專(zhuān)利名稱(chēng)：八角蓮提取物、含該提取物的藥物組合物及其制法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及八角蓮提取物、含該提取物的藥物組合物及其制法和用途。
背景技術(shù)：
八角蓮分布于我國(guó)藏東南、川西、秦嶺、淮河以南海拔300 1500米的山區(qū)。已知湖北、湖南、河南、四川、江西、安徽、浙江、廣東、廣西、云南、貴州、山西諸省均有分布，但每個(gè)地區(qū)的分布量不多。八角蓮屬是我國(guó)特有的屬，約有12種I變種。多年來(lái)人們?yōu)E采亂挖的現(xiàn)象十分嚴(yán)重，目前該屬幾種植物已被列為國(guó)家三級(jí)保護(hù)珍稀瀕危植物。八角蓮屬類(lèi)植物普遍含有鬼臼毒素等芳香四氫萘類(lèi)木脂素，具有較強(qiáng)的抗腫瘤和抗病毒等活性。此類(lèi)木脂素類(lèi)化合物是八角蓮的主要活性成分，包括鬼 曰毒素(podophyllotoxin)、去氧鬼曰(deoxypodophyIIotoxin)、苦鬼曰素葡萄糖苷(picropodophyIlotoxin 4-0-glucoside)、鬼曰毒素萄糖苷(podophyllotoxin4-0-glucoside)、鬼曰酮(podophyIIotoxone)、異苦鬼曰毒素(isopicropodophyllone)、4_去甲基異鬼曰毒素(4-demethylisopodophyllotoxin)等。此外還有黃耆式(Astragalin)、金絲桃式(Hyperin)、槲皮素(quercetin)、山柰酹(Kaempferol)等黃酮類(lèi)成分。以及β-谷留醇(β-sitosterol)、胡蘿卜苷(daucosterol)等留體成分及多種微量元素即鐵、銅、鋅、猛、銀、硒、碘、招、鈷、鎳等。八角蓮所含化合物具有抗病毒、抗菌、抗腫瘤、免疫等多種藥理作用。八角蓮中的山奈酚、山奈酚苷、槲皮素、苦鬼曰毒素與八角蓮注射劑對(duì)CBV、HSV-1 (I型單純皰疹病毒)、CB1-6V (柯薩奇B組病毒I 6型)病毒均有抑制作用。鬼白毒素能有效抑制皰疹病毒，抑制細(xì)胞中期的有絲分裂，可用于病毒性性病。觀察了 5種含鬼白毒素成分的八角蓮類(lèi)中藥八角蓮、秕鱗八角蓮、川八角蓮及桃兒七和南方山荷葉根莖的50%甲醇及二氯甲烷提取物抗單純皰疹病毒的作用，結(jié)果顯示50%甲醇提取物中除川八角蓮?fù)?，其余各種對(duì)單純皰疹病毒皆有較好的抑制作用。二氯甲烷提取物除八角蓮?fù)?，均因藥物本身毒性太大而未顯示抑制作用。研究表明，八角蓮煎劑體外對(duì)金黃色葡萄球菌有一定的抑菌作用。八角蓮中主要有效成分之一鬼白毒素有一定毒性。鬼白毒素給貓灌服，能刺激胃腸道蠕動(dòng)增強(qiáng)反應(yīng)，引起嘔吐、腹瀉，甚至血便，導(dǎo)致嚴(yán)重衰竭性虛脫死亡。用鬼曰毒素注射液注入動(dòng)物體內(nèi)，能引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制狀態(tài)的表現(xiàn)即抽搐、繼之嗜睡、昏迷、瞳孔散大、呼吸麻痹、心跳停搏致死亡。HSV (單純皰疹病毒)的感染十分普遍，呈全球性分布。人是HSV唯一的自然宿主，主要通過(guò)直接密切接觸和性接觸傳播。病毒可經(jīng)口腔、呼吸道、生殖道粘膜和破損皮膚等多種途徑侵入機(jī)體，孕婦生殖道皰疹可在分娩時(shí)傳染新生兒。兩種不同血清型HSV的感染部位及臨床表現(xiàn)各不相同，HSV-I主要引起咽炎、唇皰疹、角膜結(jié)膜炎，而HSV-2則主要導(dǎo)致生殖器皰疫。八角蓮中以木脂素為主的化學(xué)成分表現(xiàn)出對(duì)各種皰疹病毒的良好的抵抗作用，故考慮將此有效部位提煉出來(lái)，配合其黃酮類(lèi)成分，制成如洗液等各種外用劑型。提取工藝經(jīng)過(guò)創(chuàng)新改進(jìn)，與傳統(tǒng)中藥水煎洗液相去，提取時(shí)棄去了大量無(wú)效雜質(zhì)，降低了洗液使用的未知風(fēng)險(xiǎn)。產(chǎn)品在外觀、氣味、使用時(shí)肌膚感覺(jué)上更容易為消費(fèi)者所接受。同時(shí)總木脂素和總黃酮協(xié)同作用，增效減毒，大大降低了鬼白毒素類(lèi)成分對(duì)皮膚的刺激作用。公開(kāi)號(hào)為CN1258530A、CN1418685A等多項(xiàng)專(zhuān)利以鬼臼毒素配比其它化學(xué)成分制成治療皮膚疣的藥物或消毒用品，公開(kāi)號(hào)為CN1883622等專(zhuān)利以含八角蓮的復(fù)方制成皮膚病的外用藥。但尚無(wú)八角蓮有效部位總木脂素和總黃酮制成藥物或消毒用品的相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種化學(xué)成分明確較明確的八角蓮提取物，含有活性成分總木脂素和總黃酮等，所得提取物雜質(zhì)少，有效成分含量高。本發(fā)明八角蓮提取物，以提取物重量計(jì)含有鬼臼毒素20wt% 50wt%，山奈酚3wt% 8wt%,總黃酮 8wt% 15wt%。
其中，所述八角蓮為小檗科八角蓮屬植物八角蓮Dysosm versipellis (Hance)、六角蓮 D. Pleiantha(Hance)或川八角蓮 D. veitchii (Hemsl. et Wis.)的根莖。本發(fā)明所解決的第二個(gè)技術(shù)問(wèn)題是提供本發(fā)明八角蓮提取物的制備方法，通過(guò)控制混合有機(jī)溶劑的構(gòu)成比例，以控制提取物內(nèi)可測(cè)定有效成分的含量比例，得到了雜質(zhì)少，有效成分含量高的八角蓮提取物。本發(fā)明八角蓮提取物的制備方法步驟如下A、以八角蓮為原料，以乙醇為提取溶劑，提取液濃縮后得浸膏a ；B、浸膏a用乙酸乙酯洗滌、過(guò)濾，濃縮濾液得浸膏b ;C、浸膏b用混合有機(jī)溶劑加熱回流洗滌，過(guò)濾，濃縮濾液得浸膏c ；D、浸膏c干燥粉碎即得八角蓮提取物；其中，步驟C所述混合有機(jī)溶劑為低極性有機(jī)溶劑和中極性有機(jī)溶劑的混合溶齊U，其中，所述低極性有機(jī)溶劑為石油醚、乙醚、正己烷、環(huán)己烷中的至少一種，中極性有機(jī)溶劑為丙酮、乙酸乙酯中的至少一種；進(jìn)一步優(yōu)選混合有機(jī)溶劑采用乙酸乙酯和環(huán)己烷的混合溶劑，其中乙酸乙酯和環(huán)己烷的體積比為I: I 4:1，優(yōu)選體積比為2:1。其中，步驟A中用乙醇提取時(shí)采用滲漉提取，乙醇用量為八角蓮用量的6-10倍；乙醇用量?jī)?yōu)選為八角蓮用量的8倍。步驟A所述乙醇濃度為至少90%v/v ；乙醇濃度優(yōu)選95%v/v。八角蓮在提取前粉碎至10-50目；優(yōu)選粉碎至20目。本發(fā)明所解決的第三個(gè)技術(shù)問(wèn)題是提供一種含有權(quán)利要求I所述的八角蓮提取物以及藥學(xué)上可接受的輔料制成的藥物組合物；所述藥物組合物優(yōu)選劑型為外用制劑；進(jìn)一步優(yōu)選外用制劑為洗液、軟膏劑、凝膠劑。本發(fā)明解決的第四個(gè)技術(shù)問(wèn)題是提供本發(fā)明八角蓮提取物和藥物組合物的新用途，即八角蓮提取物或藥物組合物在制備具有皮膚殺菌功效的產(chǎn)品中的用途，具體可殺滅白色念珠球菌，大腸桿菌，金黃色葡萄球菌，外用可用于婦女外陰部的殺菌止癢。以及八角蓮提取物或藥物組合物在制備治療尖銳濕疣的藥物中的用途。本發(fā)明八角蓮提取物中有效成分含量高、雜質(zhì)少。八角蓮提取物或含該提取物的藥物組合物用于皮膚殺菌、治療尖銳濕疣時(shí)，效果明確，副作用小。本發(fā)明制備方法與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有工藝先進(jìn)，大生產(chǎn)實(shí)用性強(qiáng)，成本相對(duì)較低、環(huán)境污染小的優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明八角蓮提取物的制備方法步驟如下A、以八角蓮為原料，以乙醇為提取溶劑，提取液濃縮后得浸膏a ；B、浸膏a用乙酸乙酯洗滌、過(guò)濾，濃縮濾液得浸膏b ;C、浸膏b用混合有機(jī)溶劑加熱回流洗滌，過(guò)濾，濃縮濾液得浸膏c ；D、浸膏c干燥粉碎即得八角蓮提取物。本發(fā)明的關(guān)鍵在于采用了混合有機(jī)溶劑提取，減少提取物中的雜質(zhì)含量，提高了 有效成分在提取物中的含量比例?；旌嫌袡C(jī)溶劑為低極性有機(jī)溶劑和中極性有機(jī)溶劑的混合溶劑，其中，所述低極性有機(jī)溶劑為石油醚、乙醚、正己烷、環(huán)己烷中的至少一種，中極性有機(jī)溶劑為丙酮、乙酸乙酯中的至少一種。以下實(shí)施例1-4是采用不同低極性有機(jī)溶劑和中極性有機(jī)溶劑得到的混合有機(jī)溶劑，考察提取物中各有效成分的含量及比例。實(shí)施例I八角蓮提取物的制備(I)八角蓮藥材10KG，粉碎為20目，用95%乙醇滲漉，回收乙醇。(2)浸膏用乙酸乙酯洗滌過(guò)濾，濾液回收溶劑；浸膏用混合有機(jī)溶劑(乙酸乙酯環(huán)己烷=2:1)加熱回流洗滌，過(guò)濾。(3)濾液回收溶劑，浸膏烘干粉碎，得八角蓮提取物A 522g，經(jīng)HPLC法測(cè)定，提取物中鬼白毒素含量為33. 2%，山奈酚含量為4. 5%。經(jīng)紫外分光光度法測(cè)得總黃酮含量為10. 8%。實(shí)施例2八角蓮提取物的制備(I)八角蓮藥材1KG，粉碎為10目，用95%乙醇滲漉，回收乙醇。(2)浸膏用乙酸乙酯洗滌過(guò)濾，濾液回收溶劑；浸膏用混合有機(jī)溶劑(石油醚丙酮=1:1)加熱回流洗滌，過(guò)濾。(3)濾液回收溶劑，浸膏烘干粉碎，得八角蓮提取物41g，經(jīng)HPLC法測(cè)定，提取物中鬼臼毒素含量為49. 5%，山奈酚含量為3. 1%。經(jīng)紫外分光光度法測(cè)得總黃酮含量為8. 7%。實(shí)施例3八角蓮提取物的制備(I)八角蓮藥材1KG，粉碎為50目，用95%乙醇滲漉，回收乙醇。(2)浸膏用乙酸乙酯洗滌過(guò)濾，濾液回收溶劑；浸膏用混合有機(jī)溶劑(丙酮正己烷=2:1)加熱回流洗滌，過(guò)濾。(3)濾液回收溶劑，浸膏烘干粉碎，得八角蓮提取物62g，經(jīng)HPLC法測(cè)定，提取物中鬼臼毒素含量為25. 2%,山奈酹含量為6. 5%。經(jīng)紫外分光光度法測(cè)得總黃酮含量為14. 1%。實(shí)施例4八角蓮提取物的制備(I)八角蓮藥材1KG，粉碎為20目，用95%乙醇滲漉，回收乙醇。(2)浸膏用乙酸乙酯洗滌過(guò)濾，濾液回收溶劑；浸膏用混合有機(jī)溶劑(乙酸乙酯環(huán)己烷=1:2)加熱回流洗滌，過(guò)濾。(3)濾液回收溶劑，浸膏烘干粉碎，得八角蓮提取物26g，經(jīng)HPLC法測(cè)定，提取物中鬼臼毒素含量為29. 2%,山奈酹含量為3. 9%。經(jīng)紫外分光光度法測(cè)得總黃酮含量為8. 6%。通過(guò)上述實(shí)施例1-4可見(jiàn)，采用上述方法所得八角蓮提取物，以提取物重量計(jì)含有鬼臼毒素20wt% 50wt%，山奈酚3wt% 8wt%，總黃酮8wt% 15wt%。采用乙酸乙酯環(huán)己烷=2:1 (體積比)作為混合有機(jī)溶劑所得提取物的抗病毒實(shí)驗(yàn)最優(yōu)，故優(yōu)選乙酸乙酯環(huán)己烷=2:1 (體積比)。實(shí)施例5八角蓮洗液的制備取八角蓮提取物干粉(按實(shí)施例I制備)80g，加熱溶于1200ml吐溫80中，加入丙二醇4000ml、卡松40g、乙氧基化烷基硫酸鈉(AES) 200g,加熱攪拌至溶液清亮。逐步加入純化水，邊加邊攪拌，加至溶液總體積為40L，分裝，每瓶裝200ml溶液，密封，得八角蓮洗液樣品199瓶。實(shí)施例6八角蓮提取物殺菌試驗(yàn) I、材料供試樣品八角蓮洗液(按實(shí)施例5制備)大腸桿菌(8099)、金黃色葡萄球菌(ATCC6538)、白色念珠菌(ATCC10231)中和劑0. 5%硫代硫酸鈉+0. 5%卵磷脂+0. 5%甘氨酸+0. 5%吐溫-80的O. 03mol/L的PBS溶液。動(dòng)物由四川省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物專(zhuān)委會(huì)養(yǎng)殖場(chǎng)提供的健康、初成年的雌性家兔6只，體重
2.Okg 2. 3kg，生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK[川]2008-14.普通級(jí)，動(dòng)物采用單籠喂養(yǎng)。2、方法2. I檢驗(yàn)依據(jù)《消毒技術(shù)規(guī)范》(2002年版)2. I. I. 5. 5中和劑懸液定量鑒定試驗(yàn)操作程序，2. I. I. 9真菌殺滅試驗(yàn)，2. I. I. 7. 4懸液定量殺菌試驗(yàn)操作程序，2. 2. 3消毒產(chǎn)品穩(wěn)定性測(cè)定(微生物法)，2. 3. 5陰道粘膜刺激試驗(yàn)。2. 2中和劑鑒定試驗(yàn)試驗(yàn)菌為金黃色葡萄球菌和白色念珠菌。試驗(yàn)用樣濃度100%O試驗(yàn)溫度20°C，重復(fù)次數(shù)3次。2. 3殺菌試驗(yàn)白色念珠菌采用2. I. I. 9真菌殺滅試驗(yàn)，大腸桿菌和金黃色葡萄球菌采用2. I. I. 7. 4懸液定量殺菌試驗(yàn)操作程序。試驗(yàn)用樣濃度100%。試驗(yàn)溫度20°C，重復(fù)次數(shù)3次。2. 4陰道刺激性試驗(yàn)試驗(yàn)分染毒組及空白對(duì)照組，每組3只雌性家兔。操作程序參見(jiàn)《消毒技術(shù)規(guī)范》(2002年版)2.3. 5. 4。根據(jù)《消毒技術(shù)規(guī)范》(2002年版)中表2_16、2-17進(jìn)行陰道粘膜刺激反應(yīng)評(píng)分分級(jí)和強(qiáng)度分級(jí)。2. 5穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)樣品原包裝PE瓶密封，于36 °C恒溫箱中放置90天。觀察存放后對(duì)白色念珠菌殺滅效果變化。3、結(jié)果見(jiàn)表I。3. I中和劑鑒定試驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)表明，用O. 5%硫代硫酸鈉+0. 5%卵磷脂+0. 5%甘氨酸+0. 5%吐溫-80的O. 03mol/L的PBS溶液作為中和劑，可有效中和該樣品100%濃度對(duì)金黃色葡萄球菌和白色念珠菌的殺滅作用，且該中和劑及中和產(chǎn)物對(duì)受試細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖和
培養(yǎng)基無(wú)影響。3. 2殺菌效果試驗(yàn)表明，該樣品100%濃度分別對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和白色念珠菌作用2min，平均殺滅率分別為100%、100%和93. 35%，由此表明本發(fā)明八角蓮提取物可殺滅白色念珠球菌，大腸桿菌，金黃色葡萄球菌。外用可用于婦女外陰部的殺菌止癢。
表I八角蓮洗液對(duì)三種菌株的殺滅作用
權(quán)利要求
1.八角蓮提取物，其特征在于以提取物重量計(jì)含有鬼白毒素20wt% 50wt%，山奈酚3wt% 8wt%,總黃酮 8wt% 15wt%。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的八角蓮提取物，其特征在于所述八角蓮提取物采用如下步驟制備 A、以八角蓮為原料，以乙醇為提取溶劑，提取液濃縮后得浸膏a； B、浸膏a用乙酸乙酯洗滌、過(guò)濾，濃縮濾液得浸膏b； C、浸膏b用混合有機(jī)溶劑加熱回流洗滌，過(guò)濾，濃縮濾液得浸膏c； D、浸膏c干燥粉碎即得八角蓮提取物； 其中，步驟C所述混合有機(jī)溶劑為低極性有機(jī)溶劑和中極性有機(jī)溶劑的混合溶劑； 所述低極性有機(jī)溶劑為石油醚、乙醚、正己烷、環(huán)己烷中的至少一種，中極性有機(jī)溶劑為丙酮、乙酸乙酯中的至少一種； 進(jìn)一步優(yōu)選混合有機(jī)溶劑采用乙酸乙酯和環(huán)己烷的混合溶劑，其中乙酸乙酯和環(huán)己烷的體積比為1:1 4:。
3.權(quán)利要求I所述的八角蓮提取物的制備方法，其特征在于步驟如下 A、以八角蓮為原料，以乙醇為提取溶劑，提取液濃縮后得浸膏a； B、浸膏a用乙酸乙酯洗滌、過(guò)濾，濃縮濾液得浸膏b； C、浸膏b用混合有機(jī)溶劑加熱回流洗滌，過(guò)濾，濃縮濾液得浸膏c； D、浸膏c干燥粉碎即得八角蓮提取物； 其中，步驟C所述混合有機(jī)溶劑為低極性有機(jī)溶劑和中極性有機(jī)溶劑的混合溶劑； 所述低極性有機(jī)溶劑為石油醚、乙醚、正己烷、環(huán)己烷中的至少一種，中極性有機(jī)溶劑為丙酮、乙酸乙酯中的至少一種； 進(jìn)一步優(yōu)選混合有機(jī)溶劑采用乙酸乙酯和環(huán)己烷的混合溶劑，其中乙酸乙酯和環(huán)己烷的體積比為1:1 4:1。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的八角蓮提取物的制備方法，其特征在于步驟A中用乙醇提取時(shí)采用滲漉提取，乙醇用量為八角蓮用量的6-10倍；乙醇用量?jī)?yōu)選為八角蓮用量的8倍。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的八角蓮提取物的制備方法，其特征在于步驟A所述乙醇濃度為至少90%v/v ;乙醇濃度優(yōu)選95%v/v。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的八角蓮提取物的制備方法，其特征在于八角蓮在提取前粉碎至10-50目；優(yōu)選粉碎至20目。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的八角蓮提取物的制備方法，其特征在于步驟C所述乙酸乙酯和環(huán)己烷的體積比為2:1。
8.藥物組合物，含有權(quán)利要求I所述的八角蓮提取物以及藥學(xué)上可接受的輔料；所述藥物組合物優(yōu)選劑型為外用制劑；進(jìn)一步優(yōu)選外用制劑為洗液、軟膏劑、凝膠劑；特別優(yōu)選洗液。
9.權(quán)利要求I所述的八角蓮提取物或權(quán)利要求8所述的藥物組合物在制備具有皮膚殺菌功效的產(chǎn)品中的用途。
10.權(quán)利要求I所述的八角蓮提取物或權(quán)利要求8所述的藥物組合物在制備治療尖銳濕疣的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及八角蓮提取物、含該提取物的藥物組合物及其制備方法和用途。本發(fā)明的目的是提供一種化學(xué)成分明確較明確的八角蓮提取物，含有活性成分總木脂素和總黃酮等，所得提取物雜質(zhì)少，有效成分含量高。該八角蓮提取物以提取物重量計(jì)含有鬼臼毒素20wt%～50wt%，山奈酚3wt%～8wt%，總黃酮8wt%～15wt%。本發(fā)明八角蓮提取物中有效成分含量高、雜質(zhì)少。八角蓮提取物或含該提取物的藥物組合物用于皮膚殺菌、治療尖銳濕疣時(shí)，效果明確，副作用小。本發(fā)明制備方法與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有工藝先進(jìn)，大生產(chǎn)實(shí)用性強(qiáng)，成本相對(duì)較低、環(huán)境污染小的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61P31/02GK102961428SQ20121054790
公開(kāi)日2013年3月13日 申請(qǐng)日期2012年12月17日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月17日
發(fā)明者熊鐵一, 羅禹, 秦小波, 王玉, 楊楠, 楊適 申請(qǐng)人:四川省自然資源科學(xué)研究院