用于治療神經(jīng)變性tau病的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種用于治療神經(jīng)變性tau病或治療對神經(jīng)變性tau病易感性的絲狀噬菌體，和一種使用噬菌體減少tau蛋白原纖維的形成或使預(yù)形成的tau蛋白原纖維解聚的方法，諸如在遭受神經(jīng)變性tau病的患者中。在本發(fā)明中使用的絲狀噬菌體不展示：(i)哺乳動物細胞內(nèi)化信號；(ii)β-淀粉樣蛋白抗原或針對β-淀粉樣蛋白的抗體，或(iii)tau蛋白抗原或針對tau蛋白的抗體。
【專利說明】用于治療神經(jīng)變性TAU病的方法
【背景技術(shù)】【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及用于治療神經(jīng)變性tau病的治療劑和組合物領(lǐng)域。
_2] 【背景技術(shù)】
[0003]Tau病是一組神經(jīng)變性疾病，其病理學(xué)標志為異常的原纖維/纖絲/纖維形式的微管相關(guān)tau蛋白在腦中的細胞內(nèi)聚集體。這些tau病包括諸如下述疾病:阿爾茨海默病(Alzheimer’ s disease)、肌萎縮性側(cè)索硬化/帕金森綜合征-癡呆復(fù)征(Amyotrophic lateral sclerosis/parkinsonism-dementia complex)、嗜銀顆粒性癡呆(Argyrophilic grain dementia)、皮質(zhì)基底變性(Corticobasal degeneration)、克-雅病(Creutzfeldt-Jakob disease)、拳擊員癡呆(Dementia pugilistica)、伴發(fā)鈣化的彌漫性神經(jīng)原纖維纏結(jié)(Diffuse neurofibrillary tangles with calcification)、唐氏綜合征(Down’ s syndrome)、連鎖于17號染色體的伴帕金森綜合征的額顳葉癡呆(Frontotemporal dementia with parkinsonism linked to chromosomel7)、格-施-沙病(Gerstmann-Straussler-Scheinker disease)、哈勒沃登一施帕茨病(HalIervorden-Spatzdisease)、營養(yǎng)不良性肌強直(Myotonic dystrophy)、C 型尼曼-皮克病(Niemann-Pickdisease type C)、伴發(fā)神經(jīng)原纖維纏結(jié)的非關(guān)島型運動神經(jīng)元病(Non-Guamanian motorneuron disease with neurofibrillary tangles)、皮克病(Pick，s disease)、腦炎后帕金森綜合征(Postencephalitic parkinsonism)、朊病毒蛋白腦淀粉樣蛋白血管病(Prionprotein cerebral amyloid angiopathy)、進行性皮質(zhì)下神經(jīng)膠質(zhì)增生(Progressivesubcortical gliosis)、進行性核上性麻痹(Progressive supranuclear palsy)、亞急性硬化性全腦炎(Subacute sclerosing panencephalitis)、僅纏結(jié)性癡呆(Tangle onlydementia) (Lee等人，2001)。盡管tau病具有多樣的表型和臨床特征，它們都共同存在原纖維/纖絲/纖維形式(例如，扭曲的、直鏈的或成對的螺旋)的不溶性的、過度磷酸化的tau的神經(jīng)原纖維纏結(jié)(NFT)。
[0004]Tau蛋白是由位于17號染色體中的MAPT基因編碼的微管相關(guān)蛋白，它作為可溶性磷酸化蛋白存在于神經(jīng)元中，參與穩(wěn)定化和促進微管的聚合。Tau的異常過度磷酸化(如在神經(jīng)原纖維纏結(jié)中所見)降低tau蛋白的微管結(jié)合能力，并抑制它的促進微管組裝的能力。
[0005]如Pritchard等人(2011)所綜述的,針對tau病的治療策略包括:(i)tau聚集的小分子抑制劑，諸如吩噻嗪化合物亞甲藍和N3苯并噻唑衍生物，(ii)微管穩(wěn)定劑，諸如泰素(紫杉醇)，(iii)tau免疫療法，(iv)自噬活化劑，諸如雷帕霉素，其用于實現(xiàn)不溶性的和病理性的tau原纖維的清除，和(V)抗氧化劑分子，諸如維生素C和E、谷胱甘肽、泛醌和泛醌衍生物MitoQ。
[0006]絲狀噬菌體是一組結(jié)構(gòu)相關(guān)的病毒，其包含環(huán)狀單鏈DNA基因組。絲狀噬菌體既不是溶解性的也不是致溶解的，并且它們在生產(chǎn)性感染過程中不殺死它們的宿主。感染包含F(xiàn)因子的大腸桿菌(Escherichia coll)的噬菌體統(tǒng)稱為Ff噬菌體。這些噬菌體不感染真核細胞，包括哺乳動物細胞。
[0007]絲狀噬菌體是約1-2微米長(對于Ff噬菌體，僅約I微米長)且直徑為6nm的柔軟的棒狀，在單鏈環(huán)狀DNA基因組核心周圍有蛋白亞基的螺旋外殼。對于Ff家族中的絲狀噬菌體(通過F-菌毛感染大腸桿菌的那些絲狀噬菌體M13、fd和f I)，兩種主要外殼蛋白，即蛋白PlII和主要外殼蛋白PVIII，在所展示的蛋白拷貝數(shù)目上不同。盡管pill以3-5個拷貝存在，發(fā)現(xiàn)PVIII以約3000個拷貝存在。約50個殘基的主要外殼蛋白pVIII亞基主要是α-螺旋，并且該α-螺旋的軸與病毒體的軸形成小角度。蛋白外殼可以以三個面考慮:外表面，由該亞基的N端區(qū)域占據(jù)，富含酸性殘基，所述酸性殘基與周圍溶劑相互作用并且賦予該病毒體低等電點；外殼的內(nèi)部，其包括19個殘基的無極性側(cè)鏈片段，其中蛋白亞基主要彼此之間相互作用；和內(nèi)表面，由該亞基的C端區(qū)域占據(jù)，富含堿性殘基，所述堿性殘基與DNA核心相互作用。
[0008]已經(jīng)將Ff家族的絲狀噬菌體(特別是Μ13)開發(fā)為肽展示系統(tǒng)，其中使用絲狀噬菌體的2種結(jié)構(gòu)蛋白(即ρΙΙΙ(ρ3)蛋白和pVIII蛋白)作為肽的展示支架。已經(jīng)在絲狀噬菌體上展示肽表位，用于主動免疫接種。
[0009]以前已經(jīng)證實，絲狀噬菌體、尤其是M13可以將β -淀粉樣蛋白斑塊(W02006/083795 ;美國專利7，867，487 ;和W02008/011503)和α -突觸核蛋白聚集體(W02010/060073)解聚。在W02007/095616中公開了這樣的絲狀噬菌體:其展示蛋白A作為要向腦遞送的抗體和免疫復(fù)合物的結(jié)合劑
[0010]本文對任何文件的引用無意承認所述文件是相關(guān)的現(xiàn)有技術(shù)，或者認為是關(guān)于本申請的任何權(quán)利要求的專利性的材料。關(guān)于任何文件的內(nèi)容或日期的任何陳述是基于本 申請人:在提交時可獲得的信息，并且不構(gòu)成對這樣的陳述的正確性的承認。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0011]本發(fā)明提供了 用于治療神經(jīng)變性tau病或?qū)ι窠?jīng)變性tau病易感性的絲狀噬菌體、和用于減少tau蛋白原纖維的形成或使預(yù)形成的tau蛋白原纖維解聚的方法。所述方法包括:給有此需要的患者施用絲狀噬菌體，所述絲狀噬菌體不展示:(i)哺乳動物細胞內(nèi)化信號，(?)β_淀粉樣蛋白抗原或針對β_淀粉樣蛋白的抗體，或(iii)tau蛋白抗原或針對tau蛋白的抗體。
[0012]本發(fā)明也提供了藥物組合物，其含有用于治療神經(jīng)變性tau病或?qū)ι窠?jīng)變性tau病易感性的絲狀噬菌體。所述絲狀噬菌體不展示:(i)哺乳動物細胞內(nèi)化信號；(ii) β_淀粉樣蛋白抗原或針對β_淀粉樣蛋白的抗體；或(iii)tau蛋白抗原或針對tau蛋白的抗體。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0013]圖1描繪了在給3XTg小鼠海馬內(nèi)注射WT絲狀噬菌體M13或PBS對照以后，tau斑塊的免疫染色。3XTg小鼠在離前囟點-3.6處的腦切片。
[0014]圖2是得自圖1的結(jié)果的圖，顯示了每個海馬區(qū)域的tau纏結(jié)的計算數(shù)目。
[0015]圖3A-3D顯示了在離前囟點-3.6處，PBS處理過的半球的皮質(zhì)(圖3A和3B)和海馬CA2(圖3C和3D)中的硫代黃素S(ThS)染色的纏結(jié)的定量顯微鏡圖像分析。圖3B和3D分別是圖3A和3B中的帶框區(qū)域的放大視圖。圖3E的圖顯示了 rTg4510+小鼠中的ThS纏結(jié)負荷，其通過被ThS染色的纏結(jié)占據(jù)的面積百分比來測量。
[0016]圖4A和4B顯示了 3XTg小鼠中的ThS染色的斑塊的定量圖像分析。圖4A是PBS處理過的半球，圖4B是M13噬菌體處理過的半球。圖4C的圖顯示了 ThS染色的斑塊負荷的面積百分比。
[0017]圖5A和5B顯示了在海馬的左(PBS處理過)和右(噬菌體處理過)CAl區(qū)域中的NeuN染色(用小鼠NeuN抗體標記)的定量圖像分析。圖5C的圖顯示了用小鼠NeuN抗體標記的面積百分比。
[0018]圖6顯示了通過醋酸纖維素膜濾器截留測定所測得的M13噬菌體對tau原纖維的解聚。
【具體實施方式】[0019]定義
[0020]為了本說明書和所附權(quán)利要求的目的，應(yīng)用以下定義。
[0021]術(shù)語“患者”、“受試者”和“受體”互換使用。它們包括作為治療性處理的對象的人和其它哺乳動物。
[0022]術(shù)語“tau蛋白抗原”表示人微管相關(guān)tau蛋白的任何部分，例如，6種天然存在的tau蛋白同工型中的任一種(參見Lee等人，2001)，其足以誘導(dǎo)識別并特異性地結(jié)合至少一種tau蛋白同工型的抗體。術(shù)語“針對tau蛋白的抗體”表示，由tau蛋白同工型之一誘導(dǎo)的抗體的抗體結(jié)合部分。
[0023]術(shù)語“神經(jīng)變性tau病(neurodegenerative tauopathy) ”意圖包括，在神經(jīng)病理學(xué)上以異常的tau蛋白纖絲/原纖維/纖維的細胞內(nèi)沉積為特征的神經(jīng)變性疾病或病癥。神經(jīng)變性tau病的非限制性例子包括:阿爾茨海默病、肌萎縮性側(cè)索硬化/帕金森綜合征-癡呆復(fù)征、嗜銀顆粒性癡呆、皮質(zhì)基底變性、克-雅病、拳擊員癡呆、伴發(fā)鈣化的彌漫性神經(jīng)原纖維纏結(jié)、唐氏綜合征、連鎖于17號染色體的伴帕金森綜合征的額顳葉癡呆、格-施-沙病、哈勒沃登-施帕茨病、營養(yǎng)不良性肌強直、C型尼曼-皮克病、伴發(fā)神經(jīng)原纖維纏結(jié)的非關(guān)島型運動神經(jīng)元病、皮克病、腦炎后帕金森綜合征、朊病毒蛋白腦淀粉樣蛋白血管病、進行性皮質(zhì)下神經(jīng)膠質(zhì)增生、進行性核上性麻痹、亞急性硬化性全腦炎和僅纏結(jié)性癡呆。
[0024]就神經(jīng)變性tau病而言，術(shù)語“治療”意圖表示基本上抑制、減慢或逆轉(zhuǎn)神經(jīng)變性tau病的進展，諸如減少或抑制tau蛋白的原纖維/纖絲/纖維的形成，或使預(yù)形成的tau蛋白的原纖維/纖絲/纖維解聚；實質(zhì)上改善神經(jīng)變性tau病的一種或多種臨床癥狀，或基本上阻止神經(jīng)變性tau病的臨床癥狀的出現(xiàn)。
[0025]本文中使用的術(shù)語“抗體”包括多克隆抗體、單克隆抗體、具有多表位特異性的抗體組合物、雙特異性抗體、雙體、或其它抗體和重組抗體的純化制劑?？贵w可以是完整抗體，例如任何同種型(IgG、IgA、IgE、IgM等)的完整抗體，或結(jié)合目標抗原的抗體片段。
[0026]術(shù)語“哺乳動物細胞內(nèi)化信號”表示源自哺乳動物序列的(例如，在野生型絲狀噬菌體中非天然存在的)任何細胞粘著序列，其作為細胞粘著/附著于細胞的結(jié)果而促進內(nèi)在化。已知許多哺乳動物細胞粘著序列，并且包括Arg-Gly-Asp (RGD)細胞粘著序列、得自HIV的Tat肽和包含下述序列的肽:Arg-Glu_Asp (RED), Arg-Lys-Lys (RKK),Leu-Asp-Val(LDV !Humphries,1992), Leu-Leu-Gly(LLG ；Koivunen 等人，2001)，Asp-Gly-Glu-Ala(DGEA ；SEQ ID NO:1), Ile-Arg-Val-Val-Met(IRVVM ；SEQ ID NO:2 ;Kosfeld等人，1993), Pro-His-Ser-Arg-Asp (PHSRN ；SEQ ID NO:3)和 RFYVVMWK (SEQ ID NO:4 ；Kosfeld等人，1993)。已知許多細胞粘著序列(也被稱作細胞附著基序)存在于細胞粘連分子諸如層粘連蛋白(Iaminin)、纖連蛋白(fibronectin)、玻連蛋白(Vitronectin)Jj^維蛋白原(fibrinogen)、血小板反應(yīng)蛋白(thrombospondin)等中。
[0027]術(shù)語“ β -淀粉樣蛋白抗原”表示形成斑塊的“ β -淀粉樣蛋白肽”的任何部分，也被稱作“ β ΑΡ”、“ β A”、“Α β ”或“Α β P”，其源自人淀粉樣蛋白前體蛋白，其誘導(dǎo)β -淀粉樣蛋白抗體的形成?！?β -淀粉樣蛋白抗體”是識別并特異性地結(jié)合天然存在的人A β 1-42肽及其變體和突變體的抗體。
[0028]本文中使用的“藥物組合物”表示本文中所述的一種或多種活性成分與其它化學(xué)成分諸如生理學(xué)適合的載體和賦形劑的制劑。藥物組合物的目的是促進化合物向患者的施用。
[0029]短語“生理上可接受的載體”和“藥學(xué)上可接受的載體”可互換使用，指不對生物體引起顯著刺激并不消除所施用的化合物的生物學(xué)活性和性質(zhì)的載體或稀釋劑。
[0030]術(shù)語“賦形劑”指添加至藥物組合物以進一步促進活性成分施用的惰性物質(zhì)。賦形劑的非限制性例子包括碳酸鈣、磷酸鈣、多種糖和多種類型的淀粉、纖維素衍生物、明膠、植物油和聚乙二醇。
[0031]本文中使用的術(shù)語“野生型絲狀噬菌體”(或與具體絲狀噬菌體諸如Μ13結(jié)合的“野生型”)是指與其在自然界中典型相關(guān)的其它成分分隔開的天然存在的絲狀噬菌體。該術(shù)語還包括商購可得的被表征為“野生型”的絲狀噬菌體。
[0032]本文中使用的術(shù)語“滅活的野生型絲狀噬菌體”(或與具體絲狀噬菌體諸如Μ13結(jié)合的“滅活的野生型”)是指這樣的野生型絲狀噬菌體:其沒有通過重組DNA手段遺傳改變，但是已經(jīng)諸如通過紫外輻照而造成不能復(fù)制。本發(fā)明涵蓋了造成噬菌體不能復(fù)制但是不干擾噬菌體絲狀結(jié)構(gòu)(保持其通過嗅覺途徑滲透入腦中的能力)的任何機制。
[0033]術(shù)語“WT噬菌體”(或與具體絲狀噬菌體諸如Μ13結(jié)合的“WT” )表示野生型絲狀噬菌體和滅活的野生型絲狀噬菌體。
[0034]用于治療的絲狀噬菌體和治療方法
[0035]在一個實施方案中，本發(fā)明提供了用于治療神經(jīng)變性tau病或?qū)ι窠?jīng)變性tau病易感性的絲狀噬菌體和通過給患者施用絲狀噬菌體來減少tau蛋白原纖維的形成或使預(yù)形成的tau蛋白原纖維解聚的方法，其中所 述噬菌體不展示:(i)哺乳動物細胞內(nèi)化信號，(?) β-淀粉樣蛋白抗原或針對β-淀粉樣蛋白的抗體，或(iii) tau蛋白抗原或針對tau蛋白的抗體。在該實施方案的某些方面，所述絲狀噬菌體不在它的表面上展示任何非絲狀噬菌體多肽。
[0036]在某些實施方案中，要治療的神經(jīng)變性tau病選自:肌萎縮性側(cè)索硬化、嗜銀顆粒性癡呆、皮質(zhì)基底變性、克-雅病、拳擊員癡呆、伴發(fā)鈣化的彌漫性神經(jīng)原纖維纏結(jié)、唐氏綜合征、連鎖于17號染色體的伴帕金森綜合征的額顳葉癡呆、格-施-沙病、哈勒沃登-施帕茨病、營養(yǎng)不良性肌強直、C型尼曼-皮克病、伴發(fā)神經(jīng)原纖維纏結(jié)的非關(guān)島型運動神經(jīng)元病、皮克病、腦炎后帕金森綜合征、朊病毒蛋白腦淀粉樣蛋白血管病、進行性皮質(zhì)下神經(jīng)膠質(zhì)增生、進行性核上性麻痹、亞急性硬化性全腦炎和僅纏結(jié)性癡呆。在一個更具體的方面，所述tau病選自:肌萎縮性側(cè)索硬化、嗜銀顆粒性癡呆、皮質(zhì)基底變性、拳擊員癡呆、伴發(fā)鈣化的彌漫性神經(jīng)原纖維纏結(jié)、唐氏綜合征、連鎖于17號染色體的伴帕金森綜合征的額顳葉癡呆、哈勒沃登-施帕茨病、營養(yǎng)不良性肌強直、C型尼曼-皮克病、伴發(fā)神經(jīng)原纖維纏結(jié)的非關(guān)島型運動神經(jīng)元病、皮克病、腦炎后帕金森綜合征、進行性皮質(zhì)下神經(jīng)膠質(zhì)增生、進行性核上性麻痹、亞急性硬化性全腦炎和僅纏結(jié)性癡呆。
[0037]在一個替代實施方案中，要治療的神經(jīng)變性tau病不包括:帕金森病；阿爾茨海默病，包括早發(fā)型阿爾茨海默病、遲發(fā)型阿爾茨海默病和癥狀發(fā)生前的阿爾茨海默??；SAA淀粉樣變性；遺傳性冰島綜合征；年老；多發(fā)性骨髓瘤；和已知影響人類的朊病毒疾病，例如，庫魯病、克-雅病(CJD)、格-施-沙病(GSS)和致死性家族性失眠癥(FFI)，和已知影響動物的朊病毒疾病，例如，羊瘙癢癥和牛海綿狀腦炎(BSE)。
[0038]在另一個實施方案中，要治療的神經(jīng)變性tau病不包括:帕金森??；阿爾茨海默病、克-雅病(CJD)、格-施-沙病(GSS)和其它朊病毒疾病。
[0039]在該實施方案的一個方面，所述噬菌體作為藥學(xué)上可接受的組合物的一部分施用于患者，所述組合物另外包含藥學(xué)上可接受的載體。
[0040]在該實施方案的另一個方面,所述曬菌體是WT曬菌體。在該實施方案的另一個方面，所述噬菌體是野生型噬菌體。
[0041]在一個實施方案中，鼻內(nèi)地施用所述絲狀噬菌體。不受理論的約束， 申請人:認為，鼻內(nèi)給藥允許這些噬菌體穿過血腦屏障。所述噬菌體然后通過噬菌體的細胞內(nèi)降解，以及通過從尿和糞便消除，從而從腦和身體消除，對周圍器官沒有不良作用。
[0042]在另一個實施方案中，將所述絲狀噬菌體直接施用至受試者的腦?！爸苯邮┯弥聊X”包括:注射或輸注進腦本身中，例如，顱內(nèi)給藥，以及注射或輸注進腦脊液中。在該實施方案的一個方面，通過鞘內(nèi)注射或輸注、心室內(nèi)注射或輸注、實質(zhì)內(nèi)注射或輸注、或腦室內(nèi)注射或輸注，進行施用。在更具體的方面，通過實質(zhì)內(nèi)注射、腦室內(nèi)注射、或腦室內(nèi)輸注，進行施用。
[0043]在另一個實施方案中，在本發(fā)明中使用的絲狀噬菌體是WT M13。在一個更具體的實施方案中，在本發(fā)明中使用的絲狀噬菌體是野生型Ml3。
[0044]本文中描述的方法還包括這樣的方法:其中患者被鑒定為需要特別指定的治療。鑒定需要這種治療的患者，可以通過患者或健康護理專業(yè)人員的判斷，并可以是主觀的(例如，看法)或客觀的(例如，可通過試驗或診斷方法測量)。
[0045]藥物纟目合物
[0046]在一個有關(guān)的實施方案中，本發(fā)明提供了用于治療神經(jīng)變性tau病或?qū)ι窠?jīng)變性tau病易感性的藥物組合物(例如，無熱原的)，其包含絲狀噬菌體作為活性成分，所述絲狀噬菌體不展示:⑴哺乳動物細胞內(nèi)化信號；(ii) β -淀粉樣蛋白抗原或針對β -淀粉樣蛋白的抗體，或(iii) tau蛋白抗原或針對tau蛋白的抗體。在該實施方案的某些方面,所述組合物中的絲狀噬菌體不在它的表面上展示任何非絲狀噬菌體多肽。在該實施方案的一個更具體的方面，所述絲狀噬菌體是WT絲狀噬菌體。在該實施方案的另一個更具體的方面，所述絲狀噬菌體是野生型絲狀噬菌體。在該實施方案的另一個具體方面，所述絲狀噬菌體是WT M13噬菌體。在該實施方案的一個更具體的方面，所述絲狀噬菌體是野生型M13噬菌體。
[0047]用于配制和施用藥物的技術(shù)可以參見"Remington' s PharmaceuticalSciences (雷明頓制藥科學(xué))，"Mack Publishing C0.(馬克出版公司)，Easton, PA,最新版，其通過引用并入本文并且在本領(lǐng)域中公知。
[0048]合適的施用途徑可以包括，例如，經(jīng)鼻或胃腸外遞送，包括肌肉內(nèi)的、皮下的和髓內(nèi)的注射，以及直接施用至腦，例如，顱內(nèi)給藥，以及注射或輸注進腦脊液中。在該實施方案的一個方面，通過鞘內(nèi)注射或輸注、室內(nèi)注射或輸注、實質(zhì)內(nèi)注射或輸注、或腦室內(nèi)注射或輸注，進行施用。在更具體的方面，通過實質(zhì)內(nèi)注射、腦室內(nèi)注射、或腦室內(nèi)輸注，進行施用。
[0049]本發(fā)明的藥物組合物可以通過本領(lǐng)域公知的方法制備，例如，借助于常規(guī)混合、溶解、?；?、做糖衣丸、磨細、乳化、包封、截留或凍干過程制備。
[0050]因此，可以以常規(guī)方式，使用一種或多種生理上可接受的載體(包括賦形劑和助劑)，配制根據(jù)本發(fā)明使用的藥物組合物，所述載體促進將活性成分加工成可以在藥學(xué)上使用的制劑。適當?shù)闹苿┤Q于選擇的施用途徑。
[0051]對于注射，本發(fā)明的活性成分可以配制在水溶液中，優(yōu)選地在生理上相容的緩沖液(諸如漢克氏溶液、林格氏溶液或生理鹽水緩沖液)中。對于透粘膜施用，在所述制劑中使用適合要透過的屏障的穿透劑。所述穿透劑在本領(lǐng)域內(nèi)是公知的。
[0052]對于通過鼻吸入施用，根據(jù)本發(fā)明使用的活性成分方便地以氣溶膠噴霧遞送形式，從加壓包裝或噴霧器中借助于合適的推進劑(例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷或二氧化碳)來遞送。鼻腔噴霧劑(其不象在吸入噴霧劑中那樣需要加壓包裝或噴霧器)可以可替換地用于鼻內(nèi)施用。在加壓氣溶膠的情況下，通過提供閥來遞送計量的量，可以確定劑量單元?？梢耘渲圃诜峙淦髦惺褂玫哪z囊和藥盒(例如由明膠制成)，其含有所述化合物和合適的粉末基質(zhì)(諸如乳糖或淀粉)的粉末混合物。
[0053]本文所述的制劑可以配制用于胃腸外給藥或直接施用至腦，例如，通過快速推注或連續(xù)輸注。用于注射的制劑可以以單位劑型呈現(xiàn)，例如，存在于安瓿中或在多劑量容器內(nèi)，任選地具有添加的防腐劑。所述組合物可以是在油性或水性媒介物中的混懸液、溶液或乳液，并且可以含有配制試劑諸如助懸劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑。
[0054]用于胃腸外給藥或直接施用至腦的藥物組合物包括水溶形式的活性制劑的水溶液。另外，可以將活性成分的混懸液制備成適當?shù)挠托曰蚧谒淖⑸浠鞈乙?。合適的親脂溶劑或媒介物包括脂肪油如芝麻油，或合成的脂肪酸酯如油酸乙酯、甘油三酯或脂質(zhì)體。水性注射混懸液可以含有增加該混懸液的粘性的物質(zhì)，諸如羧甲基纖維素鈉、山梨醇或葡聚糖。任選地，所述混懸液還可以含有適當?shù)姆€(wěn)定劑或增加活性成分的溶解度的試劑，以允許制備高度濃縮的溶液。
[0055]可替換地，所述活性成分可以呈粉末形式，以用于在使用前用適當?shù)拿浇槲?例如，無菌的、無熱原的基于水的溶液)構(gòu)建。
[0056]適合在本發(fā)明的方法的背景下使用的藥物組合物包括這樣的組合物:其中含有有效地實現(xiàn)預(yù)期目的的量的活性成分。更具體地，有效量是指有效地治療神經(jīng)變性tau病的活性成分的量。
[0057]治療有效量的確定充分在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力之內(nèi)，特別是根據(jù)本文中提供的詳細公開內(nèi)容。
[0058]可以單獨地調(diào)節(jié)給藥量和間隔，以提供足以治療特定神經(jīng)變性tau病的絲狀噬菌體的腦水平(最小有效濃度，MEC)。MEC隨每種制劑和每種特定神經(jīng)變性tau病、以及疾病的嚴重程度而變化，但是可以由體外數(shù)據(jù)來估測。達到MEC所必需的劑量將取決于個體特征。
[0059]在某些實施方案中，在目標區(qū)域(例如，含有病理性tau聚集體的區(qū)域)中的MEC是約IO9-1O13個絲狀噬菌體顆粒/ml組織。不受理論的約束， 申請人:認為，達到該MEC所需的劑量是約IOic1-1O15個噬菌體顆粒/施用。在一個更具體的實施方案中，在每次施用中的噬菌體的劑量是約IO12-1O15個噬菌體顆粒。
[0060]給藥間隔也可以使用MEC值來確定。應(yīng)該利用這樣的方案來施用制劑:所述方案保持腦水平在治療期間的10-90%的時間、優(yōu)選30-90%的時間和最優(yōu)選50-90%的時間內(nèi)高于MEC。施用次數(shù)隨要治療的疾病的類型和嚴重程度而變化。在某些實施方案中，施用是每月I次，至少到實現(xiàn)病癥的改善。在其它實施方案中，施用是每2月I次、每3月I次、每4月I次、每6月I次或每年I次。
[0061]根據(jù)患者中要治療的神經(jīng)變性tau病的嚴重程度和應(yīng)答性，給藥可以是單次給藥或多次施藥，治療時期持續(xù)數(shù)日至數(shù)周，或直至實現(xiàn)神經(jīng)變性tau病的消減。
[0062]待施用的組合物的量當然應(yīng)該取決于待治療的受試者、痛苦的嚴重程度、處方醫(yī)師的判斷等。
[0063]如果需要的話，在本發(fā)明的方法中使用的組合物可以存在于包裝或分配器裝置(諸如FDA批準的試劑盒)中，其可以含有一個或多個包含活性成分的單位劑型。所述包裝或分配器裝置可以伴有施用說明書。所述包裝或分配器還可以包納與容器結(jié)合的公告，所述公告采用管理藥物的制備、使用或銷售的政府機構(gòu)指定的形式，所述公告反映了所述機構(gòu)對所述組合物的形式或人或獸施用的批準。例如，這樣的公告可以是由美國食品和藥品管理局關(guān)于處方藥物批準的標記，或是批準的產(chǎn)品插頁。也可以制備包含在相容藥用載體中配制的本發(fā)明制劑的組合物，將其放置在適當?shù)娜萜髦?，并且標記用于指定病癥的治療，如同上文更詳細所述那樣。
[0064]現(xiàn)在已經(jīng)一般性地描述了本發(fā)明，通過參考以下實施例將更容易地理解本發(fā)明，所述實施例通過例證來提供，并且無意限制本發(fā)明。
[0065]實施例1
[0066]絲狀噬菌體對轉(zhuǎn)基因小鼠模型中的tau沉積物的活性
[0067]材料和方法
[0068]動盤U這些實驗使用成年小鼠3 X Tg-AD品系(Oddo等人，2003)和rTg4510+小鼠(Santacruz等人,2005)。在Tel-Aviv University的動物設(shè)施中，建立純合的3xTg小鼠和野生型非轉(zhuǎn)基因的(NonTg)小鼠的群體。三元轉(zhuǎn)基因AD小鼠模型(3xTg-AD)具有2個家族性AD相關(guān)的基因突變:突變?nèi)说矸蹣拥鞍浊绑w蛋白基因/早老蛋白I基因(APPkm67cia571w/PS Imi46v)，和tau基因突變(Taup3tllJ。該模型以年齡依賴性的方式發(fā)展伴有認知功能障礙的斑塊和纏結(jié)病理學(xué)。雄性(η = 5)和13個月齡的rTg4510+tau轉(zhuǎn)基因小鼠由EdStern (Bar-1lan University,以色列)惠贈。rTg4510轉(zhuǎn)基因小鼠在皮質(zhì)、邊緣系統(tǒng)和基底神經(jīng)節(jié)中特異性地過表達與FTDP-17連鎖的突變體(P301L)人tau蛋白。該模型的特征在于空間記憶缺失和tau的獨特的64kDa異常地過度磷酸化的4R0N同工型的形成以及和神經(jīng)原纖維纏結(jié)(NFTs)的增加，在5.5個月齡之前在海馬中具有快速進展的神經(jīng)元損失。所有實驗方案得自Tel-Aviv University動物管理和使用委員會的批準，并且根據(jù)慣例動物管理和倫理委員會(Institutional Animal Care and Ethical Committee)指南進行所有動物實驗操作。在12/12光/暗條件下，每個籠子保有5只動物，食品和水可隨意獲取。
[0069]實駘操作:給15-月齡AD3XTg小鼠(η = 4)和13-月齡rTg4510+小鼠(η = 5)同側(cè)地注射2 μ I野生型噬菌體M13(lxl014病毒體/ml)，并對側(cè)地注射0.0lM PBS作為內(nèi)部對照。簡而言之，用氯胺酮(100mg/kg)/賽拉嗪(10mg/kg，腹膜內(nèi))麻醉小鼠，放在置于加溫毬.上的腦功能區(qū)定位器(stereotaxis) (Narishige, Scientific instrument Lab, SRS-5)上。將小鼠固定。使用輕輕的趾掐退縮反射，監(jiān)測鎮(zhèn)靜。通過恒溫器調(diào)節(jié)的加熱墊來提供溫度調(diào)節(jié)，并通過腹部溫度計進行監(jiān)測。剃掉頭的毛，用碘清潔，并用無菌解剖刀切出皮膚切口(對于小鼠，Icm長)，從頭蓋骨的表面除去所有軟組織。將帶有32g針頭的Hamilton注射器放在前囟點處。用為嚙齒動物外科手術(shù)設(shè)計的電池供能的鉆孔機(Fine ScienceTools, Inc.)，貫穿頭蓋骨鉆孔。注意使鉆頭不穿透腦膜或血管。
[0070]按照Franklin 和 Paxinos, 1997 (The Mouse Brain in StereotaxicCoordinates (小鼠腦的腦功能區(qū)定位坐標)，Academic Press)建立的腦功能區(qū)定位坐標是:前囟點-2.5mm ;神經(jīng)間2mm ;背腹2mm。在外科手術(shù)結(jié)束時，施用預(yù)溫熱的含有0.9%鹽水的乳酸鹽化的林格氏溶液的推注(3ml，皮下)，以防止脫水。施用丁丙諾啡(0.1-0.5mg/kg，皮下)1次。施用抗生素注射(四環(huán)素5mg/kg，腹膜內(nèi))，以防止和克服伴隨的和手術(shù)后的感染。
[0071 ] 外科手術(shù)以后，將動物圈養(yǎng)在它們的籠子內(nèi)，食品和水可隨意犾取。I周后，通過暴露于CO2來殺死小鼠。并收集它們的腦，通過浸入4%低聚甲醛中進行固定，隨后進行30%蔗糖冷凍保護，用干燥的氧化氮冷凍，并用低溫恒溫器在首尾方向在冠狀軸切成25 μ un，在-20°C保存在由30%甘油、30%乙二醇、0.1M磷酸鹽緩沖液組成的溶液中，直到為組織學(xué)免疫組織化學(xué)進行處理。
[0072]ThS染色:使用改進的硫代黃素-S (ThS)方法(Sun等人，2002)，評價了噬菌體Ml3治療對tau病理學(xué)的影響。將切片浸入ThS(0.01%，在50%乙醇中)中，在暗處溫育8min，然后浸泡在80%乙醇中2次各10秒，用dH20沖洗并固定。
[0073]免疫組織化學(xué):將腦組織處理成自由漂浮的切片，并用抗-NeuN和抗-tau AT8抗體染色。在含有0.1% Triton X-100，0.05%吐溫20的TBS pH7 (TBS+)中稀釋所有抗體。還給第一抗體補充3%驢血清(TBS++)。使用的第一抗體是小鼠α-神經(jīng)元-特異性的核蛋白；(NeuN) (1: 200 ；Zymed?, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA);已經(jīng)證實，抗-PHF-tau 抗體克隆AT8檢測出在Ser202和Thr205、絲氨酸199和202、以及絲氨酸205和208處雙磷酸化的PHF-tau (I: 250, Innogenetics, Ghent,.比利時)。使用寬范圍的聚合物-HR (準備好使用，Invitrogen, Carlsbad, CA)作為用于光學(xué)顯微術(shù)的第二抗體,并用3,3-二氨基聯(lián)苯胺四鹽酸鹽(DAB
【權(quán)利要求】
1.用于治療神經(jīng)變性tau病或治療對神經(jīng)變性tau病易感性的絲狀噬菌體，其中所述絲狀噬菌體不展示:(i)哺乳動物細胞內(nèi)化信號，(ii) β_淀粉樣蛋白抗原或針對β_淀粉樣蛋白的抗體，或(iii) tau蛋白抗原或針對tau蛋白的抗體，且前提條件是，所述神經(jīng)變性tau病不是:阿爾茨海默病，包括早發(fā)型阿爾茨海默病、遲發(fā)型阿爾茨海默病、癥狀發(fā)生前的阿爾茨海默??；庫魯??；克-雅病(CJD);格-施-沙病(GSS);其它朊病毒疾病或帕金森病。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的絲狀噬菌體，其中所述絲狀噬菌體不在它的表面上展示任何非絲狀噬菌體多肽。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的絲狀噬菌體，所述絲狀噬菌體是野生型絲狀噬菌體。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中的任一項所述的絲狀噬菌體，所述絲狀噬菌體是選自由下述組成的組的絲狀噬菌體:M13，fl和fd噬菌體，及其混合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中的任一項所述的絲狀噬菌體，所述絲狀噬菌體是野生型M13噬菌體。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中的任一項所述的絲狀噬菌體，其中所述神經(jīng)變性tau病選自由下述組成的組:嗜銀顆粒性癡呆、皮質(zhì)基底變性、拳擊員癡呆、伴發(fā)鈣化的彌漫性神經(jīng)原纖維纏結(jié)、唐氏綜合征、連鎖于17號染色體的伴帕金森綜合征的額顳葉癡呆、哈勒沃登-施帕茨病、營養(yǎng)不良性肌強直、C型尼曼-皮克病、伴發(fā)神經(jīng)原纖維纏結(jié)的非關(guān)島型運動神經(jīng)元病、皮克病、腦炎后帕金森綜合征、進行性皮質(zhì)下神經(jīng)膠質(zhì)增生、進行性核上性麻痹、亞急性硬化性全腦炎和僅纏結(jié)性癡呆。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中的任一項所述的絲狀噬菌體，所述絲狀噬菌體被配制成藥物，所述藥物用于直接施用至腦。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-6中的任一項所述的絲狀噬菌體，所述絲狀噬菌體被配制成藥物，所述藥物用于實質(zhì)內(nèi)注射或輸注、腦室內(nèi)注射、注射進鞘內(nèi)間隙中或腦室內(nèi)輸注。
9.用于治療神經(jīng)變性tau病或治療對神經(jīng)變性tau病易感性的藥物組合物，所述藥物組合物包含根據(jù)權(quán)利要求1-8中的任一項所述的絲狀噬菌體和藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑，前提條件是，所述神經(jīng)變性tau病不是:阿爾茨海默病，包括早發(fā)型阿爾茨海默病、遲發(fā)型阿爾茨海默病、癥狀發(fā)生前的阿爾茨海默??；遺傳性冰島綜合征；庫魯??；克-雅病(CJD);格-施-沙病(GSS);其它朊病毒疾病、致死性家族性失眠癥(FFI)或帕金森病。
10.用于減少患者中tau蛋白原纖維的形成或用于使患者中預(yù)形成的tau蛋白原纖維解聚的方法，所述方法包括:給有此需要的患者施用絲狀噬菌體，其中: 所述患者沒有罹患:阿爾茨海默病，包括早發(fā)型阿爾茨海默病、遲發(fā)型阿爾茨海默病、癥狀發(fā)生前的阿爾茨海默?。籗AA淀粉樣變性；遺傳性冰島綜合征；年老；多發(fā)性骨髓瘤；庫魯?。豢?雅病(CJD);格-施-沙病(GSS);其它朊病毒疾病、致死性家族性失眠癥(FFI)或帕金森病，且 所述絲狀噬菌體不展示:(i)哺乳動物細胞內(nèi)化信號，(ii) β_淀粉樣蛋白抗原或針對β-淀粉樣蛋白的抗體，或(iii) tau蛋白抗原或針對tau蛋白的抗體。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述絲狀噬菌體不在它的表面上展示任何非絲狀噬菌體多肽。
12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述絲狀噬菌體是野生型絲狀噬菌體。
13.根據(jù)權(quán)利要求10-12中的任一項所述的方法，其中所述絲狀噬菌體是選自由下述組成的組的絲狀噬菌體:M13，fl和fd噬菌體，及其混合物。
14.根據(jù)權(quán)利要求10-13中的任一項所述的方法，其中所述絲狀噬菌體是野生型M13噬菌體。
15.根據(jù)權(quán)利要求10-14中的任一項所述的方法，其中所述患者罹患神經(jīng)變性tau病或易感神經(jīng)變性tau病,其中所述tau病選自由下述組成的組:嗜銀顆粒性癡呆、皮質(zhì)基底變性、拳擊員癡呆、伴發(fā)鈣化的彌漫性神經(jīng)原纖維纏結(jié)、唐氏綜合征、連鎖于17號染色體的伴帕金森綜合征的額顳葉癡呆、哈勒沃登-施帕茨病、營養(yǎng)不良性肌強直、C型尼曼-皮克病、伴發(fā)神經(jīng)原纖維纏結(jié)的非關(guān)島型運動神經(jīng)元病、皮克病、腦炎后帕金森綜合征、進行性皮質(zhì)下神經(jīng)膠質(zhì)增生、進行性核上性麻痹、亞急性硬化性全腦炎和僅纏結(jié)性癡呆。
16.根據(jù)權(quán)利要求10-15中的任一項所述的方法，其中所述給患者施用是直接施用至腦。
17.根據(jù)權(quán)利要求10-15中的任一項所述的方法，其中所述給患者施用選自:實質(zhì)內(nèi)注射或輸注；腦室內(nèi)注射；注射進鞘內(nèi)間隙中；和腦室內(nèi)的輸注。
18.用于治療患者的神經(jīng)變性tau病的方法，所述神經(jīng)變性tau病不是阿爾茨海默病、克-雅病(CJD)、格-施-沙病(GSS)、其它朊病毒疾病或帕金森病，所述方法包括下述步驟:給有此需要的患者施用藥學(xué)上可接受的組合物，所述組合物包含: (a)絲狀噬菌體，其中所 述絲狀噬菌體不展示:(i)哺乳動物細胞內(nèi)化信號，(ii)β_淀粉樣蛋白抗原或針對β_淀粉樣蛋白的抗體，或(iii)tau蛋白抗原或針對tau蛋白的抗體；和 (b)藥學(xué)上可接受的載體。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中要治療的神經(jīng)變性tau病選自由下述組成的組:嗜銀顆粒性癡呆、皮質(zhì)基底變性、拳擊員癡呆、伴發(fā)鈣化的彌漫性神經(jīng)原纖維纏結(jié)、唐氏綜合征、連鎖于17號染色體的伴帕金森綜合征的額顳葉癡呆、哈勒沃登-施帕茨病、營養(yǎng)不良性肌強直、C型尼曼-皮克病、伴發(fā)神經(jīng)原纖維纏結(jié)的非關(guān)島型運動神經(jīng)元病、皮克病、腦炎后帕金森綜合征、進行性皮質(zhì)下神經(jīng)膠質(zhì)增生、進行性核上性麻痹、亞急性硬化性全腦炎和僅纏結(jié)性癡呆。
20.根據(jù)權(quán)利要求18或19所述的方法，其中所述絲狀噬菌體不在它的表面上展示任何非絲狀噬菌體多肽。
21.根據(jù)權(quán)利要求18或19所述的方法，其中所述絲狀噬菌體是野生型絲狀噬菌體。
22.根據(jù)權(quán)利要求18-21中的任一項所述的方法，其中所述絲狀噬菌體是選自由下述組成的組的絲狀噬菌體:M13，fl和fd噬菌體，及其混合物。
23.根據(jù)權(quán)利要求18-22中的任一項所述的方法，其中所述絲狀噬菌體是滅活的絲狀噬菌體。
24.根據(jù)權(quán)利要求18-23中的任一項所述的方法，其中所述給患者施用是直接施用至腦。
25.根據(jù)權(quán)利要求18-23中的任一項所述的方法，其中所述給患者施用選自:實質(zhì)內(nèi)注射或輸注；腦室內(nèi)注射；注射進鞘內(nèi)間隙中；和腦室內(nèi)的輸注。
【文檔編號】A61P25/28GK103476420SQ201280012629
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2012年3月12日 優(yōu)先權(quán)日:2011年3月11日
【發(fā)明者】貝卡·所羅門 申請人:臺拉維夫大學(xué)拉莫特