專利名稱：監(jiān)測和調(diào)制hgf/hgfr活性的制作方法
監(jiān)測和調(diào)制HGF/HGFR活性本申請是申請日為2006年3月30日、中國申請?zhí)枮?00680019187. 3、發(fā)明名稱為“監(jiān)測和調(diào)制HGF/HGFR活性”的發(fā)明申請的分案申請。Z相關(guān)串請的交叉引用本申請要求2005年3月31日提交的美國申請系列號60/667，463的優(yōu)先權(quán)。由此該申請的內(nèi)容全部并入作為參考。
背景技術(shù)：
肝細(xì)胞生長因子(HGF)是一種可以在人血清中找到的生長因子。HFG受體(HGFR)已經(jīng)被鑒定為c-Met原癌基因的產(chǎn)物。見例如，Bottaro等，Science, 251:802-804(1991);Naldini 等，Oncogene, 6:501-504(1991) ;W0 92/13097;和 WO 93/15754。

發(fā)明內(nèi)容
—方面，本公開涉及治療患有不希望有的皮膚情況(unwanted skin condition),例如損傷皮膚結(jié)構(gòu)的疾病情況的個(gè)體的方法。該方法包括給所述個(gè)體施用治療有效量的HGF/HGFR調(diào)制劑。一方面，本公開涉及治療有效量的HGF/HGFR調(diào)制劑(例如，激動(dòng)劑或拮抗劑)在制備藥物中的用途。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述調(diào)制劑是HGF/HGFR激動(dòng)劑。HGF/HGFR激動(dòng)劑是可以在所述個(gè)體中直接或間接地增加HGF/HGFR活性的藥劑。該激動(dòng)劑可以用于治療其中期望增加淋巴管形成的疾病情況或用于制備治療該疾病情況的藥物。此類疾病情況包括淋巴水腫，例如，后天性淋巴水腫。后天性淋巴水腫的實(shí)例包括手術(shù)或放療后獲得的淋巴水腫或者至少部分地由感染，例如病原體，例如諸如絲蟲病之類的感染所引起的淋巴水腫。其中期望增加淋巴管形成的其它疾病情況包括老化的皮膚或損傷的皮膚，例如UVB損傷的皮膚。其它疾病情況還包括部分地由遺傳或環(huán)境因素，例如紫外線輻射，引起的那些疾病。例如，所述疾病情況是表皮松解(epidermolysis),如由衰老或過度暴露于紫外線所引起的表皮松解。許多HGF/HGFR激動(dòng)劑可以增加HGFR信號的活性。HGF/HGFR激動(dòng)劑的實(shí)例包括包含肝細(xì)胞生長因子多肽(如，修飾成其成熟異二聚體形式的多肽)或其生物活性片段或類似物在內(nèi)的蛋白質(zhì)、編碼肝細(xì)胞生長因子或其生物活性片段或類似物的核酸。其它蛋白質(zhì)和分子，例如抗體和小分子，也可以用于增加HGFR活性。例如，與HGFR結(jié)合并任選地與之交聯(lián)(例如，二聚體化)的抗體可以用于增加HGFR活性。所述不希望有的情況(unwanted condition)是例如，炎性或自身免疫性皮膚病癥(例如，銀屑病)或紅斑痤瘡皮膚病(rosacea dermatosis)。治療有效量的HGF/HGFR激動(dòng)劑可以用于制備治療此類炎性或自身免疫性皮膚病癥或紅斑痤瘡皮膚病的藥物。一個(gè)實(shí)施方案中，所述調(diào)制劑是HGF/HGFR拮抗劑。HGF/HGFR拮抗劑是可以在細(xì)胞中或在個(gè)體中直接地或間接地降低HGF/HGFR活性的藥劑。拮抗劑包括核酸和蛋白質(zhì)，例如，抗體或可溶性HGF受體片段。例如，拮抗劑可以是與HGF相互作用并且例如降低HGF與細(xì)胞表面HGFR的結(jié)合親和力的蛋白質(zhì)。例如，所述蛋白質(zhì)可以是(i)識別HGF或HGFR的抗體，或(ii)包括HGFR的細(xì)胞外區(qū)域的蛋白質(zhì)，例如，可溶性HGF受體(例如，與Fe域融合)。拮抗劑的實(shí)例包括可以結(jié)合或者抑制HGF mRNA，例如mRNA的產(chǎn)生、加工或翻譯的核酸分子。其它拮抗劑還包括顯性失活的HGF蛋白質(zhì)或其片段和降低HGF核酸表達(dá)的藥劑(例如，人工轉(zhuǎn)錄因子或編碼人工轉(zhuǎn)錄因子的核酸)。一些實(shí)施方案中，所述調(diào)制劑降低內(nèi)源HGF或HGFR水平。在一方面,本公開涉及治療患有腫瘤性轉(zhuǎn)化疾病(neoplastic disorder)或者有罹患腫瘤性轉(zhuǎn)化疾病的風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體的方法，其中所述腫瘤性轉(zhuǎn)化疾病是例如轉(zhuǎn)移性癌癥，尤其是包括了淋巴管中的細(xì)胞轉(zhuǎn)移的轉(zhuǎn)移性癌癥或者具有轉(zhuǎn)移至淋巴結(jié)的潛力的癌癥。所述方法包括給所述個(gè)體施用治療有效量的可以降低所述個(gè)體中的HGF/HGFR活性的HGF/HGFR拮抗劑。治療有效量的HGF/HGFR拮抗劑可以用于制備治療患有腫瘤性轉(zhuǎn)化疾病，例如，轉(zhuǎn)移性癌癥或者有罹患該疾病的風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體的藥物。 拮抗劑包括核酸和蛋白質(zhì)，例如抗體或可溶性HGF受體片段。例如，拮抗劑可以是與HGF相互作用并例如降低HGF與細(xì)胞表面HGFR的結(jié)合親和力的蛋白質(zhì)或其它藥劑。所述蛋白質(zhì)可以是例如HGF抗體或者HGFR的細(xì)胞外區(qū)域，例如可溶性HGF受體。拮抗劑的實(shí)例包括可以結(jié)合或抑制HGF mRNA，例如，mRNA的產(chǎn)生、加工或翻譯的核酸分子。其它拮抗劑還包括顯性失活的HGF蛋白質(zhì)或其片段和降低HGF核酸表達(dá)的藥劑(例如，人工轉(zhuǎn)錄因子或編碼人工轉(zhuǎn)錄因子的核酸)。另一方面，本公開涉及治療患有腫瘤性轉(zhuǎn)化疾病或者有罹患該疾病的風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體的方法，其中所述腫瘤性轉(zhuǎn)化疾病是例如轉(zhuǎn)移性癌癥，尤其是包括了淋巴管中的細(xì)胞轉(zhuǎn)移的轉(zhuǎn)移性癌癥或者具有轉(zhuǎn)移至淋巴結(jié)的潛力的癌癥。所述方法包括給所述個(gè)體施用治療有效量的可以在所述個(gè)體中降低a9整聯(lián)蛋白活性的a9整聯(lián)蛋白拮抗劑。所述拮抗劑是例如可以與a9整聯(lián)蛋白或者配對的整聯(lián)蛋白P亞基相互作用并且例如降低整聯(lián)蛋白與細(xì)胞的結(jié)合親和力的蛋白質(zhì)或其它藥劑。所述蛋白可以是例如a9整聯(lián)蛋白或配對的整聯(lián)蛋白3亞基的抗體或者a9整聯(lián)蛋白受體的細(xì)胞外區(qū)域。治療有效量的a9整聯(lián)蛋白拮抗劑可以用于制備治療患有腫瘤性轉(zhuǎn)化疾病如轉(zhuǎn)移性癌癥或者有罹患該疾病的風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體的藥物。拮抗劑的實(shí)例包括可以結(jié)合或者抑制a 9整聯(lián)蛋白mRNA，例如mRNA的產(chǎn)生、力口工或翻譯的核酸分子。其它拮抗劑還包括顯性失活的a9整聯(lián)蛋白或其片段和可以降低a9整聯(lián)蛋白核酸表達(dá)的藥劑(例如，人工轉(zhuǎn)錄因子或編碼人工轉(zhuǎn)錄因子的核酸)。另一方面，本公開涉及評價(jià)細(xì)胞或個(gè)體(例如，使用獲自該個(gè)體的細(xì)胞)的方法。該方法包括評價(jià)所述細(xì)胞或者來自所述個(gè)體的細(xì)胞中整聯(lián)蛋白a9和司腺鈣蛋白I(stanniocalcin I) mRNA或蛋白質(zhì)的表達(dá)。該方法可以用于評價(jià)所述個(gè)體中HGF的活性。所述細(xì)胞或獲自所述個(gè)體的細(xì)胞包括例如內(nèi)皮細(xì)胞，如淋巴內(nèi)皮細(xì)胞(LEC)?？梢岳缭趯?shí)施所述評價(jià)之前、期間或之后，用本文描述的藥劑，如HGF/HGFR的激動(dòng)劑或拮抗劑處理所述細(xì)胞或個(gè)體。該方法可以用于監(jiān)測患有本文所述疾病或有罹患本文所述疾病的風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體以及可以用本文所述藥劑治療的個(gè)體。另一方面，本公開涉及鑒定可以調(diào)制淋巴內(nèi)皮細(xì)胞的活性，例如增殖或遷移的化合物的方法。該方法包括提供可以檢測其中的HGF/HGFR活性的細(xì)胞或生物體；使所述細(xì)胞或生物體與待測化合物接觸；以及評價(jià)所述細(xì)胞或生物體中的HGF/HGFR活性。例如,所諸旰沐函屮涪隸_著卬丑洧鑿諸±|闔媽灃斂昆矣 蓉昆社硌。窈社硌曲葫貓寵撕钚 鑿諸旰沐函屮灘容昆丑洧鑿諸(窆笤，著卬丑洧鑿諸)；南窈丑洧鑿諸<111^鑿諸旰沐函屮苦雄簦矣 蓉輒韹~苦項(xiàng)令窈鑿諸、窆笤 令窈鑿諸昆_銻，窆笤灘hgf/HGFR Sss. €1闔媽灃斂。窆笤，窈社硌剄泛曲葫菡沛掛雄簦矣 蓉動(dòng)掛盡著卬丑洧鑿諸跏詢±|闔媽灃斂?！纜闔媽灃斂昆嵐分剄滯滿鄰雄簦矣 蓉咨產(chǎn)蘋鑿諸旰沐函屮涪隸_著卬丑洧鑿諸±|闔?！?020〕 駕練牙洧鑿諸剄泛跏晶鵠咎蓉鑿諸^ssH#E>>1-PE>^>^PE>mAs鑿諸。駕練笛諸剄泛跑釀離3熱牟MS;室咎、^挾笛諸米冊笛諸執(zhí)熱銅方笛諸。1->將||^撕4^^挾笛諸姆Ji proxl^^s^攝(hyaluronan) ％#LYVE-1。
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20.項(xiàng)18的用途，其中所述轉(zhuǎn)移性癌癥包括淋巴管內(nèi)的細(xì)胞轉(zhuǎn)移。21.項(xiàng)16的用途，其中肝細(xì)胞生長因子活性的拮抗劑選自可以結(jié)合細(xì)胞肝細(xì)胞生長因子mRNA并抑制該蛋白質(zhì)表達(dá)的肝細(xì)胞生長因子核酸分子、可以特異地結(jié)合肝細(xì)胞生長因子蛋白的抗體、可溶性肝細(xì)胞生長因子受體、顯性失活的肝細(xì)胞生長因子蛋白或其片段、以及可以降低肝細(xì)胞生長因子核酸表達(dá)的藥劑。22.項(xiàng)16的用途，其中肝細(xì)胞生長因子活性的拮抗劑是可以有效降低內(nèi)源性肝細(xì)胞生長因子水平的藥劑。23. a 9整聯(lián)蛋白活性的拮抗劑在制備用于治療患有腫瘤性轉(zhuǎn)化疾病或有罹患該疾病的風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體的藥物中的用途。24.項(xiàng)23的用途，其中所述腫瘤性轉(zhuǎn)化疾病是癌癥。 25.項(xiàng)24的用途,其中所述癌癥是轉(zhuǎn)移性癌癥。26.項(xiàng)24的用途，其中所述癌癥的特征在于有向淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)。27.項(xiàng)25的用途，其中所述轉(zhuǎn)移性癌癥包括淋巴管內(nèi)的細(xì)胞轉(zhuǎn)移。28.項(xiàng)23的用途，其中a 9整聯(lián)蛋白活性的拮抗劑選自可以結(jié)合細(xì)胞a 9整聯(lián)蛋白mRNA并抑制該蛋白質(zhì)表達(dá)的a 9整聯(lián)蛋白核酸分子、可以特異地結(jié)合a 9整聯(lián)蛋白的抗體、可溶性a 9整聯(lián)蛋白受體、顯性失活的a 9整聯(lián)蛋白或其片段、以及可以降低a9整聯(lián)蛋白核酸表達(dá)的藥劑。29.鑒定可以抑制肝細(xì)胞生長因子依賴性淋巴內(nèi)皮細(xì)胞增殖的化合物的方法，包括提供表達(dá)肝細(xì)胞生長因子受體的淋巴內(nèi)皮細(xì)胞；使該淋巴內(nèi)皮細(xì)胞與肝細(xì)胞生長因子及待測化合物接觸；和確定在該待測化合物存在下該淋巴內(nèi)皮細(xì)胞的增殖是否減少，增殖的減少指示該待測化合物可以抑制肝細(xì)胞生長因子依賴性的淋巴內(nèi)皮細(xì)胞增殖。30.項(xiàng)29的方法，其中所述淋巴內(nèi)皮細(xì)胞是哺乳動(dòng)物細(xì)胞。31.項(xiàng)30的方法，其中哺乳動(dòng)物細(xì)胞選自小鼠、大鼠、兔、倉鼠和人。32.項(xiàng)31的方法，其中哺乳動(dòng)物細(xì)胞是人細(xì)胞。33.項(xiàng)29的方法，其中淋巴內(nèi)皮細(xì)胞是培養(yǎng)的細(xì)胞。34.項(xiàng)30的方法，其中哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)Proxl和透明質(zhì)酸受體LYVE-1。35.項(xiàng)33的方法，其中所述培養(yǎng)的細(xì)胞來自細(xì)胞系。36.項(xiàng)29的方法，其中待測化合物是肽。37.項(xiàng)29的方法，其中待測化合物是抗體。38.項(xiàng)29的方法，還包括確定所述肝細(xì)胞生長因子受體的酪氨酸磷酸化是否被降低。39.項(xiàng)29的方法，其中淋巴內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)重組肝細(xì)胞生長因子受體或其突變體。40.通過項(xiàng)29的方法鑒定的、可以抑制淋巴內(nèi)皮細(xì)胞增殖的待測化合物。41.鑒定可以抑制肝細(xì)胞生長因子依賴性淋巴內(nèi)皮細(xì)胞遷移的化合物的方法，包括提供表達(dá)肝細(xì)胞生長因子受體的淋巴內(nèi)皮細(xì)胞；使該細(xì)胞與肝細(xì)胞生長因子及待測化合物接觸；和
確定在該待測化合物存在下該淋巴內(nèi)皮細(xì)胞的遷移是否減少，遷移的減少指示該待測化合物可以抑制肝細(xì)胞生長因子依賴性的淋巴內(nèi)皮細(xì)胞遷移。42.項(xiàng)41的方法，其中所述淋巴內(nèi)皮細(xì)胞是哺乳動(dòng)物細(xì)胞。43.項(xiàng)42的方法，其中哺乳動(dòng)物細(xì)胞選自小鼠、大鼠、兔、倉鼠和人。44.項(xiàng)43的方法，其中哺乳動(dòng)物細(xì)胞是人細(xì)胞。45.項(xiàng)41的方法，其中淋巴內(nèi)皮細(xì)胞是培養(yǎng)的細(xì)胞。46.項(xiàng)42的方法，其中哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)Proxl和透明質(zhì)酸受體LYVE-1。47.項(xiàng)45的方法，其中所述培養(yǎng)的細(xì)胞來自細(xì)胞系。48.項(xiàng)41的方法，其中待測化合物是肽。49.項(xiàng)41的方法，其中待測化合物是抗體。50.項(xiàng)41的方法，還包括確定所述肝細(xì)胞生長因子受體的酪氨酸磷酸化是否被降低。51.項(xiàng)41的方法，其中淋巴內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)重組肝細(xì)胞生長因子受體或其突變體。52.通過項(xiàng)41的方法鑒定的、可以抑制淋巴內(nèi)皮細(xì)胞遷移的待測化合物。53.鑒定可以抑制肝細(xì)胞生長因子依賴性淋巴管發(fā)生的化合物的方法，包括提供表達(dá)肝細(xì)胞生長因子受體的淋巴內(nèi)皮細(xì)胞；使該淋巴內(nèi)皮細(xì)胞與肝細(xì)胞生長因子及待測化合物接觸；和確定淋巴管發(fā)生是否減少，其中淋巴管發(fā)生的減少指示該化合物可以抑制肝細(xì)胞生長因子依賴性的淋巴管發(fā)生。54.項(xiàng)53的方法，其中在體內(nèi)提供所述細(xì)胞。55.項(xiàng)53的方法，其中所述淋巴內(nèi)皮細(xì)胞是哺乳動(dòng)物細(xì)胞。56.項(xiàng)55的方法，其中哺乳動(dòng)物細(xì)胞選自小鼠、大鼠、兔、倉鼠和人。57.項(xiàng)56的方法，其中哺乳動(dòng)物細(xì)胞是人細(xì)胞。58.項(xiàng)55的方法，其中所述哺乳動(dòng)物細(xì)胞是培養(yǎng)的細(xì)胞。59.項(xiàng)55的方法，其中哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)Proxl和透明質(zhì)酸受體LYVE-1。60.項(xiàng)58的方法，其中所述培養(yǎng)的細(xì)胞來自細(xì)胞系。61.項(xiàng)53的方法，其中待測化合物是肽。62.項(xiàng)53的方法，其中待測化合物是抗體。63.項(xiàng)53的方法，其中待測化合物是肽。附圖簡述

圖1A-1F顯示淋巴細(xì)胞系標(biāo)志物的mRNA水平的定量RT-PCR數(shù)據(jù)和分別用于HGFRmRNA和蛋白質(zhì)的定量RT-PCR及免疫印跡分析試驗(yàn)。圖2A-2L顯示針對淋巴管中淋巴標(biāo)志物L(fēng)YVE-1 (綠色)和HGFR(紅色)的雙重免疫熒光染色。圖3A-3I顯示針對小鼠胚胎發(fā)育過程中淋巴囊內(nèi)皮細(xì)胞中淋巴標(biāo)志物L(fēng)YVE-1 (綠色)和HGFR (紅色)的雙重免疫熒光。圖4A-4C顯示在用HGF處理的LEC上獲得的淋巴內(nèi)皮細(xì)胞(LEC)增殖和遷移試驗(yàn)數(shù)據(jù)。圖5A- 顯示響應(yīng)HGF體外LEC管形成以及體內(nèi)淋巴管形成的數(shù)據(jù)。
圖6A-6E顯示在實(shí)驗(yàn)性皮膚炎癥后針對LYVE-1 (綠色)和⑶31 (紅色)的淋巴管雙重免疫突光染色。圖7A-7B顯示在用HGF處理后LEC中整聯(lián)蛋白a 9和司腺鈣蛋白I (stanniocalcin)mRNA 水平的 QPCR 數(shù)據(jù)。圖8A-8H顯示HGF轉(zhuǎn)基因小鼠(圖8B、8D、8F、8H)和野生型小鼠(圖8A、8C、8E、8G)的回腸的代表性組織學(xué)圖像(H&E染色和免疫熒光以檢測podoplanin)。比例條100 u m。圖9A-9C顯示小鼠耳切片LYVE-1 (綠色)和⑶31 (紅色)的雙熒光染色分析。植入含HGF的緩釋丸14天后觀察到誘導(dǎo)形成了 LYVE-1陽性的淋巴管(圖9B，9C，箭頭所指)，而在對照小丸周圍則無淋巴管形成(圖9A)。與對照IgG處理(圖9B)相比，用封閉性抗VEGFR-3抗體系統(tǒng)處理并沒有抑制HGF誘導(dǎo)的淋巴管形成(圖9C)。在所有的樣品中都觀察到有新形成的血管。P:小丸。比例條IOOii m。 發(fā)明詳述我們發(fā)現(xiàn)，除了別的以外，肝細(xì)胞生長因子受體(HGFR)在淋巴系統(tǒng)的淋巴內(nèi)皮細(xì)胞(LEC)中高度表達(dá)。用HGF處理LEC可以促進(jìn)LEC向淋巴管中增殖、遷移以及構(gòu)成組織(organization)。此外,給小鼠施用HGF可以有力地促進(jìn)新的淋巴管形成。而且,LEC遷移的誘導(dǎo)在很大程度上是通過a9整聯(lián)蛋白介導(dǎo)的。因此，可以通過調(diào)制HGF/HGFR活性，治療受淋巴系統(tǒng)影響的病理情況。也可以通過評價(jià)對HGF/HGFR活性進(jìn)行評估的參數(shù)，對個(gè)體實(shí)施診斷?？梢裕?，使用本文描述的試驗(yàn)和篩選方法鑒定可以調(diào)制HGF/HGFR活性的藥劑。1. HGF 和 HGFR人HGF的成熟形式，對應(yīng)于從人血清中純化出的主要形式，是通過在該人激素原(pro-hormone)的氨基酸R494和V495之間的蛋白水解切割產(chǎn)生的二硫鍵連接的異二聚體。該切割過程產(chǎn)生由440個(gè)氨基酸的a亞基(M.W. 69kDa)和234個(gè)氨基酸的P亞基(M. ff. 34kDa)組成的分子。該a和0鏈產(chǎn)生自編碼前原蛋白前體(pre-pro precursorprotein)的單個(gè)開放閱讀框。在示例性成熟hHGF的預(yù)測一級結(jié)構(gòu)中，在a鏈的Cys487和3 鏈的Cys604之間形成鏈間 S-S橋(見例如，Nakamura等，Nature 342:440-443, (1989))。a鏈的N端之前有54個(gè)氨基酸，起始于甲硫氨酸基團(tuán)。該片段包括31個(gè)殘基的特征性疏水前導(dǎo)(信號)序列和前序列。a鏈起始于第55位氨基酸(aa)，并含有4個(gè)Kringle域。Kringle I域從a鏈的約aa 128延伸至約aa 206,Kringle 2域位于約aa211和約aa288之間,Kringle 3域被確定為從約aa 303延伸至約aa383,Kringle 4域從約aa391延伸至約aa464。示例性HGF含有4個(gè)推測的糖基化位點(diǎn)，這些位點(diǎn)位于a鏈的294和402位以及@鏈的566和653位。HGF受體(HGFR)已經(jīng)被鑒定為c_Met原癌基因的產(chǎn)物，Bottaro等，Science, 251:802-804(1991) ；Naldini 等，Oncogene, 6:501-504 (1991) ；1992 年 8 月6日公布的WO 92/13097 ; 1993年8月19日公布的WO 93/15754。天然形式的該受體(AKAc-Met)典型地包含190kDa異二聚體(二硫鍵連接的50kDa a鏈和145kDa@鏈)跨膜酪氨酸激酶蛋白(Park 等，Proc. Natl. Acad. Sc1. USA, 84:6379-6383 (1987))。據(jù)信，HGF與其受體的結(jié)合活性是由位于HGF分子N端部分的功能域傳遞的，該功能域包括頭兩個(gè) Kringle 域(Matsumoto 等,Biochem. Biophys. Res. Commun. , 181:691-699(1991);Hartmann 等,Proc.Natl. Acad. Sc1.，89:11574-11578(1992) ;Lokker 等，EMBOJ.,11:2503-2510(1992);Lokker 和 Godowski, J. Biol. Chem.，268:17145-17150(1991))。HGF結(jié)合后，該c-Met蛋白在145kDa@亞基的酪氨酸殘基上磷酸化。關(guān)于本文公開的方法，HGF可以以純化的多肽形式產(chǎn)生，其中所述多肽的氨基酸序列可以與下列SEQ ID NO: 1-4中的任一個(gè)或其它天然HGF變體有至少80%同一性(即，85%、87%、89%、90%、92%、94%、96%、98%、99%或100%同一性)。HGF 的受體(HGFR)可以以純化的多肽形式產(chǎn)生，其中所述多肽的氨基酸序列可以與下列SEQ ID N0:5-8中的任一個(gè)或其它天然HGFR變體有至少80%同一性(S卩，85%、87%、89%、90%、92%、94%、96%、98%、99%或 100% 同一性)。人HGF (SEQ ID NO:1)I MWVTKLLPAL LLQHVLLHLL LLPIAIPYAE GQRKRRNTIH EFKKSAKTTL
51 IKIDPALKIK TKKVNTADQC ANRCTRNKGL PFTCKAFVFD KARKQCLffFP101 FNSMSSGVKK EFGHEFDLYE NKDYIRNCII GKGRSYKGTV SITKSGIKCQ151 PffSSMIPHEH SFLPSSYRGK DLQENYCRNP RGEEGGPffCF TSNPEVRYEV201 CDIPQCSEVE CMTCNGESYR GLMDHTESGK ICQRffDHQTP HRHKFLPERY251 PDKGFDDNYC RNPDGQPRPff CYTLDPHTRff EYCAIKTCAD NTMNDTDVPL301 ETTECIQGQG EGYRGTVNTI WNGIPCQRffD SQYPHEHDMT PENFKCKDLR351 ENYCRNPDGS ESPffCFTTDP NIRVGYCSQI PNCDMSHGQD CYRGNGKNYM401 GNLSQTRSGL TCSMWDKNME DLHRHIFffEP DASKLNENYC RNPDDDAHGP451 WCYTGNPLIP WDYCPISRCE ⑶TTPTIVNL DHPVISCAKT KQLRVVNGIP501 TRTNIGWMVS LRYRNKHICG GSLIKESffVL TARQCFPSRD LKDYEAffLGI551 HDVHGRGDEK CKQVLNVSQL VYGPEGSDLV LMKLARPAVL DDFVSTIDLP601 NYGCTIPEKT SCSVYGffGYT GLINYDGLLR VAHLYIMGNE KCSQHHRGKV651 TLNESEICAG AEKIGSGPCE ⑶YGGPLVCE QHKMRMVLGV IVPGRGCAIP701 NRPGIFVRVA YYAKffIHKII LTYKVPQS黑猩猩(chimpanzee)HGF(SEQID NO:2)I MWVTKLLPAL LLQHVLLHLL LLPIAIPYAE GQRKRRNTIH EFKKSAKTTL51 IKIDPALKIK TKKVNTADQC ANRCTRNKGL PFTCKAFVFD KARKQCLffFP101 FNSMSSGVKK EFGHEFDLYE NKGHETFGRF LPSSYRGKDL QENYCRNPRG151 EEGGPffCFTS NPEVRYEVCD IPQCSEVECM TCNGESYRGL MDHTESGKIC201 QRffDHQTPHR HKFLPERYPD KGFDDNYCRN PDGQPRPffCY TLDPHTRffEY251 CAIKTCADNT MNDTDVPLET TECIQGQGEG YRGTVNTIffN GIPCQRffDSQ301 YPHEHDMTPE NFKCKDLREN YCRNPDGSES PffCFTTDPNI RVGYCSQIPN351 CDMSHGQDCY RGNGKNYMGN LSQTRSGLTC SMWDKNMEDL HRHIFffEPDA401 SKLNENYCRN PDDDAHGPffC YTGNPLIPffD YCPISRCE⑶ TTPTIVNLDH451 PVISCAKTKQ LRVVNGIPTR TNVGWMVSLR YRNKHICGGS LIKESffVLTA501 RQCFPSRDLK DYEAffLGIHD VHGRGDEKCK QVLNVSQLVY GPEGSDLVLM551 KLARPAVLDD FVSTIDLPNY GCTIPEKTSC SVYGffGYTGL INYDGLLRVA601 HLYIMGNEKC SQHHRGKVTL NESEICAGAE KIGSGPCE⑶ YGGPLVCEQH
651KMRMVLGVIV PGRGCAIPNR PGIFVRVAYY AKWIHKIILT YKVPQS小鼠HGF(SEQ ID NO:3)1MMWGTKLLPV LLLQHVLLHL LLLHVAIPYA EGQKKRRNTL HEFKKSAKTT51LTKEDPLLKI KTKKVNSADE CANRCIRNRG FTFTCKAFVF DKSRKRCYWY101PFNSMSSGVK KGFGHEFDLY ENKDYIRNCI IGKGGSYKGT VSITKSGIKC151QPWNSMIPHE HSFLPSSYRG KDLQENYCRN PRGEEGGPWC FTSNPEVRYE201VCDIPQCSEV ECMTCNGESY RGPMDHTESG KTCQRWDQQT PHRHKFLPER251YPDKGFDDNY CRNPDGKPRP WCYTLDPDTP WEYCAIKTCA HSAVNETDVP301METTECIQGQ GEGYRGTSNT IWNGIPCQRW DSQYPHKHDI TPENFKCKDL351RENYCRNPDG AESPWCFTTD PNIRVGYCSQ IPKCDVSSGQ DCYRGNGKNY401MGNLSKTRSG LTCSMWDKNM EDLHRHIFWE PDASKLNKNY CRNPDDDAHG451PWCYTGNPLI PWDYCPISRC E⑶TTPTIVN LDHPVISCAK TKQLRVVNGI501PTQTTVGWMV SLKYRNKHIC GGSLIKESWV LTARQCFPAR NKDLKDYEAff551LGIHDVHERG EEKRKQILNI SQLVYGPEGS DLVLLKLARP AILDNFVSTI601DLPSYGCTIP EKTTCSIYGff GYTGLINADG LLRVAHLYIM GNEKCSQHHQ651GKVTLNESEL CAGAEKIGSG PCE⑶YGGPL ICEQHKMRMV LGVIVPGRGC701AIPNRPGIFV RVAYYAKWIH KVILTYKL大鼠HGF(SEQ ID NO:4)1MWVTKLLPAL LLQHVLLHLL LLPIAIPYAE GHKKRRNTIH EFKKSAKTTL51IKIDPALKIK TKKVNTADQC ANRCTRNNGL PFTCKAFVFD EARKQCLWFP101FNSMSSGVKK EFGHEFDLYE NKDYIRNCII GKGRSYKGTV SITKSGIKCQ151PWSSMIPHEH SFLPSSYRGK DLQENYCRNP RGEEGGPWCF TSNPEVRYEV201CDIPQCSEVE CMTCNGESYR GLMDHTESGK ICQRWDHQTP HRHKFLPERY251PDKGFDDNYC RNPDGQPRPff CYTLDPHTRff EYCAIKTCAD NTVNDTDVPM301ETTECIQGQG EGYRGTANTI WNGIPCQRWD SQYPHKHDMT PENFKCKDLR351ENYCRNPDGS ESPWCFTTDP NIRVGYCSQI PNCDMSNGQD CYRGNGKNYM401GNLSQTRSGL TCSMWNKNME DLHRHIFWEP DASKLNENYC RNPDDDAHGP451WCYTGNPLIP WDYCPISRCE ⑶TTPTIVNL DHPVISCAKT KQLRVVNGIP501TRTNVGWMIS LRYRNKHICG GSLIKESWVL TARQCFPSRD LKDYEAWLGI551HDVHGRGEEK RKQVLNVSQL VYGPEGSDLV LMKLARPAVL DDFVNTIDLP601NYGCTIPEKT SCSVYGWGYT GLINYDGLLR VAHLYIMGNE KCSQHHRGKV651TLNESEICAG AEKIGSGPCE ⑶YGGPLVCE QHKMRMVLGV IVPGRGCAIP701NRPGIFVRVA YYAKWIHKII LTYKVPES人HGFR(SEQ ID NO: 5)1MKAPAVLAPG ILVLLFTLVQ RSNGECKEAL AKSEMNVNMK YQLPNFTAET51PIQNVILHEH HIFLGATNYI YVLNEEDLQK VAEYKTGPVL EHPDCFPCQD101CSSKANLSGG VWKDNINMAL VVDTYYDDQL ISCGSVNRGT CQRHVFPHNH151TADIQSEVHC IFSPQIEEPS QCPDCVVSAL GAKVLSSVKD RFINFFVGNT201INSSYFPDHP LHSISVRRLK ETKDGFMFLT DQSYIDVLPE FRDSYPIKYV
權(quán)利要求
1.治療有效量的編碼肝細(xì)胞生長因子(HGF)的核酸在制備用于治療患有淋巴水腫或有罹患淋巴水腫的風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體的藥物中的用途。
2.權(quán)利要求1的用途，其中HGF包含與SEQID NO:1氨基酸55-728至少96%相同的氨基酸序列。
3.權(quán)利要求1的用途，其中HGF包含與SEQID NO:1氨基酸55-728相同的氨基酸序列。
4.權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)的用途，其中藥物通過局部施用或通過胃腸外施用來施用。
5.權(quán)利要求4的用途，其中胃腸外施用為靜脈內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)、肌肉內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)或鞘內(nèi)施用。
6.權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)的用途，其中藥物進(jìn)一步包含藥學(xué)可接受載體。
7.權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)的用途，其中藥物為受控釋放而配制。
8.權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)的用途，其中個(gè)體為人。
9.肝細(xì)胞生長因子(HGF)活性的拮抗劑在制備用于治療患有腫瘤性轉(zhuǎn)化疾病或者有罹患腫瘤性轉(zhuǎn)化疾病的風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體的藥物中的用途。
10.權(quán)利要求9的用途，其中HGF活性的拮抗劑選自可以結(jié)合細(xì)胞HGFmRNA并抑制HGF蛋白表達(dá)的核酸拮抗劑、特異地結(jié)合HGF蛋白的抗體或抗體片段、可溶性HGF受體、顯性失活的HGF受體、顯性失活的HGF蛋白或其片段、以及降低HGF核酸表達(dá)的藥劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及監(jiān)測和調(diào)制HGF/HGFR活性。本發(fā)明提供用于調(diào)制肝細(xì)胞生長因子活性以調(diào)節(jié)淋巴管的發(fā)育和功能的方法和組合物。本發(fā)明公開用于監(jiān)測和治療皮膚病、淋巴水腫和轉(zhuǎn)移性癌癥的方法和組合物。本發(fā)明還描述了鑒定肝細(xì)胞生長因子依賴性淋巴管生成的抑制劑的方法。
文檔編號A61P35/00GK102989012SQ20121053627
公開日2013年3月27日 申請日期2006年3月30日 優(yōu)先權(quán)日2005年3月31日
發(fā)明者邁克爾.德特馬, 肯塔羅.卡吉亞 申請人:通用醫(yī)療公司