用于治療癌癥和免疫抑制的昔洛舍平與線粒體抑制劑的組合的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及昔洛舍平與線粒體抑制劑例如二甲雙胍或寡霉素的組合，以及昔洛舍平與線粒體抑制劑的組合用于治療癌癥和用于實(shí)現(xiàn)免疫抑制的用途。本發(fā)明還涉及用于預(yù)測癌細(xì)胞的昔洛舍平敏感性的基于熒光的方法。
【專利說明】用于治療癌癥和免疫抑制的昔洛舍平與線粒體抑制劑的組
-A.口
發(fā)明領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及昔洛舍平與線粒體抑制劑例如二甲雙胍或寡霉素的組合以及昔洛舍平與線粒體抑制劑的組合用于治療癌癥和用于實(shí)現(xiàn)臨床免疫抑制的用途。
【背景技術(shù)】
[0002]抗癌療法利用治療干預(yù)例如手術(shù)、放射療法和化學(xué)療法的組合。手術(shù)和放射療法通常局部地限制于腫瘤生長的主要部位，然而化學(xué)療法被用于防止腫瘤再生長或抗遠(yuǎn)距離腫瘤病灶?；焺┻€用于減少腫瘤生長以當(dāng)放射療法或手術(shù)不是選項(xiàng)時(shí)，管理疾病進(jìn)展。
[0003]將免疫抑制劑在臨床上用于抑制靶向自已身體(自身免疫)或超射免疫反應(yīng)(overshooting immune reaction)(如過敏癥中看到的)的病理性免疫反應(yīng)。還可將其用于治療由免疫系統(tǒng)引起的移植排斥作用。免疫反應(yīng)的基礎(chǔ)的是在抗原刺激后T細(xì)胞的活化和增殖，其反過來用作為B細(xì)胞的助細(xì)胞、調(diào)節(jié)細(xì)胞或效應(yīng)細(xì)胞。免疫抑制劑例如雷帕霉素或環(huán)孢霉素A通過抑制早期T細(xì)胞活化/增殖起作用。由于癌癥和免疫反應(yīng)都參與細(xì)胞增殖，因此一些試劑例如雷帕霉素或其類似物最初被用于免疫抑制，但后來被發(fā)現(xiàn)用作抗癌劑的應(yīng)用(Recher 等，Blood 2005，105:2527-34)。
[0004]化學(xué)治療藥最有效地用于聯(lián)合治療。原理是使用通過不同機(jī)制起作用的藥物以減少抗藥癌細(xì)胞發(fā)育的概率。對(duì)于某些藥物組合，聯(lián)合治療還允許產(chǎn)生最佳組合劑量來使副作用最小化。這是重要的，因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)化療劑靶向基本細(xì)胞過程例如DNA復(fù)制、細(xì)胞分裂或誘導(dǎo)DNA損傷，從而具有一般細(xì)胞毒性效應(yīng)。最后，兩種化合物的聯(lián)合治療可揭示未預(yù)料到的協(xié)同作用和引發(fā)非由單一化 合物誘導(dǎo)的效應(yīng)。近年來，還將藥物用于新輔助療法環(huán)境中，即在手術(shù)之前，以減小腫瘤塊或改善長期存活。
[0005]昔洛舍平是利血平的合成衍生物，抗高血壓和抗精神病劑(J.A.M.A.,第170卷，Nr.17，1959年8月22日，第2092頁)。昔洛舍平于1950年代后期被臨床引入。由于開發(fā)了具有更少副作用的更好藥物，目前很少使用利血平。利血平通過抑制囊泡單胺轉(zhuǎn)運(yùn)體起作用，從而導(dǎo)致兒茶酚胺耗盡，該作用模式據(jù)信由所有具有抗高血壓作用的利血平衍生物所共有。雖然其已用于臨床，但昔洛舍平相較于利血平研究相對(duì)較少，并且從未作為抗癌劑進(jìn)行過研究。
[0006]線粒體包含細(xì)胞的能量產(chǎn)生系統(tǒng)，其中來自代謝的電子通過電子傳遞鏈(ETC)的復(fù)合物1-1V，從而導(dǎo)致質(zhì)子從復(fù)合物1、III和IV排出以及質(zhì)子通過復(fù)合物V回流，并且伴隨以三磷酸腺苷(ATP)形式存在的化學(xué)能形成。氧用作最終的電子受體并且被還原成H2O0該過程中最關(guān)鍵的是線粒體內(nèi)膜，隨著從復(fù)合物排出的質(zhì)子從基質(zhì)通過該膜進(jìn)入膜間間隙，產(chǎn)生了 150-200 mV的正膜電位。染料例如TMRM(四甲基羅丹明甲酯)通過該膜并且積累在線粒體基質(zhì)中，其中熒光信號(hào)的強(qiáng)度取決于膜電位的強(qiáng)度。許多良好描述的試劑抑制線粒體功能并且可被當(dāng)作線粒體毒性劑。所謂的解偶聯(lián)劑例如FCCP (羰基氰化物-對(duì)三氟甲氧基苯腙)使質(zhì)子的流動(dòng)與ATP合成解偶聯(lián)，從而導(dǎo)致膜電位的崩塌，導(dǎo)致ATP合成的喪失。許多良好描述的線粒體抑制劑靶向ETC的不同復(fù)合物，包括二甲雙胍、魚藤酮、表小檗堿、殺粉蝶菌素A(全為復(fù)合物I的抑制劑)、丙二酸鈉和噻吩甲酰三氟丙酮(復(fù)合物II的抑制劑)、抗霉素A(復(fù)合物III的抑制劑)、氰化鉀和疊氮化鈉(復(fù)合物IV的抑制劑)和寡霉素(復(fù)合物V抑制劑)。線粒體據(jù)信為在祖先上吞食的細(xì)菌。它們包含編碼ETC的幾個(gè)組分以及線粒體核糖體的組分的DNA基因組。靶向線粒體基因組的試劑例如核苷類似物類型的某些HIV抑制劑例如司他夫定(D4T)對(duì)于線粒體是有毒的，因?yàn)樗鼈冏罱K破壞ETC和線粒體能量產(chǎn)生系統(tǒng)。
[0007]二甲雙胍是廣泛使用的2型糖尿病的雙胍藥物。其與丁雙胍和苯乙雙胍相關(guān)，兩種雙胍因毒性已不再用于糖尿病。二甲雙胍是安全的和被良好耐受的，并且50多年來一直用于糖尿病的長期管理，是世界上處方開得最多的抗糖尿病藥。二甲雙胍在2型糖尿病的治療中的主要臨床益處是抑制肝糖原異生以減少高血糖癥和提高胰島素敏感性；這些作用據(jù)信通過AMP-活化的蛋白激酶(AMPK)活性的二甲雙胍依賴性刺激產(chǎn)生。該作用的基礎(chǔ)是這樣的事實(shí):二甲雙胍和其它雙胍抑制線粒體的呼吸鏈(電子傳遞鏈)的復(fù)合物
I(El-Mir等，J Biol Chem 2000, 275:223-228)。接受二甲雙胍相比于無關(guān)抗糖尿病劑的糖尿病患者的元分析顯示接受二甲雙胍的組群具有更低的癌癥發(fā)病率(Evans等，BMJ2005，330:1304-5 ;Bowker 等，Diabetes Care 2006, 29:254-8)。這已刺激了最近的研究進(jìn)入二甲雙胍作為抗癌劑或預(yù)防劑的用途的領(lǐng)域，許多研究和試驗(yàn)正在進(jìn)行中，參見Gonzalez-Angulo 等，Clin Cancer Res 2010, 16:1695-700。
[0008]發(fā)明概述
本發(fā)明涉及昔洛舍平與線粒體抑制劑例如二甲雙胍(和相關(guān)雙胍苯乙雙胍和丁雙胍)或寡霉素的組合，并涉及包含昔洛舍平和線粒體抑制劑的藥物組合物。
[0009]本發(fā)明還涉及昔洛舍平與線粒體抑制劑例如二甲雙胍(和相關(guān)雙胍苯乙雙胍和丁雙胍)或寡霉素的組合以及包含昔洛舍平和線粒體抑制劑的藥物組合物用于治療癌癥，尤其是用于治療如下方面 的用途:癌、白血病、骨髓瘤和淋巴瘤，和在自身免疫、移植醫(yī)學(xué)以及其中期望免疫抑制的其它情況例如皮膚病(特別是銀屑病)、神經(jīng)系統(tǒng)疾病(特別是多發(fā)性硬化)和造血系統(tǒng)疾病(特別是貧血)中實(shí)現(xiàn)免疫抑制；涉及昔洛舍平與線粒體抑制劑例如二甲雙胍(和相關(guān)雙胍苯乙雙胍和丁雙胍)或寡霉素的組合用于制備治療癌癥和實(shí)現(xiàn)免疫抑制的藥物組合物的用途，以及使用昔洛舍平與線粒體抑制劑例如二甲雙胍(和相關(guān)雙胍苯乙雙胍和丁雙胍)或寡霉素的組合或包含昔洛舍平和線粒體抑制劑的藥物組合物治療癌癥和實(shí)現(xiàn)免疫抑制的方法。
[0010]此外，本發(fā)明涉及用于確定癌細(xì)胞是否響應(yīng)于昔洛舍平聯(lián)合治療的方法。
[0011]附圖概述
圖1:二甲雙胍與昔洛舍平在體外協(xié)同殺傷腫瘤細(xì)胞。
[0012]A至H:不同細(xì)胞系。M = 二甲雙胍，S =昔洛舍平
AlamarBlue轉(zhuǎn)化細(xì)胞增殖測定。將細(xì)胞接種在96孔微量滴定板中，以指定的濃度添加化合物。接種細(xì)胞密度在5，000至15，000個(gè)細(xì)胞/孔的范圍內(nèi)，并且憑經(jīng)驗(yàn)確定每一種細(xì)胞類型的接種密度。將板孵育3天，通過AlamarBlue轉(zhuǎn)化測定增殖。將生長針對(duì)未處理對(duì)照進(jìn)行歸一化，并顯示為百分?jǐn)?shù)(Y-軸)。子圖A-E顯示一小組敏感細(xì)胞的抑制曲線，然而子圖F顯示非響應(yīng)HT1080纖維肉瘤細(xì)胞的生長曲線。子圖G-H顯示來自兩個(gè)非癌性正常人成纖維細(xì)胞系(Fib3和Fib4)的結(jié)果。對(duì)于每一個(gè)細(xì)胞系，左子圖顯示二甲雙胍的滴定，垂直虛線指示被選擇來與昔洛舍平一起進(jìn)行共治療的濃度(5 mM)。右子圖顯示單獨(dú)使用昔洛舍平(實(shí)線)和在5 mM 二甲雙胍(虛線)存在下使用昔洛舍平治療的相似生長曲線。以一式三份進(jìn)行所有數(shù)據(jù)點(diǎn)。
[0013]圖2:長期二甲雙胍和昔洛舍平共治療的時(shí)間進(jìn)程。
[0014]分別以10，000個(gè)細(xì)胞/毫升和100，000個(gè)細(xì)胞/毫升的初始細(xì)胞密度接種A549和0PM2細(xì)胞，以指定的濃度添加化合物(M = 二甲雙胍，S =昔洛舍平)。對(duì)于對(duì)照，利用溶劑(0.1% DMS0)孵育細(xì)胞。在指定的時(shí)間點(diǎn)上對(duì)孔取樣以進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)(d =治療的天數(shù))。將細(xì)胞密度繪制在Y軸上(X 1000個(gè)細(xì)胞/毫升)。
[0015]圖3:通過二甲雙胍和昔洛舍平共治療誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
[0016]以100，000個(gè)細(xì)胞/5毫升培養(yǎng)基的密度接種0PM2和RPMI8226細(xì)胞，該培養(yǎng)基添加了化合物。0PM2:5 μΜ昔洛舍平(S)、2 mM 二甲雙胍(M)。RPMI8226:2 μΜ昔洛舍平(S)、l mM 二甲雙胍(M)。無化合物=C (對(duì)照)、昔洛舍平與二甲雙胍的組合=S+M。3天后收獲500 μ I的培養(yǎng)物，洗滌細(xì)胞，用碘化丙啶/膜聯(lián)蛋白V染色以進(jìn)行FACS (熒光激活細(xì)胞分選儀)分析。膜聯(lián)蛋白V是細(xì)胞凋亡標(biāo)記物，使用FITC-偶聯(lián)抗體在FLl-通道上檢測。同時(shí)在FL3-通道上檢測活細(xì)胞的碘化丙啶(PI)排除染色。對(duì)于每一個(gè)測量，PI和膜聯(lián)蛋白V陰性細(xì)胞代表活細(xì)胞群體(白色條塊)。早期凋亡細(xì)胞是PI陰性、膜聯(lián)蛋白V陽性(陰影線條塊)，晚期凋亡細(xì)胞是PI陽性、膜聯(lián)蛋白V陽性(黑色條塊)。將條塊以總細(xì)胞群體的百分?jǐn)?shù)繪制于Y軸上。
[0017]圖4:結(jié)構(gòu)相關(guān)化合物利血平不與二.甲雙胍協(xié)同作用。
[0018]與昔洛舍平⑶平行地，在相似的濃度范圍內(nèi)利用利血平(R)和二甲雙胍(M)共治療6.5和0ΡΜ2細(xì)胞。左子圖顯示單獨(dú)采用利血平對(duì)生長增殖的影響。右子圖顯示在二甲雙胍(5 mM)存在下昔洛舍平(實(shí)線)或利血平(虛線)的生長抑制。以一式三份進(jìn)行所有數(shù)據(jù)點(diǎn)。將生長針對(duì)各自未處理的對(duì)照進(jìn)行歸一化并且以百分?jǐn)?shù)表示(Y軸)。
[0019]圖5:昔洛舍平和二甲雙胍共治療在小鼠同系腫瘤模型中的體內(nèi)作用。
[0020]將6.5 細(xì)胞(Colombi 等，Oncogene 2011, 30:1551-65)注射進(jìn)入免疫相容性(immunecompatible)DBA小鼠的側(cè)腹。當(dāng)腫瘤尺寸達(dá)到100 mm2時(shí),開始藥物治療。將小鼠分成處理組，每天用利用PBS (水平條塊)，昔洛舍平(S，實(shí)心菱形，2 mg/kg體重)、二甲雙胍(M，實(shí)心三角形，250 mg/kg體重)以及二甲雙胍+昔洛舍平(S+M，交叉方塊)腹膜內(nèi)注射，進(jìn)行15天。當(dāng)腫瘤尺寸變得過度時(shí)(第15天)，處死小鼠，切開腫瘤以進(jìn)行測量。(A)顯示在治療過程中測量的腫瘤面積(以_2計(jì))的圖，d =天數(shù)。(B)處死時(shí)小鼠的平均體重(g)。每一個(gè)條塊上方的數(shù)字(η)表示每個(gè)處理組的小鼠數(shù)目。
[0021]圖6:昔洛舍平與雙胍苯乙雙胍協(xié)同作用。
[0022]左子圖:采用二甲雙胍類似物苯乙雙胍⑵處理6.5細(xì)胞3天，通過細(xì)胞增殖測定法測定生長。右子圖:利用昔洛舍平(S)和濃度遞增的苯乙雙胍共處理6.5細(xì)胞。Y軸:相對(duì)于未處理對(duì)照的生長％。
[0023]圖7:第3天測量的二甲雙胍和昔洛舍平的共治療抑制植物凝集素(PHA)-刺激的T細(xì)胞增殖。
[0024]在植物凝集素存在或不存在的情況下培養(yǎng)人外周血白細(xì)胞。在植物凝集素存在的情況下(右子圖)，量增加的昔洛舍平和4 mM二甲雙胍的組合在低濃度的昔洛舍平(虛線)下強(qiáng)烈抑制T細(xì)胞增殖，但在二甲雙胍不存在的情況下(直線)不抑制T細(xì)胞增殖。在PHA刺激不存在下(左子圖)，細(xì)胞存活(如顯微鏡看到的)，但在第3天不增殖。該存活僅最低程度地受昔洛舍平與二甲雙胍的組合的影響(虛線)。
[0025]圖8:昔洛舍平與各種線粒體功能抑制劑協(xié)同作用。
[0026]單獨(dú)地(S，實(shí)線)或在各種線粒體功能抑制劑存在下(虛線)用昔洛舍平滴定鼠
6.5細(xì)胞:(A)魚藤酮50 nM，(B)殺粉蝶菌素A 1.25 nM，(C)表小檗堿0.625 μ M，(D) 2-噻吩甲酰三氟丙酮(TTFA)IOO μΜ, (E)丙二酸鈉30 mM, (F)抗霉素A 5 nM, (G)KCN 5 mM,(H)疊氮化鈉1.25 mM, (I)寡霉素I nM，(J)羰基氰化物-對(duì)三氟甲氧基苯腙(FCCP)IOμΜ, (K)司他夫定200 μ M0在各種化合物存在下細(xì)胞生長，在3天的處理后通過增殖測定法測量生長抑制。以一式三份進(jìn)行每一個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)，將生長針對(duì)設(shè)置在100%的未處理對(duì)照進(jìn)行歸一化。
[0027]圖9:單獨(dú)的線粒體功能的抑制劑未殺傷6.5細(xì)胞。
[0028]各種線粒體靶向劑以用于與昔洛舍平協(xié)同殺傷的濃度對(duì)6.5細(xì)胞的生長的作用。將生長針對(duì)設(shè)置在100%的未處理細(xì)胞(黑色條塊)歸一化。每一個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)以一式三份進(jìn)行，3天后利用增殖測定法測量生長。(A)魚藤酮，(B)殺粉蝶菌素A，(C)表小檗堿，(D) 2-噻吩甲酰三氟丙酮，(E)丙二酸鈉，(F)抗霉素A，(G)KCN, (H)疊氮化鈉，(I)寡霉素，(J)羰基氰化物-對(duì)三氟甲氧基苯腙(FCCP)，(K)司他夫定。
[0029]圖10:昔洛舍平和寡霉素以亞納摩爾濃度對(duì)人癌細(xì)胞的協(xié)同殺傷。
[0030]如圖1中針對(duì)(A)小鼠細(xì)胞系6.5、⑶人前髓細(xì)胞性白血病細(xì)胞系HL60和(C)人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系0ΡΜ2所描述的，進(jìn)行細(xì)胞生長增殖測定(3天)。在寡霉素不存在下(實(shí)線)、在500 ρΜ寡霉素 存在下(點(diǎn)線)和I nM寡霉素(虛線)存在下滴定昔洛舍平⑶。
[0031]圖11:昔洛舍平處理以劑量依賴性方式增加線粒體膜電位。
[0032]利用TMRM(子圖1-6)處理鼠6.5細(xì)胞，此外利用FCCP(子圖2)、0.1 μ M(子圖3) >0.5 μΜ(子圖4)、2 μΜ(子圖5)或5 μ M(子圖6)的昔洛舍平預(yù)孵育，并測量熒光強(qiáng)度。細(xì)線:對(duì)照細(xì)胞或FCCP處理的細(xì)胞的熒光強(qiáng)度(子圖2)。粗線表示額外地利用昔洛舍平預(yù)孵育的細(xì)胞(子圖3-6)。X軸表示熒光引度，Y軸表示相對(duì)細(xì)胞數(shù)目。在FCCP處理后熒光峰值的左移(子圖2)表示膜電位的下降或損失，右移(子圖4-6)表示在昔洛舍平處理后膜電位的升高(比較粗線與細(xì)線)。
[0033]發(fā)明詳述
本發(fā)明涉及昔洛舍平與線粒體抑制劑例如二甲雙胍或寡霉素的組合，并涉及包含昔洛舍平和線粒體抑制劑的藥物組合物。
[0034]本發(fā)明還涉及昔洛舍平與線粒體抑制劑的組合以及包含昔洛舍平和線粒體抑制劑的藥物組合物用于治療癌癥，尤其是用于治療癌、白血病、骨髓瘤和淋巴瘤以及用于治療免疫障礙例如自身免疫的用途。
[0035]〃線粒體抑制劑〃，如本發(fā)明中所理解的，包括減小線粒體活性并且顯示不同程度的線粒體毒性性質(zhì)的化合物。線粒體抑制劑包括所謂的解偶聯(lián)劑(其使線粒體中質(zhì)子的流動(dòng)與ATP合成解偶聯(lián))和抑制劑(其靶向線粒體中電子傳遞鏈(ETC)的不同復(fù)合物例如電子傳遞鏈的復(fù)合物1、復(fù)合物I1、復(fù)合物II1、復(fù)合物IV和復(fù)合物V)。被認(rèn)為是根據(jù)本發(fā)明的線粒體抑制劑的其它化合物是靶向線粒體基因組的線粒體毒性化合物。
[0036]許多廣泛使用的處方藥產(chǎn)生因線粒體毒性而導(dǎo)致的副作用。這些線粒體毒性藥物也被當(dāng)作根據(jù)本發(fā)明的線粒體抑制劑。此類線粒體毒性或線粒體抑制藥物與昔洛舍平協(xié)同作用，并且當(dāng)與昔洛舍平組合時(shí)代表抗癌劑。線粒體毒性藥物已被用于治療極不相同的臨床病況(Cohen 等，Dev Disabil Res Rev 2010, 16:189-199)。
[0037]根據(jù)本發(fā)明的線粒體抑制劑包括:
用于肝或膽囊疾病的具有線粒體副作用的藥物，例如四環(huán)素、布洛芬、胺碘酮、吡洛芬、他莫昔芬、丙戊酸鹽、氯喹、奎尼丁、氯丙嗪、酮康唑、環(huán)孢霉素A、利福平和格列本脲(glyburine)；
電子傳遞鏈復(fù)合物I的抑制劑，例如阿米妥、辣椒素、氟哌啶醇、利培酮、二甲雙胍、丁雙胍、苯乙雙胍、布比卡因、利多卡因、氟烷、丹曲林、苯妥英、安妥明和非諾貝特；
電子傳遞鏈復(fù)合物II的抑制劑，例如環(huán)磷酰胺和酮康唑；
電子傳遞鏈復(fù)合物III的的抑制劑，例如抗霉素A、醋氨酚、異氟烷和七氟烷；
電子傳遞鏈復(fù)合物IV的抑制劑，例如頭孢噻啶、頭孢唑啉和頭孢噻吩；
線粒體DNA合成的抑制劑,例如AZT (itovudidine)、d4T (司他夫定)、ddl (地達(dá)諾新)和ddC (扎昔他賓)；
氧化磷酸化的解偶聯(lián)劑，例如戊烷脒、消炎痛、氟西汀、異丙酚、阿司匹林、丁哌卡因(bubivacaine)、托卡朋和二硝基酹；
通過氧化還原機(jī)制將 分子氧還原成過氧化物的試劑，例如阿霉素、異煙肼、慶大霉素和氟喹諾酮；和
線粒體基因轉(zhuǎn)錄的抑制劑，例如干擾素-α和干擾素-Y。
[0038]二甲雙胍是式(I)的3_( 二氨基甲叉基(methylidene))_l，1-二甲基胍鹽酸鹽
【權(quán)利要求】
1.藥物組合物，其包含昔洛舍平和線粒體抑制劑。
2.權(quán)利要求1的藥物組合物，其包含昔洛舍平和二甲雙胍或苯乙雙胍。
3.權(quán)利要求1的藥物組合物，其包含昔洛舍平和二甲雙胍。
4.權(quán)利要求1的藥物組合物，其包含昔洛舍平和選自魚藤酮、殺粉蝶菌素A、表小檗堿、2-噻吩甲酰三氟丙酮(TTFA)、抗霉素A、寡霉素、羰基氰化物-對(duì)三氟甲氧基苯腙(FCCP)和司他夫定的線粒體抑制劑。
5.權(quán)利要求1的藥物組合物，其包含昔洛舍平和寡霉素。
6.權(quán)利要求1至5的任一項(xiàng)的藥物組合物，其中昔洛舍平與線粒體抑制劑的相對(duì)量(重量 / 重量)為 1:10-1:1，000。
7.權(quán)利要求3的藥物組合物，其中昔洛舍平與二甲雙胍的相對(duì)量(重量/重量)為1:10-1:200。
8.權(quán)利要求5的藥物組合物，其中昔洛舍平與寡霉素的相對(duì)量(重量/重量)為I，000:1-10，000:1。
9.用于治療癌癥或自身免疫性疾病的昔洛舍平與線粒體抑制劑的組合。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的組合，其中所述線粒體抑制劑是二甲雙胍。
11.根據(jù)權(quán)利要求9的組合，其中所述線粒體抑制劑是寡霉素。
12.根據(jù)權(quán)利要 求9的昔洛舍平與線粒體抑制劑的組合，其用于治療癌、肉瘤、白血病、骨髓瘤、淋巴瘤以及神經(jīng)系統(tǒng)的癌癥。
13.根據(jù)權(quán)利要求9的昔洛舍平與線粒體抑制劑的組合，其用于免疫抑制治療。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的昔洛舍平與線粒體抑制劑的組合，其用于治療皮膚、神經(jīng)系統(tǒng)、結(jié)締組織、肌肉、神經(jīng)系統(tǒng)、造血系統(tǒng)、骨和內(nèi)部器官的自身免疫疾病。
15.根據(jù)權(quán)利要求10至14的任一項(xiàng)的昔洛舍平與線粒體抑制劑的組合，其中昔洛舍平和所述線粒體抑制劑為相同藥物組合物的一部分。
16.根據(jù)權(quán)利要求10至14的任一項(xiàng)的昔洛舍平與線粒體抑制劑的組合，其中昔洛舍平和所述線粒體抑制劑在不同的藥物組合物中。
17.昔洛舍平與線粒體抑制劑的組合用于制備藥物組合物的用途，所述藥物組合物用于治療癌癥或自身免疫疾病。
18.用于確定癌細(xì)胞是否對(duì)昔洛舍平治療響應(yīng)的方法，其包括如下步驟: (a)制備單細(xì)胞懸浮液以及在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中培養(yǎng)所述癌細(xì)胞， (b)用昔洛舍平孵育所述癌細(xì)胞， (C)用帶正電荷的熒光染料孵育步驟(b)所述的癌細(xì)胞， (d)測量激發(fā)熒光強(qiáng)度，和 (e)將步驟(d)的測量的熒光強(qiáng)度與單獨(dú)用帶正電荷的熒光染料孵育的癌細(xì)胞的測量的熒光強(qiáng)度相比較， 并且其中利用昔洛舍平預(yù)孵育的癌細(xì)胞的熒光強(qiáng)度的相對(duì)增加表示昔洛舍平的治療響應(yīng)性。
19.用于治療癌癥或自身免疫疾病的方法，其包括以有效地抗所述疾病的量給需要這樣的治療的溫血?jiǎng)游锸┯梦袈迳崞脚c線粒體抑制劑的組合，或包含昔洛舍平和線粒體抑制劑的藥物組合物。
【文檔編號(hào)】A61K31/155GK103442705SQ201280005080
【公開日】2013年12月11日 申請(qǐng)日期:2012年1月9日 優(yōu)先權(quán)日:2011年1月11日
【發(fā)明者】D.本賈明, M.科洛姆比, M.哈爾, C.莫羅尼 申請(qǐng)人:巴塞爾大學(xué)