專利名稱：一種用于防治鱘因感染嗜水氣單胞菌發(fā)病的中草藥復(fù)方的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及水產(chǎn)養(yǎng)殖技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，是一種用于防治鱘因感染嗜水氣單胞菌發(fā)病的中草藥復(fù)方。
背景技術(shù)：
鱘屬于硬骨魚綱、福鰭亞綱、硬磷總目、鱘形目(Acipenseriformes)、鱘科(Acipenseridae)。我國的鱘類有2科3屬8種，長江水系的有中華鱘(Acipenser
、白鱘(Psephurus gladius)和達(dá)氏鱘 Olciponsor dabryanus);黑龍江水系的有施氏鱘0\cip6ns6r schrenckii)和達(dá)氏 (Huso dauricus);新疆地區(qū)有裸腹鱘(Acipenser nudi ventris) > ^ (Acipenser ruthenus)和西伯利亞鱘(Acipenserbaerii)。鱘魚是地球上最古老的魚種之一，素有“活化石”之稱，是我國的名特優(yōu)珍品，肉味鮮美、骨軟、營養(yǎng)價(jià)值高，鱘魚肉和卵的蛋白含量高達(dá)18%和29%。鱘魚全身都是寶，利用率極高。另外名貴的鱘魚籽醬特別值得一提的是具有“黑色黃金”之稱的鱘魚子醬，是由鱘魚卵加工而成，更是馳名中外的高檔食品，在國際市場十分走俏。我國第一個(gè)鱘魚養(yǎng)殖場1992年在大連瓦房店成立，現(xiàn)今我國已開展人工養(yǎng)殖的品種有施氏鱘、達(dá)氏鰉、鰉鱘以及從國外引進(jìn)的俄羅斯鱘、西伯利亞鱘等。另外鱘魚具有食性廣、生長速度快、成本低、價(jià)值高、個(gè)體大、易捕撈，以及抗病力強(qiáng)、容易飼養(yǎng)等特點(diǎn)，水產(chǎn)業(yè)者普遍看好鱘魚的養(yǎng)殖前景，投入大量資金進(jìn)行人工養(yǎng)殖。但是近年來隨著養(yǎng)殖量的迅速增大，養(yǎng)殖集約化程度不斷提高，造成鱘養(yǎng)殖環(huán)境不斷惡化，使得鱘體質(zhì)普遍下降，發(fā)病率大增。鱘魚多發(fā)細(xì)菌性疾病，爆發(fā)性強(qiáng)，死亡率高，主要病原菌包括鏈球菌等革蘭氏陽性菌和氣單胞菌屬幾種，其中由嗜水氣單胞菌弓I起鱘疾病表型種類多，發(fā)病率及死亡率高，流行于5-10月份，水溫20°C及以上，主要癥狀特點(diǎn)為敗血。嗜水氣單胞菌是在自然界中廣泛存在的，是一種典型的人-畜-魚共患病病原菌。嗜水氣單胞菌(Aoromoims. hydrophica),屬弧菌科(Yirbhonaceae),氣單胞菌屬(Aeromonas)，為革蘭陰性短桿菌，極端單鞭毛，無芽孢和莢膜，散在排列。對環(huán)境要求不高，普遍存在于淡水、污水、淤泥、土壤和人類糞便中，專性需氧，生長溫度5 40°C，最適溫度28°C，pH6 11，最適為pH7，分為致病性和非致病性菌株。致病性菌株可感染魚類、兩棲類、爬行類、鳥類和哺乳類等動物,主要癥狀為急性出血性敗血癥,慢性感染癥狀一般為皮膚潰爛。嗜水氣單胞菌具有較高的溶血素及蛋白酶活性，毒力很強(qiáng)。隨著養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大，養(yǎng)殖水域環(huán)境日益惡化，及鱘魚產(chǎn)品貿(mào)易來往，為嗜水氣單胞菌的傳播提供了途徑和場所，使得其危害不斷增大，流行區(qū)域大增。因此在鱘魚養(yǎng)殖過程中要重視嗜水氣單胞菌的感染，對其感染產(chǎn)生的新癥狀加以分析，及時(shí)找到防治方法減少養(yǎng)殖生產(chǎn)損失。對于疾病防治，由于中草藥對環(huán)境影響小，無殘留，而且具有資源保有量大、價(jià)格低廉、不易產(chǎn)生耐藥性、毒副作用小、安全性高等優(yōu)點(diǎn)，無疑是鱘細(xì)菌性疾病防治藥物的首選措施之一?；瘜W(xué)藥物則容易產(chǎn)生殘留，對環(huán)境危害大，不利于鱘養(yǎng)殖健康的發(fā)展。關(guān)于一種用于防治鱘因感染嗜水氣單胞菌發(fā)病的中草藥復(fù)方目前還未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種用于防治鱘因感染嗜水氣單胞菌發(fā)病的中草藥復(fù)方。本發(fā)明的再一的目的是，提供一種用于防治鱘因感染嗜水氣單胞菌發(fā)病的中草藥復(fù)方的應(yīng)用。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本·發(fā)明采取的技術(shù)方案是一種用于防治鱘因感染嗜水氣單胞菌發(fā)病的中草藥復(fù)方，所述的中草藥復(fù)方主要由以下重量份的原料藥制成地榆70-90份，烏梅50-70份，杞子30-50份，石榴皮10-30份。所述的中草藥復(fù)方主要由以下重量份的原料藥制成地榆75-85份,烏梅55-65份，杞子35-45份,石槽皮15-25份。所述的中草藥復(fù)方主要由以下重量份的原料藥制成地榆80份，烏梅60份，杞子40份，石榴皮20份。為實(shí)現(xiàn)上述第二個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是所述的中草藥復(fù)方在制備防治鱘感染嗜水氣單胞菌疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于
1、本發(fā)明的中藥復(fù)方能有效預(yù)防嗜水氣單胞菌感染鱘發(fā)病，使鱘發(fā)病幾率下降40%以上，起到很好的養(yǎng)殖生產(chǎn)實(shí)踐效果，保證了鱘養(yǎng)殖安全高產(chǎn)；
2、中草藥對環(huán)境影響小，無殘留，而且具有資源保有量大、價(jià)格低廉、不易產(chǎn)生耐藥性、毒副作用小、安全性高的特點(diǎn)，有利于鱘養(yǎng)殖健康的發(fā)展。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明提供的具體實(shí)施方式
作詳細(xì)說明。一種用于防治鱘因感染嗜水氣單胞菌發(fā)病的中草藥復(fù)方，所述的中草藥復(fù)方主要由以下重量份的原料藥制成地榆70-90份，烏梅50-70份，杞子30-50份，石榴皮10-30份。優(yōu)選的，地榆75-85份，烏梅55-65份，杞子35-45份，石榴皮15-25份。實(shí)施例1中草藥復(fù)方
地榆70份，烏梅70份，杞子30份，石榴皮30份。實(shí)施例2中草藥復(fù)方
地榆71份，烏梅69份，杞子31份，石榴皮29份。實(shí)施例3中草藥復(fù)方
地榆72份，烏梅68份，杞子32份，石榴皮28份。實(shí)施例4中草藥復(fù)方
地榆73份，烏梅67份，杞子33份，石榴皮27份。實(shí)施例5中草藥復(fù)方
地榆74份，烏梅66份，杞子34份，石榴皮26份。實(shí)施例6中草藥復(fù)方
地榆75份，烏梅65份，杞子35份，石榴皮25份。實(shí)施例7中草藥復(fù)方地榆76份，烏梅64份，杞子36份，石榴皮24份。實(shí)施例8中草藥復(fù)方
地榆77份，烏梅63份，杞子37份，石榴皮23份。實(shí)施例9中草藥復(fù)方
地榆78份，烏梅62份，杞子38份，石榴皮22份。實(shí)施例10中草藥復(fù)方
地榆79份，烏梅61份，杞子39份，石榴皮21份。實(shí)施例11中草藥復(fù)方
地榆80份，烏梅60份，杞子40份，石榴皮20份。實(shí)施例12中草藥復(fù)方
地榆81份，烏梅59份，杞子41份，石榴皮19份。實(shí)施例13中草藥復(fù)方
地榆82份，烏梅58份，杞子42份，石榴皮18份。實(shí)施例14中草藥復(fù)方` 地榆83份，烏梅57份，杞子43份，石榴皮17份。實(shí)施例15中草藥復(fù)方
地榆84份,烏梅56份,杞子44份,石槽皮16份。實(shí)施例16中草藥復(fù)方
地榆85份，烏梅55份，杞子45份，石榴皮15份。實(shí)施例17中草藥復(fù)方
地榆86份,烏梅54份,杞子46份,石槽皮14份。實(shí)施例18中草藥復(fù)方
地榆87份，烏梅53份，杞子47份，石榴皮13份。實(shí)施例19中草藥復(fù)方
地榆88份，烏梅52份，杞子48份，石榴皮12份。實(shí)施例20中草藥復(fù)方
地榆89份，烏梅51份，杞子49份，石榴皮11份。實(shí)施例21中草藥復(fù)方
地榆90份，烏梅50份，杞子50份，石榴皮10份。實(shí)施例22中草藥復(fù)方藥液的制備
按照地榆70-90份，烏梅50-70份，杞子30-50份，石榴皮10-30份的配比稱取原料藥，四種原料藥均粉碎成粉末狀，全部通過120目篩。取四種藥物分別各加1:10-12份水浸泡30 min，然后加熱至沸騰，微沸煎煮50-60min，共煎煮3次，每次加水量相同。合并3次藥液過濾，將濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮，使藥液濃度為1000 mg/mL左右，濾膜過濾除菌后，置于4°C冰箱保存?zhèn)溆谩?shí)施例23中草藥復(fù)方的制備和使用方法
按照地榆70-90份，烏梅50-70份，杞子30-50份，石榴皮10-30份的配比稱取原料藥，按照上述實(shí)施例22所述方法提取中草藥藥液后，混合加入粉碎的飼料中，用制粒機(jī)制成含此中藥復(fù)方的飼料用于投喂，5-7天為一個(gè)療程，治療一般需連用兩個(gè)療程，特別是發(fā)病早期及高溫季節(jié)即將來臨或者結(jié)束之前使用本復(fù)方預(yù)防效果更為明顯。此中藥復(fù)方能有效預(yù)防嗜水氣單胞菌感染鱘發(fā)病，使鱘發(fā)病幾率下降40%以上，起到很好的養(yǎng)殖生產(chǎn)實(shí)踐效果，保證了鱘養(yǎng)殖安全高產(chǎn)。實(shí)施例24抑菌試驗(yàn)1.材料
中藥烏梅，地榆，杞子，石榴皮購自同仁堂大藥房。營養(yǎng)瓊脂及營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基購自杭州微生物試劑有限公司，嗜水氣單胞菌弧菌科(KirMoflaceaeO ,氣單胞菌屬,嗜水氣單胞菌ATCC7966 ,購自于美國典型培養(yǎng)物保藏中心，4°C冰箱購于青島海爾，搖床購自日本三洋公司，實(shí)驗(yàn)時(shí)，營養(yǎng)瓊脂及營養(yǎng)肉湯都是在 lX105Pa，121°C 滅菌 20min。2.實(shí)驗(yàn)方法
(I)菌液制備
從固體斜面上挑取菌苔劃線接種營養(yǎng)瓊脂平板，置于28°C恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24h ;挑取單個(gè)菌落營養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)基中，28°C搖床(200 r/min)培養(yǎng)18h后，用無菌生理鹽水將菌液濃度調(diào)整至IO7 CFU / mL，即可作為藥敏實(shí)驗(yàn)接種的菌懸液。(2)藥液制備
將購買來的供試中草藥置于50°C恒溫干燥箱中烘至恒重，然后各取25g，分別加水250mL浸泡30min后煎煮，沸后文火煮20min，濾出煎液，共煎3次，合并濾液，濃縮至生藥含量1000mg/mL，121°C，lX105Pa濕熱高溫滅菌，20 min后，置4°C冰箱中保存待用。( 3 )瓊脂擴(kuò)散抑菌試驗(yàn)
采用90mm平板打孔法，具體為在每個(gè)涂有100 u L病原菌平板上使用直徑為6mm打孔器打4個(gè)孔，其中3孔加入50uL藥液，另一孔滅菌生理鹽水作為對照，每種藥液均設(shè)置3個(gè)重復(fù)。將加好藥液的平板正面朝上放置置于28°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后，測量抑菌圈直徑，并計(jì)算平均值得出各藥液平均抑菌圈直徑結(jié)果以X土SD表示。(4)最小抑菌濃度(MIC)及最小殺菌濃度(MBC)的測定
采用二倍稀釋法測定中草藥提取液對三種病原菌的MIC和MBC。即將中草藥提取液分別加入含有2mL無菌營養(yǎng)肉湯的試管中，至終質(zhì)量濃度分別為1000，500，250，125，62. 5，31. 25，15. 625,7. 81，3. 91，1. 95，0. 97，0. 49，0. 24，0. 12，0 mg/mL，并設(shè) I 個(gè)陰性對照組，即空白無菌營養(yǎng)肉湯組，然后分別接種魯氏耶爾森氏菌、弗氏檸檬酸桿菌、嗜水氣單胞菌至終濃度5. OXlO5 CFU / mL，于28°C、200 r/min搖床振蕩恒溫培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果。把無病原菌生長、稀釋度最大的中草藥提取液質(zhì)量濃度作為各實(shí)驗(yàn)菌株的最小抑菌濃度(MIC)。從所有無細(xì)菌生長的各管中分別取0. lmL，涂布于相應(yīng)的無菌瓊脂平板上，置于28°C的恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h，觀察結(jié)果。平板上無細(xì)菌生長的最低藥物質(zhì)量濃度為最小殺菌質(zhì)量濃度(MBC)。中藥復(fù)方按照實(shí)施例11所述的比例，抑菌效果最好，抑菌圈達(dá)22±0. 23mm，MIC為1.95mg/ml, MBC 為 3. 91mg/ml。實(shí)施例25應(yīng)用實(shí)例
浙江衢州市鱘魚養(yǎng)殖基地養(yǎng)殖鱘魚出現(xiàn)死亡，發(fā)病后死亡率高達(dá)80%，發(fā)病水溫在22°C及以上，發(fā)病個(gè)體在5-30kg。發(fā)病初期病魚精神不振，或靜止不動，或狂游不止，有時(shí)也貼緊池壁游動，嚴(yán)重者身體失去平衡形成腹部露出水面的現(xiàn)象，幾乎不進(jìn)食。出現(xiàn)癥狀多數(shù)一周內(nèi)死亡，病魚受到刺激后可能數(shù)小時(shí)內(nèi)死亡。發(fā)病鱘魚主要集中在西伯利亞鱘，癥狀表現(xiàn)為兩種類型，一種是鱘魚肛門一側(cè)出現(xiàn)細(xì)線紅腫，有開始潰爛癥狀，解剖后看到肝臟充血腫大而且出血，脾臟嚴(yán)重充血發(fā)黑，腎臟充血，腹腔有大量積血導(dǎo)致倒提鱘魚從生殖孔流出體外，體壁嚴(yán)重充血，也有體壁未充血的，性腺有大量出血點(diǎn)，產(chǎn)生潰爛，更嚴(yán)重的是生殖孔與腹腔相連的膈膜爛穿，肛門一側(cè)潰爛開口，性腺掉出，直至鱘魚死亡。另一種是肛門處一側(cè)潰爛開口，生殖孔與腹腔相連的膈膜爛穿，性腺直接掉出發(fā)生潰爛，未發(fā)現(xiàn)出血現(xiàn)象，解剖也未發(fā)現(xiàn)實(shí)質(zhì)器官病變。有些鱘魚也因急性感染，性腺并未掉出就已經(jīng)死亡。此病流行于水溫在22°C及以上，水溫低于22°C亦可能發(fā)病，但較少。發(fā)病鱘魚集中在西伯利亞鱘，其余鱘魚發(fā)病較少，雌雄鱘魚都可能發(fā)病。發(fā)病鱘魚個(gè)體目前發(fā)現(xiàn)最小3齡，據(jù)調(diào)查其他養(yǎng)殖基地也有類似疾病，經(jīng)病原分離鑒定及人工感染，確定病原菌為嗜水氣單胞菌。針對此種情況，通過在初夏使用本發(fā)明的中草藥復(fù)方，經(jīng)過連續(xù)3個(gè)療程的，癥狀明顯減輕，死亡基本停止，肛門逐漸愈合，吃食恢復(fù)正常。其后每隔兩個(gè)星期左右，投喂一個(gè)療程，使得鱘此疾病發(fā)病率降低40%以上。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式 ，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明方法的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和補(bǔ)充，這些改進(jìn)和補(bǔ)充也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種用于防治鱘因感染嗜水氣單胞菌發(fā)病的中草藥復(fù)方，其特征在于，所述的中草藥復(fù)方主要由以下重量份的原料藥制成地榆70-90份，烏梅50-70份，杞子30-50份，石榴皮10-30份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中草藥復(fù)方，其特征在于，所述的中草藥復(fù)方主要由以下重量份的原料藥制成地榆75-85份，烏梅55-65份，杞子35-45份，石榴皮15-25份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中草藥復(fù)方，其特征在于，所述的中草藥復(fù)方主要由以下重量份的原料藥制成地榆80份，烏梅60份，杞子40份，石榴皮20份。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的中草藥復(fù)方在制備防治鱘感染嗜水氣單胞菌疾病藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于防治鱘因感染嗜水氣單胞菌發(fā)病的中草藥復(fù)方及其應(yīng)用，所述的中草藥復(fù)方主要由以下重量份的原料藥制成地榆70-90份，烏梅50-70份，杞子30-50份，石榴皮10-30份。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于本發(fā)明的中藥復(fù)方能有效預(yù)防嗜水氣單胞菌感染鱘發(fā)病，使鱘發(fā)病幾率下降40%以上，起到很好的養(yǎng)殖生產(chǎn)實(shí)踐效果，保證了鱘養(yǎng)殖安全高產(chǎn)；中草藥對環(huán)境影響小，無殘留，而且具有資源保有量大、價(jià)格低廉、不易產(chǎn)生耐藥性、毒副作用小、安全性高的特點(diǎn)，有利于鱘養(yǎng)殖健康的發(fā)展。
文檔編號A61K36/815GK103027997SQ201210563788
公開日2013年4月10日 申請日期2012年12月24日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月24日
發(fā)明者楊先樂, 楊移斌, 曹海鵬, 邱軍強(qiáng), 胡鯤, 李怡, 夏永濤, 高曉華 申請人:上海海洋大學(xué)