中，在稀釋劑中可以包含表面活性劑以提高控釋組合物的可懸浮性。表面活性劑可以選自但不限于聚山梨醇酯以及其它生物相容性表面活性齊U。表面活性劑使用的濃度為O至5重量％，優(yōu)選為O. I至I重量％。實施例下列實施例是用于闡述本發(fā)明的具體實施方案。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)意識到，以下實施例中所公開的技術(shù)代表發(fā)明者所發(fā)現(xiàn)的在本發(fā)明實踐中作用良好的技術(shù)，因此可以認為組成了其實踐的特定模式。然而，根據(jù)本發(fā)明公開的內(nèi)容，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)意識到，在不偏離本發(fā)明的宗旨和范圍的情況下，所公開的特定具體實施方案中可以存在許多變化， 并且仍然可得到相同或相似的結(jié)論。實施例I根據(jù)先前使用的方法使用共溶劑的包封于聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)微粒中的醋酸奧曲肽的常規(guī)制法制備醋酸奧曲肽微粒制劑以考察有機相中不同共溶劑的作用。制劑A-F是使用水包油型乳液/溶劑萃取技術(shù)進行制備，在表I中進行總結(jié)。將PLGA聚合物(50 50丙交酯/乙交酯，MW 24，000，1801^)溶于乙酸乙酯化切八(，9001^)，并將溶于共溶劑(表I)的醋酸奧曲肽(20mg)加入到該聚合物溶液中。將所得的均一有機相加入至含有1%聚乙烯醇(PVA)的水相(2mL)中并將該混合物渦旋15-30秒。將該乳液倒入溶劑萃取液(IOmM的磷酸鈉，pH 8. 0,150mL)中并攪拌四小時以萃取EtOAc。通過過濾分離微粒、用水洗滌并風(fēng)干過夜。將該制劑以粒徑、掃描電子顯微鏡(SEM)形態(tài)學(xué)、奧曲肽核載藥量及體外釋放特征來表征。使用乳化裝置再次制備制劑D，例如在PCT申請?zhí)朠CT/US04/11485中所公開的，將由醋酸奧曲肽(20mg)、MeOH (100 μ L)、PLGA聚合物(50 :50丙交酯/乙交酯，MW 24,000，180mg)及EtOAc (I. 9mL)的均一有機相(2mL)與1%PVA水相(4mL)結(jié)合。然后將該乳液加入到溶劑萃取液中并攪拌四小時以萃取EtOAc。該方法制備得到制劑D2 (表I)。所考察的共溶劑對粒徑和核載藥量有微小的影響。聚乙二醇(PEG)共溶劑粘度越高，粒徑越大。相反，核載藥量則與甲醇(MeOH)和PEG作為共溶劑(制劑A-C)相似。使用pH 8緩沖乳化步驟并以MeOH作為共溶劑以及以二甲基亞砜(DMSO)作為共溶劑(制劑F)獲得了最大的核載藥量。體外釋放動力學(xué)在磷酸鹽緩沖鹽水(PBS，pH 7. 2，37°C)或IOOmM乙酸鈉(NaOAc，pH 4.0，37°C)中測定。實例如表2所示(制劑D2)。PEG共溶劑系統(tǒng)具有最高的初始肽突釋率(8-10%)，而其它制劑的初始突釋率范圍為2-3%。盡管相對于其它制劑來說用極性非質(zhì)子溶劑制備的制劑(制劑E-F)的相對釋放速率有所減小從而引起肽釋放總量降低，但所有制劑釋放肽至少達6周。在釋放介質(zhì)(PBS，pH 7. 2，37°C)中溫育49天后，通過高效液相測定作為游離肽的醋酸奧曲肽95%完好。相比之下，在釋放介質(zhì)(PBS，pH 7. 2，37°C，表2)中溫育70天之后，醋酸奧曲肽PLGA微粒制劑生成55%的改性的肽。HPLC分析顯示新的肽實體比天然的醋酸奧曲肽更疏水。HPLC/MS分析顯示質(zhì)量與PLGA聚合物對母體肽的酰化一致。所檢測的質(zhì)量與隨機?；嘁恢拢?，肽加上一個或兩個乙醇酸或乳酸單體的任意組合。?；a(chǎn)物可能產(chǎn)生于奧曲肽中的親核部分對PLGA片段或聚合物骨架的進攻。在較低pH時，這些部分可能被質(zhì)子化而減少其親核性，進而減少酰化產(chǎn)物的量。據(jù)觀察，在IOOmM乙酸鈉(NaOAc, pH
4.O)緩沖液中溫育的醋酸奧曲肽PLGA微粒的?；碑a(chǎn)物的形成在49天時降低到I. 25%,這與PBS緩沖液所得結(jié)果(55%)形成鮮明對比。表I. PLGA微粒包封的醋酸奧曲肽膠囊
權(quán)利要求
1.一種制備控釋組合物的方法，其包括將包含生物活性劑和聚合物的有機相與包含有機離子的水相結(jié)合，其中所述有機離子存在于水相中以減少所述生物活性劑的降解，并且其中所述有機離子選自三氟甲基-對-甲基苯甲酸根、2-萘磺酸根、2，3-萘二甲酸根、I-羥基-2-萘甲酸根、2-萘甲酸根以及水楊酰水楊酸根；并回收所述組合物以制備控釋組合物。
2.如權(quán)利要求I所述的方法，其中所述有機離子的最終濃度范圍為O.I至lOOOmM。
3.如權(quán)利要求I所述的方法，其中所述有機相包含選自以下組中的溶劑二氯甲烷、乙酸乙酯、苯甲醇、丙酮、乙酸以及碳酸丙烯酯。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其中在所述有機相中進一步包含共溶劑。
5.如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述共溶劑選自以下組中二甲基亞砜、二甲基甲酰胺、η-甲基吡咯烷酮、PEG200、PEG400、甲醇、乙醇、異丙醇以及苯甲醇。
6.如權(quán)利要求I所述的方法，其中在水相中進一步包含乳化劑。
7.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述乳化劑選自以下組中聚乙烯醇、白蛋白、卵磷脂維生素E-TPGS以及聚山梨醇酯。
8.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述乳化劑的最終濃度范圍為O.I至10重量％。
9.如權(quán)利要求I所述的方法，其中所述控釋組合物選自微粒和納米粒。
10.如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述微粒和納米粒是可生物降解的。
11.如權(quán)利要求I所述的方法，其中所述聚合物選自以下組中聚丙交酯、聚乙交酯、聚丙交酯-共-乙交酯、聚乳酸、聚羥基乙酸、聚乳酸-共-羥基乙酸、聚己內(nèi)酯、聚碳酸酯、聚酯酰胺、聚酸酐、聚氨基酸、聚原酸酯、聚乙酰、聚氰基丙烯酸酯、聚醚酯、聚二氧雜環(huán)己酮、聚亞烴基烷基化物、聚乙二醇和聚原酸酯的共聚物、可生物降解的聚氨基甲酸酯、它們的混合物以及共聚物。
12.如權(quán)利要求I所述的方法，其中所述生物活性劑選自以下組中蛋白質(zhì)、核酸、糖類、肽、LHRH激動劑及其合成類似物、亮丙瑞林、催產(chǎn)素、促生長素抑制素及其合成類似物、小分子藥物、免疫原、能促進細胞和組織生長和存活的代謝前體、抗腫瘤藥物、激素、抗組胺劑、心血管藥物、抗?jié)兯幬铩⒅夤軘U張劑、血管擴張劑、中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物以及麻醉劑拮抗藥。
13.如權(quán)利要求12所述的方法，其中所述蛋白質(zhì)或所述肽選自以下組中奧曲肽、催產(chǎn)素、胰島素、亮丙瑞林、以及其合成變體。
14.如權(quán)利要求I所述的方法，其中所述有機相和水相是利用乳化方法相結(jié)合。
15.如權(quán)利要求14所述的方法，其中所述乳化方法選自水包油和水包油包水。
16.一種由權(quán)利要求I所述的方法制備的控釋組合物。
17.如權(quán)利要求I所述的方法，其中所述控釋組合物包括有機離子一生物活性劑復(fù)合物。
全文摘要
此處公開的方法用于制備控釋組合物。具體而言，本方法提供將包含生物活性劑和聚合物的有機相與包含有機離子的水相的接觸以制備包含生物活性劑的控釋組合物。本發(fā)明還包括包含聚合物、有機離子以及生物活性劑的控釋組合物。本發(fā)明還包括使用這種控釋組合物的方法。本發(fā)明的有效性在于該方法可用于制備包含生物活性劑的控釋組合物，該組合物能夠采用濃縮低劑量形式給藥、具有低突釋率并且生物活性劑的降解產(chǎn)物減少。
文檔編號A61K47/30GK102935069SQ201210469150
公開日2013年2月20日 申請日期2004年7月15日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月15日
發(fā)明者P·庫克·蓋瑞 申請人:Pr藥品有限公司