地黃提取物在制備治療甲亢藥物或保健食品中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種地黃提取物的新用途。所述新用途是地黃提取物在制備治療甲狀腺功能亢進癥的藥物或保健食品中的應(yīng)用，以及在甲狀腺功能亢進癥相關(guān)的甲亢性心臟病的藥物或保健食品中的應(yīng)用。實驗研究結(jié)果表明：地黃提取物能夠改善甲亢小鼠的外觀行為表現(xiàn)；有增加甲亢小鼠體重的趨勢；減輕耗氧量、減慢心率；對T3、FT3和FT4有顯著降低作用；對小鼠的全心重量指數(shù)、左心室重量指數(shù)有顯著降低作用。
【專利說明】地黃提取物在制備治療甲亢藥物或保健食品中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種地黃提取物的新用途，具體說，是涉及一種地黃提取物在制備治療甲狀腺功能亢進癥的藥物或保健食品中的應(yīng)用，屬于中藥【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]甲狀腺功能亢進癥，簡稱“甲狀腺功能亢進”、“甲亢”，是由多種病因引起的甲狀腺激素過量，進入血循環(huán)中，作用于全身的組織和器官，致機體出現(xiàn)高代謝和神經(jīng)精神興奮性增高癥群為主要表現(xiàn)的臨床綜合癥。隨著社會、工作壓力的增大，生活節(jié)奏的加快，甲狀腺功能亢進的發(fā)病率明顯增加。流行病學調(diào)查發(fā)現(xiàn)，男女發(fā)病比例為1: 4-1: 6，以20-40歲多見，本病多見于女性，我國甲狀腺功能亢進的總發(fā)病率竟高達3%。
[0003]甲亢發(fā)病臨床表現(xiàn)輕重不一，典型患者的表現(xiàn)有:①神經(jīng)系統(tǒng):甲亢患者易激動、精神過敏、多言多動、失眠緊張、思想不集中、焦慮煩躁、多猜疑等，患者伸舌和雙手平舉向前伸出時有細震顫。②高代謝綜合征:患者怕熱多汗，常有低熱、皮膚溫暖潮濕，自覺疲乏無力。③甲狀腺腫大:多呈彌漫性對稱性腫大，少數(shù)不對稱。青年女性多見，體檢時可在患者甲狀腺聞及收縮期雜音，捫及震顫，尤以甲狀腺體上部明顯，為特征性體征。④眼征:患者眼球突出，眼裂增寬。分為浸潤性突眼和非浸潤性突眼。⑤心血管系統(tǒng):患者出現(xiàn)心悸氣促，活動時上述癥狀加劇。常有心動過速(多為竇性心動過速)、心律失常、心臟肥大和充血性心力衰竭等表現(xiàn)。⑥消化系統(tǒng):食量明顯增大，但體重下降，部分患者大便次數(shù)增多。⑦運動系統(tǒng):肌肉軟弱無力。⑧生殖系統(tǒng):女性患者月經(jīng)量減少，月經(jīng)周期延長甚至閉經(jīng)。男性多陽痿。⑨皮膚及肢端:有些患者出現(xiàn)對稱性粘液性水腫，多見于小腿脛前下段。⑩嚴重的可出現(xiàn)甲亢危相、昏迷甚至危及生命。
[0004]甲亢的病因和發(fā)病機制至今尚不完全清楚，西醫(yī)認為本病的發(fā)生主要是由于甲狀腺分泌過多所致。甲狀腺的分泌`活動受大腦垂體前葉促甲狀腺素(TSH)的影響。當高級神經(jīng)活動發(fā)生紊亂以后，大腦垂體前葉就分泌過多的促甲狀腺激素，刺激甲狀腺增生肥大，而分泌過多的甲狀腺激素會使機體代謝率升高，氧化過程加速而出現(xiàn)一系列甲亢癥候群，弓丨起能量、糖、脂肪、蛋白質(zhì)、維生素的代謝紊亂及循環(huán)、消化、造血、神經(jīng)、內(nèi)分泌等系統(tǒng)的功能紊亂。也有認為遺傳因素和自身免疫因素對疾病發(fā)生起主導作用。
[0005]目前，對該病的治療藥物雖然有多種，但均存在一定的不足和副作用。我國最常用的治療方法為藥物治療常用的藥物包括抗甲狀腺藥(ATD)、β受體阻滯劑、碘劑、糖皮質(zhì)激素等。最常用的ATD包括甲巰咪唑(MMI)和丙基硫氧嘧啶(PTU)，其主要作用機制是抑制甲狀腺激素的合成。甲亢患者具有腎上腺素能活性增強的癥狀和體征，應(yīng)用β受體阻滯劑可以對抗腎上腺素能效應(yīng)，可使心動過速、精神緊張、多汗、震顫、肌病等癥狀得以改善。鹽酸普萘洛爾作為最常用的β受體阻滯劑還可以降低5’ -脫碘酶活性，抑制Τ4向Τ3轉(zhuǎn)化。碘化物是最古老的抗甲亢藥物。碘化物能減少甲狀腺的血液供應(yīng)使甲狀腺縮小，抑制甲狀腺激素的合成和釋放，療效顯著而迅速，但使用2-3周后會出現(xiàn)“脫逸”現(xiàn)象，而使甲亢加重，并且令以后甲亢的治療更加困難。臨床上一般將復(fù)方碘溶液用于治療甲亢危象、甲亢術(shù)前準備以及甲亢放射性碘治療用藥。目前公認的糖皮質(zhì)激素主要用于甲狀腺相關(guān)性眼病(TAO)、甲亢危象、重癥亞急性甲狀腺炎的治療。但同時，抗甲狀腺藥物(ATD)的不良反應(yīng)備受學者們關(guān)注?？偟膩碚f，ATD治療是安全且有效的，但其臨床不良反應(yīng)亦較常見，如對肝臟、血液系統(tǒng)的毒性作用、抗中性粒細胞胞漿抗體相關(guān)性肺小血管炎、低血糖、變態(tài)反應(yīng)、肌肉損傷等，一般程度較輕，如能及時停用ATD則能夠自行恢復(fù)，但亦可出現(xiàn)少見、嚴重的副作用，可能存在潛在致命的危險，故需引起臨床醫(yī)生的重視。MMI與PTU比較，其不良反應(yīng)顯著低于PTU，且前者大多具有劑量依賴性，后者與藥物的劑量無顯著相關(guān)。此外，PTU的肝毒性強于MMI，甚至可能發(fā)生致命性肝損傷和肝衰竭。硫脲類抗甲狀腺藥物不良反應(yīng)包括藥疹、粒細胞缺乏癥、嚴重肝損傷、抗中性粒細胞胞質(zhì)抗體(ANCA)相關(guān)性血管炎等，并有一定的致畸作用。嚴重肝損傷和ANCA相關(guān)性血管炎的發(fā)生多與丙硫氧嘧啶有關(guān)，致崎作用主要見于甲巰咪唑。
[0006]中醫(yī)治療大多是復(fù)方湯劑治療或者中西醫(yī)結(jié)合治療，針對個案較多，缺乏大量的臨床數(shù)據(jù)統(tǒng)計資料。中醫(yī)藥現(xiàn)代化過程中，發(fā)明人在總結(jié)了大量的文獻及實驗基礎(chǔ)上，創(chuàng)造性的提出一種中藥地黃提取物的醫(yī)藥新用途。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的是提供一種地黃提取物的新用途，以充分發(fā)揮該地黃提取物在臨床中的藥用價值。
[0008]為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下:
[0009]一種生地黃提取物的新用途，是以該提取物作為活性成分用于制備治療甲狀腺功能亢進癥的藥物或保健食品中的應(yīng)用。
[0010]所述的生地黃提取物的新用途，是以該提取物作為活性成分用于制備治療與甲狀腺功能亢進癥相關(guān)的甲亢性心臟病的藥物或保健食品中的應(yīng)用。
`[0011]所述提取物中梓醇、益母草苷、毛蕊花糖苷含量之和大于50%，通過如下方法提取得到:鮮地黃榨汁液加入乙醇，上清液干燥成粉，加水溶解，濾液上大孔吸附樹脂，水、乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮，干燥，粉碎，即得。
[0012]本發(fā)明的優(yōu)點:
[0013](I)本發(fā)明地黃提取物的實驗研究結(jié)果表明:地黃提取物能夠改善甲亢小鼠的外觀行為表現(xiàn)；有增加甲亢小鼠體重的趨勢；減輕耗氧量、減慢心率；對T3、FT3和FT4有顯著降低作用；對小鼠的全心重量指數(shù)、左心室重量指數(shù)有顯著降低作用。該實驗結(jié)果為本發(fā)明提供了可靠的技術(shù)支撐。
[0014](2)制備工藝簡單，更適合工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明的生地黃提取物制備方法，省去了常規(guī)的提取、濃縮工藝步驟，節(jié)約了能源，降低了成本，更容易實現(xiàn)工業(yè)化，具有實用性。
【具體實施方式】
[0015]下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步詳細、完整地說明。
[0016]實施例1
[0017]取鮮地黃lOOOg，切碎，壓榨榨汁，榨汁液加入4倍量(V/V) 95%乙醇，放置過夜，上清液減壓濃縮至相對密度1.1，噴霧干燥，得鮮地黃干粉；鮮地黃干粉加水溶解并稀釋至相對密度1.05，濾過，濾液上大孔吸附樹脂，控制流速為0.5~1.5BV/h ;先用2.0BV的水進行除雜，然后用2.0BV80%乙醇洗脫，收集80%醇洗脫液，減壓濃縮，60~70°C真空干燥，粉碎，即得11.0g鮮地黃總苷提取物，呈棕黃色粉末；氣特異，味微苦。其中梓醇、益母草苷、毛蕊花糖苷含量之和為56.0%。
[0018]實施例2
[0019]取鮮地黃lOOOg，壓榨榨汁，榨汁液加入5倍量95%乙醇，放置過夜，上清液減壓濃縮至相對密度1.1，噴霧干燥，得鮮地黃干粉；鮮地黃干粉加水溶解并稀釋至相對密度1.05，濾過，濾液上大孔吸附樹脂，控制流速為0.5~1.5BV/h ;先用1.5BV的水進行除雜，然后用1.0BV80%乙醇洗脫，收集80%醇洗脫液，減壓濃縮，60~70°C真空干燥，粉碎，即得
8.2g鮮地黃總苷提取物，呈棕黃色粉末；氣特異，味微苦。其中梓醇、益母草苷、毛蕊花糖苷含量之和為59.4%。
[0020]實施例3
[0021]取鮮地黃lOOOg，壓榨榨汁，榨汁液加入6倍量95%乙醇，放置過夜，上清液減壓濃縮至相對密度1.1，噴霧干燥，得鮮地黃干粉；鮮地黃干粉加水溶解并稀釋至相對密度1.05，濾過，濾液上大孔吸附樹脂，控制流速為0.5~1.5BV/h ;先用1.0BV的水進行除雜，然后用2.5BV70%乙醇洗脫，收集70%醇洗脫液，減壓濃縮，60~70°C真空干燥，粉碎，即得
9.5g鮮地黃總苷提取物，呈棕黃色粉末；氣特異，味微苦。其中梓醇、益母草苷、毛蕊花糖苷含量之和為56.8%。
[0022]實施例4
[0023]取鮮地黃2000g，壓榨榨汁，榨汁液加入4.8倍量95%乙醇，放置過夜，上清液減壓濃縮至相對密度1.1，噴霧干燥，得鮮地黃干粉；鮮地黃干粉加水溶解并稀釋至相對密度1.05，濾過，濾液上大孔吸附樹脂`，控制流速為0.5~1.5BV/h ;先用1.8BV的水進行除雜，然后用2.5BV68%乙醇洗脫，收集68%醇洗脫液，減壓濃縮，60~70°C真空干燥，粉碎，即得21.0g鮮地黃總苷提取物，呈棕黃色粉末；氣特異，味微苦。其中梓醇、益母草苷、毛蕊花糖昔含量之和為56.5%。
[0024]實施例5
[0025]取鮮地黃2000g，壓榨榨汁，榨汁液加入4.5倍量95%乙醇，放置過夜，上清液減壓濃縮至相對密度1.1，噴霧干燥，得鮮地黃干粉；鮮地黃干粉加水溶解并稀釋至相對密度1.05，濾過，濾液上大孔吸附樹脂，控制流速為0.5~1.5BV/h ;先用1.5BV的水進行除雜，然后用3.0BV60%乙醇洗脫，收集60%醇洗脫液，減壓濃縮，60~70°C真空干燥，粉碎，即得23.2g鮮地黃總苷提取物，呈棕黃色粉末；氣特異，味微苦。其中梓醇、益母草苷、毛蕊花糖苷含量之和為54.8%。
[0026]實施例6
[0027]取鮮地黃2000g，壓榨榨汁，榨汁液加入4.2倍量95%乙醇，放置過夜，上清液減壓濃縮至相對密度1.1，噴霧干燥，得鮮地黃干粉；鮮地黃干粉加水溶解并稀釋至相對密度
1.05，濾過，濾液上大孔吸附樹脂，控制流速為0.5~1.5BV/h ;先用1.3BV的水進行除雜，然后用2.2BV75%乙醇洗脫，收集75%醇洗脫液，減壓濃縮，60~70°C真空干燥，粉碎，即得26.6g鮮地黃總苷提取物，呈棕黃色粉末；氣特異，味微苦。其中梓醇、益母草苷、毛蕊花糖苷含量之和為51.1 %。[0028]實施例7實驗例
[0029]I 材料
[0030]1.1實驗動物
[0031]清潔級昆明種小鼠，18-25克。
[0032]1.2 藥物
[0033]受試藥物:梓醇(20g)。
[0034]對照藥物:左旋甲狀腺鈉、甲巰咪唑片。
[0035]1.3 試劑
[0036]碘[1251]三碘甲狀腺原氨酸(T3)放射免疫分析藥盒；碘[1251]甲狀腺素(T4)放射免疫分析藥盒；碘[1251]游離三碘甲狀腺原氨酸(FT3)放射免疫分析藥盒；碘[1251]游離甲狀腺素(FT4)放射免疫分析藥盒。
[0037]1.4 儀器
[0038]JA5003A電子天平；ECG_6511心電圖機；CY_3型數(shù)字式測氧儀；SN_697放射免疫Y計數(shù)器；KK25E73TI西門子冰箱；Scanspeed mini離心機；DL_50RC低溫離心機。
[0039]2 方法
[0040]2.1動物模型制備
`[0041]實驗前置動物于室內(nèi)適應(yīng)環(huán)境2天。隨機抽取20只昆明小鼠作為空白組，每天皮下注射生理鹽水，其余小鼠每天皮下注射左旋甲狀腺素鈉350μ g/kg，給藥容量均為IOml/kg,連續(xù)給藥7天。
[0042]于給藥第6天三小時后，從空白組和模型組各隨機抽取10只(雌雄各半)測其心率。通過麻醉后，用心電圖計算小鼠心率，進而再進行統(tǒng)計分析，比較其差異性。
[0043]若心率明顯加快，可于末次給藥(第7天)后，當日晚八時開始禁食不禁水12h，于次日早上八時稱量并記錄各組小鼠體重，然后眼球取血，待凝血后，3500r/min離心15min,留取血清，采用放射免疫分析法測定T3、T4含量。處死小鼠，取其心臟，稱取全心重量(HWI)與左心室重量(LVWI)，實驗結(jié)束后計算全心重量指數(shù)與左心室重量指數(shù)。[全心重量指數(shù)HWI =全心重量(HW)/體重(BW);左心室重量指數(shù)(LVWI)=左心室重量(LVW)/體重(BW)]
[0044]若這些水平明顯提高，可視為模型制備成功。
[0045]2.2動物分組與給藥
[0046]將造模成功的小鼠隨機分為5組，每組10只，即分為甲亢模型組、地黃提取物低劑量組(簡稱提取物低劑量組)、地黃提取物高劑量組(簡稱提取物高劑量組)、甲巰咪唑組，再加上空白組(10只)。
[0047]地黃提取物低劑量組60mg/kg、地黃提取物高劑量組120mg/kg、甲巰咪唑組給予甲巰咪唑7.5mg/kg，分別進行灌胃給藥，空白組和甲亢模型組灌胃等量的蒸餾水。連續(xù)20天，每天一次。除空白組外，其余各組每只每日均繼續(xù)皮下注射甲狀腺素鈉350μ g/kg。
[0048]2.3指標測定及方法
[0049]2.3.1小鼠外觀行為的觀察
[0050]實驗期間全程觀察并記錄小鼠的整體情況，包括小鼠的精神狀態(tài)、毛色變化、行為活動等。同時，每隔一天測量各組小鼠的進食量。
[0051]2.3.2小鼠體重變化的測定[0052]于小鼠初次給藥的前一天晚八時開始禁食不禁水12h，次日稱取全部小鼠的體重(bodyweight, BW)，即治療前體重(BWl);于末次給藥后，當日晚八時開始禁食不禁水12h，次日進行稱量，即治療后體重(BW2),并計算治療后與治療前體重的差值，比較各組小鼠體重的變化情況。
[0053]2.3.3小鼠耗氧量測定
[0054]于末次給藥前二天，測定小鼠的耗氧量。具體方法為:取CY-3型測氧儀，裝入氧電極。連接并進行調(diào)零處理，并反復(fù)調(diào)試，穩(wěn)定后待用。另取500ml抽濾玻璃瓶，將其外通玻璃管用膠皮套套牢，并用凡士林密封，膠皮套通過三通管相連，可通過三通管檔位調(diào)換，選擇與外界連通或密閉。測定時將小鼠放入瓶中，將抽濾瓶瓶口迅速用木塞塞緊，使瓶內(nèi)外空氣不相通，并將抽濾瓶橫放與實驗臺上，同時開始計時，共計20min。20min末用注射器通過三通管吸取瓶內(nèi)空氣IOml，迅速注入CY-3測氧儀的進氣管接口處，測氧儀顯示所注入氣體的含氧量，待穩(wěn)定記錄該數(shù)據(jù)，該數(shù)據(jù)為剩余氧含量，氧含量下降值=21% -剩余氧含量(%)。(按空氣中21%氧含量計算)[0055]2.3.4小鼠心率的測定
[0056]于末次給藥前一天，全部小鼠禁食不禁水12h，于次日給藥3h左右測其心率。具體方法為:用0.6%的戊巴比妥鈉的麻醉小鼠(按0.lml/10g給藥)，待動物被麻醉后，將其固定在實驗臺上，按右上肢紅色，左上肢黃色，左下肢綠色，右下肢黑色的連接方式，將電極針插入動物四肢的皮下，連接好導聯(lián)線，即可進行心電圖的記錄。然后通過心電圖計算小鼠心率(heartrate，HR)，進而再進行統(tǒng)計分析，比較其差異性。
[0057]2.3.5小鼠血漿甲狀腺激素水平的測定
[0058]于小鼠末次給藥后禁食不禁水12h，摘眼球取血后，3500r/min離心15min，吸取血漿，采用放射免疫分析法測定血清中的T3、T4、FT3、FT4的含量。具體操作均按放免試劑盒說明書進行。
[0059]2.3.6小鼠臟器指數(shù)的測定
[0060]處死小鼠，迅速開胸取心臟，稱取全心重量(heart weight, HW)與左心室重量(leftventricular weight, LVW),實驗結(jié)束后計算全心重量指數(shù)(heart weight index,HWI) (HWI = HW/BW)、左心室重量指數(shù)(left ventricular weight index, LVffI) (LVWI =LVW/BW)。
[0061]2.4統(tǒng)計學方法
[0062]實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)土標差(i±s)表示，采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行分析，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較方差齊性用q檢驗，方差不齊用Dunnett’ s T3檢驗。P < 0.05為有顯著性差異。
[0063]3實驗結(jié)果
[0064]3.1判定模型是否成功的結(jié)果
[0065]3.1.1對小鼠心率的影響
[0066]與空白組比較，造模第6天模型組小鼠心率(HR)明顯加快，兩者比較有極其顯著性差異(P < 0.001)。(見表1)
[0067]表1注射左旋甲狀腺鈉6天對小鼠心率的影響F±S)
[0068]
【權(quán)利要求】
1.一種生地黃提取物的新用途，其特征在于:以該提取物作為活性成分用于制備治療甲狀腺功能亢進癥的藥物或保健食品中的應(yīng)用。 所述提取物中梓醇、益母草苷、毛蕊花糖苷含量之和大于50%，通過如下方法提取得到:鮮地黃榨汁液加入乙醇，上清液干燥成粉，加水溶解，濾液上大孔吸附樹脂，水、乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮，干燥，粉碎，即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生地黃提取物的新用途，其特征在于:以該提取物作為活性成分用于制備治療與甲狀腺功能亢`進癥相關(guān)的甲亢性心臟病的藥物或保健食品中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P9/00GK103860742SQ201210538845
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2012年12月12日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月12日
【發(fā)明者】玄振玉 申請人:玄振玉