一種具有抗谷氨酸損傷活性的頭頂一顆珠有效部位及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種中藥及其活性部位的新用途，特別是涉及頭頂一顆珠及其活性部位的新用途。本發(fā)明頭頂一顆珠為土家族、苗族特色藥材，其來(lái)源為百合科植物延齡草Trilliumtschonoskii?Maxim.和吉林延齡草Trillium?kamtschaticum?Pall.ex?Pursh的根和根莖。頭頂一顆珠及其活性部位，特別是乙酸乙酯提取部位具有很好抗谷氨酸細(xì)胞損傷作用，因谷氨酸損傷是腦缺血和血管性癡呆發(fā)生的主要原因，因此，頭頂一顆珠及其乙酸乙酯提取部位是治療腦缺血和血管性癡呆的主要活性部位。
【專利說(shuō)明】一種具有抗谷氨酸損傷活性的頭頂一顆珠有效部位及其制備方法
發(fā)明領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及一種中藥及其活性部位的新用途，特別是涉及頭頂一顆珠及其活性部位的新用途。
【背景技術(shù)】
[0002]興奮性氨基酸毒性學(xué)說(shuō)是血管性癡呆的病理機(jī)制之一。該學(xué)說(shuō)認(rèn)為，腦缺血缺氧時(shí)引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮性氨基酸(excitatory amino acids, EAAs),特別是谷氨酸的大量釋放、重?cái)z取受阻及突觸后膜興奮性氨基酸受體過(guò)度激活，是造成神經(jīng)元損傷的重要原因。經(jīng)典的興奮性毒性理論認(rèn)為，腦缺血過(guò)程中谷氨酸的損傷作用主要是通過(guò)離子型受體發(fā)揮作用的，藥物治療的研究集中在離子型谷氨酸受體的阻斷劑，尤其是NMDA受體阻斷劑的研究，如美金剛已在臨床實(shí)驗(yàn)中證實(shí)能阻斷谷氨酸的毒性作用。近年大量的實(shí)驗(yàn)研究表明，興奮性氨基酸的興奮作用還與Y-氨基丁酸、神經(jīng)膠質(zhì)、谷氨酰胺等密切相關(guān)，而且除離子型谷氨酸受體外，代謝性氨基酸受體也參與額興奮性毒性作用，由此提出了弱興奮性毒性和間接興奮毒性作用等概念。腦缺血缺氧時(shí)引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)EAAs，特別是谷氨酸的大量釋放、重?cái)z取受阻及突觸后膜興奮性氨基酸受體過(guò)度激活，是造成神經(jīng)元損傷的重要原因。哺乳動(dòng)物腦內(nèi)各型興奮性氨基酸受體分布廣泛，其中大腦皮層和海馬的受體密度最高，間腦和中腦等部位則較低。谷氨酸受體分為兩大類:離子型谷氨酸受體(ionotropic glutamate receptors, iGluRs)和促代謝型谷氨酸受體(metabotropicglutamate receptors,mGluRs)。前者包括 N-甲基-D-天冬氨酸(n-methyl-D-aspartate,NMDA)受體、a_ 氨基 _3_ 羥基 _5_ 甲基 _4_ 異惡唑(a -amino-3-hydroxy-5-methyl-4isoxa-zolepropionic acid, AMPA)受體和海人藻酸(kainate, KA)受體，屬于配體門控離子通道受體。谷氨酸主要通過(guò)受體活化方式發(fā)揮毒性作用，引起神經(jīng)元損傷主要有以下兩個(gè)機(jī)制:①急性滲透性損傷，主要由谷氨酸激活A(yù)MPA受體和KA受體引起，使細(xì)胞膜對(duì)Na+通透性增加，大量Na+、Cl_、H2O內(nèi)流，導(dǎo)致神經(jīng)元胞體腫脹、死亡Ca2+相關(guān)性損傷，谷氨酸激活NMDA受體引起Ca2+內(nèi)流，同時(shí)激活細(xì)胞內(nèi)Ca2+庫(kù)的釋放，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)Ca2+超載，受Ca2+調(diào)節(jié)的磷酸酶、蛋白酶、核酸內(nèi)切酶、一氧化氮合成酶等被激活，引起細(xì)胞膜降解和骨架破壞，產(chǎn)生不可逆的損傷。
[0003]頭頂一顆珠為百合科植物延齡草Trillium tschonoskii Maxim.和吉林延齡草Trilliumkamtschaticum Pall, ex Pursh的根和根莖。頭頂一顆珠又名芋兒七、玉兒七、魚(yú)兒七、佛手七、黃花三七、獅兒七、尸兒七、延齡草、白花延齡草、三角七、頭頂珠、天珠、地珠等。頭頂一顆珠是我國(guó)土家族、苗族的傳統(tǒng)特色藥材，土家族認(rèn)為其性熱，味甜，微辣，有小毒，功效為鎮(zhèn)靜止痛、散瘀療傷、活血調(diào)經(jīng)、止血，用于治療眩暈頭痛、跌打損傷、月經(jīng)后期、刀傷出血，民間還用治療骨 折、風(fēng)氣病、瘡毒等癥；苗族認(rèn)為其味麻、性熱，有小毒，功效祛風(fēng)除濕、行氣活血，用于治療頭暈、跌打損傷、外傷出血、失眠、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)頭頂一顆珠能改善氟哌啶醇所致腦老化大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，升高大鼠血清、肝、生、海馬與腦皮質(zhì)SOD、GSH含量，增強(qiáng)由崗田酸側(cè)腦室注射導(dǎo)致的阿爾茨海默病大鼠腦組織的SOD、GSH-Px活性，減少M(fèi)DA蓄積，降低tau蛋白水平。
[0004]本發(fā)明將提供頭頂一顆珠抗谷氨酸損傷的一種活性部位及其制備方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供頭頂一顆珠抗谷氨酸損傷的活性部位；本發(fā)明的目的還在于提供頭頂一顆珠活性部位的提取工藝。
[0006]本發(fā)明采用的頭頂一顆珠，經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院周鳳琴教授鑒定為百合科植物吉林延齡草 Trillium kamtschaticum Pall, ex Pursh 的根和根莖。
[0007]本發(fā)明頭頂一顆珠的乙酸乙酯部位具有抗谷氨酸細(xì)胞損傷作用，對(duì)經(jīng)谷氨酸損傷的SH-SY5Y細(xì)胞有保護(hù)作用。乙酸乙酯部位是頭頂一顆珠抗谷氨酸損傷的主要活性部位，因此，其應(yīng)具有治療腦缺血和血管性癡呆的潛在藥用價(jià)值。
[0008]本發(fā)明頭頂一顆珠乙酸乙酯部位的制備方法包括以下步驟:
[0009]步驟1:選取頭頂一顆珠藥材，揀去雜質(zhì)，除去塵土，經(jīng)60°C恒溫烘箱干燥后粉碎；
[0010]步驟2:稱取藥材碎粉2000g，加入3倍量70%乙醇浸泡2小時(shí)后回流提取3次，每次提取2小時(shí)，減壓回收溶劑，得頭頂一顆珠總提取物559.5g ；
[0011]步驟3:加適量去離子水分散溶解，依次用3倍體積石油醚、乙酸乙酯、水飽和的正丁醇萃取，減壓回收溶劑，得石油醚部位4.9g、乙酸乙酯部位47.5g、正丁醇部位269.6g ；
[0012]步驟4:正丁醇 部位經(jīng)AB-8大孔吸附樹(shù)脂分離，依次用水、30%、50%、70%乙醇進(jìn)行洗脫，得30%乙醇洗脫部位32g、50%乙醇洗脫部位94g、70%乙醇洗脫部位76g。
[0013]將以上所得的提取部位，加入常規(guī)輔料，按常規(guī)的制劑工藝制成藥劑學(xué)科接受的任意常規(guī)劑型，包括膠囊劑、片劑、顆粒劑、凝膠劑、緩釋劑、口服液。
[0014]將以上所得的頭頂一顆珠活性部位按一定配比可以與天麻及其活性成分組成復(fù)方，如天珠散。
[0015]本發(fā)明中藥提取部位由頭頂一顆珠經(jīng)乙醇浸泡、乙酸乙酯提取，大孔吸附脂純化得到，同時(shí)經(jīng)過(guò)SH-SY5Y細(xì)胞的谷氨酸損傷模型試驗(yàn)證明，本發(fā)明的頭頂一顆珠乙酸乙酯部位能對(duì)由谷氨酸引起的SH-SY5Y細(xì)胞損傷有保護(hù)作用。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0016]圖1:野生延齡草(陜西鰲山)
[0017]圖2:頭頂一顆珠藥材(河北安國(guó))
[0018]圖3:血管性癡呆(VD)的發(fā)生與谷氨酸
[0019]圖4:頭頂一顆珠乙酸乙酯部位(TTMl)對(duì)Glu損傷的SH-SY5Y細(xì)胞形態(tài)的保護(hù)作用(X400)，圖4A是空白對(duì)照組SH-SY5Y細(xì)胞；圖4B是2mM谷氨酸損傷的SH-SY5Y細(xì)胞模型組；圖4C是經(jīng)2mM谷氨酸損傷的SH-SY5Y細(xì)胞，并給予頭頂一顆珠乙酸乙酯部位(TTMl) 2.5 μ g/ml ；圖4D是經(jīng)2mM谷氨酸損傷的SH-SY5Y細(xì)胞，并給予TTMl5 μ g/ml ；圖4E是經(jīng)2mM谷氨酸損傷的SH-SY5Y細(xì)胞，并給予TTMllO μ g/ml ；圖4F是經(jīng)2mM谷氨酸損傷的SH-SY5Y 細(xì)胞，并給予 TTM120 μ g/ml。
[0020]圖5:頭頂一顆珠乙酸抑制部位(TTMl)對(duì)Glu損傷的SH-SY5Y細(xì)胞凋亡的影響，圖5A是空白對(duì)照組SH-SY5Y細(xì)胞，圖5B是2mM谷氨酸損傷的SH-SY5Y細(xì)胞模型組，箭頭示發(fā)生凋亡的細(xì)胞，圖5C是經(jīng)2mM谷氨酸損傷的SH-SY5Y細(xì)胞，并給予頭頂一顆珠乙酸乙酯部位(TTMl) 10 μ g/ml,圖經(jīng)2mM谷氨酸損傷的SH-SY5Y細(xì)胞，并給予頭頂一顆珠乙酸乙酯部位(TTMl) 20 μ g/ml ο
【具體實(shí)施方式】
[0021]實(shí)驗(yàn)例1:頭頂一顆珠抗SH-SY5Y細(xì)胞谷氨酸損傷有效部位篩選材料與方法
[0022]細(xì)胞人神經(jīng)母細(xì)胞瘤株SH-SY5Y細(xì)胞購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所。
[0023]藥品與試劑頭頂一顆珠的不同提取部位(見(jiàn)表-1)，由山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院周鳳琴教授提供，經(jīng)冷凍干燥后用二甲基椏楓(DMSO)制成儲(chǔ)備液，使用時(shí)用DEMD/F12培養(yǎng)液稀釋；
[0024]DEMD/F12培養(yǎng)基，Gibco公司產(chǎn)品，批號(hào)828485 ;胰蛋白酶、四噻唑藍(lán)(MTT)，Amresco公司產(chǎn)品，北京拜耳迪生物技術(shù)公司分裝；胎牛血清(FBS)，Hyclone公司，批號(hào)AUB34148 ;谷氨酸，北京拜耳迪生物技術(shù)公司；DMS0，Sigma公司，批號(hào)BCBB9519。
[0025]表-1頭頂一顆珠不同提取部位
【權(quán)利要求】
1.一種抗谷氨酸損傷活性的中藥，其特征在于藥材來(lái)源為為百合科植物延齡草Trilliumtschonoskii Maxim.和吉林延齡草 Trillium kamtschaticum Pall, ex Pursh 的根和根莖。
2.如權(quán)利要求1所述的中藥，其為土家族、苗族特色藥材，藥材名稱為頭頂一顆珠，其特征在于藥材的別名包括芋兒七、獅兒七、黃花三七、延齡草、玉兒七、魚(yú)兒七、尸兒七、佛手七、黃花三七、尸兒七、芋兒七、獅兒七、白花延齡草、三角七、頭頂珠、天珠、地珠。
3.如權(quán)利要求1所述的中藥，其特征在于具有抗谷氨酸損傷活性的提取部位為頭頂一顆珠乙酸乙酯部位。
4.如權(quán)利要求3所述的頭頂一顆珠乙酸乙酯提取部位，其特征在于乙酸乙酯活性部位可能具有抗腦缺血及血管性癡呆的作用。
5.如權(quán)利要求3所述的頭頂一顆珠的活性部位，其特征在于活性部位的制備方案為:取干燥頭頂一顆珠藥材粉碎后，加入3倍量70%乙醇浸泡2小時(shí)，回流提取3次，每次2小時(shí)，合并減壓回收溶劑，得頭頂一顆珠總提取物。將總提取物加適量去離子水分散溶解，依次用3倍體積石油醚、乙酸乙酯、水飽和的正丁醇萃取，減壓回收溶劑，得頭頂一顆珠乙酸乙酯部位。
6.如權(quán)利要求4所述的頭頂一顆珠可與天麻(為蘭科植物天麻GastrodiaelataB1.的塊莖)組成復(fù)方，即天珠散，用治風(fēng)痰型神衰癥(土家族醫(yī)學(xué)病名，相當(dāng)于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的血管性癡呆)，見(jiàn)頭暈?zāi)垦?，失眠多?mèng)，精神不佳，舌胖大苔白，脈滑。
7.如權(quán)利要求6所述的中藥復(fù)方天珠散，其特征在于由頭頂一顆珠6g、天麻12g組成，服藥方法為研粉，每次3g，與雞蛋拌勻蒸服，2次/日。
8.如權(quán)利要求3、4、6、7所述的天珠散，其特征在于可由頭頂一顆珠的乙酸乙酯部位與天麻主要活性成分如天麻素等組成組分中藥。
9.如權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的中藥，其特征在于頭頂一顆珠活性部位在治療血管性癡呆及腦缺血疾病中的應(yīng)用。
10.如權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的中藥，其特征在于可加入藥學(xué)上可接受的輔料或賦形劑。
11.如權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的中藥，其特征在于可制成臨床可接受的劑型。
【文檔編號(hào)】A61K36/896GK103830503SQ201210479479
【公開(kāi)日】2014年6月4日 申請(qǐng)日期:2012年11月23日 優(yōu)先權(quán)日:2012年11月23日
【發(fā)明者】李志勇, 李彥文, 周鳳琴 申請(qǐng)人:李志勇, 李彥文, 周鳳琴