專利名稱：山藥糖蛋白在提高腦細(xì)胞線粒體氧化代謝酶活性的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種山藥糖蛋白在提高腦細(xì)胞線粒體氧化代謝酶活性的用途，尤其涉及山藥糖蛋白在制備提高腦細(xì)胞線粒體中丙酮酸脫氫酶、O酮戊二酸脫氫酶活性類藥物中的用途。
背景技術(shù)：
腦細(xì)胞線粒體是腦細(xì)胞維持正常生理活動的主要細(xì)胞器之一，同時也是控制腦細(xì)胞凋亡的開關(guān)，在正常情況下，線粒體中的主要氧化代謝酶丙酮酸脫氫酶和α酮戊二酸脫氫酶，將產(chǎn)能物質(zhì)氧化代謝后產(chǎn)生能量(ATP)供細(xì)胞維持正常的生理活動，但如果由于腦細(xì)胞的退行性病變使線粒體氧化代謝效率降低，或由于腦血管梗賽導(dǎo)致腦組織缺血缺氧，使腦細(xì)胞無法產(chǎn)生足夠的ATP來維持正常的生理功能，就會產(chǎn)生一系列病理改變，如老年癡呆、血管性癡呆、中風(fēng)等。換言之，在保持腦細(xì)胞基本血供、氧供的前提下，即便在缺血、缺氧的條件下，如果能提高腦細(xì)胞線粒體主要氧化代謝酶的活性，提高氧化產(chǎn)能的效率，也會使因退化和損傷的腦細(xì)胞功能得到一定程度的保護(hù)和恢復(fù)。從而使因這些病理變化而產(chǎn)生的疾病得到有效地治療和控制。
山藥糖蛋白為薯蕷科薯蕷屬植物山藥根莖中所含有的一種天然活性成分，在此前公開的研究中證明此物質(zhì)可以有效治療睡眠呼吸暫停綜合征、具有抗缺氧、抗疲勞等作用(ZL201010171536. I和ZL2010101715337)，本發(fā)明在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步研究表明山藥糖蛋白能顯著地提高腦細(xì)胞線粒體中丙酮酸脫氫酶和α酮戊二酸脫氫酶的活性，從而使因缺血、缺氧和其它因素導(dǎo)致的腦細(xì)胞線粒體氧化代謝降低所致的損傷和功能障礙得到治療和恢復(fù)，但到目前為止，尚未見有相關(guān)報道。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于，提供一種山藥糖蛋白在提高腦細(xì)胞線粒體氧化代謝酶活性的用途，通過動物實驗進(jìn)行篩選和驗證，證明了山藥糖蛋白具有顯著提高腦細(xì)胞線粒體中進(jìn)行氧化代謝的關(guān)鍵酶即丙酮酸脫氫酶和α-酮戊二酸脫氫酶的活性，從而使伴有這些酶活性的降低所導(dǎo)致的氧化代謝效率的下降的老年癡呆、血管性癡呆、腦梗塞、腦癱等腦細(xì)胞退化和損傷類疾病得到有效治療。
本發(fā)明所述的一種山藥糖蛋白在制備提高腦細(xì)胞線粒體氧化代謝酶活性的用途， 該山藥糖蛋白在制備提高腦細(xì)胞線粒體中丙酮酸脫氫酶和α酮戊二酸脫氫酶活性的藥物，其中所述的山藥糖蛋白來自薯蕷科薯蕷屬植物山藥或薯蕷科其它屬植物的干燥根莖， 所述的山藥糖蛋白的制備按下列步驟進(jìn)行
a、將山藥干燥根莖粉碎成細(xì)粉后，加入2-5倍量的水加熱，溫度50-100°C，提取兩次，每次2-3小時，過濾后合并兩次提取液，將提取液減壓濃縮；
b、將步驟a所得的濃縮液中加入濃度為95%的乙醇，使其含醇量達(dá)到60_75%靜置，出現(xiàn)白色沉淀物，靜置了 3-6小時，將白色沉淀物與上清液分離；
C、將步驟b所得的上清液中繼續(xù)加入濃度為95-98%的乙醇，使其乙醇含量達(dá)到 90-95%，出現(xiàn)棕色粘膠狀沉淀，靜置3-6小時后除去上清液，收集沉淀物，干燥后即可得到棕色或深棕色結(jié)晶狀或粘膠狀固體的山藥糖蛋白。
所述的藥物是以山藥糖蛋白為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的載體或輔助性成分制備而成的藥物制劑。
所述的藥物制劑是膠囊劑、顆粒劑、片劑、散劑、口服液或糖漿劑。
本發(fā)明所述的山藥糖蛋白及其制劑，具有良好的提高腦細(xì)胞線粒體中丙酮酸脫氫酶和α酮戊二酸脫氫酶的活性的作用，可用于治療因腦細(xì)胞線粒體氧化產(chǎn)能效率降低，而產(chǎn)生的各種急慢性腦損傷和因腦細(xì)胞氧化代謝降低而產(chǎn)生的腦功能退化類疾病，其來源于天然植物，藥源充足，提取制備方法簡便易行，可將其制成膠囊、片劑、顆粒劑、口服液等多種劑型，具有療效顯著，使用安全方便等優(yōu)點。
根據(jù)本發(fā)明所述的內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本思想的前提下，還可以作出其它多種形式的修改，替換與變更。以下通過實施例形式的具體實施方式
，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再做進(jìn)一步詳細(xì)說明，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
具體實施方式
實施例I :山藥糖蛋白的制備
取山藥原生藥IOOOg粉碎成細(xì)粉，加入2倍量水加熱，溫度50°C，提取兩次，每次2 小時，過濾后合并兩次提取液，將提取液濃縮至50%，將濃度為95%乙醇加入濃縮液中使其含醇量達(dá)到60%，出現(xiàn)白色沉淀物后靜置了 3-6小時，將沉淀物與上清液分離，在上清液中繼續(xù)加入濃度為95%乙醇使其含醇量達(dá)到90%，出現(xiàn)棕色沉淀，靜置3-6小時后除去上清液收集沉淀物，烘干干燥，即可得到棕色或深棕色粘膠狀固體粗山藥糖蛋白。
實施例2 :山藥糖蛋白的制備
取山藥原生藥IOOOg粉碎成粗粉，加入3倍量水加熱，溫度70°C，提取2次，每次時間3小時，過濾后合并兩次提取液，濃縮50%，將濃度為95%乙醇加入濃縮液中使其含醇量達(dá)到70%，出現(xiàn)白色沉淀，靜置3-6小時，將沉淀物與上清液分離，向上清液中繼續(xù)加入濃度為 95%乙醇，使其含醇達(dá)到90%，出現(xiàn)棕色粘膠狀沉淀，除去上清液，收集沉淀物，真空干燥，即可得到棕色或深棕色固體狀較純的山藥糖蛋白。
實施例3 :山藥糖蛋白的制備
取山藥原生藥IOOOg粉碎為大顆粒狀，加入5倍量水加熱，溫度100°C，提取3次， 每次2小時，過濾后合并兩次提取液，濃縮至50%，將濃度為95%乙醇加入濃縮液中，使其含醇量達(dá)到75%，出現(xiàn)白色沉淀后，抽取上清液，上清液中繼續(xù)加入濃度為98%乙醇，使其含醇量達(dá)到95%，出現(xiàn)黃棕色粘膠狀沉淀，除去上清液，收集沉淀物進(jìn)行真空冷凍干燥，即可得到棕色結(jié)晶狀較純的山藥糖蛋白。
實施例4 :山藥糖蛋白對小鼠腦細(xì)胞線粒體中丙酮酸脫氫酶和a酮戊二酸脫氫酶活性的作用研究
材料和方法
材料小鼠a酮戊二酸脫氫酶酶聯(lián)免疫分析試劑盒，小鼠丙酮酸脫氫酶酶聯(lián)免疫分析試劑盒均購自北京永輝生物科技有限公司；
動物昆明種小鼠，雄雌各半，體重(20 土 2)g，由新疆醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供；
動物分組將27只小鼠隨機(jī)分為3組，每組9只，即對照組，山藥糖蛋白小劑量組和山藥糖蛋白大劑量組；
藥物將山藥糖蛋白加入純凈水溶解，配制成0、42g/mL的溶液備用；
方法山藥糖蛋白大劑量小鼠組按0，42g/Kg體重給予山藥糖蛋白溶液灌胃，山藥糖蛋白小劑量小鼠按0,21g/Kg體重給予山藥糖蛋白溶液灌胃，每天一次，連續(xù)10天,對照組則給予純凈水灌胃，第10天給藥一小時后，處死小鼠后，取腦組織稱重，加入一定量的 PBS (pH7. 4)，用勻漿器將標(biāo)本充分勻漿，離心20分鐘(2000 — 3000轉(zhuǎn)/分)，仔細(xì)收集上清，分裝一份待檢測，其余冷凍備用，用相應(yīng)的試劑盒按說明書操作檢測。
結(jié)果
山藥糖蛋白大小兩個劑量組與對照組相比，小鼠腦組織中，丙酮酸脫氫酶與α酮戊二酸脫氫酶的含量顯著增加，見表I :
表I對照組與糖蛋白組酶含量對比(α酮戍二酸脫氫酶U/mg protein)
權(quán)利要求
1.一種山藥糖蛋白在制備提高腦細(xì)胞線粒體氧化代謝酶活性的用途，其特征在于該山藥糖蛋白在制備提高腦細(xì)胞線粒體中丙酮酸脫氫酶和α酮戊二酸脫氫酶活性的藥物，其中所述的山藥糖蛋白來自薯蕷科薯蕷屬植物山藥或薯蕷科其它屬植物的干燥根莖，所述的山藥糖蛋白的制備按下列步驟進(jìn)行 a、將山藥干燥根莖粉碎成細(xì)粉后，加入2-5倍量的水加熱，溫度50-100°C，提取兩次，每次2-3小時，過濾后合并兩次提取液，將提取液減壓濃縮； b、將步驟a所得的濃縮液中加入濃度為95%的乙醇，使其含醇量達(dá)到60-75%靜置，出現(xiàn)白色沉淀物，靜置了 3-6小時，將白色沉淀物與上清液分離； C、將步驟b所得的上清液中繼續(xù)加入濃度為95-98%的乙醇，使其乙醇含量達(dá)到90-95%，出現(xiàn)棕色粘膠狀沉淀，靜置3-6小時后除去上清液，收集沉淀物，干燥后即可得到棕色或深棕色結(jié)晶狀或粘膠狀固體的山藥糖蛋白。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的用途，其特征在于所述的藥物是以山藥糖蛋白為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的載體或輔助性成分制備而成的藥物制劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的用途，其特征在于所述的藥物制劑是膠囊劑、顆粒劑、片劑、散劑、口服液或糖漿劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種山藥糖蛋白在提高腦細(xì)胞線粒體氧化代謝酶活性的用途，通過動物實驗進(jìn)行篩選和驗證，證明了山藥糖蛋白具有顯著提高腦細(xì)胞線粒體中進(jìn)行氧化代謝的關(guān)鍵酶即丙酮酸脫氫酶和ɑ-酮戊二酸脫氫酶的活性，從而使伴有這些酶活性的降低所導(dǎo)致的氧化代謝效率的下降的老年癡呆、血管性癡呆、腦梗塞、腦癱等腦細(xì)胞退化和損傷類疾病得到有效治療。
文檔編號A61P25/28GK102920998SQ20121051386
公開日2013年2月13日 申請日期2012年12月5日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月5日
發(fā)明者多力坤·馬木特 申請人:多力坤·馬木特