低劑量il-2用于治療自身免疫相關病癥或炎性病癥的應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及用于治療自身免疫疾病和炎性疾病的新療法。更具體來說，本發(fā)明涉及使用低劑量白介素-2治療I型糖尿病和其他自身免疫疾病和/或炎性疾病。
【專利說明】低劑量IL-2用于治療自身免疫相關病癥或炎性病癥的應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及新的基于IL-2的人類疾病療法。更具體來說，本發(fā)明涉及人類對象中自身免疫疾病、免疫相關疾病或炎性疾病、包括炎癥的低劑量IL-2療法。
【背景技術】
[0002]在幾乎30年前鑒定出白介素-2 (IL-2) [I]，并且由于其在體外刺激T淋巴細胞的能力，最初被稱為T細胞生長因子。它是報道分子量在約13kda至17kda之間[2]并且等電點為約6至8.7的蛋白質。
[0003]在臨床上，IL-2已被用于在癌癥和傳染病中增強效應子免疫應答[3，4]。它現(xiàn)在被批準用于在人類中治療癌癥。
[0004]在其登記的適應癥之一腎細胞癌(RCC)的輔助治療中，不到10%的患者對治療有響應。IL-2的這種受限的效能現(xiàn)在部分地用下述最新發(fā)現(xiàn)來解釋，即IL-2也在調節(jié)T細胞(Treg)的外周存活和抑制性功能中發(fā)揮重要作用[5，6]，所述調節(jié)T細胞已知抑制抗腫瘤效應子應答。
[0005]事實上，在效應T細胞(Teff)和Treg兩者的免疫應答期間，IL-2/IL-2受體(IL-2R)信號傳導是重要 的。一方面，大范圍IL-2R信號傳導，對于表現(xiàn)出增強功能活性的終端分化的短壽命Teff細胞的發(fā)育以及引發(fā)正確的T細胞記憶來說是必需的[7]。另一方面，IL-2/IL-2R信號傳導對于Treg發(fā)育和體內穩(wěn)態(tài)來說是必不可少的，正如由IL-2敲除小鼠缺乏Treg這一事實所顯示的。值得注意的是，IL-2或IL-2R缺陷小鼠能夠增強效應子免疫應答，正如由它們發(fā)生嚴重的T-細胞介導的自身免疫疾病(AID)所明顯證實的。
[0006]IL-2信號傳導異常的這些不同結果，目前用IL-2/IL-2R信號傳導的定量和定性差異兩者調節(jié)Treg和Teff這一事實來解釋。Treg顯得需要低的IL-2/IL-2R信號傳導閾值來支持其發(fā)育和外周穩(wěn)態(tài)[6]。已顯示，IL-2給藥在小鼠和人類中引起Treg的顯著擴增和活化[3，4，8]。
[0007]目前，IL-2繼續(xù)被專門用于癌癥免疫療法，并且在人類自身免疫疾病或更廣義來說由不想要的免疫應答引起的人類疾病中的應用，尚未被研究。這是由于與這樣的治療相關的、認識到的和預計的風險。事實上，IL-2刺激Teff的能力帶有活化剛好介導所述疾病的效應T細胞而使疾病加重的風險。
[0008]發(fā)明概述
[0009]本發(fā)明的目的涉及一種用于在人類對象中減少或阻止不想要的免疫應答的方法，所述方法包括向所述對象給藥能夠有效刺激調節(jié)T淋巴細胞(Treg)而基本上不誘導效應T淋巴細胞(Teff)的量的白介素-2 (IL-2)。
[0010]本發(fā)明的另一個目的涉及一種用于在人類對象中減少或阻止不想要的免疫應答的方法，所述方法包括向所述對象給藥能夠有效刺激調節(jié)T淋巴細胞(Treg)而基本上不誘導與IL-2相關的副作用的量的白介素-2 (IL-2)。[0011]本發(fā)明的另一個目的涉及一種用于在人類對象中減少或阻止不想要的免疫應答的方法，所述方法包括向所述對象給藥能夠有效刺激調節(jié)T淋巴細胞(Treg)而基本上不誘導效應T淋巴細胞(Teff)和與IL-2相關的副作用的量的白介素-2 (IL-2)。
[0012]本發(fā)明的另一個目的涉及一種用于在人類對象中減少或阻止不想要的免疫應答的方法，所述方法包括向所述對象給藥能夠在所述對象中有效地使調節(jié)T淋巴細胞(Treg)與效應T淋巴細胞(Teff)之間的平衡(或比率)(Treg/Teff平衡)朝向Treg移動的量的白介素 ~2 (IL-2)。
[0013]本發(fā)明的另一個目的涉及一種用于在人類對象中減少或阻止不想要的免疫應答的方法，所述方法包括向所述對象給藥能夠有效地提高所述對象中調節(jié)T淋巴細胞(Treg)與效應T淋巴細胞(Teff)之間的平衡(或比率)的量的白介素-2 (IL-2)。
[0014]本發(fā)明提出了新的基于IL-2的療法。本發(fā)明第一次顯示出，IL-2可以用作通過特異性Treg擴增/活化起作用的一類新的免疫調節(jié)和抗炎性藥物。
[0015]本發(fā)明的另一個目的涉及一種用于在人類對象中治療自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥的方法，所述方法包括向所述對象給藥能夠在所述對象中有效地使調節(jié)T淋巴細胞(Treg)與效應T淋巴細胞(Teff)之間的平衡(Treg/Teff平衡)朝向Treg移動的量的白介素-2 (IL-2)。
[0016]本發(fā)明的另一個目的涉及一種用于在人類對象中治療自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥的方法，所述方法包括向所述對象給藥能夠有效地刺激調節(jié)T淋巴細胞(Treg)而基本上不誘導效應T淋巴細胞(Teff)和/或有效地降低炎癥的量的白介素_2(IL-2)。
[0017]本發(fā)明可用于這 些病癥的治愈性或預防性治療。更具體來說，本發(fā)明的方法在對象中阻止自身免疫、免疫相關或炎性病癥的發(fā)生或發(fā)展。
[0018]IL-2通常被重復地給藥。
[0019]根據(jù)權利要求1，白介素-2在治療自身免疫、免疫相關或炎性病癥中的應用，其中它以約0.05至約2百萬國際單位(MIU)/m2/天的劑量，優(yōu)選以約0.1或0.2至約IMUI/m2/天或低于約3.5MIU/天的劑量給藥。
[0020]在優(yōu)選實施方式中，它以約3MIU/天的劑量或以低于約2MIU/天的劑量，優(yōu)選以約0.1MIU至約2MIU/天之間、優(yōu)選約0.3MIU至約IMIU/天之間的劑量給藥。
[0021]所述治療優(yōu)選地可以至少包含第一療程，在所述第一療程中白介素-2在至少連續(xù)3天期間、優(yōu)選連續(xù)3至7天期間、還優(yōu)選連續(xù)4至5天期間每日一次給藥。優(yōu)選地，隨后在2至4周后進行維持劑量給藥。所述維持劑量能每周一次或每月一次或兩次給藥。
[0022]在優(yōu)選實施方式中，所述治療至少包含第一療程，在所述第一療程中，在至少連續(xù)3天期間、優(yōu)選連續(xù)3至7天期間、還優(yōu)選連續(xù)4至5天期間每日一次給藥劑量為約0.2MUI/Hi2的白介素-2，并在I至3周后進行約0.2MUI/m2的維持劑量給藥，所述維持劑量能每I至3周重復給藥。在優(yōu)選情況下，所述對象是成人，當每日劑量為0.2MUI/m2時其被給藥約0.3MUI。
[0023]在另一種優(yōu)選實施方式中，所述治療至少包含第一療程，在所述第一療程中，在至少連續(xù)3天期間、優(yōu)選連續(xù)3至7天期間、還優(yōu)選連續(xù)4至5天期間每日一次給藥劑量為約0.6MUI/m2的白介素_2，并在2至4周后進行約0.6MUI/m2的維持劑量給藥，所述維持劑量能每2至4周重復給藥。在優(yōu)選情況下，所述對象是成人，當每日劑量為0.6MUI/m2時其被給藥約1ΜΠ。
[0024]在另一種優(yōu)選實施方式中，所述治療至少包含第一療程，在所述第一療程中，在至少連續(xù)3天期間、優(yōu)選連續(xù)3至7天期間、還更優(yōu)選連續(xù)4至5天期間每日一次給藥劑量為約1.8MUI/m2的白介素-2，并在約I至2個月后進行約1.8MUI/m2的維持劑量給藥，所述維持劑量能每I至2個月重復給藥。在優(yōu)選情況下，所述對象是成人，當每日劑量為1.8MUI/m2時其被給藥約3MUI。
[0025]一般來說，IL-2優(yōu)選以D/10至20父0、優(yōu)選地0/5至IOXD的劑量給藥，其中D是在Treg中啟動⑶25表達的上調而不誘導Treg擴增的最低劑量。優(yōu)選地，⑶25表達的上調為至少33%、優(yōu)選地至少50%。
[0026]本發(fā)明在人類對象中刺激調節(jié)T淋巴細胞(Treg)而基本上不誘導效應T淋巴細胞(Teff )。本發(fā)明的方法能夠在所述對象中增加Treg/Teff平衡或增加強力抑制性Treg細胞群體數(shù)量。
[0027]IL-2還被給藥用于在人類對象中減輕或預防炎癥。
[0028]本發(fā)明可用于治療或預防與不想要的免疫應答相關或由其引起的任何病征。它特別適用于治療炎癥、免疫相關或自身免疫疾病，包括但不限于HCV相關脈管炎、眼色素層炎、肌炎、I型糖尿病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、系統(tǒng)性脈管炎、銀屑病、過敏癥、哮喘、克隆病、多發(fā)性硬化癥、類風濕性關節(jié)炎、動脈粥樣硬化、自身免疫性甲狀腺病、神經退行性疾病、阿茲海默病、移植物抗宿主疾病、自發(fā)性流產和同種異體移植排斥。
[0029]本發(fā)明的另一 個主題是一種用于確定在使用IL-2治療的患有自身免疫、免疫相關或炎性病癥的患者中IL-2治療方案或劑量是否必須修改的方法，所述方法包括監(jiān)測Treg的量和/或Treg中CD25的表達水平，其中Treg的量和/或Treg中CD25的表達水平低于對照值意味著要提高IL-2的劑量。
[0030]圖例說明
[0031]圖1:低劑量IL-2對HCV相關的自身免疫性脈管炎的生物標志物的影響
[0032]示出了 HCV病毒載量(圖A)、冷球蛋白(圖B)和C4補體血清水平(圖C)隨時間過程的變化。數(shù)據(jù)被表示成平均值土標準誤差(n=10，*:P<0.05，**:P<0.01，*#:P<0.001)。
[0033]圖2:低劑量IL-2對淋巴細胞亞群的影響
[0034]示出了CD4+T 細胞中的 CD4+CD25 高 CD127-Foxp3+ 和 CD8+T 細胞中的⑶8+CD25+Foxp3+的百分率(圖A)、總體Treg/Teff比率(圖B)、CD19+總B細胞和邊緣區(qū)B細胞的絕對數(shù)量(圖C)以及NK細胞和CD56toight NK細胞的絕對數(shù)量(圖D)隨時間過程的變化。數(shù)據(jù)被表示成平均值土標準誤差(n=10，*:P<0.05，#P〈0.01，:P<0.001)。
[0035]圖3.通過流式細胞術對⑶4+Treg進行表型表征。示出了用于鑒定⑶3+⑶4+T子集的代表性淋巴細胞門(gate)。在CD3+CD4+T細胞中，Treg被鑒定為CD25*CD127_FoxP3+細胞。
[0036]圖4.Treg細胞在IL_2治療下的HCV相關自身免疫性脈管炎患者中的抑制活性
[0037]測定FACS純化的Treg在同種異體刺激下，在不同比例(1/1至1/8)下抑制自身效應T細胞增殖的能力。結果用cpm表示。示出的實驗代表4。
[0038]圖5.通過流式細胞術對⑶8+Treg進行表型表征。示出了用于鑒定⑶3+⑶8+Treg的代表性淋巴細胞門。在⑶3+⑶8+T細胞中，Treg被鑒定為⑶25+FoxP3+細胞。
[0039]圖6.通過流式細胞術對⑶19+B細胞子集進行表征
[0040]B細胞子集群體被定義為未接觸抗原的細胞(IgD+⑶27_)、記憶細胞(IgDTD27+)、邊緣區(qū)細胞(IgD+CD27+)。
[0041]圖7:通過PBMC的轉錄組學分析揭示出低劑量IL-2誘導炎性的整體降低
[0042]IL-2治療之前和之后的分級聚類(圖A)突顯出主要影響B(tài)細胞相關基因和前炎性基因的基因下調。數(shù)據(jù)挖掘鑒定出NFKB途徑是前炎性應答降低的中心(圖B)。在IL-2治療的患者中，下調的基因用紅色框表示。轉錄特征區(qū)中存在的基因(圖A)用實心圓框示意表示。2個基因產物之間的轉錄后活化(例如通過磷酸化、切斷等)用尖銳的箭頭表示，并且實心箭頭表示直接轉錄活化。虛線箭頭表示間接信號傳導。
[0043]表(圖C)示出了這些數(shù)據(jù)的ICA的結果。示出了在IL-2治療組中上調或下調特征的數(shù)量，所述特征對于與炎性、免疫應答和自身免疫疾病(I型糖尿病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、自身免疫性甲狀腺病)、移植(移植物抗宿主疾病和同種異體移植排斥)或炎性感染相關的疾病(美洲錐蟲病、利什曼病、幽門螺旋桿菌感染、瘧疾、變形蟲病、志賀氏菌病，其都以高度炎癥為特征)相關的GO術語和KEGG途徑來說顯著富集。作為對照，將同樣數(shù)量的隨機挑取的GO術語和細胞周期相關GO術語及對照病理一起，進行試驗。對于每個GO術語或KEGG途徑來說，Khi2檢驗的P-值指示與總體上調(2527)或下調的(3429)特征相比，上調或下調的特征的可能的富集偏倚。
[0044]圖8:低劑量IL-2在I型糖尿病患者中誘導Treg。
[0045]圖8示出了在用0. 33、I或3MUI/天的IL-2 (Proleukin?)給藥5天的患者中的Treg/TCD4比率。在不同劑量下Treg增加峰值相當相似，但是效應的持續(xù)時間是劑量依賴性的，并為確定維持治療的時間安排提供了信息(即劑量越低，維持注射之間的延遲越短)。
[0046]圖9:低劑量IL-2不降低C-肽生產。
[0047]圖9A示出了在用IL-2(Proleukin?.)給藥5天的患者中的Treg/TCD4比率。圖9B示出了在同一患者中，在IL-2給藥之前和之后血清C-肽的濃度。在治療期間存在Treg的增加，其與2個月時C-肽生產的增加相關聯(lián)。
[0048]發(fā)明詳述
[0049]本發(fā)明第一次出人意料地顯示，在人類自身免疫患者中通過低劑量IL-2免疫療法可以在體內擴增非常強的抑制性Treg而不擴增Teff，也沒有不利事件發(fā)生。
[0050]IL-2被專門用于癌癥免疫治療，并且尚未在人類中在人自身免疫疾病中被單獨研究。事實上，IL-2刺激Teff的能力帶有激活剛好介導自身免疫的效應T細胞的風險。在這里，我們示出了 IL-2可以在誘導Treg而不誘導Teff的條件下使用的生物學證據(jù)，其與顯示出沒有觀察到與免疫激活相關的不利事件的臨床證據(jù)相一致。根據(jù)本發(fā)明，IL-2明顯使Treg/Teff平衡向有利于Treg的方向傾斜，正如也由IL-2療法期間炎性環(huán)境的總體降低所支持的。
[0051 ] 在HCV相關患者的第一個試驗中，本發(fā)明人顯示，低劑量IL-2耐受良好，誘導Treg細胞的急劇和選擇性的增加，并在80%的患者中引起臨床改善。
[0052]使用5天的1.5MIU/天的療程治療，在所有患者中觀察到Treg的明顯增加(增加
2倍)，并且沒有副作用。在另外的5天的3MIU/天的療程后，觀察到Treg的進一步增加。[0053]我們的結果顯示，所述治療耐受良好，并且粒細胞、紅細胞或肝臟酶系沒有明顯變化。此外，在1.5MIU/天的劑量下，沒有觀察到諸如虛弱、注射位點處的短暫局部反應、流感樣綜合征、肌肉痛或高血壓的副作用。
[0054]重要的是，在整個治療和跟蹤期間，沒有出現(xiàn)指示病理性T細胞活化的生物學或臨床征兆。
[0055]5天的1.5M IU/天的療程，代表了到目前為止出于在人類中誘導Treg目的的具有已證明的效能和安全性的最低IL-2劑量。
[0056]此外，本發(fā)明第一次揭示了 IL-2的顯著的抗炎活性。我們的無監(jiān)督轉錄組分析顯示出與許多自身免疫疾病和炎性疾病以及免疫相關疾病例如移植物抗宿主疾病和同種異體移植排斥相關的特征/途徑的清楚的下調。通過這項顯示出可以在人類中使用IL-2來刺激Treg而不刺激Teff的研究，本發(fā)明人提出低劑量IL-2治療將深刻地改變所有這些疾病的預防和治療模式。
[0057]本發(fā)明人進一步在另一種自身免疫疾病即I型糖尿病中試驗了低劑量IL-2，從而證實了低劑量IL-2在治療自身免疫、免疫相關或炎性病癥中的重要性。
[0058]因此，本發(fā)明提供了使用IL-2治療自身免疫、免疫相關或炎性病癥的新的治療方法。本發(fā)明公開了 IL-2在低劑量下，能夠在患有自身免疫、免疫相關或炎性病癥的對象中有效地活化或擴增抑制性Treg細胞群體,而基本上不活化效應T細胞。
[0059]對象是任何人類患者，不論其年齡或性別。在特定實施方式中，患者可以是兒童或青少年。
[0060]白介素-2 (IL-2)
[0061 ] 在本發(fā)明的情形中，術語“ IL-2”是指任何來源的IL-2，包括哺乳動物來源例如人類、小鼠、大鼠、靈長動物和豬，并且可以是天然的或通過重組或合成技術獲得的，包括通過微生物宿主生產的重組IL-2多肽。IL-2可以是或包含天然多肽序列，或者可以是天然IL-2多肽的活性變體。優(yōu)選地，IL-2多肽或活性變體源自于人類來源，并包括重組人類IL-2，特別是由微生物宿主生產的重組人類IL-2。
[0062]IL-2的活性變體已在文獻中公開。天然IL-2的變體可以是其片段、類似物和衍生物?！捌巍笔侵钢话暾嚯男蛄械囊徊糠值亩嚯??！邦愃莆铩笔侵赴瑤в幸粋€或多個氨基酸置換、插入或缺失的天然多肽序列的多肽。突變蛋白和假肽是類似物的具體實例。“衍生物”包括任何修飾的天然IL-2多肽或其片段或類似物，例如糖基化、磷酸化、與另一種多肽或分子融合、聚合等，或通過化學或酶改性或添加，以改進IL-2的性質(例如穩(wěn)定性、特異性等)。參比IL-2多肽的活性變體一般與參比IL-2多肽的氨基酸序列具有至少75%、優(yōu)選地至少85%、更優(yōu)選地至少90%的氨基酸序列同一性。
[0063]用于確定變體IL-2多肽是否有活性的方法在本領域中是可用的，并且在本發(fā)明中具體描述。活性變體最優(yōu)選地是活化Treg的變體。
[0064]IL-2 變體的實例公開在例如 EP109748、EP136489、US4, 752，585、EP200280 或EP118, 617 中。
[0065]優(yōu)選地，我們使用重組IL-2，即通過重組DNA技術制備的IL_2[9]。用于表達編碼IL-2的重組DNA的宿主生物體可以是原核生物(細菌例如大腸桿菌)或真核生物(例如酵母、真菌、植物細胞或哺乳動物細胞)。用于生產IL-2的方法已被描述在例如US4，656，132、US4, 748，234、US4, 530，787 或 US4, 748，234 中，在此引為參考。
[0066]在優(yōu)選實施方式中，本發(fā)明使用人類來源的IL-2或其活性變體，更優(yōu)選地是通過重組生產的。人類IL-2的核苷酸和氨基酸序列分別公開在例如Genbank ref3558或P60568中。本發(fā)明更優(yōu)選地使用人類IL-2。
[0067]在本發(fā)明中使用的IL-2熒光處于基本上純的形式，例如純度為95%或以上，更優(yōu)選地96、97、98或99%純。
[0068]對于在本發(fā)明中的使用來說，IL-2通常不與Teff抑制性藥劑組合或聯(lián)合給藥。然而，盡管不是優(yōu)選的或要求的，但可以考慮藥物組合。
[0069]IL-2可以以單體蛋白或多體蛋白形式使用。
[0070]IL-2是可商購的，包括用于制藥應用的，它被批準在人類患者中使用。適合的商品化形式包括例如:
[0071]- ProlcLikiii K.，_ ?種重組的人類 IL-2 組合物，
[0072]- Aldesleukin?, —種在大腸桿菌中生產的非糖基化的des-丙氨酰-1，絲氨酸-125人類白介素_2，
[0073]- Roncoleukin?,在酵母中生產的重組人類IL-2。
[0074]白介素-2可以單獨或與任何其他治療活性劑組合使用。
[0075]在優(yōu)選實施方 式中，當用于預防或治療I型糖尿病時，IL-2不與雷帕霉素組合給藥。
[0076]調節(jié)T細朐
[0077]調節(jié)T細胞是具有免疫抑制性活性的T淋巴細胞。天然Treg是特征為⑶4+⑶25+Foxp3+的細胞。表現(xiàn)出Treg遺傳缺陷的人類和小鼠發(fā)生多種T-細胞介導的器官特異性自身免疫疾病。Treg的定量或定性缺乏已在許多人類自身免疫疾病中描述，包括系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)U型糖尿病、多發(fā)性硬化癥、眼色素層炎和肌炎。相反，在這些疾病的大多數(shù)動物模型中，Treg的添加/恢復引起臨床改善。
[0078]Treg也在炎性疾病的控制中發(fā)揮重要作用，盡管它們在這樣的疾病中的作用方式尚未被很好地理解。事實上，在大多數(shù)炎性疾病中，耗盡Treg使疾病惡化，而添加Treg使疾病減輕。這顯示在例如動脈粥樣硬化的情形中。盡管這種疾病最初不是炎性疾病，但它的發(fā)展涉及炎性組分/回路。在自發(fā)發(fā)生動脈粥樣硬化的載脂蛋白E (ApoE)缺陷小鼠中，耗盡Treg使斑塊形成明顯加重，而注射多克隆Treg明顯改善這種疾病。
[0079]大多數(shù)Treg是⑶4+細胞，盡管也存在具有抑制活性的⑶8+Foxp3+T淋巴細胞的少見群體。
[0080]效應T細朐
[0081]在本申請的情形中，“效應T細胞”(或“Teff”)是指Treg之外的常規(guī)T淋巴細胞(在文獻中有時也稱為Tconv)，其表達一種或多種T細胞受體(TCR)并執(zhí)行效應細胞功能(例如細胞毒性活性、細胞因子分泌、抗自身識別等)。根據(jù)本發(fā)明，人類Teff的主要群體包括⑶4+T輔助性淋巴細胞(例如ThO、Thl、Thl7)和⑶4+或⑶8+細胞毒性T淋巴細胞，并且它們可以對自身或非自身抗原具有特異性。
[0082]在自身免疫疾病的具體情形中，TefT細胞包括負責或參與所述疾病的T細胞群體。例如，這樣的T細胞群體包括識別自身抗原例如甲狀腺抗原、關節(jié)抗原、β_郎格罕氏胰島抗原等的T淋巴細胞。在GVHD疾病中，Teff細胞包括來自于移植物的T淋巴細胞。
[0083]Treg的詵擇件擴增
[0084]在本發(fā)明的情形中，Treg的刺激(或誘導或活化或擴增)是指在患者中，在數(shù)量和活性方面Treg細胞相對于Teff的比例的任何增加，其通過抑制性測定法或通過反映出Treg活性的分子例如⑶25、即IL-2受體的α鏈的表達來測試。所述比例的增加優(yōu)選地為與治療前水平相比增加至少20%，更優(yōu)選地至少40%，甚至更優(yōu)選地至少60%。在特定且優(yōu)選的實施方式中，刺激是指Treg/Teff平衡向Treg方向移動或Treg/Teff比率的增加。
[0085]本發(fā)明的本質方面事實上在于在患有自身免疫、免疫相關或炎性病癥的人類患者中，在體內刺激Treg而基本上不誘導Teff的能力。
[0086]Treg的誘導(或活化或擴增)可以按照實施例中所公開的，通過例如測量來自于治療對象的樣品中Treg的數(shù)量(例如基于⑶25、FoxP3……的表達)和/或Treg的活性來測量。不存在Teff的顯著誘導(或活化或擴增)也可以按照實施例中所公開的，通過例如測量來自于治療對象的樣品中Teff的數(shù)量和/或Teff的活性來測量。優(yōu)選地，不存在顯著誘導表明目標TefT細胞群體沒有獲得活化標志物例如⑶25、⑶69和/或HLA-DR，或者正如通過全轉錄組分析所評估的。用于檢測、測量和定量Treg和TefT細胞的詳細方法本身在本領域中是公知的，并且某些公開在實施例中。
[0087]Treg的刺激,可以通過患者中Treg計數(shù)的增加、通常增加至少10%,或通過活化標志物例如CD25的表達強度的增加來測量。不存在TefT誘導，通常意味著作為治療的結果所述對象中Teff細胞群體沒有增加超過10%。
[0088]Treg的刺激和 不存在Teff的顯著誘導，優(yōu)選地通過治療對象中Treg/Teff的比率或平衡的測量來評估。這種平衡根據(jù)例如在來自于對象的樣品中Treg的數(shù)量和Teff的數(shù)量來計算。如實施例中所示，在治療患者中，這樣的平衡通常增加至少20%，更優(yōu)選地至少30%、40% 或 60%。
[0089]人類對象中Treg的基線百分數(shù)，即Treg/CD4+Teff的比率，為約4.6±0.6%(患有自身免疫疾病的患者中的基線％可能低得多，如實施例1中所示，其中患有HCV誘導的自身免疫性脈管炎的患者僅具有3.6%±0.23的基線百分數(shù)水平，盡管依賴于測量的技術情況，這些數(shù)量在不同實驗室中可能變化)。
[0090]在這種應用中呈現(xiàn)的結果表明，在使用1.5MIU/天的I個療程后，Treg的基線％獲得2倍(100%)增加，在繼續(xù)治療后其可能進一步擴大。根據(jù)給藥方案，已經獲得超過300%的增加。在患有TlD的患者中，在15天的療程后觀察到類似的2倍增加，不論使用何種劑量(0.33、I 和 3MIU/天)。
[0091]在優(yōu)選實施方式中，方法使對象中Treg/Teff比率增加20%、30%、40%、50%、75%、100%或以上。
[0092]此外，本發(fā)明顯示出不僅⑶4+Treg增加，而且具有⑶8+的Treg稀有種群也增加。
[0093]在特定實施方式中，本發(fā)明增加循環(huán)的CD4+CD25高CD127-FoXp3+Treg。
[0094]在另一種特定實施方式中，本發(fā)明增加循環(huán)的⑶8+CD25SFOXp3+Treg。
[0095]另一個重要方面是擴增的Treg細胞群體是高度抑制性的。事實上，下面呈現(xiàn)的結果顯示，在按照本發(fā)明治療后，對TefT細胞具有強抑制活性的Treg被活化。在我們的研究中，在經典的抑制性測定法中，在1/8的Treg/Teff比例下可以檢測到顯著的抑制活性(>75%)，而來自于未治療的正常個體在1/2至1/4的比例下給出這樣的抑制。
[0096]因此，本發(fā)明允許在患有自身免疫疾病的人類對象中顯著增加Treg，而不顯著改變或活化效應T淋巴細胞。在優(yōu)選實施方式中，本發(fā)明的方法是使對象中的CD25+Foxp3+Treg增加至少30%，并使所述對象中目標Teff的增加低于5%的方法。
[0097]此外，本發(fā)明出人意料地顯示，在優(yōu)選的給藥劑量下，本發(fā)明的基于IL-2的療法基本上不引起動脈高壓、頭痛、惡心、關節(jié)痛、肌肉痛或流感樣綜合征，也沒有如FDA的IL-2產品特征概況(IL-2Summary of Product Charasteristics)中描述的許多其他IL-2的已知副作用。因此，可以在患有免疫相關病癥的人類對象中使用IL-2療法，而基本上不活化Teff細胞，也基本上不誘導與IL-2相關的副作用，同時非常顯著地誘導Treg和抗炎性效應。
[0098]IL-2 劑量
[0099]對于在本發(fā)明中的使用來說，IL-2以有效活化Treg而基本上不活化Teff的劑量給藥。結果是對象中Treg/Teff平衡的急劇增加。
[0100]有效劑量可以由醫(yī)生根據(jù)本申請中包含的信息進行調整。具體來說，利用在患有自身免疫疾病的患者中IL-2可以在活化Treg并且基本上不活化Teff的條件下給藥這一本發(fā)明的知識，專業(yè)技術人員可能能夠為每位患者和每種狀況調整劑量。
[0101]通常，IL-2以約0.05MIU/m2/天至約2MIU/m2/天、優(yōu)選地0.2至約lMIU/m2/天的劑量給藥。
[0102]因此，給藥的IL-2量優(yōu)選地取決于對象的身體表面積。身體表面積(BSA)是人體的測量或計算表面積。
[0103]已經發(fā)表了不經直`接測量而獲得BSA的各種計算方法:
[0104]Dubois&Dubois公式[18]常用于成年人中:
[0105]
【權利要求】
1.白介素-2在人類對象中治療自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥中的應用，其中以在所述對象中增加調節(jié)T淋巴細胞(Treg)與效應T淋巴細胞(Teff )之間的平衡(Treg/Teff比率)的量給藥白介素_2。
2.權利要求1的白介素-2在治療自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥中的應用，其中以約0.05MIU/m2/天至約2MIU/m2/天、優(yōu)選約0.2MUI/m2/天至約IMUI/m2/天的劑量給藥白介素-2。
3.權利要求1或2的白介素-2在治療自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥中的應用，其中以低于約3.5MIU/天的劑量給藥白介素_2。
4.權利要求3的白介素-2在治療自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥中的應用，其中以約3MIU/天的劑量給藥白介素-2。
5.權利要求3的白介素-2在治療自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥中的應用，其中以低于約2MIU/天的劑量給藥白介素-2 (IL-2)。
6.權利要求5的白介素-2在治療自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥中的應用，其中以約0.05MIU/天至約2MIU/天之間的劑量給藥白介素_2 (IL-2)。
7.權利要求6的白介素-2在治療自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥中的應用，其中以約0.3MIU/天至約IMIU/天之間的劑量給藥白介素-2 (IL-2)。
8.權利要求1至7任一項的白介素-2在治療自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥中的應用，其中IL-2被重復地給藥。
9.權利要求1至8任一項的白介素-2在治療自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥中的應用，其中所述治療至少包含第一療程，在所述第一療程中在至少連續(xù)3天期間、優(yōu)選連續(xù)3至7天期間、還優(yōu)選連續(xù)4至5天期間每日一次給藥白介素_2，并且優(yōu)選在I至4周后進行維持給藥。
10.權利要求1至9任一項的白介素-2在治療自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥中的應用，其中所述治療至少包含第一療程，在所述第一療程中在至少連續(xù)3天期間、優(yōu)選連續(xù)3至7天期間、還優(yōu)選連續(xù)4至5天期間每日一次給藥劑量為約0.2MUI/m2的白介素_2，并且在I至3周后給藥約0.2MUI/m2的維持劑量，所述維持劑量能每I至3周重復。
11.權利要求10的白介素-2在治療自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥中的應用，其中所述對象是成人，當每日劑量為0.2MUI/m2時其被給藥約0.3MUI。
12.權利要求1至9任一項的白介素-2在治療自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥中的應用，其中所述治療至少包含第一療程，在所述第一療程中在至少連續(xù)3天期間、優(yōu)選連續(xù)3至7天期間、還優(yōu)選連續(xù)4至5天期間每日一次給藥劑量為約0.6MUI/m2的白介素_2，并且在約2至4周后給藥約0.6MUI/m2的維持劑量，所述維持劑量能每2至4周重復。
13.權利要求12的白介素-2在治療自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥中的應用，其中所述對象是成人，當每日劑量為0.6MUI/m2時其被給藥約IMUI。
14.權利要求1至4任一項的白介素-2在治療自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥中的應用，其中所述治療至少包含第一療程，在所述第一療程中在至少連續(xù)3天期間、優(yōu)選連續(xù)3至7天期間、還優(yōu)選連續(xù)4至5天期間每日一次給藥劑量為約1.8MUI/m2的白介素_2，并且在約I或2個月后給藥約1.8MUI/m2的維持劑量，所述維持劑量能每I或2個月重復。
15.權利要求14的白介素-2在治療自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥中的應用，其中所述對象是成人，當每日劑量為1.8MUI/m2時其被給藥約3MUI。
16.權利要求1的白介素-2在治療自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥中的應用，其中以D/10至20XD的劑量，優(yōu)選以D/5至IOXD的劑量給藥IL-2，其中D是在Treg中啟動⑶25表達的上調而不誘導Treg擴增的最低劑量。
17.權利要求16的白介素-2在治療自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥中的應用，其中以使⑶25的上調增加至少33%、優(yōu)選增加至少50%的劑量給藥IL-2。
18.權利要求1至17任一項的白介素-2在治療自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥中的應用，其中所述治療是治療性的。
19.權利要求1至17任一項的白介素-2在治療自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥中的應用，其中所述治療是預防性的。
20.權利要求1至17任一項的白介素-2在治療自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥中的應用，其中所述治療阻止所述自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥的發(fā)生或發(fā)展。
21.權利要求1至20任一項的白介素-2在治療自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥中的應用，其中所述病癥選自I型糖尿病、HCV相關脈管炎、眼色素層炎、肌炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、系統(tǒng)性脈管炎、銀屑病、過敏癥、哮喘、克隆病、多發(fā)性硬化癥、類風濕性關節(jié)炎、動脈粥樣硬化、自身免疫性甲狀腺病、自身炎性疾病、神經退行性疾病、阿茲海默病、移植物抗宿主疾病、自發(fā)性流產和同種異體移植排斥。
22.權利要求21的白介素-2在治療或預防自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥中的應用，其中所述病癥是I型糖尿病。
23.權利要求22的白介素-2在治療或預防自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥中的應用，其中所述對象處于發(fā)生I型糖尿病的風險下，并且使用IL-2的治療在所述對象中預防糖尿病的發(fā)作。
24.權利要求22的白介素-2在治療或預防自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥中的應用，其中待治療對象顯示出IL-2生產不足以及殘余的胰島素生產。
25.權利要求21的白介素-2在治療自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥中的應用，其中所述病癥是類風濕性關節(jié)炎。
26.權利要求21的白介素-2在治療自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥中的應用，其中所述病癥是多發(fā)性硬化癥。
27.權利要求21的白介素-2在治療自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥中的應用，其中所述病癥是銀屑病。
28.權利要求21的白介素-2在治療自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥中的應用，其中所述病癥是系統(tǒng)性紅斑狼瘡。
29.權利要求21的白介素-2在治療自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥中的應用，其中所述病癥是阿茲海默病。
30.權利要求1至29任一項的白介素-2在治療自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥中的應用，其中通過注射或通過口、鼻或體表施用來給藥白介素_2。
31.權利要求1至29任一項的白介素-2在治療自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥中的應用，其中通過皮下途徑給藥白介素-2 (IL-2)。
32.權利要求1至31任一項的白介素-2在治療自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥中的應用，其中所述Treg/Teff比率增加至少20%、優(yōu)選增加至少50%、甚至更優(yōu)選增加至少 100%ο
33.權利要求1至31任一項的白介素-2在治療自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥中的應用，其中在不顯著誘導效應T淋巴細胞(Teff)的情況下，調節(jié)T淋巴細胞(Treg)被刺激。
34.權利要求1至33任一項的白介素-2在治療自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥中的應用，其中在不誘導動脈高壓、關節(jié)痛、肌肉痛或流感樣綜合征的情況下，Treg被刺激。
35.權利要求1至34任一項的白介素-2在治療自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥中的應用，其中白介素-2在可藥用載體或賦形劑中被給藥。
36.一種用于確定在使用IL-2治療的患有自身免疫病癥、免疫相關病癥或炎性病癥的患者中IL-2治療方案或劑量是否必須進行修改的方法，所述方法包括監(jiān)測Treg的量和/或Treg中⑶25的表達水平，其中Treg的量和/或Treg中⑶25的表達水平低于對照值意味著要提高IL-2的劑量。`
【文檔編號】A61P37/08GK103732241SQ201280012853
【公開日】2014年4月16日 申請日期:2012年3月9日 優(yōu)先權日:2011年3月11日
【發(fā)明者】大衛(wèi)·克拉茨曼, 大衛(wèi)·薩阿頓, 帕特里斯·卡庫, 米謝勒·羅森瓦吉, 埃利亞內·皮亞焦, 吉爾貝·邦西蒙, 克洛德·貝爾納 申請人:公共事業(yè)救濟局-巴黎醫(yī)院, 巴黎第六大學, 法國國家衛(wèi)生及研究醫(yī)學協(xié)會