專利名稱：烏頭屬藥材或其加工品中總生物堿提取物的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種烏頭屬藥材或其加工品中總生物堿提取物的制備方法，特別是對由各種方法得到的烏頭屬藥材或其加工品總生物堿提取物粗品制備其純化提取物產(chǎn)品的方法。
背景技術：
烏頭屬植物有著豐富的藥用品種，據(jù)記載，我國約有36種烏頭屬植物可供藥用，常用藥材主要有烏頭(川烏)、北烏頭(草烏)、黃花烏頭、短柄烏頭、甘青烏頭等，以及炮制加工品，如制草烏、制川烏、黑附片、白附片、淡附片、黃附片、炮天雄等。地方和民間習用的藥用品種有鐵棒錘、黃草烏、爪葉烏頭和聚葉花葶烏頭及其加工炮制品等。烏頭屬植物多具有祛風除濕、溫經(jīng)止痛之功效，可用于風寒濕痹、關節(jié)疼痛、心腹冷痛等，廣泛用于臨床治療
中，《全國醫(yī)藥產(chǎn)品大全》收載有含川烏、附子、草烏、短柄烏頭、高烏頭、黃花烏頭的中成藥超過350種。烏頭屬藥用植物中主要藥效成分是生物堿，包括雙酯型生物堿(烏頭堿、新烏頭堿、次烏頭堿等)、單酯型生物堿(苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿等)和醇胺型生物堿(烏頭原堿、新烏頭原堿、次烏頭原堿)等。目前對該類生物堿成分已有報道和/使用的分離純化方法，均為將其水煎液或其水溶液經(jīng)大孔吸附樹脂柱吸附后，先用水洗脫除雜，再用乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，得到經(jīng)分離純化后的附子或川烏的總生物堿成分。如趙鐳等報道，將附子提取物通過DlOl大孔吸附樹脂純化，水、體積分數(shù)為10%、80%的乙醇溶液梯度洗脫，收集體積分數(shù)為10%的乙醇洗脫部分濃縮干燥，即得附子總生物堿(附子總生物堿的提取純化工藝，沈陽藥科大學學報，2007，24(7) :433)。萬里翔等報道，將附子提取物上DlOl大孔吸附樹脂柱，以蒸餾水除雜，再用95%乙醇洗脫，濃縮蒸干洗脫液，即得附子總生物堿(烏頭總堿的純化工藝及中烏頭堿的純化研究，安徽農(nóng)業(yè)科學，2008，36(12):5044)。吳平報道了一種附子生物堿的提取分離純化方法，將生附子用酸水提取，提取液經(jīng)大孔樹脂柱吸附，先用水洗去雜質(zhì)，再用60%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，經(jīng)進一步處理得到附子生物堿提取物(成都中醫(yī)藥大學碩士學位論文，2007年)。申請人:經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，對烏頭屬藥材或其加工品的水煎液，或其乙醇等其它溶劑提取物的水溶液，采用大孔吸附樹脂柱分離純化時，經(jīng)水洗脫除雜后，再用3(T95(v)%的含水乙醇洗脫(解吸附)，均不能充分洗脫回收相應的生物堿成分，導致生物堿的損失嚴重，損失率可達30飛0%，浪費了藥材資源，也影響了烏頭屬藥材或其加工品藥效作用的充分發(fā)揮。

發(fā)明內(nèi)容
鑒于此，本發(fā)明提供了一種烏頭屬藥材或其加工品總生物堿提取物的制備方法，特別是對由各種方法得到的烏頭屬藥材或其加工品總生物堿提取物粗品制備其純化提取物產(chǎn)品的方法。本發(fā)明烏頭屬藥材或其加工品中總生物堿提取物的制備方法，是將含有烏頭屬藥材或其加工品提取物的水溶液調(diào)節(jié)PH值7 10，優(yōu)選的是調(diào)節(jié)pH值8 10后，用大孔吸附樹脂柱吸附，然后先用水洗滌除雜質(zhì)后，再至少用PH ( 5和乙醇體積含量為50、0%的酸性乙醇-水溶液洗脫，收集洗脫液，除去溶劑，即得到烏頭屬藥材及其加工品總生物堿提取物。其中，所說的大孔吸附樹脂，可以按照目前常規(guī)的方式操作，如選擇常用的HPD100、HPD300、DlOU AB-8等各種型號的大孔樹脂，其中優(yōu)選HPD100或DlOl等型號的大孔吸附樹脂。上述所說的含有烏頭屬藥材或其加工品提取物的水溶液，包括烏頭屬藥材或其加工品的水提取溶液，或者是其它各種來源的含有烏頭屬藥材或其加工品提取物成分的水溶液，特別是由不同的有機溶劑對烏頭屬藥材或其加工品提取并除去溶劑后的提取物配制的水溶液。其中，在采用烏頭屬藥材或其加工品的水提取液時，該水提取液除可以為常規(guī)的水提取液外，更優(yōu)選的是pH< 5的酸水提取液，并優(yōu)選采用為以鹽酸或硫酸酸化的水溶液。
對作為制備原料的所說含有烏頭屬藥材或其加工品提取物水溶液的pH調(diào)節(jié)，可以采用藥物中允許使用的各種堿性成分，例如通?？梢圆捎冒溲趸c、碳酸鈉或碳酸氫鈉等最為常用的堿金屬氫氧化物或是其碳酸鹽、碳酸氫鹽等。實驗顯示，將烏頭屬藥材或其加工品提取物的水溶液調(diào)節(jié)至PH值7 10后，再用所說的大孔吸附樹脂吸附處理，將更有利于醇胺型生物堿成分的吸附分離，明顯提高大孔樹脂的吸附容量，提高分離效率，降低成本。所說含有烏頭屬藥材或其加工品提取物的水溶液用大孔吸附樹脂柱吸附后用水洗滌除雜時，可以分別采用常規(guī)方式只用中性水洗滌的方式，更優(yōu)選的方式是采用依次用中性水、pH 8^10的堿性水和中型水洗滌；或者采用依次用pH 8^10的堿性水洗滌和中性水洗滌。實驗表明，大孔吸附樹脂吸附后先用PH 8 10的堿水洗滌，能更好的除去雜質(zhì)，再用水洗至近中性(pH 7 8)。然后再進行所說的用酸性乙醇-水溶液洗脫，從而能更好地富集純化總生物堿成分。上述方法中，為提高處理效率，所說的供大孔吸附樹脂柱吸附的水溶液，優(yōu)選的是其中烏頭屬藥材或其加工品的提取物含量不超過相當于2克生藥/毫升。上述制備方法中作為洗脫液的所說酸性乙醇溶液，除優(yōu)選以工業(yè)生產(chǎn)中最為常用和易得的鹽酸進行酸化的乙醇-水溶液外，也可以使用藥物中允許使用的其它酸性成分進行酸化。洗脫時的另一種優(yōu)選方式是，可以采用先用酸性乙醇-水溶液洗脫，最后再用中性乙醇-水溶液洗脫，即先采用酸性(特別是酸性較強的)乙醇-水溶液洗脫，使大孔吸附樹脂柱呈酸性后，最后再改用中性乙醇洗脫。對所收集的洗脫液，除可直接除去乙醇等溶劑，得到所說的提取物(或含有烏頭屬藥材或其加工品總生物堿相應酸鹽)外，還可以采用的其它方式包括，將所說收集的洗脫液先用醫(yī)藥中允許使用的堿性成分(如同樣可優(yōu)選上述的氫氧化鈉、碳酸鈉或碳酸氫鈉等)調(diào)節(jié)至pH值5 7后，再進行除去溶劑的操作。另一種方法是，可以將所說收集的洗脫液用堿型陰離子交換樹脂，如選擇目前已有廣泛報道和/使用的717、D201、D202、711、D301、D311、D318等型號的堿型陰離子交換樹脂處理后，再進行除去溶劑的操作。實驗結(jié)果表明，本發(fā)明上述制備方法與目前傳統(tǒng)方法比較，特別是采用堿性水溶液洗脫除雜時，既能充分除去雜質(zhì)，又不會明顯損失或破壞所需要的生物堿成分，而且用酸性乙醇-水溶液對吸附樹脂進行洗脫，能使相應的生物堿成分被充分洗脫，回收率高，有效避免了傳統(tǒng)方法的生物堿損失嚴重問題，大大節(jié)省了藥材資源，提高了藥材的利用率，使烏頭屬藥材或其加工品的藥效作用得以更充分的利用和發(fā)揮。以下通過實施例的具體實施方式
再對本發(fā)明的上述內(nèi)容作進一步的詳細說明。但不應將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。在不脫離本發(fā)明上述技術思想情況下，根據(jù)本領域普通技術知識和慣用手段做出的各種替換或變更，均應包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
具體實施例方式實施例I
取生附子10kg，加水10倍，浸泡4小時，煎煮2小時，濾過，水煎液備用；藥渣再加水8倍，煎煮I小時，濾過，合并水煎液，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值擴10，按常規(guī)方法上HPD100 型大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫除雜后，再用PH 2 3的70(v)% (以下同)鹽酸乙醇-水溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至6 7，減壓回收乙醇，濃縮、干燥，SP得生附子總生物堿提取物。實施例2
取炒附片10kg，加水12倍，浸泡2小時，煎煮3小時，濾過，水煎液備用；藥渣再加水10倍，煎煮2小時，濾過，合并水煎液，用碳酸鈉溶液調(diào)節(jié)pH值9 10，上HPD100型大孔吸附樹脂柱，分別用水、PH值擴10的氫氧化鈉溶液和水洗脫除雜，再用pH 2^3的70%鹽酸乙醇-水溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，上717堿型陰離子交換樹脂柱，收集乙醇流出液，減壓回收乙醇，濃縮、干燥，即得炒附片總生物堿提取物。實施例3
取鐵棒錘(制)IOkg,加水10倍，煎煮2次，每次2小時，濾過，合并水煎液，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值8 9，上DlOl型大孔吸附樹脂柱，分別用pH值擴10的碳酸鈉溶液和水洗脫除雜，再用PH 3^4的90%鹽酸乙醇-水溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮、干燥，即得制鐵棒錘總生物堿提取物。實施例4
取黑附片10kg，加pH值2 3的鹽酸溶液12倍，煎煮2次，每次3小時，濾過，合并水煎液，用碳酸鈉溶液調(diào)節(jié)PH值疒8，上DlOl型大孔吸附樹脂柱，分別用pH值8、的氫氧化鈉溶液和水洗脫除雜后，再用PH 2^3的60%鹽酸乙醇-水溶液洗脫，至流出液呈酸性時，改用中性60%乙醇-水洗脫，收集酸乙醇和乙醇洗脫液，加氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至5 7，減壓回收乙醇，濃縮、干燥，即得黑附片總生物堿提取物。實施例5
取白附片10kg，加70 (V) %乙醇10倍，回流提取2次，每次2小時，濾過，合并乙醇提取液，減壓回收除盡乙醇，得到白附片的提取物，加水溶解，配制成含量相當于I克/毫升生藥的水溶液，用碳酸氫鈉溶液調(diào)節(jié)PH值7 8，濾過，上HPD300型大孔吸附樹脂柱，分別用水、PH值8、的碳酸鈉溶液和水洗脫除雜，再用pH 4^5的80%鹽酸乙醇-水溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮、干燥，即得白附片總生物堿提取物。實施例6取淡附片10kg，加pH值4飛的鹽酸溶液12倍，煎煮2次，每次2小時，濾過，合并水煎液，用碳酸鈉溶液調(diào)節(jié)PH值8 9，上HPD300型大孔吸附樹脂柱，分別用pH值擴10的氫氧化鈉溶液和水洗脫除雜后，再用PH 3^4的60%鹽酸乙醇-水溶液洗脫，至流出液呈酸性時，改用中性60%乙醇-水洗脫，收集酸乙醇和乙醇洗脫液，加氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至近中性，減壓回收乙醇，濃縮、干燥，即得淡附片總生物堿提取物。實施例7
取蒸附片10kg，加pH值廣2的硫酸溶液8倍，煎煮3次，每次I. 5小時，濾過，合并濾液，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值9 10，上AB-8型大孔吸附樹脂柱，分別用水、pH值擴10的氫氧化鈉溶液和水洗脫除雜后，再用PH 2^3的70%鹽酸乙醇-水溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，上717堿型陰離子交換樹脂柱，收集乙醇流出液，減壓回收乙醇，濃縮、干燥，即得蒸附片總生物堿提取物。
實施例8
取制川烏10kg，加pH值3 4的鹽酸溶液12倍，煎煮2次，每次2小時，濾過，合并水煎液，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值擴10，濾過，上HPD100型大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫除雜，再用PH 3 4的50%鹽酸乙醇-水溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，加氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至5飛，減壓回收乙醇，濃縮、干燥，即得制川烏總生物堿提取物。實施例9
取生川烏10kg，加水10倍，煎煮2次，每次5小時，濾過，合并水煎液，用碳酸鈉溶液調(diào)節(jié)pH值8 9，上HPD300型大孔吸附樹脂柱，分別用pH值擴10的氫氧化鈉溶液和水洗脫除雜后，再用pH r2的70%鹽酸乙醇-水溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，上D201堿型陰離子交換樹脂柱，收集乙醇流出液，減壓回收乙醇，濃縮、干燥，即得生川烏總生物堿提取物。實施例10
取制草烏10kg，加80 (v)%乙醇8倍，回流提取3次，每次2小時，濾過，合并乙醇提取液，減壓回收除盡乙醇，得到制草烏的提取物，加水溶解，用氫氧化鈉溶液配制成pH 8 9、配制成含量不超過相當于2克/毫升生藥的水溶液，濾過，上AB-8型大孔吸附樹脂柱，分別用PH值擴10的氫氧化鈉溶液和水洗脫除雜后，再用pH 0. 5的60%鹽酸乙醇-水溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，上D301堿型陰離子交換樹脂柱，收集乙醇流出液，減壓回收乙醇，濃縮、干燥，即得制草烏總生物堿提取物。以下通過有效成分的含量和藥效作用為評價指標，進一步說明本發(fā)明附子或川烏總生物堿提取物的制備方法所具有的有益效果。I、有效成分的含量測定
取生附子4kg，加水10倍，浸泡4小時，煎煮2小時，濾過，水煎液備用；藥渣再加水8倍，煎煮I小時，濾過，合并水煎液，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值擴10，濾過，分成4等份，按常規(guī)方法分別上4根完全相同的柱床體積為I. 5L的HPD100型大孔吸附樹脂柱(A、B、C、D)A柱采用常規(guī)方式，先用3倍柱床體積的水洗脫除雜，再用70%乙醇-水溶液洗脫，收集3倍柱床體積的乙醇洗脫液，備用(A液)；
B柱采用上述實施例I的方式，先用3倍柱床體積的水洗脫除雜，再用pH 2^3的70%鹽酸乙醇-水溶液洗脫，收集3倍柱床體積的乙醇洗脫液，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6 7，備用(B液)；C柱采用上述實施例2的方式，分別用3倍柱床體積的水、pH值擴10的氫氧化鈉溶液和水洗脫除雜，再用pH 2^3的70%鹽酸乙醇溶液洗脫，收集3倍柱床體積的乙醇洗脫液，上717堿型陰離子交換樹脂柱，收集乙醇流出液，備用(C液)。D柱采用上述實施例3的方式，分別用3倍柱床體積的pH值擴10的氫氧化鈉溶液和水洗脫除雜，再用pH 2^3的70%鹽酸乙醇溶液洗脫，收集3倍柱床體積的乙醇洗脫液，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至6 7，備用(D液)。
另取黑附片4kg，加pH值2 3的鹽酸溶液12倍，煎煮2次，每次3小時，濾過，合并濾液，用碳酸鈉溶液調(diào)節(jié)PH值7 8 ，濾過，分成4等份，按常規(guī)方法分別上4根完全相同的柱床體積為I. 5L的DlOl型大孔吸附樹脂柱(E、F、G、H)
E柱同A柱方式，先用3倍柱床體積的水洗脫除雜，再用70%乙醇-水溶液洗脫，收集3倍柱床體積的乙醇洗脫液,備用(E液)；
F柱同B柱方式，先用3倍柱床體積的水洗脫除雜，再用pH 2^3的70%鹽酸乙醇-水溶液洗脫，收集3倍柱床體積的乙醇洗脫液，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6 7，備用(F液)；G柱同C柱方式，分別用3倍柱床體積的水、pH值擴10的氫氧化鈉溶液和水洗脫除雜，再用pH 2^3的70%鹽酸乙醇溶液洗脫，收集3倍柱床體積的乙醇洗脫液，上717堿型陰離子交換樹脂柱，收集乙醇流出液，備用(G液)。H柱同D柱方式，分別用3倍柱床體積的pH值擴10的氫氧化鈉溶液和水洗脫除雜，再用pH 2^3的70%鹽酸乙醇溶液洗脫，收集3倍柱床體積的乙醇洗脫液，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至6 7，備用(H液)。再取制草烏4kg，加pH 2^3含80 (v) %乙醇的鹽酸溶液8倍量，回流提取3次，每次2小時，濾過，合并乙醇提取液，減壓回收除盡乙醇，得到制草烏的提取物，加4 L水溶解，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH 8^9,濾過，分成4等份，按常規(guī)方法分別上4根完全相同的柱床體積為I. 5L的AB-8型大孔吸附樹脂柱(L、M、N、0)
L柱同A柱方式，先用3倍柱床體積的水洗脫除雜，再用70%乙醇-水溶液洗脫，收集3倍柱床體積的乙醇洗脫液,備用(L液)；
M柱同B柱方式，先用3倍柱床體積的水洗脫除雜，再用pH 2^3的70%鹽酸乙醇-水溶液洗脫，收集3倍柱床體積的乙醇洗脫液，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6 7，備用(M液)；N柱同C柱方式，分別用3倍柱床體積的水、pH值擴10的氫氧化鈉溶液和水洗脫除雜，再用pH 2^3的70%鹽酸乙醇溶液洗脫，收集3倍柱床體積的乙醇洗脫液，上717堿型陰離子交換樹脂柱，收集乙醇流出液，備用(N液)。0柱同D柱方式，分別用3倍柱床體積的pH值擴10的氫氧化鈉溶液和水洗脫除雜，再用pH 2^3的70%鹽酸乙醇溶液洗脫，收集3倍柱床體積的乙醇洗脫液，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至6 7，備用(0液)。按中國藥典2010年版一部177頁附子項下的HPLC色譜方法，分別測定上述A液 0液中生物堿成分的含量(以生藥計)，結(jié)果見表I。表I A 0洗脫液中生物堿成分的含量測定結(jié)果(mg g'以生藥計)
生物堿I苯甲酰烏頭原堿I苯甲酰次烏頭原堿 I苯甲酰新烏頭原堿 I烏頭堿I次烏頭堿I新烏頭堿
A 液 0.113_0. 341_0. 837_—_—_—_
B 液丨0. 158|o. 425|l. 562|— |—|—
權利要求
1.烏頭屬藥材或其加工品中總生物堿提取物的制備方法，其特征是將含有烏頭屬藥材或其加工品提取物的水溶液調(diào)節(jié)PH值7 10，優(yōu)選為pH值8 10后，用大孔吸附樹脂柱吸附，然后先用水洗滌除雜質(zhì)后，再至少用pH < 5和乙醇體積含量為5(T90%的酸性乙醇-水溶液洗脫，收集洗脫液，除去溶劑，即得到烏頭屬藥材及其加工品總生物堿提取物。
2.如權利要求I所述的制備方法，其特征是所說的含有烏頭屬藥材或其加工品提取物的水溶液，為烏頭屬藥材或其加工品的水提取液，或是烏頭屬藥材或其加工品提取物的水溶液。
3.如權利要求2所述的制備方法，其特征是所說的烏頭屬藥材或其加工品的水提取液為pH < 5的水提取液,優(yōu)選為用鹽酸或硫酸酸化的水溶液。
4.如權利要求I所述的制備方法，其特征是所說含有烏頭屬藥材或其加工品提取物的水溶液用大孔吸附樹脂柱吸附后，用水洗滌除雜時，采用依次用中性水、PH 8^10的堿性水和中性水洗滌；或者采用依次用PH 8^10的堿性水洗滌和中性水洗滌。
5.如權利要求I所述的制備方法，其特征是所說供大孔吸附樹脂柱吸附的水溶液中烏頭屬藥材或其加工品的提取物含量不超過相當于2克生藥/毫升。
6.如權利要求I所述的制備方法，其特征是所說的酸性乙醇-水溶液為用鹽酸酸化的乙醇-水溶液。
7.如權利要求I所述的制備方法，其特征是所說的用酸性乙醇-水溶液洗脫時，采用先用酸性乙醇_水溶液洗脫,最后用中性乙醇_水溶液洗脫。
8.如權利要求I所述的制備方法，其特征是所說收集的洗脫液先調(diào)節(jié)至pH值5 7后，再除去溶劑。
9.如權利要求I所述的制備方法，其特征是對收集的洗脫液先用堿型陰離子交換樹脂處理后，再進行除去溶劑的操作。
10.如權利要求I所述的制備方法，其特征是所說的大孔吸附樹脂為HPD100或DlOl型大孔吸附樹脂。
全文摘要
烏頭屬藥材或其加工品中總生物堿提取物的制備方法。將含有烏頭屬藥材或其加工品提取物的水溶液調(diào)節(jié)pH值7～10后，用大孔吸附樹脂柱吸附，然后先用水洗滌除雜質(zhì)后，再至少用pH≤5和乙醇體積含量為50～90%的酸性乙醇-水溶液洗脫，收集洗脫液，除去溶劑，即得到烏頭屬藥材及其加工品總生物堿提取物。該方法既能達到除雜完全，又不損失和破壞所需的生物堿成分，而且對相應生物堿成分洗脫充分，回收率高，有效解決了傳統(tǒng)方法生物堿損失嚴重的問題，大大節(jié)省了藥材資源，提高了藥材的利用率，使烏頭屬藥材或其加工品的藥效作用得以更充分的利用和發(fā)揮。
文檔編號A61P29/00GK102973679SQ20121055943
公開日2013年3月20日 申請日期2012年12月21日 優(yōu)先權日2012年12月21日
發(fā)明者陳燕, 唐小龍, 黃志芳, 劉玉紅, 劉云華, 易進海 申請人:四川省中醫(yī)藥科學院