專利名稱：櫻桃核中總酚酸的制備方法及新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及植物櫻桃核中總酚酸的制備方法及在制備抗菌藥物中的新應(yīng)用。
背景技術(shù)：
凡對(duì)細(xì)菌和其他微生物具有抑制和殺滅作用的物質(zhì)統(tǒng)稱為抗菌藥。它包括化學(xué)合成藥如磺胺類藥、呋喃類藥、喹諾酮類藥，也包括具有抗菌作用的抗生素，還包括具有抗菌作用的中草藥等。由于化學(xué)合成藥引起的病原菌抗藥性增加，植物源殺菌劑具有不污染環(huán)境，對(duì)人體安全，不易產(chǎn)生抗藥性等特點(diǎn)，使得天然產(chǎn)物又成為作為發(fā)現(xiàn)新藥物的重要來源和從植物中獲得具有抗菌活性的天然化合物的研究又重新獲得普遍的關(guān)注。我國(guó)植物資源豐富，在植物中尋找抗菌、抗氧化和其他活性成分一直是植物化學(xué)和天然產(chǎn)物化學(xué)研究的主流。樓桃核為樓桃(Prunus pseudocerasus Lindl.)的種子。原植物為薔薇科(Rosaceae)梅屬(Prunus. L)植物,落葉喬木或灌木。除食用和觀賞價(jià)值之外,《本草綱目》、《名醫(yī)別錄》等古籍中還記載了櫻桃各個(gè)部位的藥用價(jià)值?！侗静菥V目》中記載“(櫻桃)調(diào)中益脾氣，令人好顏色，止泄精。”櫻桃主要用于病后體虛氣弱，脾胃功能失調(diào)，氣短心悸，倦怠少食者。與酒合用可祛風(fēng)濕、通經(jīng)絡(luò)，治療風(fēng)濕性腰腿痛、四肢麻木不仁等。因其富含鐵，還用于缺鐵性貧血?！睹t(yī)別錄》中記載“(櫻桃)味甘。主調(diào)中，益脾氣?！睓烟夜麑?shí)可以祛除風(fēng)濕，治療癱瘓、凍瘡；果汁可以治療燒傷、燙傷，悶疹；葉片可治胃寒食積，腹瀉，瘡毒；種子有透疹解毒，發(fā)汗解表等功效；枝?？梢灾委熀郏瑲馓?；根有調(diào)氣活血的作用。櫻桃葉中含有的黃酮類化合物具有保護(hù)心肌，降低心肌耗氧量，調(diào)節(jié)心肌功能，增加冠脈流量，降低阻力的功效，對(duì)促進(jìn)微動(dòng)脈血流恢復(fù)，緩解心絞痛，降低舒張壓及對(duì)胸悶、心悸及早博均有一定療效。櫻桃還含有數(shù)種抗癌成分，如抗氧化劑功效的花青素等，由于這些物質(zhì)的存在而有助于預(yù)防皮膚癌、肺癌、乳癌和肝癌。

發(fā)明內(nèi)容
目前針對(duì)櫻桃核的化學(xué)成分研究較少，還沒有文獻(xiàn)報(bào)道。與櫻桃葉中含有大量黃酮類成分不同，櫻桃核中的黃酮含量較少。通過抗菌活性追蹤，櫻桃核提取物30%大孔樹脂部分有較強(qiáng)的抗菌活性。利用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)該部分的化學(xué)成分進(jìn)行推測(cè)，基本上為簡(jiǎn)單酚酸類化合物和木脂素類化合物，因此確定該部分(總酚酸)為櫻桃核的抗菌有效部位。櫻桃屬于藥食同源類植物，無(wú)毒、副作用。從其中開發(fā)出來的抗菌藥物具有低毒高效的特點(diǎn)，有十分寬廣的市場(chǎng)前景。本發(fā)明的目的之一是提供一種植物櫻桃核的總酚酸的制備方法，該方法是將取櫻 桃核原料粉碎成粗粉，用甲醇或乙醇提取，減壓濃縮得到粗體物后用水混懸，再上大孔樹脂以水醇系統(tǒng)洗脫得到總酚酸。該方法采用大孔樹脂層析一步即可獲得有效部位，具體通過以下步驟實(shí)現(xiàn)1.取櫻桃核原料粉碎成粗粉，用5 10倍體積量的甲醇或乙醇提取f3次，甲醇或乙醇的體積濃度為50°/ri00%，提取采用加熱回流或超聲提取；
2.將提取液合并后減壓濃縮，除去甲醇或乙醇，減壓濃縮干燥既得浸膏；
3.浸膏加水混懸后，上大孔樹脂，水洗脫2飛個(gè)柱體積后再用體積濃度309^50%甲醇或乙醇洗脫，收集甲醇或乙醇洗脫液，減壓回收甲醇或乙醇，噴霧干燥得到干燥粉末，總得率為2% 6%。采用的大孔樹脂為DM301、NKA-9、AB-8、DlOl、DM130、DM-18、D312 型弱極性或中極性大孔樹脂。所得的提取物利用FeCl3顏色反應(yīng)呈陽(yáng)性，且HCl-Mg反應(yīng)呈陰性，排除了黃酮類化合物的影響，確定所得提取物為總酚酸。利用可見分光光度法，以沒食子酸(自制，純度97%)為對(duì)照品，0. 6%FeCl3-0. 9%K3[Fe (CN)6] (1:0. 9)混合溶液為顯色劑，檢測(cè)波長(zhǎng)720nm,檢測(cè)結(jié)果顯示所得提取物其總酚酸含量為60% 90%。
本發(fā)明的目的之二是提供櫻桃核中總酚酸在制備抗菌藥物中的新用途。所述的植物櫻桃核中總酚酸加入藥劑學(xué)允許的賦型制劑制備成藥物制劑，制劑形式為外用制劑或口服制劑。所述外用制劑包括涂膜劑、軟膏、硬膏、霜?jiǎng)┗蚰z，所述口服制劑包括片劑、膠囊齊U、丸劑或顆粒劑。本發(fā)明的有益之處是(1)本發(fā)明采用的原料為食品生產(chǎn)中的工業(yè)廢料，成本低廉，也是對(duì)傳統(tǒng)中藥進(jìn)行的二次開發(fā)。(2)在抗菌活性追蹤的指導(dǎo)下對(duì)原藥材中的有效部位進(jìn)行了充分的提純，濃縮，得到其總酚酸(其有效部位)，利用分光光度法測(cè)定總酚酸含量，其含量達(dá)到60% 90%，優(yōu)于其粗提物直接入藥，且便于制成各種制劑。(3)用本方法獲得的有效部位，具有顯著的抑菌作用，可抑制金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、乙型鏈球菌的生長(zhǎng)。(4)獲得的總酚酸可以制成外用制劑或口服制劑，給藥簡(jiǎn)單，藥物利用度高。(5)本發(fā)明方法設(shè)計(jì)合理，具有工藝簡(jiǎn)單、成本低、能耗低和生產(chǎn)過程污染低的特點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明結(jié)合具體實(shí)施例作進(jìn)一步的說明。實(shí)施例1 櫻桃核總酚酸的制備
取櫻桃核200g左右粉碎，加1600ml 70%乙醇-水，回流提取2小時(shí)，過濾后濾渣再加IOOOml 70%乙醇-水回流提取I小時(shí),合并兩次濾液,減壓回收乙醇，得到浸膏。將此浸膏用200ml水混懸后上DlOl大孔樹脂，水洗脫3個(gè)體積后再用40%乙醇-水洗脫至流出液近無(wú)色，收集此部分洗脫液，減壓回收乙醇，噴霧干燥得到干燥粉末，得到6. 6g總酚酸，總得率約為3. 3%。所得的提取物利用FeClj^色反應(yīng)呈陽(yáng)性，且HCl-Mg反應(yīng)呈陰性，排除了黃酮類化合物的影響，確定所得提取物為總酚酸。利用可見分光光度法，以沒食子酸(自制，純度97%)為對(duì)照品，0. 6%FeCl3-0. 9%K3[Fe (CN)6] (1:0. 9)混合溶液為顯色劑，檢測(cè)波長(zhǎng)720nm，檢測(cè)結(jié)果顯示所得提取物其總酚酸含量為82%。實(shí)施例2 櫻桃核總酚酸的制備
取櫻桃核200g左右粉碎，加1600ml 90%乙醇-水，回流提取2小時(shí)，過濾后濾渣再加IOOOml 90%乙醇-水回流提取I小時(shí)，合并兩次濾液，減壓回收乙醇，得到浸膏。將此浸膏用200ml水混懸后上D312大孔樹脂，水洗脫3個(gè)體積后再用50%乙醇-水洗脫至流出液近無(wú)色，收集此部分洗脫液，減壓回收乙醇，噴霧干燥得到干燥粉末，得到Sg總酚酸，總得率約為4%。所得的提取物利用FeCl3顏色反應(yīng)呈陽(yáng)性，且HCl-Mg反應(yīng)呈陰性，排除了黃酮類化合物的影響，確定所得提取物為總酚酸。利用可見分光光度法，以沒食子酸(自制，純度97%)為對(duì)照品，0. 6%FeCl3-0. 9%K3[Fe (CN)6] (1:0. 9)混合溶液為顯色劑，檢測(cè)波長(zhǎng)720nm，檢測(cè)結(jié)果顯示所得提取物其總酚酸含量為80%。實(shí)施例3 櫻桃核總酚酸的制備
取櫻桃核IOOOg左右粉碎，加8000ml 60%乙醇-水，回流 提取2小時(shí)，過濾后濾渣再加3000ml 60%乙醇-水回流提取I小時(shí)，合并兩次濾液，減壓回收乙醇，得到浸膏。將此浸膏用IOOOml水混懸后上AB-8大孔樹脂，水洗脫3個(gè)體積后再用30%乙醇-水洗脫至流出液近無(wú)色，收集此部分洗脫液，減壓回收乙醇，噴霧干燥得到干燥粉末，得到30g總酚酸，總得率約為3%。所得的提取物利用FeCl3顏色反應(yīng)呈陽(yáng)性，且HCl-Mg反應(yīng)呈陰性，排除了黃酮類化合物的影響，確定所得提取物為總酚酸。利用可見分光光度法，以沒食子酸(自制，純度97%)為對(duì)照品，0. 6%FeCl3-0. 9%K3[Fe (CN)6] (1:0. 9)混合溶液為顯色劑，檢測(cè)波長(zhǎng)720nm，檢測(cè)結(jié)果顯示所得提取物其總酚酸含量為85%。實(shí)施例4 櫻桃核總酚酸的制備
取櫻桃核IOOOg左右粉碎，加8000ml 80%乙醇-水，回流提取2小時(shí)，過濾后濾渣再加3000ml 80%乙醇-水回流提取I小時(shí),合并兩次濾液,減壓回收乙醇,得到浸膏。將此浸膏用IOOOml水混懸后上DM301大孔樹脂，水洗脫3個(gè)體積后再用50%乙醇-水洗脫至流出液近無(wú)色，收集此部分洗脫液，減壓回收乙醇，噴霧干燥得到干燥粉末，得到45g總酚酸，總得率約為4. 5%。所得的提取物利用FeCl3顏色反應(yīng)呈陽(yáng)性，且HCl-Mg反應(yīng)呈陰性，排除了黃酮類化合物的影響，確定所得提取物為總酚酸。利用可見分光光度法，以沒食子酸(自制，純度97%)為對(duì)照品，0. 6%FeCl3-0. 9%K3[Fe (CN)6] (1:0. 9)混合溶液為顯色劑，檢測(cè)波長(zhǎng)720nm，檢測(cè)結(jié)果顯示所得提取物其總酚酸含量為81%。實(shí)施例5 涂膜劑的制備
取聚乙烯醇(PVA)120g，加入到350ml蒸餾水中浸泡溶脹后水浴加熱，過濾。取上述1_4任一實(shí)施例方法獲得的樓桃核總酹酸50g,與IOg甘油、30g苯甲酸一起加入至500ml乙醇中在攪拌下至藥物基本溶解，攪拌均勻后緩緩加入聚乙烯醇液中，隨加隨攪拌，攪勻后濾過既得。實(shí)施例6 軟膏劑的制備
取硬脂酸IOOg在水浴上熔化，加入羊毛脂20g、白凡士林120g并水浴加熱至80°C，另將甘油120g及蒸餾水500ml加熱至90°C，再加入十二烷基硫酸鈉IOg和羥苯乙酯Ig溶解為水相，然后慢慢將水相倒入油相中，邊加邊攪拌至冷凝，既得乳劑型基質(zhì)，取上述1-4任一實(shí)施例方法獲得的櫻桃核總酚酸50g加入上述基質(zhì)中，攪拌均勻即得。實(shí)施例7 硬膏劑的制備
取生膠洗凈，切成適宜大小的條塊，在煉膠機(jī)中塑煉成網(wǎng)狀膠片，浸入適量的溶劑汽油中，浸泡至完全溶脹成凝膠狀，移入打膏桶內(nèi)攪拌3-4小時(shí)，依次加入凡士林、羊毛脂、松香、氧化鋅等制成基質(zhì)，再加入上述1-4任一實(shí)施例方法獲得的櫻桃核總酚酸適量，繼續(xù)攪拌3小時(shí)，待已成均勻膏漿時(shí)，以七號(hào)篩濾過，經(jīng)涂布、切割、加襯、包裝既得。實(shí)施例8 凝膠劑的制備
取卡波姆940適量撒入IOOml純水中，攪拌下滴加三乙醇胺，制成凝膠基質(zhì)，另取上述1-4任一實(shí)施例方法獲得的樓桃核總酹酸20g與輕基苯乙酯Ig溶解于200ml乙醇中，攪拌下加入凝膠基質(zhì)中，攪拌既得。實(shí)施例9 片劑制備
取上述廣4任一實(shí)施例方法獲得的櫻桃核總酚酸50g，粉碎后過80目篩，與淀粉IOOg混勻，加10%淀粉漿IOg制成軟材加入硬脂酸鎂lg，干淀粉IOg混勻后制成1000片，既得。每片含櫻桃核總酚酸50mg。實(shí)施例10 膠囊劑制備
取上述廣4任一實(shí)施例方法獲得的櫻桃核總酚酸50g，粉 碎后過80目篩，與淀粉IOOg混勻，加10%淀粉漿IOg制成軟材，用14目篩制粒后，置60°C 70°C干燥后于12目篩整粒，套入I號(hào)空心膠囊中。共裝1000粒，每粒膠囊含櫻桃核總酚酸50mg。實(shí)施例11 丸劑制備
取上述廣4任一實(shí)施例方法獲得的櫻桃核總酚酸50g，粉碎后過80目篩，適量蜂蜜作黏合劑制成丸。實(shí)施例12 顆粒劑制備
取上述廣4任一實(shí)施例方法獲得的櫻桃核總酚酸50g，粉碎后過80目篩，加10%淀粉漿制成軟材，用14目篩制粒后，置60°C 70°C干燥后于12目篩整粒，分裝，密封，包裝既得。實(shí)施例13
采用實(shí)施例1制備得到的櫻桃核總酚酸體外抗菌活性篩選試驗(yàn) 采用肉湯稀釋法中的常量稀釋法藥敏試驗(yàn)方法
1.10支管中先各加Iml的肉湯培養(yǎng)基；
2.在I號(hào)管加Iml的藥物，與肉湯混勻后移取Iml至2號(hào)管，在2中混勻后再移Iml到3號(hào)管，一次類推到9號(hào)管，從9號(hào)管移去Iml到廢液缸，10號(hào)不加藥；
3.除9號(hào)外其余都再加0.1ml的3X 106CFU/ml的細(xì)菌，混勻后，37°C恒溫培養(yǎng)18-24小時(shí)。之后用接種環(huán)取培養(yǎng)后的各試管的試液，涂于培養(yǎng)皿上，觀察是否長(zhǎng)菌。其中，金黃色葡萄球菌、痢疾桿菌、傷寒桿菌和大腸桿菌的實(shí)驗(yàn)室管1-8號(hào)的藥物含量分別為 62. 5mg/ml、33. 2mg/ml、18. 2mg/ml、7. 3mg/ml、5. 2 mg/ml>2. 62 mg/ml、1. 42mg/ml>0. 63 mg/ml,9號(hào)為不加菌陰性對(duì)照，10號(hào)加菌陽(yáng)性對(duì)照。綠膿桿菌和乙型鏈球菌的實(shí)驗(yàn)試管 1-8 號(hào)的藥物含量分別為 2. 03 mg/ml>0. 92 mg/ml、0. 53 mg/ml>0. 31 mg/ml、0. 12mg/ml、53. 75 u g/ml、35. 23 u g/ml、15. 82 u g/ml。9號(hào)為不加菌陰性對(duì)照，10號(hào)加菌陽(yáng)性對(duì)照。其中鏈球菌的營(yíng)養(yǎng)肉湯經(jīng)121°C 15min滅菌后放到室溫時(shí)，向其中加入5%的小牛血清配成；平板培養(yǎng)基經(jīng)滅菌放到50°C后加入5%的小牛血清，混勻后制成培養(yǎng)皿。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表I。表I具有抗菌活性的櫻桃核提取物體外抗菌活性對(duì)比表
權(quán)利要求
1.一種植物櫻桃核中總酚酸的制備方法，其特征是將取櫻桃核原料粉碎成粗粉，用甲醇或乙醇提取，減壓濃縮得到粗體物后用水混懸，再上大孔樹脂以水醇系統(tǒng)洗脫得到總酚酸。
2.一種植物櫻桃核中總酚酸的制備方法，其特征是通過以下步驟實(shí)現(xiàn)取櫻桃核原料粉碎成粗粉，用5 10倍體積量的甲醇或乙醇提取2 3次，甲醇或乙醇的體積濃度為50°/Γ 00%，提取采用加熱回流或超聲提取；將提取液合并后減壓濃縮，除去甲醇或乙醇，減壓濃縮干燥既得浸膏；浸膏加水混懸后，上大孔樹脂，水洗脫2飛個(gè)體積后再用體積濃度309Γ50%乙醇洗脫至流出液無(wú)色，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，噴霧干燥得到干燥粉末。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種植物櫻桃核中總酚酸的制備方法，其特征是步驟(3)所述的大孔樹脂為DM301、NKA-9型、AB-8、D101、DM130、DM_18、D312型弱極性或中極性大孔樹脂。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2制備得到的植物櫻桃核中的總酚酸在制備抗菌藥物中的應(yīng)用。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其中所述的菌包括金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、乙型鏈球菌。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征是所述的植物櫻桃核中總酚酸加入藥劑學(xué)允許的賦型制劑制備成藥物制劑，制劑形式為外用制劑或口服制劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征是所述外用制劑包括涂膜劑、軟膏、硬膏、霜?jiǎng)┗蚰z。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征是所述口服制劑包括片劑、膠囊劑、丸劑或顆粒劑。
全文摘要
本發(fā)明提供一種植物櫻桃的核中總酚酸的制備方法，是將櫻桃核原料粉碎，用一定濃度的乙醇-水提取，減壓濃縮得到粗體物后用水混懸，水相直接上大孔樹脂以醇水系統(tǒng)洗脫得到總酚酸類提取物，也是櫻桃核中具有藥理活性的有效部位。本發(fā)明提供的櫻桃核中的總酚酸具有明顯的抗菌活性，且櫻桃為藥食同源類植物，無(wú)毒、副作用，可以開發(fā)成一種新的抗菌藥物。櫻桃核中的總酚酸可以制成各種制劑。本發(fā)明方法設(shè)計(jì)合理，具有工藝過程簡(jiǎn)單、成本低、能耗低和生產(chǎn)過程污染低的特點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61K36/736GK102988529SQ20121053820
公開日2013年3月27日 申請(qǐng)日期2012年12月13日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月13日
發(fā)明者宋少江, 李玲芝, 黃肖霄, 劉慶博, 周晨晨, 趙偉 申請(qǐng)人:沈陽(yáng)藥科大學(xué)