專(zhuān)利名稱(chēng)：抗分泌因子的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及包含稱(chēng)作抗分泌因子(AF)的ー組蛋白質(zhì)的某些要素的肽、多肽和蛋白質(zhì)在制造用于治療和/或預(yù)防狀況或醫(yī)學(xué)狀況的藥物的用途，其中所述狀況特征在于(或與其相關(guān))細(xì)胞的病理性損失和/或獲得、或者如在病理性降解時(shí)細(xì)胞所表達(dá)蛋白質(zhì)的過(guò)量產(chǎn)生或異常降解率、或者包括干細(xì)胞或祖細(xì)胞在內(nèi)的已分化細(xì)胞和/或組織的修復(fù)、恢復(fù)和/或再生控制的損失，其中所述醫(yī)學(xué)狀況特征在于(或與其相關(guān))其為這樣一類(lèi)狀況，即其包括由創(chuàng)傷、窒息、毒素、缺氧、局部缺血、感染或者退化性或代謝性損傷對(duì)腦和神經(jīng)系統(tǒng)其它部分的損傷，其中所述損傷引起缺陷、障礙或異常結(jié)構(gòu)和功能。本發(fā)明尤其涉及抗分泌蛋白質(zhì)或者其具有相同功能特征的同源物或者其寡肽或多肽或衍生物的新用途、誘導(dǎo)抗分泌蛋白質(zhì)的食物的新用途和具有高水平抗分泌蛋白質(zhì)的蛋黃的新用途。本發(fā)明還涉及増殖、誘導(dǎo)、降低和/或維持所分離干細(xì)胞發(fā)生的方法及治療的方法。
背景技術(shù)：
中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)、周?chē)?神經(jīng)系統(tǒng)(PNS)或自主神經(jīng)系統(tǒng)(ANS)中的創(chuàng)傷性、窒息性、缺氧性、局部缺血性、中毒性、感染性、退化性或代謝性損傷常引起幾種不同類(lèi)型細(xì)胞的損傷。帕金森病和阿爾茨海默病是CNS內(nèi)的退化性狀況的實(shí)例，兩者常引起特定的細(xì)胞群體損失。帕金森病尤其與黑質(zhì)內(nèi)的多巴胺能神經(jīng)元的特定損失有關(guān)。類(lèi)似地，多發(fā)性硬化癥與軸突的結(jié)構(gòu)和功能病變以及髓鞘質(zhì)和少突膠質(zhì)細(xì)胞的損失有夫。阿爾茨海默病是神經(jīng)元損失引起退化性失調(diào)的另ー個(gè)例子。此外，存在CNS、PNS和ANS損傷或疾病與少突膠質(zhì)、星形神經(jīng)膠質(zhì)、衛(wèi)星細(xì)胞、施萬(wàn)細(xì)胞、小膠質(zhì)、血管細(xì)胞和神經(jīng)元的損傷相關(guān)的眾多事例。通常，退化或損傷后神經(jīng)元和已分化神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的替換不是成年哺乳動(dòng)物腦的特征。因此通常認(rèn)為神經(jīng)元損失為永久性的。然而，必須指出疾病、腦腫瘤和神經(jīng)創(chuàng)傷的恢復(fù)主要是因?yàn)榇婊罴?xì)胞的修復(fù)和重建。然而，出生后在包括人類(lèi)的所有哺乳動(dòng)物物種腦內(nèi)的側(cè)腦室室下區(qū)(SVZ)和在海馬中的齒狀回顆粒下層(SGZ)內(nèi)的神經(jīng)發(fā)生一直持續(xù)至成年期(參考文獻(xiàn)2、3、4)。此外，神經(jīng)祖細(xì)胞在脊髄和在ANS中的形成程度較小。不得不強(qiáng)調(diào)的是在神經(jīng)組織的損傷處和疾病中可重建和形成血管細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞和巨噬細(xì)胞以及結(jié)締組織細(xì)胞。如在包括人在內(nèi)的成年哺乳動(dòng)物身體的其它組織一祥，在腦中存在全能的細(xì)胞群體，命名為祖細(xì)胞。神經(jīng)元祖細(xì)胞是干細(xì)胞并且存在于腦內(nèi)側(cè)腦室室下區(qū)(SVZ)以及海馬齒狀回顆粒下層(SGZ)內(nèi)，在此處此種細(xì)胞連續(xù)増殖并且遷移至臨近的腦結(jié)構(gòu)，并且最終退化或者存活和分化。例如SGZ中的新生神經(jīng)元優(yōu)選地遷移至海馬顆粒細(xì)胞層，并且最終表達(dá)已分化神經(jīng)元的標(biāo)記以及獲得已分化顆粒細(xì)胞的相應(yīng)形態(tài)學(xué)特征，使軸突性突起建成為苔蘚纖維途徑(mossy fibre pathway)并且在海馬內(nèi)與它們的祀標(biāo)形成突觸性連接(參考文獻(xiàn)5)。應(yīng)當(dāng)強(qiáng)調(diào)的是，若未受到足夠刺激，大部分新形成的此類(lèi)細(xì)胞會(huì)退化，而另ー些細(xì)胞則獲得神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的特征(參考文獻(xiàn)3、4、5)。由于海馬與空間學(xué)習(xí)和記憶密切相關(guān)，因此齒狀回內(nèi)的神經(jīng)發(fā)生本身尤其引起人們的興趣(參考文獻(xiàn)6)。SVZ內(nèi)的神經(jīng)發(fā)生通過(guò)吻側(cè)漂移線(xiàn)向嗅葉持續(xù)提供新的神經(jīng)細(xì)胞，但是在例如中風(fēng)和神經(jīng)創(chuàng)傷時(shí)，如果受損或發(fā)病部位適度接近于正在遷移的前體細(xì)胞，則正在遷移的初級(jí)神經(jīng)元祖細(xì)胞可以偏轉(zhuǎn)至受損或發(fā)病部位。SVZ和SGZ內(nèi)祖細(xì)胞的增殖受例如生長(zhǎng)因子、白介素、N-甲基-d_天冬氨酸受體拮抗物施用的影響或受腎上腺摘除的影響，腎上腺摘除后導(dǎo)致皮質(zhì)類(lèi)固醇激素水平降低或缺乏(參考文獻(xiàn)7、8)。此外，對(duì)富集環(huán)境的暴露伴隨著在例如齒狀回中存活的新形成的顆粒細(xì)胞數(shù)目的增加以及存活神經(jīng)元總數(shù)的増加(參考文獻(xiàn)9)。新神經(jīng)細(xì)胞的形成隨著年齡的增長(zhǎng)而降低(參考文獻(xiàn)3)。在損傷或疾病后減少神經(jīng)組織中的炎癥反應(yīng)是有益的，并且導(dǎo)致存活神經(jīng)元數(shù)目的増加、突觸形成的改善和延長(zhǎng)以及星形細(xì)胞增生的減少，同時(shí)對(duì)血管和相關(guān)結(jié)構(gòu)的阻礙性影響較小從而對(duì)循環(huán)的阻礙性影響較小。弱的炎癥至中度的炎癥對(duì)于修復(fù)和恢復(fù)性事件以及神經(jīng)發(fā)生是有益的，而強(qiáng)烈炎癥反應(yīng)是有害的并且可引起本可恢復(fù)的組織和細(xì)胞的損失加重?？狗置谝蜃?AF)是ー類(lèi)體內(nèi)天然存在的蛋白質(zhì)。Lange和Lonnroth總結(jié)了抗分泌因子常識(shí)(參考文獻(xiàn)I)?？狗置谝蜃拥慕Y(jié)構(gòu)和AF在包括人類(lèi)在內(nèi)的動(dòng)物體內(nèi)引起的某些效應(yīng)描述于專(zhuān)利W097/08202(參考文獻(xiàn)10)。分離自腦垂體的人AF蛋白質(zhì)是41kD的蛋白質(zhì)，包含382個(gè)氨基酸。AF s中關(guān)于抗炎癥和抗分泌效應(yīng)的活性位點(diǎn)似乎位于蛋白質(zhì)中靠近AFN末端部分的第1-163位、或較優(yōu)選第36-52或第36-44位的某個(gè)區(qū)域，或者其修飾。最近本發(fā)明者開(kāi)展的研究已經(jīng)表明AF與蛋白質(zhì)S5a(又稱(chēng)RpnlO)在一定程度上同源，其中所述S5a蛋白質(zhì)組成了所有細(xì)胞中廣泛存在的成分26S蛋白酶體的ー個(gè)亞基，更加具體而言是19S/PA700帽中的亞基。在本發(fā)明中，將AF蛋白質(zhì)定義為具有相同功能特征的ー類(lèi)同源蛋白質(zhì)。蛋白酶體具備涉及降解過(guò)剩蛋白質(zhì)以及短壽命的、不需要的、變性的、錯(cuò)誤折疊的和異常的蛋白質(zhì)降解的多種功能。而且，AF/S5a/RpnlO參與細(xì)胞成分的分布和轉(zhuǎn)運(yùn)，最為明顯地為參與蛋白質(zhì)的分布和轉(zhuǎn)運(yùn)。Davidson和Hickey (參考文獻(xiàn)11、12)于2004年在國(guó)際科學(xué)期刊發(fā)表的兩篇文章中報(bào)道已經(jīng)產(chǎn)生抗AF抗體,該抗體能夠調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng),從而證實(shí)了先前專(zhuān)利申請(qǐng)和專(zhuān)利中的描述(參考文獻(xiàn)10、14)。發(fā)明概述本發(fā)明者現(xiàn)已驚奇地發(fā)現(xiàn)AF及其片段能改善神經(jīng)組織修復(fù)，以及介導(dǎo)和/或降低創(chuàng)傷、炎癥和進(jìn)行性退化的影響，從而拯救組織，這如通過(guò)神經(jīng)組織損失的減少所確定以及通過(guò)抑制3淀粉樣蛋白和其它組織成分的形成或促進(jìn)3淀粉樣蛋白和其它組織成分的分解(否則積累)來(lái)確定。對(duì)例如血管成分的有益影響也已經(jīng)記錄。AF及其片段能進(jìn)ー步拯救神經(jīng)組織成分并且支持成年CNS中普遍存在的祖細(xì)胞的増殖。這表明其為ー種新的和令人激動(dòng)的作用模型，因?yàn)锳F及其片段能介導(dǎo)受影響細(xì)胞的拯救和存活并且能夠促進(jìn)SVZ和SGZ中干細(xì)胞和祖細(xì)胞的増殖和遷移。
具體而言，本發(fā)明者已經(jīng)認(rèn)識(shí)到AF及其某些片段可調(diào)節(jié)神經(jīng)組織成分的破壞、修復(fù)、再生、祖細(xì)胞的遷移和分化以及現(xiàn)存細(xì)胞和新細(xì)胞之間的突觸形成，這促進(jìn)了突觸形成和功能性恢復(fù)并且降低了退化和組織破壞的速度和程度。本發(fā)明因此提供旨在治療特別是CNS、PNS和/或ANS的損傷、機(jī)能障礙、疾病或功能紊亂的新的和改進(jìn)的方法，并且因此有可能有益地影響組織的功能。包括人在內(nèi)的哺乳動(dòng)物的腦和脊髓保留終生產(chǎn)生神經(jīng)元的能力，雖然此能力很大程度上僅局限于某些區(qū)域。通過(guò)干細(xì)胞或祖細(xì)胞的增殖產(chǎn)生了新的神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞以及試驗(yàn)性的血管細(xì)胞。在產(chǎn)生本發(fā)明的研究期間，顯而易見(jiàn)AF的某些片段拯救了神經(jīng)組織并且誘導(dǎo)新細(xì)胞的形成増加,包括細(xì)胞之間的突起和突觸。現(xiàn)已經(jīng)驚奇地發(fā)現(xiàn)，可以通過(guò)施用有效量的AF或其某些片段來(lái)治療CNS損傷后或在神經(jīng)元疾病或失調(diào)進(jìn)程中神經(jīng)組織的損失。因此有可能拯救神經(jīng)組織，并且有可能在CNS、PNS或者ANS內(nèi)的神經(jīng)元或神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞損失后影響細(xì)胞的形成、遷移和分化以及突觸形成，或者有可能阻止CNS、PNS和ANS中所述細(xì)胞的年齡相關(guān)的退化。在后續(xù)內(nèi)容中，根據(jù)生物化學(xué)常用的基于使用單字母的縮寫(xiě)命名氨基酸，以便確定每ー氨基酸。在本發(fā)明的ー個(gè)方面涉及抗分泌蛋白質(zhì)或者其具有相同功能特性的同源物、或者其包含式I氨基酸序列的寡肽或多肽或衍生物、或者其可藥用鹽在制造用于治療和/或預(yù)防與細(xì)胞的拯救或者細(xì)胞的病理性損失和/或獲得和/或腦水腫有關(guān)或以其為特征的狀況的藥物的用途，其中式I為X1-V-C-X2-X3-K-X4-R-X5 (式 I)其中Xl為1、SEQ ID NO 1中第1_35位氨基酸或者空缺， X2 為 H、R 或 KX3 為 S 或 LX4 為 T 或 AX5 為 SEQ ID NO 1 中第 43_46、43-51、43-80 或 43-163 位氨基酸或者空缺。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，式I具有選自如下之一的序列a) SEQ ID NO 1 中第 35-42 位氨基酸，b)SEQ ID NO 1 中第 35-46 位氨基酸，c)SEQ ID NO :1 中第 36-51 位氨基酸，d) SEQ ID NO 1 中第 36-80 位氨基酸，e)SEQ ID NO 1 中第 1-80 位氨基酸，或f) SEQ ID NO 1中第ト163位氨基酸，或其可藥用的鹽。SEQ ID NO 1是如在Johansson, E.等(參考文獻(xiàn)13)或Lange, S等(參考文獻(xiàn)10、14)中給出的抗分泌因子多肽或蛋白質(zhì)的氨基酸序列。本發(fā)明的第二個(gè)方面涉及誘導(dǎo)抗分泌蛋白質(zhì)的食物在制造用于治療和/或預(yù)防狀況的食物或醫(yī)用食物的用途，其中所述狀況與細(xì)胞的拯救或者細(xì)胞的病理性損失和/或獲得和/或腦水腫有關(guān)或以其為特征。
本發(fā)明的第三個(gè)方面涉及具有高水平、優(yōu)選至少每毫升1000FIL単位的抗分泌蛋白質(zhì)或其具有相同功能特性的同源物的蛋黃在制造用于治療和/或預(yù)防狀況的食物或醫(yī)用食物的用途，其中所述狀況與細(xì)胞的拯救或者細(xì)胞的病理性損失和/或獲得和/或腦水腫有關(guān)或以其為特征。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，該狀況特征在于表現(xiàn)為已分化細(xì)胞和/或組織、胚胎干細(xì)胞、成年干細(xì)胞、祖細(xì)胞和/或自干細(xì)胞或祖細(xì)胞衍生的細(xì)胞的病理性退化、再生能力喪失和/或再生控制喪失、和/或再生控制喪失。仍然在另ー個(gè)實(shí)施方案中，該狀況與周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)、自主神經(jīng)系統(tǒng)和/或中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的細(xì)胞病理性損失和/或獲得有關(guān)或以其為特征，并且又在另ー個(gè)實(shí)施方案中，該狀況與神經(jīng)干細(xì)胞或神經(jīng)祖細(xì)胞的拯救或病理性損失和/或獲得有關(guān)或以其為特征。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，該狀況與少突膠質(zhì)、星形神經(jīng)膠質(zhì)、施萬(wàn)細(xì)胞和/或神經(jīng)元細(xì)胞和/或細(xì)胞群體的病理性損失和/或獲得有關(guān)或以其為特征，并且在另ー個(gè)實(shí)施方案中，該狀況與非膽堿能神經(jīng)元細(xì)胞、膽堿能神經(jīng)元細(xì)胞和/或神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和/或細(xì)胞群體的病理性損失和/或獲得有關(guān)或以其為特征。在本發(fā)明的另ー個(gè)實(shí)施方案中，該狀況由中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損傷或中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的缺陷所致，并且在另ー個(gè)實(shí)施方案中，該狀況由創(chuàng)傷性病癥、惡性病癥、炎性病癥、自身免疫性病癥或退化性病癥所致。在另外ー個(gè)實(shí)施方案中，該狀況由震蕩、挫傷引起的軸突損傷、頭部創(chuàng)傷引起的軸突損傷、CNS內(nèi)的小血管疾病引起的軸突損傷和/或在疾病和/或創(chuàng)傷后脊髄損傷所致，在另ー個(gè)實(shí)施方案中所述狀況特征在于記憶喪失，并且在此類(lèi)新用途的最后ー個(gè)實(shí)施方案中，該狀況是腦水腫、多發(fā)性硬化癥、窒息、缺氧損傷、缺血性損傷、創(chuàng)傷性損傷、帕金森病、阿爾茨海默病、中風(fēng)、梅尼埃病或脫髓鞘病。本發(fā)明的第四個(gè)方面涉及根據(jù)如上所述任一新用途的具有高水平抗分泌蛋白質(zhì)或其具有相同功能特性同源 物的蛋黃的用途。本發(fā)明的第五個(gè)方面涉及根據(jù)如上所述任一新用途的誘導(dǎo)抗分泌蛋白質(zhì)或其具有相同功能特性同源物的食物和/或飲料溶液的用途。在一個(gè)實(shí)施方案中，將藥物配制成用于靜脈內(nèi)灌注、肌內(nèi)注射和/或皮下注射，在另ー個(gè)實(shí)施方案中，將藥物進(jìn)行配制以致于當(dāng)向所述患者施用時(shí)活性物質(zhì)將進(jìn)入患者腦上或腦內(nèi)的腦室和/或其它腔體，并且還在另ー個(gè)實(shí)施方案中，將藥物進(jìn)行配制以致于當(dāng)向所述患者施用時(shí)活性物質(zhì)將進(jìn)入該患者的腦脊液。本發(fā)明的第六個(gè)方面涉及増殖、誘導(dǎo)、降低和/或維持來(lái)自任一生發(fā)層的分離干細(xì)胞或干細(xì)胞后代體外發(fā)生的方法，其特征在于用抗分泌蛋白質(zhì)或其具有相同功能特性的同源物、或者其包含式I氨基酸序列的寡肽或多肽或衍生物或者其可藥用的鹽治療所分離的細(xì)胞，其中式I為X1-V-C-X2-X3-K-X4-R-X5 (式 I)其中Xl為1、SEQ ID NO 1中第1-35位氨基酸或者空缺，X2 為 H、R 或 KX3 為 S 或 L
X4 為 T 或 AX5 為 SEQ ID NO :1 中第 43_46、43-51、43-80 或 43-163 位氨基酸或者空缺。在上面描述方法的一個(gè)實(shí)施方案中，式I具有選自如下之一的序列a) SEQ ID NO 1 中第 35-42 位氨基酸，b)SEQ ID NO 1 中第 35-46 位氨基酸，c)SEQ ID NO 1 中第 36-51 位氨基酸，d) SEQ ID NO 1 中第 36-80 位氨基酸，e)SEQ ID NO:1 中第 1-80 位氨基酸，或f) SEQ ID NO 1 中第 1-163 位氨基酸，或其可藥用的鹽。在該方法的另ー個(gè)實(shí)施方案中，所述的分離細(xì)胞選自上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、成骨細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞、血管細(xì)胞、骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、心肌細(xì)胞、血細(xì)胞、神經(jīng)元、少突膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、祖細(xì)胞、干細(xì)胞和/或自祖細(xì)胞或干細(xì)胞衍生的細(xì)胞。本發(fā)明的第七個(gè)方面涉及治療和/或預(yù)防與細(xì)胞的病理性損失和/或獲得有關(guān)或以其為特征的狀況的方法，其包括向需要其的患者施用有效量的抗分泌蛋白質(zhì)、或者其包含式I氨基酸序列的寡肽或多 肽或衍生物或者其可藥用的鹽，其中式I為X1-V-C-X2-X3-K-X4-R-X5 (式 I)其中Xl為1、SEQ ID NO 1中第1_35位氨基酸或者空缺，X2 為 H、R 或 KX3 為 S 或 LX4 為 T 或 AX5 為 SEQ ID NO 1 中第 43_46、43-51、43-80 或 43-163 位氨基酸或者空缺。在治療和/或預(yù)防方法的一個(gè)實(shí)施方案中，式I具有選自下列之一的序列a) SEQ ID NO 1 中第 35-42 位氨基酸，b)SEQ ID NO 1 中第 35-46 位氨基酸，c)SEQ ID NO 1 中第 36-51 位氨基酸，d) SEQ ID NO 1 中第 36-80 位氨基酸，e)SEQ ID NO 1 中第 1-80 位氨基酸，或f) SEQ ID NO 1 中第 1-163 位氨基酸，或其可藥用的鹽。在本方法的另ー個(gè)實(shí)施方案中，該狀況特征在于表現(xiàn)為已分化細(xì)胞和/或組織、胚胎干細(xì)胞、成年干細(xì)胞、祖細(xì)胞和/或自干細(xì)胞或祖細(xì)胞衍生的細(xì)胞的病理性退化、再生能力的喪失和/或再生控制的喪失、和/或再生控制的喪失，并且仍然在本方法另ー個(gè)實(shí)施方案中，該狀況與周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)、自主神經(jīng)系統(tǒng)和/或中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)細(xì)胞的病理性損失和/或獲得有關(guān)或以其為特征。在本方法另ー個(gè)實(shí)施方案中，該狀況與神經(jīng)干細(xì)胞或神經(jīng)祖細(xì)胞的病理性損失和/或獲得有關(guān)或以其為特征，并且仍然在本方法另ー個(gè)實(shí)施方案中，該狀況與少突膠質(zhì)、星形神經(jīng)膠質(zhì)、施萬(wàn)細(xì)胞和/或神經(jīng)元細(xì)胞和/或細(xì)胞群體的病理性損失和/或獲得有關(guān)或以其為特征。在另外ー個(gè)實(shí)施方案中，該狀況與非膽堿能神經(jīng)元細(xì)胞、膽堿能神經(jīng)元細(xì)胞和/或神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、和/或細(xì)胞群體的病理性損失和/或獲得有關(guān)或以其為特征，并且仍然在另ー個(gè)實(shí)施方案中，該狀況由中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損傷或中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的缺陷所致。在一個(gè)實(shí)施方案中，該狀況由創(chuàng)傷性病癥、惡性病癥、炎性病癥、自身免疫性病癥或退化性病癥所致，在另ー個(gè)實(shí)施方案中，該狀況由震蕩、挫傷引起的軸突損傷、頭部創(chuàng)傷引起的軸突損傷、CNS內(nèi)的小血管疾病引起的軸突損傷和/或在疾病和/或創(chuàng)傷后脊髓損傷所致，并且在仍然另一個(gè)實(shí)施方案中，所述狀況特征在于記憶喪失。在治療和/或預(yù)防方法的一個(gè)實(shí)施方案中，該狀況是腦水腫、多發(fā)性硬化癥、窒息、缺氧損傷、缺血性損傷、創(chuàng)傷性損傷、帕金森病、阿爾茨海默病、中風(fēng)、梅尼埃病或脫髓鞘病。在上述方法的另ー個(gè)實(shí)施方案中，將抗分泌蛋白質(zhì)或其具有相同功能特性的同源物或者其寡肽或多肽或衍生物配制成用于靜脈內(nèi)灌注、肌內(nèi)注射和/或皮下注射的藥物，在另ー個(gè)實(shí)施方案中，將抗分泌蛋白質(zhì)或其具有相同功能特性的同源物或者其寡肽或多肽或衍生物配進(jìn)行配制，以致于當(dāng)向所述患者施用時(shí)活性物質(zhì)將進(jìn)入患者腦內(nèi)和/或腦上的腦室和/或其它腔體，并且還在最后ー個(gè)實(shí)施方案中，將抗分泌蛋白質(zhì)或其具有相同功能特性的同源物或者其寡肽或多肽或衍生物配進(jìn)行配制，以致于當(dāng)向所述患者施用時(shí)活性物質(zhì)將進(jìn)入該患者的腦脊液。本發(fā)明的第八個(gè)方面涉及増殖、誘導(dǎo)、降低和/或維持來(lái)自任一生發(fā)層的分離干細(xì)胞或干細(xì)胞后代發(fā)生的方法，其特征在于a)在分離所述細(xì)胞之前向所述患者施用有效量的抗分泌蛋白質(zhì)或其具有相同功能特性的同源物、或者 包含如上所定義式I氨基酸序列的寡肽或多肽或其衍生物；b)體外繁殖所述分離細(xì)胞；隨后c)向需要其的同一患者或另ー患者移植所述已増殖的細(xì)胞。本發(fā)明的第九個(gè)方面涉及増殖、誘導(dǎo)、降低和/或維持來(lái)自患者的任一生發(fā)層的分離干細(xì)胞或干細(xì)胞后代發(fā)生的方法，其特征在于a)從患者中分離所述細(xì)胞和/或干細(xì)胞后代；b)向所述分離細(xì)胞體外施用有效量的抗分泌蛋白質(zhì)或其具有相同功能特性的同源物、或者包含如上所定義式I氨基酸序列的寡肽或多肽或其衍生物，并繁殖所述細(xì)胞；隨后c)向需要其的同一患者或另ー患者回植所述已增殖細(xì)胞。在剛剛描述的兩種方法的一個(gè)實(shí)施方案中，所述分離細(xì)胞選自成纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、血管細(xì)胞、骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、心肌細(xì)胞、血細(xì)胞、神經(jīng)元、少突膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、施萬(wàn)細(xì)胞、祖細(xì)胞、干細(xì)胞和/或自祖細(xì)胞或干細(xì)胞衍生的細(xì)胞。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，式I多肽可以額外包含保護(hù)基。N末端保護(hù)基的例子包括こ?；?。C末端保護(hù)基的例子包括酰胺。本發(fā)明的另ー個(gè)實(shí)施方案是如上所述通過(guò)以適當(dāng)方式向個(gè)體提供所需要的AF以治療狀況，其中所述狀況是與AF :s和相關(guān)化合物形成不足或AF受體功能缺陷有關(guān)的狀況。由使用內(nèi)源性產(chǎn)生AF s組成的本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案對(duì)于本領(lǐng)域任何技術(shù)人而言是顯而易見(jiàn)的。這可以通過(guò)采用專(zhuān)利描述的通過(guò)施用誘導(dǎo)AF的食物來(lái)誘導(dǎo)AF s的方法(參考文獻(xiàn)15)實(shí)現(xiàn)。在本發(fā)明的另ー個(gè)實(shí)施方案中，施用同樣先前描述于專(zhuān)利(參考文獻(xiàn)16)中的包含高水平AF :s的蛋黃。發(fā)明詳述術(shù)語(yǔ)細(xì)胞的病理性損失和/或獲得在本上下文中用于描述眾多醫(yī)學(xué)狀況和病癥的共同技術(shù)特征。狀況和病癥特征在于表現(xiàn)為已分化細(xì)胞和/或組織、胚胎干細(xì)胞、成年干細(xì)胞、祖細(xì)胞和/或自干細(xì)胞或祖細(xì)胞衍生的細(xì)胞的病理性退化、再生能力喪失和/或再生控制能力喪失。此外，該術(shù)語(yǔ)還包括神經(jīng)組織細(xì)胞存活的改善和拯救以及次級(jí)退化效應(yīng)的降低或消失。待治療的狀況可以是由ー種或多種尤其對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的創(chuàng)傷性窒息、神經(jīng)病性疼痛、缺氧損傷、缺血性損傷、中毒性損傷、感染性損傷、退化性損傷或代謝性損傷所致。這常常導(dǎo)致幾種不同細(xì)胞類(lèi)型的損傷。因此由提及的任一原因所致的腦損傷常引起神經(jīng)學(xué)缺陷、認(rèn)知缺陷和額外的精神病綜合征。在其它ー些情況下，該狀況可由創(chuàng)傷性病癥、惡性病癥、炎性病癥、自身免疫性病癥或退化性病癥弓I起或者由藥物或X-射線(xiàn)治療引起。在又一些情況下，該狀況可由遺傳因素引起或者其原因可能未知。在另外ー些情況下，此狀況可由震蕩引起的軸突損傷、頭部或身體創(chuàng)傷引起的軸突損傷、CNS內(nèi)的小血管疾病弓I起的軸突損傷和/或疾病和/或創(chuàng)傷后脊髄損傷、或者在此種損傷中水腫的作用所致。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，待治療的狀況是與CNS以及PNS和/或ANS內(nèi)細(xì)胞的病理性損失和 /或獲得有關(guān)或以其為特征的狀況?？梢酝ㄟ^(guò)包含SEQ ID NO 1氨基酸序列片段的多肽影響的細(xì)胞是例如干細(xì)胞、祖細(xì)胞和/或甚至是獲得改善存活和重新獲得暫失功能的已分化細(xì)胞。此類(lèi)細(xì)胞可屬于三種生發(fā)層中的任一生發(fā)層。一旦受到刺激，所述細(xì)胞將分化、獲得功能并且形成突觸以替代例如病理性CNS、PNS和/或ANS狀況中的機(jī)能異常、垂死或已喪失的細(xì)胞或細(xì)胞群體，其中所述狀況特征在于細(xì)胞例如神經(jīng)膠質(zhì)、和/或神經(jīng)元細(xì)胞或細(xì)胞群體如神經(jīng)元細(xì)胞、和/或神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和/或細(xì)胞群體以及血管細(xì)胞和炎癥細(xì)胞的異常喪失。本發(fā)明尤其涉及對(duì)與干細(xì)胞、優(yōu)選神經(jīng)干細(xì)胞損失有關(guān)或以其為特征的狀況的治療，或者對(duì)特征在于祖細(xì)胞損失和/或獲得或與其相關(guān)狀況的治療。此外本發(fā)明涉及移植至神經(jīng)組織的干細(xì)胞或祖細(xì)胞存活的改善。本發(fā)明還尤其涉及對(duì)與已分化細(xì)胞損失和/或獲得有關(guān)狀況的治療。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，已分化細(xì)胞是骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、心肌細(xì)胞、少突膠質(zhì)、星形神經(jīng)膠質(zhì)、神經(jīng)元細(xì)胞、上皮細(xì)胞內(nèi)皮、皮膚、血液、肝、腎、骨、結(jié)締組織、肺組織、外分泌腺組織和/或內(nèi)分泌腺組織或者肌肉細(xì)胞。優(yōu)選地，已分化細(xì)胞是神經(jīng)元細(xì)胞、神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞、施萬(wàn)細(xì)胞或其它神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。本發(fā)明還提供了包含式I氨基酸序列的多肽在制造藥物中的用途，其中所述藥物用于拯救和正常化神經(jīng)組織內(nèi)的細(xì)胞以及調(diào)節(jié)CNS、PNS和/或ANS中的干細(xì)胞/祖細(xì)胞的發(fā)育和/或細(xì)胞間突觸。本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案提供了調(diào)節(jié)CNS中的干細(xì)胞發(fā)育和/或細(xì)胞間突觸的方法，其包括將干細(xì)胞間接體內(nèi)或者體外與某一量的包含式I氨基酸序列的多肽接觸。
本發(fā)明的用途和方法優(yōu)選地適用于治療影響祖細(xì)胞以及神經(jīng)細(xì)胞間和/或衍生自神經(jīng)元干細(xì)胞的細(xì)胞間突觸的病理性喪失或獲得的異常和/或醫(yī)學(xué)狀況。因此可將所述方法用于預(yù)防、治療或改善CNS、PNS和/或ANS的損傷、疾病或缺乏。根據(jù)本發(fā)明所用的藥物活性物質(zhì)尤其適用于治療影響施萬(wàn)細(xì)胞、衛(wèi)星細(xì)胞、少突膠質(zhì)、星形神經(jīng)膠質(zhì)和/或神經(jīng)元細(xì)胞的狀況。此類(lèi)狀況可以歸咎于例如CNS的損傷或缺乏、神經(jīng)元細(xì)胞喪失或記憶喪失。此類(lèi)狀況可以由例如許多不同的因素或疾病(例如創(chuàng)傷性病癥、惡性病癥、炎性病癥、水腫性病癥、自身免疫性病癥或退化性病癥如多發(fā)性硬化癥、缺氧損傷、局部缺血性損傷、創(chuàng)傷性損傷、阿爾茨海默病和帕金森病、梅尼埃病和脫髓鞘病)所致。用于本發(fā)明該優(yōu)選實(shí)施方案的藥物活性物質(zhì)的效應(yīng)是因?yàn)樵擃?lèi)藥物活性物質(zhì)具有改善細(xì)胞存活、誘導(dǎo)細(xì)胞形成、誘導(dǎo)突觸產(chǎn)生或分解在所述細(xì)胞中積累的神經(jīng)元斑(neuronal plaque)和/或0 _APP、^淀粉樣蛋白和其它化合物的能力。然而，并且如上所述，本發(fā)明并不限制于治療神經(jīng)元疾病和狀況的用途和方法，并且所述用途和方法還可用于治療多種特征為細(xì)胞病理性喪失或獲得的多種哺乳動(dòng)物狀況，例如帕金森病、阿爾茨海默病、多發(fā)性硬化癥、中風(fēng)、窒息性或缺氧性心衰、心肌梗塞、糖尿病、關(guān)節(jié)病(artrosis)或關(guān)節(jié)炎、皮膚病和燒傷、慢性傷ロ、肝病或肝衰竭、肌肉疾病或損傷、癌癥(受癌癥影響的組織)、胰機(jī)能障礙和炎癥性腸病。本發(fā)明的藥物組合物或藥物可以額外地包含ー種或多種本領(lǐng)域已知的那些可藥用載體、接受體或稀釋劑。組合物或藥物可以是例如流體、半流體、半固體或固體組合物形態(tài)，例如但不限于已溶解的輸液液體如無(wú)菌鹽水、多種鹽溶液、葡萄糖溶液、磷酸鹽緩沖鹽水、血液、血漿或水；粉末、微膠囊、微球、納米粒子、噴霧劑、氣溶膠、吸入器、溶液、分散劑、混懸劑、乳劑或其混合物。所述組合物可根據(jù)常規(guī)制藥規(guī)范進(jìn)行配制，要考慮到寡肽或多肽或者蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性和反應(yīng)性。顯而易見(jiàn)所述組合物可包括誘導(dǎo)AF的食物或含高水平AF s的蛋黃。誘導(dǎo)AF的食物在適于此目的的組合物中優(yōu)選地口服或經(jīng)ロ施用。具有高水平AF s的蛋黃優(yōu)選地口服或經(jīng)ロ施用。AF和其衍生物也可通過(guò)注射和氣溶膠輔助或通過(guò)表面沉積施用。所述組合物或藥物可根據(jù)常規(guī)制藥規(guī)范配制，常規(guī)制藥規(guī)范參見(jiàn)例如“Remington :The science and practice of pharmacy、果 20 版)” (MackPuolishing,Easton PA, 2000 年，ISBN0-91273404-3)和“ Encyclopedia o f Pharmac eu t ica ITechnology” (Swarbrick, J.和 J. C. Boylan 編，MarcelDekker, Inc. , New York, 1988,ISBN0-8247-2800-9)。對(duì)本發(fā)明所用的組合物或藥物中可藥用的賦形劑及其優(yōu)化濃度的選擇可通過(guò)實(shí)驗(yàn)容易地確定。一種可藥用賦形劑是否適用于ー種藥物組合物通常還取決于采用何種劑型。然而藥物制劑領(lǐng)域技術(shù)人員可在例如“Remington :The science and practice ofpharmacy (第 20 版)，，(MackPub lishi ng，Easton PA，2000 年，ISBN0-91273404-3)中找至 Ij指導(dǎo)?？伤幱觅x形劑是對(duì)所述組合物將要施用的個(gè)體基本無(wú)害的物質(zhì)。該賦形劑通常滿(mǎn)足國(guó)家藥品機(jī)構(gòu)發(fā)布的要求。官方藥典如美國(guó)藥典和歐洲藥典制定了眾知的可藥用賦形劑的標(biāo)準(zhǔn)。以下是根據(jù)本發(fā)明所用的相關(guān)藥物組合物的綜述。該綜述基于施用的特定途徑。然而應(yīng)當(dāng)意識(shí)到在可藥用賦形劑可按不同劑型或不同組合物應(yīng)用的那些情況下，特定可藥用賦形劑的應(yīng)用不受限于該賦形劑的特定劑型或特定功能。經(jīng)腸胃外施用的組合物為了全身應(yīng)用，本發(fā)明的組合物可包含常規(guī)無(wú)毒的可藥用的載體和賦形劑，包括微球和脂質(zhì)體。根據(jù)本發(fā)明使用的組合物可包括所有類(lèi)型的固體組合物、半固體組合物和流體組合物。特別相關(guān)的組合物是例如溶液、懸浮液和乳剤?？伤幱觅x形劑可包括溶剤、緩沖劑、防腐剤、螯合劑、抗氧劑、穩(wěn)定劑、乳化剤、懸浮劑和/或稀釋劑。不同試劑的實(shí)例如下所列。多種試劑的實(shí)例

溶劑的實(shí)例包括但不限于水、こ醇、血液、血漿、脊髄液、腹水和淋巴液。緩沖劑的實(shí)例包括但不限于檸檬酸、こ酸、酒石酸、乳酸、氫磷酸(hydrogenphosphoric acid)、重碳酸鹽、磷酸鹽、ニこ胺等等。螯合劑的實(shí)例包括但不限于EDTA鈉和朽1檬酸?？寡鮿┑膶?shí)例包括但不限于丁基羥基茴香醚(BHA)、抗壞血酸及其衍生物、生育酚及其衍生物、半胱氨酸以及它們的混合物。稀釋劑和崩解劑的實(shí)例包括但不限于乳糖、蔗糖、淀粉糖類(lèi)復(fù)合物、磷酸鈣、碳酸鈣、硫酸鈣、甘露醇、淀粉、微晶纖維素。結(jié)合劑的實(shí)例包括但不限于蔗糖、山梨糖醇、阿拉伯膠、海藻酸鈉、明膠、淀粉、纖維素、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基纖維素、聚こ烯吡咯烷酮、聚こニ醇。用于本發(fā)明的藥物組合物或物質(zhì)優(yōu)選地通過(guò)向所述患者周?chē)o脈內(nèi)灌注或通過(guò)肌內(nèi)或皮下注射或者通過(guò)口腔、肺、鼻或ロ服途徑施用。而且，還有可能通過(guò)向所述患者的腦室中手術(shù)方式插入分流器(shunt)施用所述藥物組合物或藥物活性物質(zhì)。 在本發(fā)明一個(gè)實(shí)施方案中，將所述藥物組合物進(jìn)行配制以致于所述活性物質(zhì)將進(jìn)入患者腦的腦室內(nèi)。在本發(fā)明ー個(gè)實(shí)施方案中，將所述藥物組合物進(jìn)行配制以致于當(dāng)向所述患者施用時(shí)活性物質(zhì)將進(jìn)入患者腦的腦室或所述患者的腦脊液內(nèi)。這可通過(guò)例如機(jī)械裝置、媒介物、脂質(zhì)體、脂微球或者生物的或合成的載體完成。優(yōu)選地，所施用的劑量范圍是每100克體重大約0. 001-100毫克的包含式I氨基酸序列的多肽，其包含0. 001-100毫克/I克體重、0. 001-100毫克/10克體重和0. 001-100毫克/50克體重的范圍。所施用的劑量范圍優(yōu)選地是每I公斤體重大約0. 001-100毫克的包含式I氨基酸序列的多肽。當(dāng)使用誘導(dǎo)AF s的食物時(shí)，所施用的劑量對(duì)應(yīng)于每公斤體重0. 2-5克的麥芽谷物(malted cereal)。當(dāng)施用具有高水平AF :s (即至少1000FIL單位/毫升)的蛋黃時(shí),使用每公斤體重0. 05-0. 5克的劑量。應(yīng)當(dāng)控制個(gè)體的反應(yīng)。本發(fā)明可用于治療人或非人哺乳動(dòng)物。術(shù)語(yǔ)“治療”如此處所用既涉及g在治愈或減輕疾病或醫(yī)學(xué)狀況(特征在于細(xì)胞異常損失和/或獲得)的治療性治療，也涉及g在阻止疾病或醫(yī)學(xué)狀況(特征在于細(xì)胞和細(xì)胞組分如突觸的病理性損失或獲得)發(fā)展的預(yù)防性治療。因此本發(fā)明的范圍包括預(yù)防性治療和治療性治療。術(shù)語(yǔ)“治療”還指在CNS、PNS或ANS中的神經(jīng)元、少突膠質(zhì)或神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞損失后通過(guò)誘導(dǎo)已分化細(xì)胞(例如神經(jīng)元和/或神經(jīng)膠質(zhì))的發(fā)生影響源自干細(xì)胞或祖細(xì)胞的細(xì)胞發(fā)生，或者指阻止CNS、PNS或ANS或體內(nèi)其它結(jié)構(gòu)中的年齡相關(guān)的正常退化。治療可以急性或慢性方式進(jìn)行。AF擴(kuò)展(AF-expanded)干細(xì)胞和/或祖細(xì)胞可以増殖，并且可在移植前已預(yù)分化或者允許通過(guò)所移植細(xì)胞和宿主間的相互作用而分化。AF擴(kuò)展干細(xì)胞和/或祖細(xì)胞可單次施用和/或移植，或在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)重復(fù)遞送。通過(guò)血流將干細(xì)胞和/或祖細(xì)胞施用進(jìn)入靶器官是特別有用的。根據(jù)本發(fā)明的另ー個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，可以使用包含式I氨基酸序列的多肽以便使組織培養(yǎng)或細(xì)胞培養(yǎng)中的祖細(xì)胞或干細(xì)胞或其它細(xì)胞増殖。此后，此類(lèi)細(xì)胞可以用于向患有神經(jīng)元細(xì)胞損失或另ー類(lèi)型內(nèi)源性細(xì)胞缺乏所致?tīng)顩r的患者進(jìn)行細(xì)胞移植。用于開(kāi)始培養(yǎng)的細(xì)胞可來(lái)自該患者或來(lái)自另ー個(gè)人類(lèi)供體或動(dòng)物供體，并且可用于治療廣泛多種的疾病和病癥，所述疾病和病癥包括心臟病例如梗死、糖尿病或者多種多樣的神經(jīng)疾病和病癥如上面提到的那些。
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因此本發(fā)明還提供體外増殖、誘導(dǎo)、降低和/或維持所分離干細(xì)胞和/或干細(xì)胞后代發(fā)生的方法，其特征在于以包含式I氨基酸序列的多肽處理所分離細(xì)胞。優(yōu)選地，所分離細(xì)胞選自上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、成骨細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、心肌細(xì)胞、血細(xì)胞、神經(jīng)元、少突膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、祖細(xì)胞、干細(xì)胞和/或自此類(lèi)所述細(xì)胞衍生的細(xì)胞。通常，在適當(dāng)條件下將所分離細(xì)胞處理一段時(shí)間，這足以完成所預(yù)期的増殖、誘導(dǎo)、降低和/或維持。當(dāng)計(jì)劃從患者中移出細(xì)胞用于體外增殖時(shí)，首先増加患者中的祖細(xì)胞數(shù)目將是最有利的。這將更便于隨后從患者中分離所述細(xì)胞。通過(guò)使用本發(fā)明的方法或藥物組合物使祖細(xì)胞的數(shù)目增加。包含式I氨基酸序列的多肽可單獨(dú)使用或與其它藥物、白介素或生長(zhǎng)因子如表皮生長(zhǎng)因子(EGF)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)、血小板衍生的生長(zhǎng)因子(TOGF)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)或胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF)聯(lián)合使用，以有計(jì)劃地在例如CNS、PNS或ANS中誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生或増殖。包含式I氨基酸序列的多肽可單獨(dú)使用或同時(shí)或順序地與其它藥物、肽、生長(zhǎng)因子、類(lèi)固醇、脂類(lèi)、糖基化蛋白質(zhì)或肽聯(lián)合使用，以便促進(jìn)體內(nèi)或體外細(xì)胞發(fā)生或特定類(lèi)型細(xì)胞的產(chǎn)生。所述多肽還可用于誘導(dǎo)不成熟的細(xì)胞或多能細(xì)胞以激活上述細(xì)胞中的特異發(fā)育程序和特定基因。如以上提及的術(shù)語(yǔ)“細(xì)胞發(fā)生”意指從原位的或處于分離狀態(tài)的成年CNS或PNS或身體其它器官內(nèi)的多能細(xì)胞、祖細(xì)胞或干細(xì)胞產(chǎn)生新細(xì)胞，例如神經(jīng)元、少突膠質(zhì)細(xì)胞、施萬(wàn)細(xì)胞、衛(wèi)星細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞。此外，本發(fā)明還涉及物質(zhì)的治療性用途，其中所述物質(zhì)降低患者中的活性AF的量或天然存在的AF類(lèi)似物的量，并且因此降低患者中的新細(xì)胞發(fā)生例如少突膠質(zhì)細(xì)胞的發(fā)生，其中所述患者患有這樣的軸突損傷或脊髓損傷，例如由震蕩引起的軸突損傷、頭部創(chuàng)傷引起的軸突損傷、CNS內(nèi)小血管疾病引起的軸突損傷和/或疾病和/或創(chuàng)傷后對(duì)脊髓的損傷。此類(lèi)物質(zhì)的實(shí)例是藥物、抗體、化合物、肽和/或內(nèi)源性AF釋放的抑制物。因?yàn)锳F支持新細(xì)胞的發(fā)生并且尤其支持與學(xué)習(xí)和記憶密切相關(guān)的海馬內(nèi)的神經(jīng)元的發(fā)生，所以可使用包含式I氨基酸序列的多肽以便通過(guò)所述細(xì)胞的發(fā)生促進(jìn)學(xué)習(xí)和記憶。盡管本發(fā)明主要涉及通過(guò)影響神經(jīng)干細(xì)胞或祖細(xì)胞用于治療CNS或PNS內(nèi)的以細(xì)胞病理性損失或獲得為特征的異常狀況的方法，然而本發(fā)明的用途和方法可同樣用于治療和/或預(yù)防身體其它器官內(nèi)的醫(yī)學(xué)狀況，只要所述醫(yī)學(xué)狀況的特征在于細(xì)胞的病理性損失和/或獲得即可。盡管參考文獻(xiàn)在此處主要涉及包含式I氨基酸序列的多肽用途，然而在做必要修正的情況下本發(fā)明還涉及基本上由式I氨基酸序列組成的多肽和涉及由式I氨基酸序列組成的多肽。包含式I氨基酸序列的多肽可通過(guò)包括重組體和合成方法在內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)方法產(chǎn)生。當(dāng)閱讀以下實(shí)施例時(shí)將更全面地理解本發(fā)明，這些實(shí)施例僅僅g在說(shuō)明，但不限制本發(fā)明的范圍。附圖描述

圖1.來(lái)自受假性治療的對(duì)照腦的齒狀回(A)和通過(guò)腹內(nèi)注射溶于緩沖鹽水的紅藻氨酸(10mg/ml)誘導(dǎo)癲癇發(fā)作后的齒狀回(B-7天；C-28天)的共聚焦免疫熒光顯微照片，顯示正在増殖的細(xì)胞團(tuán)的分布。新形成的細(xì)胞被染成暗色。癲癇發(fā)作后第7天(B)和第28天(C)SGZ中的核苷酸還原酶(RNR)陽(yáng)性細(xì)胞(即有絲分裂細(xì)胞)數(shù)目顯著增加。B中的插圖來(lái)自經(jīng)相同方法染色的相同腦的另ー個(gè)切片，顯示出兩個(gè)陽(yáng)性即有絲分裂的細(xì)胞團(tuán)。GCL=顆粒細(xì)胞層，HiL=門(mén)。標(biāo)尺=20011111(六、8、0，2011111(8中的插圖)。圖2.來(lái)自顱骨外側(cè)放置冰凍探針40秒之后2天的大鼠腦照片。上排中的兩個(gè)腦所來(lái)自的大鼠在腦損傷之前和之后自由獲得標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料和自來(lái)水?？梢宰⒁獾匠鲅妥兩哪X組織。下排中的兩個(gè)腦所來(lái)自的大鼠在外側(cè)顱骨暴露于冰凍探針之前的12天不受限地獲得SPC食物和飲用溶液并且此后再獲得2天的SPC食物和飲用溶液直到被處死前。可以注意到缺乏肉眼可見(jiàn)的出血和較小范圍的腦損傷。以染色切片的光學(xué)顯微鏡術(shù)進(jìn)一歩證實(shí)，以SPC為食的大鼠中的高水平AF減少了腦損傷。圖3.來(lái)自顱骨外側(cè)放置冰凍探針40秒之后6天的大鼠的腦照片。上排中的三個(gè)腦來(lái)自在腦損傷之前和之后自由獲得標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料和自來(lái)水的成年大鼠?？梢宰⒁獾捷p微出血和腦組織的淺表缺損。下排中的三個(gè)腦所來(lái)自的大鼠在外側(cè)顱骨接觸冰凍探針之前的5天不受限地獲得SPC食物和飲用溶液并且此后再獲得6天的SPC食物和飲用溶液直到被處死前?？梢宰⒁獾脚c上面一組中的大鼠腦相比腦損傷范圍較小。以染色切片的光學(xué)顯微鏡術(shù)進(jìn)一步證實(shí)，冰凍損傷前5天以SPC為食的大鼠中的AF水平減少了腦損傷。
實(shí)施例實(shí)施例1 :誘導(dǎo)AF形成增加則增進(jìn)神經(jīng)發(fā)生開(kāi)展了以下實(shí)驗(yàn)以評(píng)估AF的施用是否影響正常成年哺乳動(dòng)物大鼠腦內(nèi)的神經(jīng)發(fā)生。

雄性和雌性大鼠(實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)體重為180-350克)購(gòu)自B&K AB，Stockholm，瑞典。將動(dòng)物在許可類(lèi)型和尺寸的籠內(nèi)飼養(yǎng)，并且從6點(diǎn)至18點(diǎn)進(jìn)行光照。地區(qū)動(dòng)物試驗(yàn)倫理委員會(huì)準(zhǔn)許本實(shí)驗(yàn)。采取了措施以減少不適和痛苦。測(cè)試大鼠在處死前以SPC顆粒食物為食并且飲用SPC提取物至少10天。未對(duì)動(dòng)物進(jìn)行任何外科手術(shù)或處理。通過(guò)腹內(nèi)注射過(guò)量的戊巴比妥鈉鹽水或通過(guò)吸入異氟烷麻醉大鼠。打開(kāi)胸腔，左心室插管并且灌注已添加肝素的調(diào)節(jié)平衡緩沖鹽溶液以將血液從血管系統(tǒng)中沖走。此后灌注緩沖甲醛鹽水溶液以固定組織。最后分割腦、脊髄、視網(wǎng)膜和神經(jīng)組織的另外部分，并且在冷的緩沖福爾馬林中進(jìn)ー步固定過(guò)夜。次日將前腦和海馬分割、沖洗并且在冷凍切片機(jī)中切片之前浸于已添加20%蔗糖的緩沖鹽水中。然后切成5-25 y m厚的薄切片用于免疫組化法顯示對(duì)任何DNA合成至關(guān)重要的核苷酸還原酶(RNR)Rl亞基的分布和覆蓋程度(圖1a)，所述核苷酸還原酶Rl亞基的存在顯示細(xì)胞正通過(guò)有絲分裂形成(Zhu，H.等，參考文獻(xiàn)14)。作為平行對(duì)照將來(lái)自前腦和海馬的另外組織標(biāo)本用石蠟包埋并進(jìn)行如上所述的處理。對(duì)進(jìn)行RNR免疫組織化學(xué)處理的切片的光學(xué)顯微術(shù)分析顯示與以標(biāo)準(zhǔn)的嚙齒動(dòng)物顆粒飼料為食的動(dòng)物比較，對(duì)正常成年大鼠進(jìn)行至少10天SPC食物的治療增加了海馬SGZ內(nèi)正在増殖的干細(xì)胞和祖細(xì)胞的出現(xiàn)。正在分裂細(xì)胞頻率的升高還可見(jiàn)于前腦SVZ中。通過(guò)免疫組織化學(xué)法借助于抗雙皮層蛋白(由遷移的未成熟神經(jīng)細(xì)胞表達(dá))、NeuN(由成熟神經(jīng)細(xì)胞表達(dá))和GFAP(由星形細(xì)胞表達(dá))的抗體對(duì)新形成的細(xì)胞進(jìn)行鑒定?？梢缘贸鼋Y(jié)論向成年哺乳動(dòng)物提供至少10天的SPC食物似乎明顯地促進(jìn)了成年腦內(nèi)干細(xì)胞和祖細(xì)胞的増殖。

實(shí)施例2 :通過(guò)應(yīng)用冰凍探針的腦損傷模型開(kāi)展以下實(shí)驗(yàn)以評(píng)估通過(guò)顱骨外應(yīng)用極冷探針對(duì)嚙齒動(dòng)物腦所致的損傷。雄性和雌性大鼠(實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)體重為180-350克)購(gòu)自B&K AB，Stockholm，瑞典。將動(dòng)物在許可類(lèi)型和尺寸的籠內(nèi)飼養(yǎng)，并且從6點(diǎn)至18點(diǎn)進(jìn)行光照。地區(qū)動(dòng)物試驗(yàn)倫理委員會(huì)準(zhǔn)許本實(shí)驗(yàn)。采取了措施以減少不適和痛苦。通過(guò)吸入異氟烷麻醉大鼠并且剃掉頭部毛發(fā)。皮膚在顱骨上的正中矢狀面處切開(kāi)。在左側(cè)前因點(diǎn)和后因點(diǎn)之間暴露顱蓋。將骨外膜從骨上分離，然后沖洗骨。此后極其仔細(xì)地除去來(lái)自顱蓋的血液和任何液體，否則可能有損后續(xù)操作。通過(guò)按標(biāo)準(zhǔn)方式浸于液氣中的具有直徑3mm且長(zhǎng)4mm末端的圓柱形銅制探針冷卻。已冷卻的探針隨后在后因點(diǎn)和前囟點(diǎn)之間顱蓋處(矢狀正中線(xiàn)側(cè)面4mm)應(yīng)用40秒。然后移去探針并縫合皮膚傷ロ。冰凍探針的應(yīng)用暫時(shí)引起暴露區(qū)下方腦組織冰凍。應(yīng)當(dāng)強(qiáng)調(diào)顱骨是未打開(kāi)的并且沒(méi)有引起骨折或重大損傷的其它跡象。所述動(dòng)物在從麻醉復(fù)蘇后運(yùn)動(dòng)未見(jiàn)任何明顯問(wèn)題、行為正常并且食物的消化和液體的飲用與那些未受處理動(dòng)物十分類(lèi)似。凍傷后兩天，左側(cè)大腦皮層在緊接遭受冷卻的顱骨部分下方的ー個(gè)直徑3-5_的區(qū)域內(nèi)表現(xiàn)變色和出血(圖2)。淺凹陷表明存在神經(jīng)組織損傷。在所述半影內(nèi)即在嚴(yán)重?fù)p傷的神經(jīng)組織中心帶的邊緣分布的腦物質(zhì)中存在水腫。更詳細(xì)的檢查可顯示所述水腫向白質(zhì)延伸，這在所損傷的同一側(cè)最為明顯。對(duì)染色的薄切片的光學(xué)顯微鏡檢查顯示了在損傷的腦皮層中央的壞死組織，伴有似乎加重半影繼發(fā)性組織損傷和細(xì)胞損傷的水腫。原發(fā)性損傷是在使用冰凍探針后的最初數(shù)秒期間內(nèi)發(fā)生的損傷。繼發(fā)性腦損傷包括I分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間后發(fā)生的變化，對(duì)確切時(shí)間的限定取決于損傷類(lèi)型。繼發(fā)性變化可隨時(shí)間變得更加嚴(yán)重，特別是在存在趨向有害的腦水腫吋。炎癥反應(yīng)在數(shù)分鐘內(nèi)開(kāi)始出現(xiàn)，在半影處最為明顯并且其特征為大量活化星形細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞的出現(xiàn)。血管也受到損傷但可立即得以重建。然而直至數(shù)天或甚至數(shù)周后損傷組織中的中央壞死部分血管重新形成。任何誘導(dǎo)炎癥的腦損傷導(dǎo)致了 SGZ和SVZ內(nèi)(如果所述區(qū)域未受?chē)?yán)重受損)干細(xì)胞和祖細(xì)胞増殖的暫時(shí)升高。而且，新的神經(jīng)干細(xì)胞和祖細(xì)胞必須受到刺激以便存活、遷移和分化；否則細(xì)胞増殖可引起神經(jīng)元細(xì)胞的凈損失。 伴隨腦損傷的結(jié)果是P淀粉樣前體蛋白(P-APP)和0淀粉樣蛋白(AP)的積累和在神經(jīng)細(xì)胞胞體內(nèi)和突起內(nèi)的積累。P-APP和AP兩者對(duì)神經(jīng)細(xì)胞均有毒并且在神經(jīng)創(chuàng)傷后數(shù)小時(shí)內(nèi)開(kāi)始積累。然而，若這兩類(lèi)蛋白溶解并因此消失，則受影響神經(jīng)細(xì)胞在結(jié)構(gòu)和功能上存活、恢復(fù)以及重新整合的可能性認(rèn)為是高度有利的。此外，細(xì)胞骨架組分如神經(jīng)絲和微管在神經(jīng)創(chuàng)傷處受損并且積累，形成聚集物和纏結(jié)物使原發(fā)損傷變得更重并且甚至有害。軸突和樹(shù)突因細(xì)胞骨架組分、細(xì)胞器和淀粉樣蛋白的局部積累而呈現(xiàn)不規(guī)則串珠狀、腫脹和扭曲。由于創(chuàng)傷后神經(jīng)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)破壞例如冰凍后神經(jīng)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)破壞，細(xì)胞裝置的正常極精確和規(guī)則組織部分喪失并且正常細(xì)胞組分如遍在蛋白積累或出現(xiàn)濃度異常。除了那些在SGZ和SVZ內(nèi)的神經(jīng)細(xì)胞以外，神經(jīng)細(xì)通常不再分裂，但其在神經(jīng)創(chuàng)傷后可開(kāi)始形成異常高量的在正常情況下只普遍存在于正在分裂細(xì)胞中的蛋白質(zhì)和其它化合物，如細(xì)胞周期蛋白和相關(guān)組分。神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、星形細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞增殖并變肥大。在受損組織內(nèi)進(jìn)一步發(fā)生殘留血管的重建和血管發(fā)生。任何神經(jīng)創(chuàng)傷后出現(xiàn)的水腫加重了對(duì)組織的損傷(繼發(fā)性損傷)。凍傷后第六日因腦組織的損失在受損皮質(zhì)的中央出現(xiàn)淺腔(圖2)?？捎^察到出血的微量殘留物，但是大部分的已滲出血液已去除。損傷中央處的壞死已經(jīng)部分地清除了碎片并且因此看起來(lái)是界限相當(dāng)清楚的凹陷。包圍中央壞死的半影富含小膠質(zhì)細(xì)胞和肥大的正在増殖的星形細(xì)胞。在此半影中可見(jiàn)受損的和垂死的神經(jīng)細(xì)胞以及存活的神經(jīng)細(xì)胞。大部分神經(jīng)細(xì)胞顯示有神經(jīng)絲、P-APP和AP的積累?？梢缘贸鼋Y(jié)論經(jīng)完整顱骨的腦冰凍可以以重復(fù)性方式導(dǎo)致腦損傷。實(shí)施例3 :如在第二天之后檢查，AF s拯救了凍傷的腦組織開(kāi)展如下實(shí)驗(yàn)以評(píng)估體內(nèi)AF增加是否影響由嚙齒動(dòng)物腦顱骨外側(cè)應(yīng)用冰凍探針?biāo)履X損傷的范圍和嚴(yán)重程度，是否表現(xiàn)為神經(jīng)保護(hù)作用。雄性和雌性大鼠(實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)體重為180-350克)在腦損傷前提供SPC食物和飲用液體至少10天。在損傷當(dāng)日，如實(shí)驗(yàn)2將大鼠麻醉并且準(zhǔn)備。冰凍探針使用一次持續(xù)40秒。大鼠在縫合顱骨處的皮膚傷ロ并從麻酔中復(fù)蘇后允許自由運(yùn)動(dòng)并且獲得SPC食物和飲用液體。凍傷兩天后，如所述將大鼠處死并通過(guò)灌注法固定。當(dāng)打開(kāi)顱骨時(shí)，很明顯與進(jìn)食商業(yè)標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料和自來(lái)水的動(dòng)物的腦損傷相比，存在較小范圍的腦損傷(圖2)。只存在少量可識(shí)別的出血。而且受損區(qū)域中央部分的淺凹陷不明顯。與攝食標(biāo)準(zhǔn)顆粒食物和自來(lái)水的動(dòng)物內(nèi)觀察到的水腫相比，所述半影看起來(lái)受水腫影響較小。對(duì)受損腦組織的染色薄切片進(jìn)行光學(xué)顯微鏡檢查顯示出現(xiàn)較小的范圍的受損細(xì)胞并且血液成分僅少量滲出。不規(guī)則分布的腫脹和串珠稀疏。例如本應(yīng)明顯的淀粉樣蛋白和神經(jīng)絲的積累較不明顯。與供給標(biāo)準(zhǔn)食物和自來(lái)水的對(duì)照動(dòng)物相比，神經(jīng)膠質(zhì)增生較少。然而兩日后由SPC食物和飲用液體弓I起神經(jīng)保護(hù)的程度存在變異?？梢缘贸鼋Y(jié)論如在局部損傷兩天后檢查的腦組織損傷的降低所顯示，實(shí)驗(yàn)性誘導(dǎo)體內(nèi)AF形成增加導(dǎo)致神經(jīng)保護(hù)。實(shí)施例4 如第六天之后檢查，AF : s拯救了凍傷的腦組織開(kāi)展如下實(shí)驗(yàn)以評(píng)估體內(nèi)AF增加是否影響由嚙齒動(dòng)物腦顱骨外側(cè)應(yīng)用冰凍探針?biāo)履X損傷的范圍和嚴(yán)重程度，是否表現(xiàn)為神經(jīng)保護(hù)作用。雄性和雌性大鼠(實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)體重為180-350克)在腦損傷前提供SPC食物和飲用液體至少10天。在損傷當(dāng)日，如實(shí)驗(yàn)2將大鼠麻醉并且準(zhǔn)備。冰凍探針使用一次持續(xù)40秒。大鼠在縫合顱骨處的皮膚傷ロ并從麻酔中復(fù)蘇后允許自由運(yùn)動(dòng)并且獲得SPC食物和飲用液體。凍傷六天后，如所述將大鼠處死并通過(guò)灌注法固定。當(dāng)打開(kāi)顱骨時(shí)，很明顯與進(jìn)食商業(yè)標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料和自來(lái)水的動(dòng)物的腦損傷相比，存在較小范圍的腦損傷(圖3)。沒(méi)有可識(shí)別的出血。而且受損區(qū)域中央部分的淺凹陷不明顯并且在某些情況下難以確切鑒定。與攝食標(biāo)準(zhǔn)顆粒食物和自來(lái)水的動(dòng)物中所觀察到的結(jié)果相比，所述半影看起來(lái)受水腫影響較小。對(duì)受損腦組織的染色薄切片的光學(xué)顯微鏡檢查顯示較小范圍出現(xiàn)受損傷細(xì)胞并且?guī)缀鯖](méi)有血液的任何殘留滲出。軸突和樹(shù)突不規(guī)則分布的腫脹和串珠稀疏。在所述半影區(qū)域內(nèi)存在明顯的星形膠質(zhì)細(xì)胞增生，但是不如來(lái)自攝食標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料和自來(lái)水的大鼠腦內(nèi)那樣廣泛和普遍。然而，通過(guò)SPC食物和飲用液體引起的神經(jīng)保護(hù)的程度存在變異。

當(dāng)檢查海馬時(shí)，發(fā)現(xiàn)SGZ內(nèi)神經(jīng)干細(xì)胞和祖細(xì)胞的増殖存在明顯的增加。對(duì)于SVZ同樣如此，但較不明顯?？梢缘贸鼋Y(jié)論如第六天所檢查到的局部損傷后腦組織損傷減少、膠質(zhì)細(xì)胞增生較不明顯以及來(lái)自SGZ中(最明顯的是SGZ中的)干細(xì)胞和祖細(xì)胞的新神經(jīng)細(xì)胞的形成增加所示，實(shí)驗(yàn)性誘導(dǎo)體內(nèi)AF形成增加導(dǎo)致了神經(jīng)保護(hù)。實(shí)施例5 :如第六天之后檢查，毎日靜脈內(nèi)注射AF衍生物(16個(gè)氨基酸的肽)拯救了凍傷的腦組織開(kāi)展如下實(shí)驗(yàn)以評(píng)估體內(nèi)AF增加是否影響由嚙齒動(dòng)物腦顱骨外側(cè)應(yīng)用冰凍探針?biāo)履X損傷的范圍和嚴(yán)重程度，是否表現(xiàn)為神經(jīng)保護(hù)作用。雄性和雌性大鼠(實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)體重為180-350克)在腦損傷之前和之后供給標(biāo)準(zhǔn)顆粒食物和自來(lái)水。在損傷當(dāng)日，如實(shí)驗(yàn)2所述將大鼠麻醉并且準(zhǔn)備。冰凍探針使用一次持續(xù)40秒。大鼠在縫合顱骨處的皮膚傷ロ并從麻酔中復(fù)蘇后允許自由運(yùn)動(dòng)。從手術(shù)當(dāng)日開(kāi)始，向所有大鼠每日兩次靜脈內(nèi)注射每公斤體重1-1Oyg的合成肽，持續(xù)5天，其中所述合成肽是包含第36-51位氨基酸(即由16個(gè)氨基酸組成)的AF的片段。將所述合成肽溶于鹽水并且每次注射前新鮮制備。在處死當(dāng)日即第六日，不再靜脈內(nèi)注射此肽。在任何一個(gè)動(dòng)物中未觀察到在運(yùn)動(dòng)活性、探索行為、攝食或飲水習(xí)性方面的副作用。凍傷六天后，如所述將大鼠處死并通過(guò)灌注法固定。當(dāng)打開(kāi)顱骨時(shí)，很明顯與進(jìn)食商業(yè)的標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料和自來(lái)水的動(dòng)物的腦損傷相比，腦損傷范圍較小。腦內(nèi)或腦表面無(wú)出血。此外，受損區(qū)域中央部分的淺凹陷不明顯并且在某些情況下難以確切鑒定。所述半影看起來(lái)受水腫的影響較小。對(duì)受損腦組織染色薄切片的光學(xué)顯微鏡檢查顯示與如實(shí)驗(yàn)2中處理和研究的大鼠腦相比，受損細(xì)胞出現(xiàn)的范圍較小并且?guī)缀鯖](méi)有血液的任何殘留滲出。軸突和樹(shù)突不規(guī)則分布的腫脹和串珠稀疏。在半影區(qū)域內(nèi)存在明顯的星形膠質(zhì)細(xì)胞增生，但是不如來(lái)自攝食標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料和自來(lái)水的相應(yīng)大鼠腦內(nèi)那樣廣泛和普遍。然而由注射肽弓I起的神經(jīng)保護(hù)程度存在變異。當(dāng)檢查海馬時(shí)，存在SGZ內(nèi)的神經(jīng)干細(xì)胞和祖細(xì)胞增殖的增加。對(duì)于SVZ同樣如此?？梢缘贸鼋Y(jié)論如第六天所檢查到的局部損傷后腦組織損傷減少、膠質(zhì)細(xì)胞增生較不明顯以及來(lái)自SGZ中(最明顯的是SGZ中的)干細(xì)胞和祖細(xì)胞的新神經(jīng)細(xì)胞的形成增加所示，在凍傷后的前五天毎日靜脈內(nèi)注射AF片段導(dǎo)致神經(jīng)保護(hù)。實(shí)施例6 :如第六天之后檢查，AF拯救了由興奮性神經(jīng)毒性藥物紅藻氨酸所損傷的腦組織開(kāi)展如下實(shí)驗(yàn)以評(píng)估體內(nèi)AF增加是否影響由腹內(nèi)注射興奮性神經(jīng)毒性藥物紅藻氨酸所致的嚙齒動(dòng)物腦損傷的范圍和嚴(yán)重程度，是否表現(xiàn)為神經(jīng)保護(hù)作用。雄性和雌性大鼠(實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)體重為180-350克)在腦損傷至少前10天供給SPC食物和飲用液體。為了比較，相同數(shù)目的大鼠攝取標(biāo)準(zhǔn)顆粒食物和自來(lái)水。在損傷當(dāng)日，將溶于緩沖鹽水的紅藻氨酸(Sigma Chemical Co, St. Louis, Mo,USA)以每公斤體重IOmg的量腹內(nèi)注射一次。此后允許大鼠自由運(yùn)動(dòng)和獲得SPC食物和飲用液體。在45-60分鐘后，大鼠開(kāi)始出現(xiàn)定型化行為，重復(fù)ー種或兩種運(yùn)動(dòng)。此后大鼠發(fā)生單側(cè)和普遍癲癇發(fā)作。密切監(jiān)測(cè)大鼠并且記錄影響程度。紅藻氨酸處理3小時(shí)后注射地西泮終止癲癇發(fā)作。本研究?jī)H包括表現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)類(lèi)型和程度的癲癇發(fā)作的大鼠。在癲癇發(fā)作后 第六日，如所述處死大鼠并通過(guò)灌注法固定。當(dāng)打開(kāi)顱骨時(shí)，未顯示腦損傷跡象。在攝取SPC食物和攝取標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料和自來(lái)水的大鼠之間沒(méi)有差異。在兩種情況下均未見(jiàn)肉眼可見(jiàn)的水腫。對(duì)腦海馬染色薄切片的光學(xué)顯微鏡檢查顯示了兩組動(dòng)物間損傷程度的差異。與攝取標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料和自來(lái)水動(dòng)物的更為嚴(yán)重的損傷相比，以SPC食物治療的動(dòng)物表現(xiàn)為CAl和CA3/4區(qū)域內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞退化范圍較小。對(duì)于苔蘚纖維生長(zhǎng)可觀察到同樣的差異。可以識(shí)別出軸突和樹(shù)突不規(guī)則分布的腫脹和串珠。與攝取標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料的那些大鼠相比，攝取SPC食物的大鼠的門(mén)區(qū)域中和腔隙層及分子層中以及門(mén)中存在較不明顯的星形神經(jīng)膠質(zhì)增生。然而由SPC食物和飲用液體引起的神經(jīng)保護(hù)程度存在相當(dāng)大的變異。當(dāng)檢查海馬時(shí)，很明顯SGZ內(nèi)神經(jīng)干細(xì)胞和祖細(xì)胞增殖增加(圖1)。對(duì)于SVZ同樣如此，盡管較不明顯。在飲食SPC食物和飲用溶液后，SGZ內(nèi)新形成的RNR-陽(yáng)性細(xì)胞的存活率増加?？梢缘贸鼋Y(jié)論如癲癇發(fā)作后第六日海馬內(nèi)腦組織損傷程度的降低、和伴隨著較不明顯的膠質(zhì)細(xì)胞增生以及來(lái)自SGZ中(最明顯的是SGZ中的)干細(xì)胞和祖細(xì)胞的新神經(jīng)細(xì)胞的形成増加所示，實(shí)驗(yàn)性誘導(dǎo)體內(nèi)AF形成增加導(dǎo)致神經(jīng)保護(hù)。實(shí)施例7 :在彌散性腦損傷后，AF和AF片段影響腦組織的拯救，最明顯是對(duì)彌散性軸突損傷的影響開(kāi)展如下實(shí)驗(yàn)以評(píng)估體內(nèi)AF和AF片段出現(xiàn)的增加是否影響由旋轉(zhuǎn)加速度創(chuàng)傷所致的兔腦彌散性腦損傷的范圍和嚴(yán)重程度。最常見(jiàn)的腦損傷是稱(chēng)作腦震蕩的腦損傷。腦損傷毎年影響8-9萬(wàn)瑞典人，并且其中大約四分之一的人不得不住院至少一天以便臨床檢查和觀察。在美國(guó)，大約200萬(wàn)個(gè)體患有腦震蕩并且其中大約50萬(wàn)人住院一天或更長(zhǎng)時(shí)間。大多數(shù)患者要接受X射線(xiàn)和/或MRI檢查。對(duì)此類(lèi)個(gè)體而言，腦震蕩后面臨增加患有長(zhǎng)期神經(jīng)精神學(xué)后遺癥和疼痛的危險(xiǎn)增カロ。而且，以后發(fā)展成為癡呆(最明顯是阿爾茨海默病)的危險(xiǎn)。將使用幼年和成年免。將已麻醉兔的顱骨從軟組織中分離。將由塑料制成并以玻璃纖維強(qiáng)化的一個(gè)頭盔與所述顱骨粘合。所述頭盔與向兔頭的傳送旋轉(zhuǎn)加速度創(chuàng)傷(前面-后面或相反)的接觸設(shè)備(exposure equipment)連接。通過(guò)施用AF或與所選擇AF序列對(duì)應(yīng)的合成肽治療該兔。另外的兔將以SPC食物和飲用溶液為食或備選地以基于蛋黃的組合物為食。接觸參數(shù)將由計(jì)算機(jī)記錄系統(tǒng)密切監(jiān)測(cè)。在旋轉(zhuǎn)加速度創(chuàng)傷后的預(yù)定時(shí)間段內(nèi)，將腦從處死的兔中取出并仔細(xì)檢查所推測(cè)的通過(guò)AF及其衍生物以及蛋黃的神經(jīng)保護(hù)作用。所計(jì)劃實(shí)驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn)在于腦損傷是定型的并且對(duì)應(yīng)于人類(lèi)最常見(jiàn)腦損傷即腦振蕩。腦水腫的形成將由腦內(nèi)移植的與計(jì)算機(jī)連接的纖維光學(xué)傳感器密切監(jiān)測(cè)。因此可以密切追 蹤和記錄AF和其衍生物對(duì)水腫形成和組織病理性異常的影響。也將開(kāi)展長(zhǎng)期研究?？梢缘贸鼋Y(jié)論使用AF或其衍生物治療的彌散性腦損傷的實(shí)驗(yàn)性誘導(dǎo)對(duì)評(píng)估刺激情況下神經(jīng)保護(hù)的長(zhǎng)期作用至關(guān)重要，其中所述刺激情況正是臨床醫(yī)學(xué)實(shí)踐中人類(lèi)腦損傷的主要原因。參考文獻(xiàn)1. Lange, S.和L6nni*Oth，1.1nt. Review of Cytology21039-75 (2001)2. Eriksson, P. S.等，Nature Med. 11 :1313-1317(1998)3. Kuhn, H.，J. Neurosc1. 16 :2027-2033 (1996)4. Zhu, H.，Wang, Z. _Y.和 Hansson, H. -A.，Brain Res. 977 180-189 (2003)5. Gage, F. H.，Science287 1433-1438 (2000)6. McNamara, R. K.等，Brain Res. Rev. 18 :33-49(1993)7. Cameron, H. A.等，Neuroscience61 :203-209 (1994)8. Cameron, H. A.等，Neuroscience82 :349-354 (1998)9. Kempermann, G.等，Nature386 :493-495 (1997)10. Lange，S 等，WO9VO82O211. Davidson, J.和 Hickey, ff. F.，Lab.1nvestigation84 :307-319 (2004)12. Davidson, J.和 Hickey, ff. F.，J. Leukocyt Biol74 :907-919 (2004)13. Johansson, E 等，J Biol. Chem. 270 :20615-20620(1995)14. Lange, S 等，美國(guó)專(zhuān)利 6, 344,44015. Lange, S 等，PCT/SE97/0191816. Lange, S 等，PCT/SE99/02340
權(quán)利要求
1.a)抗分泌因子(AF)蛋白質(zhì)，其基本上由SEQ ID NO:2的第36-51位氨基酸組成，或b)其可藥用鹽，在制造用于神經(jīng)保護(hù)的藥物中的用途。
2.a)抗分泌因子(AF)蛋白質(zhì)，其基本上由SEQ ID NO:2的第36-51位氨基酸組成，或b)其可藥用鹽，在制造用于神經(jīng)保護(hù)的藥物中的用途，所述藥物用于治療和/或預(yù)防選自中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損傷、中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的缺陷、創(chuàng)傷性病癥、惡性病癥、自身免疫性病癥或退化性病癥、由震蕩、挫傷弓I起的軸突損傷、頭部創(chuàng)傷弓I起的軸突損傷、CNS內(nèi)的小血管疾病弓I起的軸突損傷、在疾病后脊髓損傷、多發(fā)性硬化癥、窒息、缺氧損傷、缺血性損傷、創(chuàng)傷性損傷、帕金森病、阿爾茨海默病、中風(fēng)和脫髓鞘病的狀況。
3.由麥芽谷物制造的誘導(dǎo)抗分泌蛋白質(zhì)的食物在制造用于神經(jīng)保護(hù)的食物或醫(yī)用食物中的用途。
4.具有至少1000FIL單位/ml抗分泌蛋白質(zhì)的蛋黃在制造用于神經(jīng)保護(hù)的食物或醫(yī)用食物中的用途。
5.具有至少1000FIL單位/ml抗分泌蛋白質(zhì)的蛋黃在制造用于神經(jīng)保護(hù)的藥物中的用途。
6.權(quán)利要求2- 5任一項(xiàng)的用途，其中所述狀況的特征在于表現(xiàn)為已分化細(xì)胞和/或組織、胚胎干細(xì)胞、成年干細(xì)胞、祖細(xì)胞和/或自干細(xì)胞或祖細(xì)胞衍生的細(xì)胞的病理性退化、再生能力的損失和/或再生控制的損失和/或再生控制的損失，用于治療和/或預(yù)防與周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)、自主神經(jīng)系統(tǒng)和/或中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)細(xì)胞的病理性損失和/或獲得有關(guān)或以其為特征的狀況。
7.權(quán)利要求2- 6任一項(xiàng)的用途，其中所述狀況與神經(jīng)干細(xì)胞或神經(jīng)祖細(xì)胞的病理性損失和/或獲得有關(guān)或以其為特征。
8.權(quán)利要求2— 7任一項(xiàng)的用途，其中所述狀況與少突膠質(zhì)、星形神經(jīng)膠質(zhì)、施萬(wàn)細(xì)胞和/或神經(jīng)元細(xì)胞和/或細(xì)胞群體的病理性損失和/或獲得有關(guān)或以其為特征。
9.權(quán)利要求8的用途，其中所述狀況與非膽堿能神經(jīng)元細(xì)胞、膽堿能神經(jīng)元細(xì)胞和/或神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和/或細(xì)胞群體的病理性損失和/或獲得有關(guān)或以其為特征。
10.權(quán)利要求2— 9任一項(xiàng)的用途，其中所述狀況由中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損傷或中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的缺陷所致。
11.權(quán)利要求2— 10任一項(xiàng)的用途，其中所述狀況由創(chuàng)傷性病癥、自身免疫性病癥或退化性病癥所致。
12.權(quán)利要求2— 11任一項(xiàng)的用途，其中所述狀況特征在于記憶喪失。
13.權(quán)利要求1一 3和5 — 12任一項(xiàng)的用途，其中將所述藥物配制成用于靜脈內(nèi)灌注、肌內(nèi)注射和/或皮下注射。
14.權(quán)利要求1一 3和5 — 12任一項(xiàng)的用途，其中將所述藥物如此配制以致于當(dāng)向所述患者施用時(shí)此活性物質(zhì)將進(jìn)入患者腦上或腦內(nèi)的腦室和/或其它腔體。
15.權(quán)利要求1一 3和5 — 12任一項(xiàng)的用途，其中將所述藥物如此配制以致于當(dāng)向所述患者施用時(shí)此活性物質(zhì)將進(jìn)入患者腦脊液。
全文摘要
本發(fā)明是抗分泌因子的新用途。涉及抗分泌蛋白或其具有相同特性的同源物或其某些片段在制造藥物或醫(yī)用食物中的用途，其用于誘導(dǎo)受損或患病神經(jīng)組織的改善拯救、誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞、成年干細(xì)胞、祖細(xì)胞和/或自干細(xì)胞或祖細(xì)胞衍生的細(xì)胞的增殖、凋亡、分化和/或遷移，以及用于治療以細(xì)胞損失和/或獲得為特征或與之相關(guān)的狀況。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述狀況是神經(jīng)創(chuàng)傷或CNS和/或PNS和/或ANS的狀況或疾病，例如阿爾茨海默病。
文檔編號(hào)A61K38/17GK103028110SQ20121057008
公開(kāi)日2013年4月10日 申請(qǐng)日期2004年9月24日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月26日
發(fā)明者H－A·漢松, E·延尼謝, S·蘭格, L·倫羅特, P·埃里克松, A·佩爾松 申請(qǐng)人:艾斯 - 法克特股份有限公司