用于肺遞送的載體、導(dǎo)入劑及用途
【專利摘要】本發(fā)明通過使用包含GALA或Chol-GALA的脂質(zhì)體提供了能給予優(yōu)異且無先例的肺遷移水平的脂質(zhì)體。本發(fā)明通過使用該脂質(zhì)體進(jìn)一步提供了肺部遞送運(yùn)載體，該運(yùn)載體與現(xiàn)有的運(yùn)載體相比提供了更強(qiáng)的siRNA敲減。
【專利說明】用于肺遞送的載體、導(dǎo)入劑及用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及用于肺遞送的導(dǎo)入劑和載體及其用途。
[0002]相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用
[0003]本申請(qǐng)要求于2011年3月14日提交的第2011-55765號(hào)日本專利申請(qǐng)的優(yōu)先權(quán)(該申請(qǐng)的全部?jī)?nèi)容并入本文作為參考)。
【背景技術(shù)】
[0004]近年來，對(duì)具有在脂質(zhì)體膜的外表面上引入的功能性分子的脂質(zhì)體積極地進(jìn)行了研發(fā)，該脂質(zhì)體用作用于向靶點(diǎn)遞送目標(biāo)物質(zhì)的載體，所述目標(biāo)物質(zhì)例如低分子量藥物、核酸藥物、抗體藥物、肽、蛋白、糖等。在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，積極地進(jìn)行了對(duì)核酸藥物的研究，核酸藥物是步抗體藥物和蛋白藥物后塵的下一代生物藥物。核酸藥物的實(shí)例包括反義核酸、核酶、核酸適配體、誘騙性寡核苷酸和siRNA。盡管核酸藥物的臨床應(yīng)用仍處于其早期階段，但siRNA已經(jīng)特別受到關(guān)注，西方國(guó)家的制藥公司和企業(yè)已經(jīng)進(jìn)行了 siRNA的臨床試驗(yàn)。然而，大多數(shù)這樣的臨床試驗(yàn)限于局部給藥。盡管使用遞送系統(tǒng)進(jìn)行了用于全身給藥的臨床試驗(yàn)，但那些試驗(yàn)僅限于預(yù)期表現(xiàn)出被動(dòng)累積的一些器官，例如肝臟。因此，為了擴(kuò)展由siRNA代表的核酸藥物的應(yīng)用范圍，亟需建立能主動(dòng)靶向的遞送系統(tǒng)。
[0005]已經(jīng)開發(fā)的這樣的遞送系統(tǒng)的實(shí)例包括具有在脂質(zhì)體膜的外表面上引入的親水性聚合物(例如，聚亞烷基二醇，如聚乙二醇)的脂質(zhì)體(參閱專利文獻(xiàn)I和專利文獻(xiàn)2)。關(guān)于這種脂質(zhì)體，由于改善了脂質(zhì)體的血液中滯留性，因此脂質(zhì)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的向性得到改善。此外，已經(jīng)提出了多`功能性包封型納米裝置(MEND)(在下文可以縮寫為“MEND”)，并且該裝置能用作將基因或肽選擇性遞送至特定細(xì)胞內(nèi)的藥物遞送系統(tǒng)。
[0006]此外，已經(jīng)開發(fā)了通過使用與GALA結(jié)合的膽固醇而在脂質(zhì)體膜的外表面上引入GALA所獲得的脂質(zhì)體(參閱非專利文獻(xiàn)I)。當(dāng)脂質(zhì)體經(jīng)歷胞吞作用時(shí)，脂質(zhì)體被包括在核內(nèi)體之內(nèi)，并且當(dāng)核內(nèi)體與溶酶體融合時(shí),核內(nèi)體之內(nèi)的脂質(zhì)體被降解。然而,關(guān)于上述脂質(zhì)體,包封在脂質(zhì)體內(nèi)的物質(zhì)能從核內(nèi)體中逃逸并能在細(xì)胞質(zhì)中釋放。
[0007]GALA是基本由谷氨酸、丙氨酸、亮氨酸和丙氨酸(EALA)的重復(fù)序列的30個(gè)氨基酸殘基形成的寡肽。由Szoka等人的研究小組合成了 GALA(參閱非專利文獻(xiàn)2)，并且迄今為止已對(duì)其進(jìn)行了各種研究。已知雖然GALA在中性pH條件下由于谷氨酸的電排斥而采取無規(guī)卷曲結(jié)構(gòu)，但在酸性條件下通過電排斥的消解，GALA采取與脂質(zhì)膜具有高親和性的α螺旋結(jié)構(gòu)(參閱非專利文獻(xiàn)2)。
[0008]此外，由于當(dāng)用膽固醇(Chol)-結(jié)合的GALA(Chol-GALA)修飾MEND的表面時(shí)，核內(nèi)體膜和MEND脂質(zhì)膜在核內(nèi)體內(nèi)在酸性條件下經(jīng)歷膜融合，導(dǎo)致包封的物質(zhì)釋放入細(xì)胞質(zhì)中，因此GALA已用作用于改善MEND活性的pH應(yīng)答性的核內(nèi)體-逃逸促進(jìn)要素(參閱專利文獻(xiàn)3) ο
[0009]如上所述，盡管GALA已用作用于改善細(xì)胞內(nèi)動(dòng)力學(xué)的功能性要素，但其作為肺部遷移性要素是未知的。[0010]此外，盡管肺部被提及為某些類型的用核內(nèi)體可溶性肽修飾的脂質(zhì)體的靶器官(參閱專利文獻(xiàn)4)，但是所述肽的構(gòu)型與本申請(qǐng)的基本由谷氨酸、丙氨酸、亮氨酸和丙氨酸(EALA)的重復(fù)序列形成的GALA肽的構(gòu)型在很大程度上是不同的。此外，尚未有關(guān)于用特異性遷移至肺部的肽修飾的脂質(zhì)體的記載或建議。
[0011]引用目錄
[0012]專利文獻(xiàn)
[0013]PTL1:JP1-249717A
[0014]PTL2:JP2004-10481A
[0015]PTL3:JP2006-28030A
[0016]PTL4:JP10-506001A
[0017]非專利文獻(xiàn)
[0018]NPLl:T.Kakudo 等人，Biochemistry, 2004;43:5618-5623
[0019]NPL2:N.K.Subbarao 等人，Biochemistry, 1987;26:2964-2972
[0020]發(fā)明概述
[0021]技術(shù)問題
[0022]本發(fā)明的目的為提供了將目的`物質(zhì)特異性遞送至肺部的技術(shù)。
[0023]本發(fā)明的目的還為提供載體，所述載體具有優(yōu)異的貯存穩(wěn)定性和/或在貯存一定時(shí)段之后不聚集或大部分不聚集。
[0024]解決問題的方案
[0025]本發(fā)明人已經(jīng)對(duì)具有使諸如藥物的目的物質(zhì)以高效率遷移至肺部的功能的載體進(jìn)行了研究。由此，他們發(fā)現(xiàn)GALA肽表現(xiàn)出高的肺部遷移性并完成了本發(fā)明。
[0026]此外，他們還發(fā)現(xiàn)甚至當(dāng)用PEG修飾包括GALA肽的載體(例如，用GALA肽-脂質(zhì)修飾的脂質(zhì)體)時(shí)，肺部特異性遷移性不消失，并完成了本發(fā)明。
[0027]此外，他們發(fā)現(xiàn)向用GALA肽或GALA肽-脂質(zhì)修飾的脂質(zhì)體添加輔助脂質(zhì)(helperlipid)使得該脂質(zhì)體具有下述物理性質(zhì):優(yōu)異的貯存穩(wěn)定性和/或在貯存一定時(shí)段之后不聚集或大部分不聚集；并完成了本發(fā)明。
[0028]因此，本發(fā)明提供了下列用途、物質(zhì)導(dǎo)入劑和載體。
[0029]項(xiàng)1.由SEQ ID NO:1表示的GALA肽作為用于向肺部遞送目的物質(zhì)的載體的肺部遷移性要素的用途。
[0030]項(xiàng)2.如項(xiàng)I所述的用途，其中所述GALA肽與載體的組分結(jié)合。
[0031]項(xiàng)3.如項(xiàng)I或2所述的用途，其中所述載體包括脂質(zhì)和/或膽固醇，并且所述GALA肽與陽(yáng)離子脂質(zhì)和/或膽固醇結(jié)合。
[0032]項(xiàng)4.如項(xiàng)I或2所述的用途，其中所述載體包括陽(yáng)離子脂質(zhì)和/或膽固醇，并且所述GALA肽與陽(yáng)離子脂質(zhì)和/或膽固醇結(jié)合。
[0033]項(xiàng)5.靶標(biāo)為肺部的物質(zhì)導(dǎo)入劑，所述導(dǎo)入劑具有包封在載體內(nèi)的目的物質(zhì)，并且所述載體包括由SEQ ID NO:1表示的GALA肽。
[0034]項(xiàng)6.如項(xiàng)5所述的物質(zhì)導(dǎo)入劑，其中所述GALA肽與載體的組分結(jié)合。
[0035]項(xiàng)7.如項(xiàng)5或6所述的物質(zhì)導(dǎo)入劑，其中所述載體包括脂質(zhì)和/或膽固醇，并且所述GALA肽與陽(yáng)離子脂質(zhì)和/或膽固醇結(jié)合。[0036]項(xiàng)8.如項(xiàng)5或6所述的物質(zhì)導(dǎo)入劑，其中所述載體包括陽(yáng)離子脂質(zhì)和/或膽固醇，并且所述GALA肽與陽(yáng)離子脂質(zhì)和/或膽固醇結(jié)合。
[0037]項(xiàng)9.如項(xiàng)5至8中任一項(xiàng)所述的物質(zhì)導(dǎo)入劑，其中所述載體用親水性聚合物修飾，所述親水性聚合物選自聚亞烷基二醇、葡聚糖、普魯蘭多糖、聚蔗糖、聚乙烯醇、苯乙烯-馬來酸酐交替共聚物、二乙烯醚-馬來酸酐交替共聚物、直鏈淀粉、支鏈淀粉、殼聚糖、甘露聚糖、環(huán)糊精、果膠和角叉菜膠。
[0038]項(xiàng)10.如項(xiàng)5至9中任一項(xiàng)所述的物質(zhì)導(dǎo)入劑，其中所述目的物質(zhì)為作用于肺部的生物活性物質(zhì)。
[0039]項(xiàng)11.如項(xiàng)5至10中任一項(xiàng)所述的物質(zhì)導(dǎo)入劑，其中所述目的物質(zhì)選自藥物、核酸、肽、蛋白、糖及其復(fù)合物。
[0040]項(xiàng)12.如項(xiàng)5至11中任一項(xiàng)所述的物質(zhì)導(dǎo)入劑，所述目的物質(zhì)為雙鏈RNA (dsRNA)，其選自 meroduplex RNA (部分雙鏈 RNA) (mdRNA)、帶切口 的 dsRNA (ndsRNA)、有缺口的 dsRNA(gdsRNA)、短干擾核酸(siNA)、siRNA、微 RNA(miRNA)、短發(fā)夾 RNA(shRNA)、短干擾寡核苷酸、取代的短干擾寡核苷酸、修飾的短干擾寡核苷酸、化學(xué)修飾的dsRNA以及轉(zhuǎn)錄后基因沉默RNA(ptgsRNA)。
[0041]項(xiàng)13.如項(xiàng)11或12所述的物質(zhì)導(dǎo)入劑，其中所述目的物質(zhì)為核酸，并且所述物質(zhì)導(dǎo)入劑除所述核酸之外還包括聚乙烯亞胺(PEI)。
[0042]項(xiàng)14.用于向肺部遞送目的物質(zhì)的載體,所述載體包含由SEQ ID N0:1表示的作為將物質(zhì)選擇性遞送至肺部的要素的GALA肽。
[0043]項(xiàng)15.如項(xiàng)14所述的載體，其中所述載體包括脂質(zhì)和/或膽固醇，并且所述GALA肽與陽(yáng)離子脂質(zhì)和/或膽固醇結(jié)合。
[0044]項(xiàng)16.如項(xiàng)14所述的載體，其中所述載體包括陽(yáng)離子脂質(zhì)和/或膽固醇，并且所述GALA肽與陽(yáng)離子脂質(zhì)和/或膽固醇結(jié)合。
[0045]項(xiàng)17.如項(xiàng)15或16所述的載體，其中所述載體包括陽(yáng)離子脂質(zhì)，并且所述陽(yáng)離子脂質(zhì)包括選自DOTMA、DSTAP和DODAP的至少一種類型。
[0046]項(xiàng)18.如項(xiàng)14至17中任一項(xiàng)所述的載體，其中所述載體用親水性聚合物修飾，所述親水性聚合物選自聚亞烷基二醇、葡聚糖、普魯蘭多糖、聚蔗糖、聚乙烯醇、苯乙烯-馬來酸酐交替共聚物、二乙烯醚-馬來酸酐交替共聚物、直鏈淀粉、支鏈淀粉、殼聚糖、甘露聚糖、環(huán)糊精、果膠和角叉菜膠。
[0047]項(xiàng)19.如項(xiàng)18所述的載體，其中聚亞烷基二醇為PEG(優(yōu)選分子量為2000的PEG)。
[0048]項(xiàng)20.如項(xiàng)14至19中任一項(xiàng)所述的載體,其還包含輔助脂質(zhì)(helper lipid)。
[0049]項(xiàng)21.如項(xiàng)20所述的載體，其中所述輔助脂質(zhì)(helper lipid)為EPC、DOPC、DOPE或 SOPE。
[0050]項(xiàng)22.如項(xiàng)14所述的載體，其中所述載體為脂質(zhì)體，并且所述脂質(zhì)體的組成為陽(yáng)離子脂質(zhì)/Chol/輔助脂質(zhì)(helper lipid)/STR-PEG/Chol_GALA 或者輔助脂質(zhì)(helperI i P i d) /Cho I /STR-PEG/Cho 1-GALA (更優(yōu)選為選自 DOTMA、DODAP 或 DSTAP 的陽(yáng)離子脂質(zhì)/Chol/ 選自 EPC、DOPE 或 SOPE 的輔助脂質(zhì)(helper lipid) /STR-PEG/Cho 1-GALA,或者EPC/Cho I/STR-PEG/Cho 1-GALA ；以及進(jìn)一步優(yōu)選為 DOTMA/Chol/EPC/STR-PEG/Chol-GALA、DODAP/Chol/EPC/STR-PEG/Chol-GALA、DSTAP/Chol/EPC/STR-PEG/Chol-GALA、DOTMA/Cho I /DOPE/STR-PEG/Cho 1-GALA, DOTMA/Chol/SOPE/STR-PEG/Chol-GALA 或者 EPC/Chol/STR-PEG/Chol-GALA)。
[0051]項(xiàng)23.如項(xiàng)14所述的載體，其中:
[0052]所述載體為脂質(zhì)體，其包括作為脂質(zhì)膜的組分的DOTMA、Chol和EPC ；
[0053]關(guān)于DOTMA/Chol/EPC的脂質(zhì)體的脂質(zhì)組成(摩爾比)為10至50/20至50/20至70 ;以及
[0054]相對(duì)于DOTMA/Chol/EPC的總脂質(zhì)量，脂質(zhì)體還包括lmol%至15mol%的STR-PEG2000 以及 0.1mo 1% 至 5mol% 的 Chol-GALA。
[0055]項(xiàng)24.用于將目的物質(zhì)導(dǎo)入肺部的方法，所述方法包括向哺乳動(dòng)物給予載體，所述載體具有包封于其內(nèi)的目的物質(zhì)并且具有與其結(jié)合的由SEQ ID NO:1表示的GALA肽。
[0056]項(xiàng)25.用于治療肺癌的治療方法，所述方法包括向患有肺癌的哺乳動(dòng)物給予載體，所述載體具有包封于其內(nèi)的抗癌劑并且具有與其結(jié)合的由SEQ ID N0:1表示的GALA肽。
[0057]項(xiàng)26.如項(xiàng)24所述的治療方法，其中所述肺癌為轉(zhuǎn)移至肺部的癌。
[0058]項(xiàng)27.肺癌治療劑，其包含載體，所述載體具有包封于其內(nèi)的抗癌劑并具有與其結(jié)合的由SEQ ID NO:1表示的GALA肽。
[0059]項(xiàng)28.如項(xiàng)27所述的肺癌治療劑，其中所述肺癌為轉(zhuǎn)移至肺部的癌。
`[0060]項(xiàng)29.如項(xiàng)3所述的用途、項(xiàng)7所述的物質(zhì)導(dǎo)入劑或者項(xiàng)15所述的載體，其中所述GALA肽與相對(duì)于總脂質(zhì)量的lmol%至4mol%的脂質(zhì)組分結(jié)合。
[0061]本發(fā)明的有利效果
[0062]關(guān)于本發(fā)明，提供了用于將目的物質(zhì)特異性地遞送至肺部的載體或物質(zhì)導(dǎo)入劑，特別是脂質(zhì)體。此外，本發(fā)明的載體或物質(zhì)導(dǎo)入劑、特別是脂質(zhì)體能遷移至肺部并且還抑制了其向肝臟的遷移，所述肝臟為主要的積聚器官。此外，本發(fā)明的載體或物質(zhì)導(dǎo)入劑、特別是脂質(zhì)體尤其在肺部中已表現(xiàn)出超越現(xiàn)有的siRNA遞送運(yùn)載體的敲減作用，并且已經(jīng)證實(shí)了具有非常優(yōu)異的目的物質(zhì)的導(dǎo)入效果。
[0063]因?yàn)楸景l(fā)明所用的包含GALA肽的載體和物質(zhì)導(dǎo)入劑不具有聚集問題，所以它們不堵塞血管。
[0064]附圖簡(jiǎn)述
[0065]圖1-A示出GALA-修飾的脂質(zhì)體隨時(shí)間的肺部遷移的評(píng)價(jià)結(jié)果。
[0066]圖1-B為其中按比例放大圖1-A中縱軸的圖表。
[0067]圖2示出GALA-修飾的脂質(zhì)體隨時(shí)間的肝臟遷移的評(píng)價(jià)結(jié)果。
[0068]圖3示出在各種比例下混合血液和GALA-修飾的MEND的結(jié)果，從而評(píng)價(jià)其與血細(xì)胞組分的相互作用。
[0069]圖4示出GALA-修飾的MEND的尾靜脈靜脈內(nèi)給藥的結(jié)果，其中用[32P]標(biāo)記siRNA且用[3H]標(biāo)記脂質(zhì)膜，并且在給藥后I小時(shí)測(cè)量在肺部中的[32P]和[3H]，從而評(píng)價(jià)GALA-修飾的MEND向肺部的遷移。
[0070]圖5示出包封熒光標(biāo)記的siRNA的GALA-修飾的MEND的尾靜脈靜脈內(nèi)給藥的結(jié)果，并且使用激光共聚焦掃描顯微鏡評(píng)價(jià)了在給藥后I小時(shí)的肺部?jī)?nèi)GALA-修飾的MEND的定位。[0071 ] 圖6示出GALA-修飾的MEND和GALA-未修飾的MEND的尾靜脈靜脈內(nèi)給藥的結(jié)果，并且使用qRT-PCR評(píng)價(jià)在給藥后24小時(shí)的肺部中的GALA-修飾的MEND和GALA-未修飾的MEND各自的敲減作用。
[0072]圖7示出GALA-修飾的MEND的尾靜脈靜脈內(nèi)給藥的結(jié)果，并且使用qRT_PCR評(píng)價(jià)了在給藥后24小時(shí)的肺部中的GALA-修飾的MEND的敲減作用。
[0073]圖8示出GALA-修飾的MEND的尾靜脈靜脈內(nèi)給藥的結(jié)果，并且使用qRT_PCR評(píng)價(jià)了在給藥后24小時(shí)的肝臟內(nèi)的GALA-修飾的MEND的敲減作用。
[0074]圖9示出GALA-修飾的MEND的尾靜脈靜脈內(nèi)給藥的結(jié)果，并且使用qRT_PCR評(píng)價(jià)了在給藥后24小時(shí)的脾臟內(nèi)的GALA-修飾的MEND的敲減作用。
[0075]圖10示出當(dāng)DOTMA、DSTAP和DODAP用作陽(yáng)離子脂質(zhì)時(shí)，MEND的敲減作用。
[0076]圖11示出當(dāng)EPC、D0PE和SOPE用作輔助脂質(zhì)(helper lipid)時(shí)，各MEND的敲減作用。
[0077]圖12示出當(dāng)GALA-修飾的MEND連續(xù)給藥4天時(shí)的重量變化。
[0078]圖13示出當(dāng)MEND連續(xù)給藥4天時(shí)的AST和ALT的測(cè)量結(jié)果。
[0079]圖14示出PEG-修飾 的MEND的藥代動(dòng)力學(xué)評(píng)價(jià)結(jié)果。
[0080]圖15示出PEG-修飾的MEND的敲減作用。
[0081 ] 圖16示出MEND的保存品的敲減作用。
[0082]圖17示出在室溫下貯存I個(gè)月之后GALA-修飾的MEND的貯存穩(wěn)定性的結(jié)果。
[0083]圖18示出具有不同的GALA修飾水平的MEND的尾靜脈靜脈內(nèi)給藥的結(jié)果，并且使用qRT-PCR評(píng)價(jià)了在給藥后24小時(shí)的肺部?jī)?nèi)的GALA-修飾的MEND的敲減作用。
[0084]圖19示出在肺轉(zhuǎn)移模型中給予GALA-修飾的MEND的肺轉(zhuǎn)移抑制作用。
[0085]圖20示出在肺轉(zhuǎn)移模型中給予GALA-修飾的MEND的敲減作用。
[0086]實(shí)施方案描述
[0087]將在下文詳述本發(fā)明。
[0088]本發(fā)明的載體能通過包含GALA肽而實(shí)現(xiàn)向肺部的選擇性遷移。
[0089]“由SEQ ID NO:1表示的GALA肽”是下述的30個(gè)氨基酸的肽。
[0090]Ala Ala Leu Ala Glu Leu Ala Glu Ala Leu Ala Glu Ala Leu His Glu Ala LeuAla Glu Ala Leu Ala Glu Ala Leu Ala Ala Glu Trp (SEQ ID NO:1)
[0091]由SEQ ID NO:1表示的肽在其序列中具有谷氨酸(E)-丙氨酸(A)-亮氨酸(L)-丙氨酸(A)的部分結(jié)構(gòu)的4個(gè)單元。由SEQ ID NO:1表示的肽可以在除該部分結(jié)構(gòu)之外的其它部分中具有氨基酸的刪除、取代或添加，盡管優(yōu)選保持部分結(jié)構(gòu)的3個(gè)單元或4個(gè)單元，更優(yōu)選保持4個(gè)單元。這些修飾的GALA肽也被包括在本發(fā)明的“由SEQ ID NO:1表示的GALA肽”中。
[0092]關(guān)于向由SEQ ID NO:1表示的氨基酸序列進(jìn)行的氨基酸的刪除、取代或添加的數(shù)量和位置，氨基酸的數(shù)量為I個(gè)以上，優(yōu)選為I個(gè)或多個(gè)。其具體范圍包括:對(duì)于刪除而言，通常為I至4個(gè)，優(yōu)選為I至3個(gè)，進(jìn)一步優(yōu)選為I或2個(gè)；對(duì)于取代而言，通常為I至6個(gè)，優(yōu)選為I至4個(gè)，進(jìn)一步優(yōu)選為I或2個(gè)；以及對(duì)于添加而言，通常為I至12個(gè)，優(yōu)選為I至6個(gè)，進(jìn)一步優(yōu)選為I至4個(gè)。氨基酸的取代優(yōu)選為在類似氨基酸內(nèi)進(jìn)行的取代，例如疏水性氨基酸(Leu、Val、Ile、Ala)、芳香族氨基酸(Phe、Tyr、Trp)、堿性氨基酸(Arg、Lys、His)、酸性氨基酸(Glu、Asp)、中性氨基酸(Gly、Ser、Thr、Cys、Met、Gin、Asn、Pro)。應(yīng)注意的是，在本說明書中，GALA肽有時(shí)被簡(jiǎn)稱為“GALA”。
[0093]優(yōu)選在GALA肽與形成所述載體的組分之間形成鍵。形成所述載體的組分的實(shí)例包括脂質(zhì)、蛋白或肽、糖鏈、水溶性或水混溶性聚合物(中性、陽(yáng)離子或陰離子的)、表面活性劑等。盡管鍵的實(shí)例包括任何鍵，諸如共價(jià)鍵、離子鍵、氫鍵和配位鍵，但共價(jià)鍵或配位鍵是優(yōu)選的，并且共價(jià)鍵是最優(yōu)選的。
[0094]GALA肽被包括在能夠?qū)⑽镔|(zhì)導(dǎo)入細(xì)胞的運(yùn)載體(載體)中。能夠?qū)⑽镔|(zhì)導(dǎo)入細(xì)胞的運(yùn)載體(載體)的實(shí)例包括基于脂質(zhì)的轉(zhuǎn)染試劑、病毒衍生的顆粒、脂質(zhì)體、核酸聚合復(fù)合物(polyplexes)、膠束等；并且在優(yōu)選實(shí)施方案中被脂質(zhì)體修飾或與脂質(zhì)體結(jié)合。當(dāng)載體為脂質(zhì)體時(shí)，可將GALA肽與脂質(zhì)體的任何組分結(jié)合，例如磷脂、膽固醇、脂質(zhì)(優(yōu)選陽(yáng)離子脂質(zhì))和輔助脂質(zhì)(helper lipid)。與膽固醇(膽固醇基-0H)結(jié)合的SEQ ID NO:1的GALA肽例如具有下列結(jié)構(gòu)(下文有時(shí)縮寫為“Chol-GALA”):(膽固醇基)-O (C=O) - (WEAALAEALAEALAEHLAEALAEALEALAA)-NH2
[0095]在上述描述中，“-O (C=O) 與GALA肽的N-末端處的氨基結(jié)合，并且“_NH2”意味著GALA肽的C-末端處的羧基被氨基保護(hù)。在膽固醇和GALA肽之間形成的鍵可以為上述的氨基甲酸酯鍵，或可以為酯鍵或醚鍵。膽固醇基可以在N-末端或C-末端與GALA肽結(jié)合，或可以與GALA肽的任何氨基酸的側(cè)鏈結(jié)合。此外，膽固醇基可以通過諸如亞烷基、肽或聚醚的任何銜接物而與GALA肽結(jié)合。此外，盡管C-末端是上述的酰胺，但C-末端可以為其它基團(tuán)，例如羧酸(COOH)、酯或羧酸的鹽。
[0096]當(dāng)GALA肽與諸如膽固醇和磷脂的脂質(zhì)組分結(jié)合并且被包括在載體或物質(zhì)導(dǎo)入劑中時(shí)，所包括的GALA的肽的量相對(duì)于總脂質(zhì)量為約0.1mo 1%至5mol%,優(yōu)選0.3mol%至4mol%,更優(yōu)選 0.5mol% 至 4mol%,進(jìn)一步優(yōu)選 lmol% 至 4mol%,特別優(yōu)選 1.5mol% 至 2mol%。應(yīng)注意的是，本說明書中描述的“總脂質(zhì)量”不包括與脂質(zhì)體的修飾組分結(jié)合的脂質(zhì)組分的量。即，不包括與GALA肽結(jié)合的脂質(zhì)組分的量。同樣地，當(dāng)用PEG修飾載體時(shí)，不包括與PEG結(jié)合的脂質(zhì)組分的量。
[0097]例如，當(dāng)未與GALA肽結(jié)合的脂質(zhì)組分(總脂質(zhì)量)為IOOmol且與GALA肽結(jié)合的脂質(zhì)組分為5mol時(shí)，GALA修飾水平(與GALA肽結(jié)合的脂質(zhì)相對(duì)于總脂質(zhì)量的比)為5mol%。
[0098]當(dāng)由除脂質(zhì)之外的組分形成載體時(shí)，GALA肽的量相對(duì)于載體的總重量為約0.01wt%至10wt%,優(yōu)選0.lwt%至5wt%,更優(yōu)選0.5wt%至4wt%,并且特別優(yōu)選lwt%至2.5wt%。
[0099]盡管上面描述了其中GALA肽與膽固醇結(jié)合的實(shí)施方案，但GALA肽可以與除膽固醇之外的載體的其它組分結(jié)合，并且其方式對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。
[0100]在pH接近中性(例如，pH7或7.4)時(shí)，本發(fā)明的載體和物質(zhì)導(dǎo)入劑的ζ電位為約-1OOmV至IOOmV,優(yōu)選為約-50mV至50mV，并且更優(yōu)選為約_30mV至30mV。能使用ζ電位儀(zetasizer)來測(cè)量ζ電位。
[0101]本發(fā)明的載體和物質(zhì)導(dǎo)入劑的平均粒徑不受特別限定，并且例如，粒徑為30nm至1000nm,優(yōu)選50nm至300nm,更優(yōu)選50nm至200nm,并且特別優(yōu)選50nm至150nm。能通過例
如動(dòng)態(tài)光散射法、靜態(tài)光散射法、電子顯微鏡、原子力顯微鏡等來測(cè)量平均粒徑。[0102]本發(fā)明的導(dǎo)入劑包括載體和旨在細(xì)胞內(nèi)遞送的目的物質(zhì)。目的物質(zhì)可以具有與載體形成的共價(jià)鍵，可以與載體形成復(fù)合物，并且當(dāng)載體為中空顆粒時(shí)，目的物質(zhì)可以被包封或包囊在載體內(nèi)。本發(fā)明的目的物質(zhì)特別為當(dāng)被引入肺細(xì)胞中時(shí)發(fā)揮作用的生物活性物質(zhì)。
[0103]本發(fā)明的物質(zhì)導(dǎo)入劑可以體外和體內(nèi)用于將目的物質(zhì)在肺細(xì)胞內(nèi)遞送。
[0104]目的物質(zhì)的類型不受特別限制，并且其實(shí)例包括:藥物、核酸、肽(肽激素、生物活性肽等，例如催產(chǎn)素、緩激肽、促甲狀腺激素釋放因子和腦啡肽)、蛋白(酶、各種細(xì)胞因子，例如白介素、細(xì)胞轉(zhuǎn)移因子、細(xì)胞生長(zhǎng)因子等)、糖或那些物質(zhì)的復(fù)合物。目的物質(zhì)的類型可以根據(jù)治療目的、診斷、肺病類型等而適當(dāng)選擇。應(yīng)注意的是，“核酸”除了 DNA或RNA之外還包括其類似物或其衍生物(例如，siRNA、肽核酸(PNA)、硫代磷酸DNA等)。此外，核酸可以為單鏈或雙鏈的，并且可以為線性或圓形的。
[0105]當(dāng)目的物質(zhì)為藥物時(shí)，其實(shí)例包括抗癌劑、血管擴(kuò)張藥物、肺血管炎治療劑、抗菌劑、抗病毒劑、抗炎劑、支氣管擴(kuò)張劑、鎮(zhèn)咳劑、肺纖維化抑制劑、抗結(jié)核藥物等?？拱﹦┑木唧w實(shí)例包括阿霉素、柔紅霉素、順鉬、奧沙利鉬、卡鉬、紫杉醇、伊立替康、SN-38、放線菌素D、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春堿、氨甲喋呤、咪唑硫嘌呤、氟尿嘧啶、絲裂霉素C、多西他賽、環(huán)磷酰胺、卡培他濱、表柔比星、吉西他濱、米托蒽醌、亞葉酸、長(zhǎng)春瑞濱、曲妥珠單抗、依托泊苷、雌莫司汀、強(qiáng)的松、干擾素-a、白介素_2、博來霉素、異環(huán)磷酰胺、美司鈉、六甲蜜胺、拓?fù)涮婵怠⑻前?、甲基?qiáng)的松龍、地塞米松、巰嘌呤、硫鳥嘌呤、氟達(dá)拉濱、吉妥珠單抗、伊達(dá)比星、米托蒽醌、維甲酸、阿倫單抗、苯丁酸氮芥、克拉屈濱、伊馬替尼、表阿霉素、達(dá)卡巴嗪、丙卡巴肼、氮芥、利妥昔單抗、地尼白介素-白喉毒素連接物(denileukin diftitox)、甲氧節(jié)氨喃
/磺胺甲基異噁唑、別嘌呤醇、卡莫司汀、他莫昔芬、非格司亭、替莫唑胺、美法侖、長(zhǎng)春瑞濱、氮雜胞苷、沙利度胺、絲裂霉素等。血管擴(kuò)張藥物的具體實(shí)例包括波生坦、安倍生坦、貝前列素鈉、西地那非、依前列醇等。肺血管炎治療劑的具體實(shí)例包括腎上腺皮質(zhì)類固醇、環(huán)磷酰胺、咪唑硫嘌呤、氨甲喋呤、阿司匹林等?？咕鷦┑木唧w實(shí)例包括兩性霉素B等?？共《緞┑木唧w實(shí)例包括阿糖腺苷、阿昔洛韋、三氟胸苷等?？寡讋┑木唧w實(shí)例包括苯基丁氮酮、對(duì)乙酰氨基酚、布洛芬、吲哚美辛、舒林酸、吡羅昔康、雙氯芬酸、強(qiáng)的松、倍氯米松、地塞米松等。
[0106]當(dāng)目的物質(zhì)為核酸時(shí)，其優(yōu)選的實(shí)例包括選自下述的雙鏈RNA(dsRNA):部分雙鏈 RNA (mdRNA)、帶切口 的 dsRNA (ndsRNA)、有缺口 的 dsRNA (gdsRNA)、短干擾核酸(siNA)、siRNA、微RNA(miRNA)、短發(fā)夾RNA(shRNA)、短干擾寡核苷酸、取代的短干擾寡核苷酸、修飾的短干擾寡核苷酸、化學(xué)修飾的dsRNA以及轉(zhuǎn)錄后基因沉默RNA(ptgsRNA)。目的物質(zhì)可以單獨(dú)使用，或者可以使用兩種以上類型的目的物質(zhì)的混合物。例如，可以使用兩種以上類型的siRNA的組合。當(dāng)物質(zhì)導(dǎo)入劑包括諸如siRNA的核酸作為目的物質(zhì)時(shí)，還優(yōu)選同時(shí)也包括諸如聚乙烯亞胺(PEI)的陽(yáng)離子。
[0107]在使用取代和修飾(包括化學(xué)修飾)的一個(gè)實(shí)施方案中，雙鏈RNA可以包括含脫氧核糖核苷酸或兩個(gè)脫氧核糖核苷酸(例如，胸苷、腺嘌呤)的突出部分(overhang),或者可以包括在雙鏈RNA的一個(gè)或兩個(gè)3’端處的I至4個(gè)核苷酸的突出部分。雙鏈RNA可以包括在一端或兩端處的鈍端。在一些實(shí)施方案中，磷酸化第一鏈和第二鏈的5’端。在所有使用雙鏈RNA的實(shí)施方案中，在3’端處的核苷酸突出部分可以包括在核酸的骨架、堿基或糖上具有化學(xué)修飾的脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸。在所有使用雙鏈RNA的實(shí)施方案中，在3’-端的核苷酸突出部分可以包括一個(gè)以上的普遍的堿基核糖核苷酸。在所有使用雙鏈RNA的實(shí)施方案中，在3’ -端的核苷酸突出部分可以包括一個(gè)以上的非環(huán)狀核苷酸。在使用雙鏈RNA的所有實(shí)施方案中，dsRNA還可以包括末端磷酸酯基團(tuán)，例如5’，3’ - 二磷酸酯或 5’-憐酸酯(參閱 Martinez 等人,Cell.110:563-574，2002;以及 Schwarz 等人,Molec.Cell.10:537-568，2002)。
[0108]雙鏈RNA還可以包括2’-糖取代，例如2’-脫氧、2’-0-甲基、2’_0_甲氧基乙基、2’ -0-2-甲氧基乙基、鹵素以及2’ -氟、2’ -0-烯丙基，或其任意組合。在其它實(shí)施方案中，雙鏈RNA還可在第一鏈的一端或兩端或者在第二鏈的一端或多個(gè)端處包括端帽(terminalcap)取代基，例如烷基、脫喊基、脫氧脫喊基、甘油基、二核昔酸、非環(huán)狀核昔酸、反轉(zhuǎn)脫氧核苷酸部分或其任意組合。
[0109]此外，在另一實(shí)施方案中，雙鏈RNA可以包括至少一個(gè)修飾的核苷酸間鍵，例如獨(dú)立為硫代磷酸酯鍵、手性硫代磷酸酯鍵、二硫代磷酸酯鍵、磷酸三酯鍵、氨基烷基磷酸三酯鍵、甲基膦酸酯鍵、烷基膦酸酯鍵、3’ -亞烷基膦酸酯鍵、5’ -亞烷基膦酸酯鍵、手性膦酸酯鍵、膦?；宜狨ユI、硫代膦?；宜狨ユI、亞膦酸酯鍵、氨基磷酸酯鍵、3’ -氨基氨基磷酸酷鍵、氣基烷基氣基憐酸酷鍵、硫擬基氣基憐酸酷鍵、硫擬基烷基憐酸酷鍵、硫擬基烷基憐酸三酯鍵、硒代磷酸酯鍵或硼烷膦酸酯鍵，或者其任意組合。
[0110]雙鏈RNA可以通過使用核酸類似物而被取代或修飾(包括化學(xué)修飾)，所述核酸類似物包括:5-甲基胞嘧啶；5_羥基甲基胞嘧啶；黃嘌呤；次黃嘌呤；2_氨基腺嘌呤；6-甲基；2_丙基或其他烷基衍生物，例如腺嘌呤和鳥嘌呤；8_取代的腺嘌呤和鳥嘌呤(8-氮雜-、8_鹵代、8_氛基、8_疏基、8_硫代烷基、8_羥基等);7_甲基、7_脫氣雜和3-脫氣雜-腺嘌呤和鳥嘌呤；2_硫尿嘧啶；2_硫代胸腺嘧啶；2_硫代胞嘧啶；5-甲基、5-丙炔基、5-鹵代(5-溴、5-氟等)、5_三氟甲基或其它5-取代的尿嘧啶和胞嘧啶；以及6-偶氮尿嘧啶。
[0111]諸如雙鏈RNA(dsRNA)的RNA可以被化學(xué)修飾。這樣的化學(xué)修飾的非限制性實(shí)例包括在核苷酸之間引入硫代磷酸酯鍵、引入2’ -脫氧核糖核苷酸、2’ -0-甲基核糖核苷酸、2’ -脫氧_2’ -氟核糖核苷酸、“非環(huán)`狀”核苷酸、5’ -C-甲基核苷酸和向末端引入甘油基和/或反轉(zhuǎn)的脫氧脫堿基殘基。這些化學(xué)修飾能保持在細(xì)胞內(nèi)的RNAi活性。
[0112]只要脂質(zhì)體是具有脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)的封閉的囊泡，脂質(zhì)體可以為多層脂質(zhì)體(MLV)或單層脂質(zhì)體如SUV (小單層囊泡)、LUV (大單層囊泡)和GUV (巨單層囊泡)。
[0113]本發(fā)明的載體(運(yùn)載體)可以用親水性聚合物修飾。
[0114]親水性聚合物的實(shí)例包括聚亞烷基二醇(聚乙二醇、聚丙二醇、聚丁二醇，或者聚亞烷基二醇的共聚物，例如聚乙二醇和聚丙二醇的嵌段共聚物)、葡聚糖、普魯蘭多糖、聚蔗糖、聚乙烯醇、苯乙烯-馬來酸酐交替共聚物、二乙烯醚-馬來酸酐交替共聚物、直鏈淀粉、支鏈淀粉、殼聚糖、甘露聚糖、環(huán)糊精、果膠、角叉菜膠等。親水性聚合物優(yōu)選為聚亞烷基二醇(聚乙二醇、聚丙二醇、聚丁二醇，或者聚亞烷基二醇的共聚物，例如聚乙二醇和聚丙二醇的嵌段共聚物)，并且特別優(yōu)選為聚乙二醇(PEG);并且載體(運(yùn)載體)優(yōu)選用這些親水性聚合物修飾。PEG的長(zhǎng)度可以適當(dāng)?shù)剡x自約500至10000的分子量范圍，并且優(yōu)選的分子量為1000至5000，并且更優(yōu)選的分子量為2000。用PEG修飾的脂質(zhì)的實(shí)例包括DSPE (二硬脂酰磷脂酰乙醇胺)_PEG2000、DMPE (二肉豆蘧酰磷脂酰乙醇胺)-PEG2000、DSG(二硬脂酰甘油)-PEG2000、DMG(二肉豆蘧酰甘油)-PEG2000、膽固醇化的PEG2000、STR(十八烷基)-PEG2000 或 C8 神經(jīng)酰胺-PEG2000、C16 神經(jīng)酰胺-PEG2000 等。其中，STR-PEG2000 或CS神經(jīng)酰胺-PEG2000是優(yōu)選的。其它親水性聚合物的分子量可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員同樣適當(dāng)?shù)剡M(jìn)行選擇。
[0115]例如，當(dāng)脂質(zhì)體要被PEG-修飾時(shí)，為了獲得具有優(yōu)異的貯存穩(wěn)定性且不損害肺部遷移性和目的物質(zhì)(例如，核酸藥物，如siRNA)的功能表現(xiàn)的載體(例如，脂質(zhì)體制劑)，優(yōu)選使用硬脂化的PEG(STR-PEG)、C8神經(jīng)酰胺-PEG或者膽固醇化的PEG(Chol-PEG)。此外，為了改善血液中穩(wěn)定性，優(yōu)選使用DSPE-PEG、DSG-PEG, C16神經(jīng)酰胺-PEG等。
[0116]當(dāng)親水性聚合物要用于修飾脂質(zhì)體時(shí)，當(dāng)形成脂質(zhì)體的脂質(zhì)為100mol%時(shí)，優(yōu)選將親水性聚合物以約lmol%至15mol%的比用于修飾。
[0117]在下文中，盡管使用脂質(zhì)體作為實(shí)例來描述用于將目的物質(zhì)體外或體內(nèi)遞送至肺部的載體(運(yùn)載體)，但本發(fā)明不限于脂質(zhì)體，并且任何能將GALA肽導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)的載體(運(yùn)載體)均包括在本發(fā)明中。
[0118]在本發(fā)明的脂質(zhì)體中，形成脂質(zhì)雙層的脂質(zhì)類型不受特別限制，并且其具體實(shí)例包括:磷脂，如磷脂酰膽堿(例如，二油?；字Ｄ憠A、二月桂?；字Ｄ憠A、二肉豆蘧?；字Ｄ憠A、二棕櫚?；字Ｄ憠A、二硬脂?；字Ｄ憠A等)、磷脂酰甘油(例如，二油酰基磷脂酰甘油、二月桂?；字８视?、二肉豆蘧?；字８视?、二棕櫚酰基磷脂酰甘油以及二硬脂?；字８视?、磷脂酰乙醇胺(例如，二油?；字Ｒ掖及?、二月桂?；字Ｒ掖及贰⒍?豆蘧?；字Ｒ掖及?、二棕櫚?；字Ｒ掖及芬约岸仓；字Ｒ掖及?、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酸、心磷脂等；其氫化產(chǎn)物；以及糖月旨，例如鞘磷脂和神經(jīng)節(jié)苷脂。關(guān)于脂質(zhì)，可以單獨(dú)使用單一脂質(zhì)，或可以使用兩種以上的脂質(zhì)的組合。磷脂可以為源自蛋黃、大豆的天然脂質(zhì)，或來自動(dòng)物和植物的其它脂質(zhì)(例如，蛋黃卵磷脂、大豆卵磷脂等)；合成脂質(zhì)；或半合成脂質(zhì)。關(guān)于脂質(zhì)，可以單獨(dú)使用單一脂質(zhì)，或可以使用兩種以上的脂質(zhì)的組合。
[0119]為了物理地或化學(xué)地穩(wěn)定脂質(zhì)雙層或調(diào)節(jié)膜的流動(dòng)性，脂質(zhì)雙層可以包含例如下列中的一種或多種:源自動(dòng)物的固醇，例如膽固醇、膽固醇琥珀酸酯、羊毛固醇、二氫羊毛固醇、鏈留醇和二氫膽固醇；源自植物的固醇(植物固醇)，例如豆留醇、谷留醇、菜油固醇和菜籽留醇；源自微生物的固醇，例如酵母留醇和麥角固醇；糖，例如甘油和蔗糖；以及甘油脂肪酸酯，例如的三油酸甘油酯和三辛酸甘油酯。盡管其含有量不受特別限制，但相對(duì)于形成脂質(zhì)雙層的脂質(zhì)的總量，所述含有量?jī)?yōu)選為5%至40%(摩爾比)，并且進(jìn)一步優(yōu)選為10%至30% (摩爾比)。
[0120]脂質(zhì)雙層可以包括:抗氧化劑，例如生育酚、沒食子酸丙酯、棕櫚酸抗壞血酸酯和丁基化苯甲醇；給予正電荷的帶電物質(zhì)，例如硬脂胺和油胺；給予負(fù)電荷的帶電物質(zhì)，例如磷酸雙十六烷酯；以及膜蛋白，例如表面膜蛋白和內(nèi)在膜蛋白。其含有量可以得到適當(dāng)?shù)乜刂啤?br> [0121]本發(fā)明的脂質(zhì)體在其表面上具有由30個(gè)氨基酸形成的GALA肽。應(yīng)注意的是，在單層脂質(zhì)體中的脂質(zhì)體表面為脂質(zhì)雙層的外表面，以及在多層脂質(zhì)體中的脂質(zhì)體表面為在最外層的脂質(zhì)雙層的外表面。此外，本發(fā)明的脂質(zhì)體還可以在除表面之外的其它部分(例如，脂質(zhì)雙層的內(nèi)表面)處包含肽。[0122]本發(fā)明的載體優(yōu)選包含陽(yáng)離子脂質(zhì)。陽(yáng)離子脂質(zhì)的實(shí)例包括DODAC(雙十八烷基二甲基氯化銨)、DOTMA (N-(2，3-二油酰氧基)丙基-N，N，N-三甲基銨)、DDAB (雙十二烷基溴化銨)、DOTAP (1，2- 二油酰氧基-3-三甲基胺丙烷)、DC-Chol (3-3 -N-(N，，N，，- 二甲基-氨基乙烷)-氨基甲酰膽固醇)、DMRIE (I, 2- 二肉豆蘧酰氧基丙基-3- 二甲基羥乙基銨)、DOSPA(2，3- 二油烯氧基_N_[2 (精胺甲酰胺基)乙基]-N, N- 二甲基_1_丙基二氟乙酸銨),DSTAPd, 2- 二硬脂?；?3-三甲基銨丙烷)、D0DAP (二油?；鵢3_ 二甲基胺丙烷)等。陽(yáng)離子脂質(zhì)優(yōu)選為D0TMA、DSTAP或D0DAP，并且特別優(yōu)選為D0TMA。關(guān)于陽(yáng)離子脂質(zhì)，可以單獨(dú)使用單一陽(yáng)離子脂質(zhì)，或可以使用兩種以上的陽(yáng)離子脂質(zhì)的組合。
[0123]在陽(yáng)離子脂質(zhì)中，DOTMA和DSTAP具有季銨并且一致地具有正電荷，而DODAP具有叔胺且在生理PH中不具有電荷。因此，通過改變陽(yáng)離子脂質(zhì)的類型和配合量，可以拓寬陽(yáng)離子脂質(zhì)的結(jié)構(gòu)和特性。
[0124]本發(fā)明的載體優(yōu)選包含輔助脂質(zhì)(helper lipid)。輔助脂質(zhì)的實(shí)例包括EPC (蛋磷脂酰膽堿)、DLPC ( 二亞油?；字Ｄ憠A)、DMPC ( 二肉豆蘧?；字Ｄ憠A)、DPPC ( 二棕櫚酰基磷脂酰膽堿)、DSPC (二硬脂酰基磷脂酰膽堿)、POPC (棕櫚?；王；字Ｄ憠A),DOPC ( 二油?；字Ｄ憠A)、D0PE ( 二油?；字Ｒ掖及?以及SOPE (硬脂酰基油?；字Ｄ憠A)。其中，EPC、DOPC、DOPE和SOPE是優(yōu)選的。
[0125]例如，因?yàn)榘珼OPC作為輔助脂質(zhì)(helper lipid)的MEND在室溫下貯存I個(gè)月之后根本不聚集，所以DOPC在貯存穩(wěn)定性方面也是優(yōu)異的。
[0126]作為本發(fā)明的脂質(zhì)體的優(yōu)選方式，能例示下述脂質(zhì)體，其中用疏水性基團(tuán)或疏水性化合物修飾GALA肽，并且將疏水性基團(tuán)或疏水性化合物插入脂質(zhì)雙層中，但是該肽從脂質(zhì)雙層被暴露出。應(yīng)理解的是，在本方式中，“該肽從脂質(zhì)雙層被暴露出”包括肽從脂質(zhì)雙層的外表面或內(nèi)表面被暴露出的情況，以及其中肽從兩個(gè)表面被暴露出的情況。
[0127]疏水性基團(tuán)或疏水性化合物不受特別限制，只要其能插入脂質(zhì)雙層中。疏水性基團(tuán)的實(shí)例包括:飽和或不飽和脂肪酸基團(tuán)，例如十八烷基、棕櫚基、油基、棕櫚油酸醇基(palmitoleyl)、亞麻基、亞油基等；脂肪醇、脂肪胺或包括碳數(shù)為10個(gè)以上的烴基在內(nèi)的其它基團(tuán)(例如，固醇衍生的基團(tuán)，例如膽固醇基(Chol));及它們的衍生物。其中，碳數(shù)為10至20的脂肪酸基團(tuán)(例如，棕櫚?；⒂突?、十八烷基、花生四烯?；?是特別優(yōu)選的。此外，疏水性化合物的實(shí)例包括上述的磷脂、糖脂或固醇、長(zhǎng)鏈脂肪醇(例如，磷脂酰乙醇胺、膽固醇等)、聚氧丙烯基烷基、甘油脂肪酸酯等。
[0128]可以使用本領(lǐng)域已知的方法來產(chǎn)生本發(fā)明的脂質(zhì)體，所述方法包括例如水合法、超聲處理、乙醇注射法、醚注射法、反相蒸發(fā)法和冷凍-解凍法。
[0129]下面將示出使用水合法生產(chǎn)脂質(zhì)體的方法。
[0130]將為脂質(zhì)雙層的組分的脂質(zhì)以及用疏水性基團(tuán)或疏水性化合物修飾的肽溶解在有機(jī)溶劑中，然后通過蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑以獲得脂質(zhì)膜。在該情況中，有機(jī)溶劑的實(shí)例包括:烴，例如戊烷、己烷、庚烷和環(huán)己烷；鹵代烴，例如二氯甲烷和氯仿；芳香烴，例如苯和甲苯；低級(jí)醇，例如甲醇和乙醇；酯，例如乙酸甲酯和乙酸乙酯；以及酮，例如丙酮。關(guān)于這些有機(jī)溶劑，可以單獨(dú)使用單個(gè)有機(jī)溶劑，或可以使用兩種以上的有機(jī)溶劑的組合。接下來，通過水合脂質(zhì)膜并攪拌或超聲處理溶液，能產(chǎn)生在脂質(zhì)體表面上具有肽的脂質(zhì)體。
[0131 ] 此外，下面將示出使用水合法的其它制備實(shí)例。[0132]將為脂質(zhì)雙層的組分的脂質(zhì)溶解在有機(jī)溶劑中，然后通過蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑以獲得脂質(zhì)膜。將該脂質(zhì)膜水合，并且將溶液攪拌或超聲處理以產(chǎn)生脂質(zhì)體。接下來，通過向脂質(zhì)體的外部溶液添加用疏水性基團(tuán)或疏水性化合物修飾的肽，能將肽引入至該脂質(zhì)體的表面?；蛘撸ㄟ^向具有已溶解于其中的脂質(zhì)的有機(jī)溶劑中添加用疏水性基團(tuán)或疏水性化合物修飾的肽，能將肽引入至脂質(zhì)體的表面。
[0133]例如，當(dāng)將季胺用作陽(yáng)離子脂質(zhì)時(shí)，能使用類似于稍后描述的實(shí)施例3-1中的方法、基于該實(shí)施例的方法、或那些方法與本領(lǐng)域中常用方法的組合來生產(chǎn)脂質(zhì)體；并且當(dāng)叔胺用作陽(yáng)離子脂質(zhì)時(shí)，能使用類似于稍后描述的實(shí)施例3-2中的方法、基于該實(shí)施例的方法、或那些方法與本領(lǐng)域中常用方法的組合來生產(chǎn)脂質(zhì)體。
[0134]當(dāng)制備陽(yáng)離子脂質(zhì)體時(shí)，能酌情改變陽(yáng)離子脂質(zhì)/Chol/輔助脂質(zhì)(helperlipid)的比。組成比(摩爾比)優(yōu)選為10至50/20至50/20至70，更優(yōu)選為20至40/30至50/20至40，并且特別優(yōu)選為30/40/30。陽(yáng)離子脂質(zhì)/Chol/輔助脂質(zhì)(helper lipid)的優(yōu)選組合為:選自D0TMA、D0DAP或DSTAP的陽(yáng)離子脂質(zhì)/Chol/選自EPC、D0PE或SOPE的輔助脂質(zhì)(helper lipid)，并且更優(yōu)選為 DOTMA/Chol/EPC、DODAP/Chol/EPC、DSTAP/Chol/EPC、DOTMA/Chol/DOPE 或者 DOTMA/Chol/SOPE。當(dāng)用 Chol-GALA 修飾脂質(zhì)體時(shí)，可以酌情改變Chol-GALA的添加比，并且相對(duì)于總脂質(zhì)量，(陽(yáng)離子脂質(zhì)/Chol/輔助脂質(zhì)(helperlipid)的脂質(zhì)總量)其實(shí)例包括0.lmol%至5mol%,優(yōu)選0.3mol%至4mol%,更優(yōu)選0.5mol%至4mol%,進(jìn)一步優(yōu)選lmol%至4mol%,并且特別優(yōu)選1.5mol%至2mol%。此外,可以酌情地用PEG修飾脂質(zhì)體，并且當(dāng)進(jìn)行PEG修飾時(shí)，能酌情改變PEG的添加比，并且相對(duì)于總脂質(zhì)量(陽(yáng)離子脂質(zhì)/Chol/輔助脂質(zhì)(helper lipid)的脂質(zhì)總量)，添加比的實(shí)例包括0.1mo 1%至15mol%,并且優(yōu)選為lmol%至5mol%。應(yīng)注意的是,所添加的PEG優(yōu)選為與脂質(zhì)結(jié)合的PEG,更優(yōu)選為STR-PEG或C8神經(jīng)酰胺-PEG，并且特別優(yōu)選為STR-PEG2000或C8神經(jīng)酰胺-PEG2000。
[0135]此外，通過使用上述輔助脂質(zhì)(helper lipid)，能制備脂質(zhì)體組成為輔助脂質(zhì)(helper lipid)/Chol的中性`脂質(zhì)體，盡管可以酌情改變其組成比(摩爾比)，但組成比優(yōu)選為40至90/10至60，更優(yōu)選為60至80/20至40，并且特別優(yōu)選為70/30。輔助脂質(zhì)(helper lipid)/Chol 的組合優(yōu)選為 EPC/Chol、DLPC/Chol、DMPC/Chol、DPPC/Chol、DSPC/Chol、POPC/Chol、DOPC/Chol、DOPE/Chol 或 SOPE/Chol，更優(yōu)選為 EPC/Chol、DOPC/Chol、DOPE/Cho I或SOPE/Cho I，并且特別優(yōu)選為EPC/Cho I。當(dāng)用Cho 1-GALA修飾脂質(zhì)體時(shí)，可以酌情改變Chol-GALA的添加比，并且相對(duì)于總脂質(zhì)量(輔助脂質(zhì)(helper lipid) /Chol的脂質(zhì)總量)，其實(shí)例包括0.lmol%至5mol%,優(yōu)選0.3mol%至4mol%,更優(yōu)選0.5mol%至4mol%,進(jìn)一步優(yōu)選lmol%至4mol%,并且特別優(yōu)選1.5mol%至2mol%。此外，可以酌情用PEG修飾脂質(zhì)體，并且當(dāng)進(jìn)行PEG修飾時(shí)，能酌情改變PEG的添加比，并且相對(duì)于總脂質(zhì)量(輔助脂質(zhì)(helper lipid) /Chol的脂質(zhì)總量)，添加比的實(shí)例包括0.lmol%至15mol%,并且優(yōu)選為lmol%至5mol%。應(yīng)注意的是，所添加的PEG優(yōu)選為被修飾至脂質(zhì)上的PEG，更優(yōu)選為STR-PEG或C8神經(jīng)酰胺-PEG，并且特別優(yōu)選為STR-PEG2000或C8神經(jīng)酰胺-PEG2000。
[0136]本發(fā)明的脂質(zhì)體組成優(yōu)選為陽(yáng)離子脂質(zhì)/Chol/輔助脂質(zhì)(helper lipid)/STR-PEG/Cho 1-GALA 或者輔助脂質(zhì)(helper lipid) /Cho I /STR-PEG/Cho 1-GALA,更優(yōu)選為選自DOTMA、DODAP或DSTAP的陽(yáng)離子脂質(zhì)/Chol/選自EPC、DOPE或SOPE的輔助脂質(zhì)(helper lipid) /STR-PEG/Cho 1-GALA,或者 EPC/Chol/STR-PEG/Chol-GALA ；以及進(jìn)一步優(yōu)選為 DOTMA/Chol/EPC/STR-PEG/Chol-GALA、DODAP/Cho I /EPC/STR-PEG/Cho 1-GALA, DSTAP/ChoI/EPC/STR-PEG/Cho1-GALA、DOTMA/ChoI/DOPE/STR-PEG/Cho1-GALA、DOTMA/ChoI/SOPE/STR-PEG/Cho 1-GALA 或者 EPC/Chol/STR-PEG/Cho 1-GALA。應(yīng)注意的是，作為 STR-PEG，其 PEG具有分子量2000的STR-PEG2000是特別優(yōu)選的。
[0137]本發(fā)明的最優(yōu)選脂質(zhì)體具有DOTMA/Cho I/EPC/STR-PEG2000/Cho 1-GALA的組成，其中:
[0138]優(yōu)選地，其中的DOTMA/Chol/EPC的組成比(摩爾比)為10至50/20至50/20至70，并且相對(duì)于DOTMA/Chol/EPC的總脂質(zhì)量，以lmol%至15mol%來包含STR-PEG2000，并且以 0.1mo 1% 至 5mol% 來包含 Chol-GALA ；
[0139]更優(yōu)選地，其中的DOTMA/Chol/EPC的組成比(摩爾比)為20至40/30至50/20至40，并且相對(duì)于DOTMA/Chol/EPC的總脂質(zhì)量，以lmol%至5mol%來包含STR-PEG2000，并且以lmol%至4mol%來包含Chol-GALA ；以及
[0140]最優(yōu)選地，其中的DOTMA/Chol/EPC的組成比(摩爾比)為30/40/30，并且相對(duì)于DOTMA/Chol/EPC 的總脂質(zhì)量，以 lmol% 至 5mol% 來包含 STR-PEG2000，并且以 1.5mol% 至2mol%來包含Chol-GALA。因?yàn)镾TR-PEG2000和Chol-GALA為脂質(zhì)體的修飾組分，所以其添加量以相對(duì)于100mol%( 即，由DOTMA/Chol/EPC的三種組分形成的脂質(zhì)體的總脂質(zhì)量)的比的形式來表示。
[0141]待向肺細(xì)胞遞送的目的物質(zhì)能被包封在本發(fā)明的脂質(zhì)體內(nèi)。
[0142]包封在本發(fā)明的物質(zhì)導(dǎo)入劑(尤其是脂質(zhì)體)中的目的物質(zhì)的實(shí)例根據(jù)肺部疾病的類型包括上述藥物(抗癌劑、血管擴(kuò)張藥物、抗菌劑等)、核酸(DNA，RNA及其類似物或衍生物(例如，siRNA、肽核酸(PNA)、硫代磷酸DNA等))，以及肽(肽激素和生物活性肽，例如催產(chǎn)素、緩激肽、促甲狀腺激素釋放因子以及腦啡肽)。根據(jù)肺部疾病的類型，通過包封合適的目的物質(zhì)，可以治療或預(yù)防該肺部疾病。在本說明書中，“肺部疾病”包括但不限于肺癌、肺的炎性疾病、肺纖維化、肺栓塞、肺動(dòng)脈高壓、肺血管炎、急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)、石棉肺/積塵病、哮喘、支氣管擴(kuò)張、支氣管肺發(fā)育不良(BPD)、慢性支氣管炎、慢性咳嗽、慢性阻塞性肺病(COPD)、感冒、囊性纖維化、肺氣腫、漢坦病毒、組織胞漿菌病、流感、軍團(tuán)病、肺淋巴管肌瘤病、百日咳、胸膜炎、氣胸、原發(fā)性肺泡換氣低下綜合征、肺泡蛋白沉積癥、呼吸窘迫綜合征、RS病毒、結(jié)節(jié)病、嚴(yán)重急性呼吸綜合征(SARS)、結(jié)核病等。優(yōu)選用作治療或預(yù)防的靶標(biāo)的肺病為涉及肺部血管的肺病，并且其實(shí)例包括肺癌、肺動(dòng)脈高壓、肺血管炎等；并且肺癌(包括非小細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌)是特別優(yōu)選的。肺癌不僅包括原發(fā)性肺癌，而且還包括從肺之外的其它器官轉(zhuǎn)移的轉(zhuǎn)移性肺癌。此外，本發(fā)明的物質(zhì)導(dǎo)入劑還可用于抑制其原發(fā)病灶為肺部的癌癥向其它器官(例如，腎上腺、肝臟、腦部、骨等)的轉(zhuǎn)移。要包封在本發(fā)明的物質(zhì)導(dǎo)入劑中以用于治療肺癌及用于抑制癌癥從肺部轉(zhuǎn)移的目的物質(zhì)為:優(yōu)選地，上述抗癌劑(例如，鹽酸氨柔比星、吉非替尼、順鉬、長(zhǎng)春花堿、絲裂霉素C、長(zhǎng)春瑞濱、紫杉醇、多西他賽、吉西他濱、卡鉬、伊立替康、替加氟、依托泊苷、長(zhǎng)春新堿、環(huán)磷酰胺、阿霉素、異環(huán)磷酰胺、長(zhǎng)春地辛等)，或靶標(biāo)為涉及血管生成的因子例如，⑶31、ESAM、VEGF,VEGFR、EGF、EGFR、Dll、SFRP、CD151、bFGF、TGFP 1、PDGF、HGF 等)的 siRNA ;更優(yōu)選地，靶標(biāo)為⑶31、ESAM、⑶151、VEGF或EGF的siRNA ;并且特別優(yōu)選地，抗⑶31siRNA。根據(jù)用途，這些藥劑可以單獨(dú)使用或以兩種以上的混合物形式使用。
[0143]包封在本發(fā)明的物質(zhì)導(dǎo)入劑中以用于肺動(dòng)脈高壓的目的物質(zhì)優(yōu)選為上述血管擴(kuò)張劑(例如，波生坦、安倍生坦、貝前列素鈉、西地那非、依前列醇等)，或者涉及血管舒張的因子(例如，內(nèi)皮素受體(ETa，ETb)、PDE5等)的抗SiRNA。
[0144]包封在本發(fā)明的物質(zhì)導(dǎo)入劑中以用于肺血管炎的目的物質(zhì)優(yōu)選為腎上腺皮質(zhì)類固醇、環(huán)磷酰胺、咪唑硫嘌呤、氨甲喋呤、阿司匹林等。
[0145]本發(fā)明的物質(zhì)導(dǎo)入劑可以單獨(dú)使用，或可以與用于肺部疾病的其它治療一起使用。
[0146]當(dāng)目的物質(zhì)為水溶性時(shí)，能通過將目的物質(zhì)添加至當(dāng)水合脂質(zhì)膜以制備脂質(zhì)體時(shí)所用的水性溶劑中，從而將目的物質(zhì)包封在脂質(zhì)體內(nèi)的水相中。當(dāng)目的物質(zhì)為親脂性時(shí)，能通過將目的物質(zhì)添加至用于制備脂質(zhì)體的有機(jī)溶劑中，從而將目的物質(zhì)包封在脂質(zhì)體的脂質(zhì)雙層中。在本說明書中，“包封”包括下述兩種情況，即，其中目的物質(zhì)被包括在諸如脂質(zhì)體的中空顆粒內(nèi)的情況，以及其中目的物質(zhì)被保留在諸如脂質(zhì)雙層膜的形成所述載體的表面部分處的情況。
[0147]目的物質(zhì)所要遞送至的生物物種不受特別限制，只要該物種是具有肺的脊椎動(dòng)物，并優(yōu)選為哺乳動(dòng)物。這樣的哺乳動(dòng)物的實(shí)例包括人、猴、牛、綿羊、山羊、馬、豬、兔、狗、毛、大鼠、小鼠、膝鼠等。
[0148]本發(fā)明的脂質(zhì)體可以例如處于分散液體的狀態(tài)下使用。作為分散溶劑，例如，可以使用緩沖液，乙酸鹽緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液、磷酸鹽緩沖液或鹽水溶液?？梢韵蚍稚⒁后w中添加例如添加劑，例如糖、多元醇、水溶性聚合物、非離子表面活性劑、抗氧化劑、PH調(diào)節(jié)劑、水合促進(jìn)劑等。
[0149]本發(fā)明的脂質(zhì)體可以以通過干燥所述分散液體(例如，凍干、噴霧干燥等)而獲得的形式來使用。可以將干燥的脂質(zhì)體添加到諸如乙酸鹽緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液、磷酸鹽緩沖液或鹽水溶液的緩沖液中，從而獲得分散液體。
[0150]各脂質(zhì)體均能體外和體內(nèi)使用。當(dāng)各脂質(zhì)體體內(nèi)使用時(shí)，給藥途徑的實(shí)例包括靜脈內(nèi)注射、靜脈內(nèi)滴注等；并且給藥劑量和給藥頻率可以根據(jù)被包封在本發(fā)明脂質(zhì)體中的目的物質(zhì)的量和類型等而適當(dāng)調(diào)節(jié)。
[0151]本發(fā)明的脂質(zhì)體未表現(xiàn)出導(dǎo)致體重降低或肝臟損傷，并且能安全地給藥。
實(shí)施例
[0152]在下文中，盡管基于實(shí)施例更詳細(xì)地描述了本發(fā)明，但毋庸置疑地，本發(fā)明不限于實(shí)施例。
[0153]在下面示出各實(shí)施例中使用的試劑、材料、動(dòng)物等。
[0154]EPC 購(gòu)自 NOF Corp.，(Tokyo, JAPAN)。DOTAP、DSTAP、D0DAP、膽固醇、DOPE、SOPE、DOPC 和 C8 神經(jīng)酰胺-PEG2000 購(gòu)自 Avanti Polar Lipids (Alabaster, AL, USA)。DOTMA購(gòu)自 Tokyo Chemical Industry C0., Ltd.(Tokyo, JAPAN)。STR-PEG2000 購(gòu)自 Wako PureChemical Industries, Ltd.。
[0155]使用專利文獻(xiàn)3所述的方法、基于該專利文獻(xiàn)3的方法或者那些方法與本領(lǐng)域常用方法的組合,合成 Cho 1-GALA (膽固醇基-O (C=O) -WEAALAEALAEALAEHLAEALAEALEALAA_NH2;Mw3444.0;>71% 的純度)。
[0156]PEI (支鏈型，平均分子量 10,000)購(gòu)自 Wako Pure Chemical Industries, Ltd.。
[0157]轉(zhuǎn)氨酶CI1-Test Wako 購(gòu)自 Wako Pure Chemical Industries, Ltd.。
[0158]RNAlater 購(gòu)自 Ambion。High Capacity RNA-to-cDNA Kit (高容量 RNA-to-cDNA試劑盒)和Gene Expression Master Mix(TaqMan基因表達(dá)預(yù)混液)購(gòu)自AppliedBiosystemSaSiRNA和 Cy5標(biāo)記的 siRNA 的合成委托給Hokkaido System Science C0.Ltd.。根據(jù)本領(lǐng)域常用的方法進(jìn)行引物和探針的合成。所用的siRNA、引物和探針的序列在下面示出。
[0159]siRNA
[0160]CD31-1 有義:GCACAGUGAUGCUGAACAATT(SEQ ID NO:2)
[0161]CD31-1 反義:UUGUUCAGCAUCACUGUGCTT(SEQ ID NO:3)
[0162]CD31-2 有義:GUGCAUAGUUCAAGUGACATT(SEQ ID NO:4)
[0163]CD31-2 反義:UGUCACUUGAACUAUGCACTT(SEQ ID NO:5)
[0164]CD31-3 有義:GCAAGAAGCAGGAAGGACATT(SEQ ID NO:6)
[0165]CD31-3 反義:UGUCCUUCCUGCUUCUUGCTT(SEQ ID NO:7)
[0166]熒光素酶有義:GCGCUGCUGGUGCCAACCCTT(SEQID NO:8)
[0167]熒光素酶反義:GGGUUGGCACCAGCAGCGCTT(SEQID NO:9)`[0168]作為⑶31siRNA，上述3種類型等量混合使用。
[0169]引物，探針
[0170]CD31 正向:CAGAGCGGATAATTGCCATTCC(SEQ ID NO: 10)
[0171]CD31 反向:ACAGGATGGAAATCACAACTTCATC(SEQ ID NO: 11)
[0172]CD31 探針:[FAM]ACCCTCAGGATCTCGCTGAACACCGC[TAMRA] (SEQ ID NO: 12)
[0173]CD34 正向:TCTGCCTGGAACTAAGTGAAGC(SEQ ID NO: 13)
[0174]CD34 反向:CCTCAGACTGGGCTAGAAGCA(SEQ ID NO: 14)
[0175]CD34 探針:[FAM]ACCAGCATCAGCCTCAGCCTCCTCC[TAMRA] (SEQ ID NO: 15)
[0176]5周齡的ICR雄性小鼠和6周齡的C57BL/6雄性小鼠購(gòu)自Japan SLC, Inc.。
[0177]對(duì)于其他而言，除非另外提及，則使用特級(jí)或一級(jí)商購(gòu)產(chǎn)品，或者與其類似的產(chǎn)品O
[0178]此外，在下面示出各實(shí)施例中使用的儀器等。
[0179]為了制備脂質(zhì)膜，使用泵DIVACL 2和捕獲器EVALA UNI TRAP UT-1000 (二者均來自 Tokyo Rikakikai C0., Ltd.)。
[0180]浴槽型超聲波破碎儀AU-25C(AIWA MEDICAL INDUSTRY C0.，LtcL )用于超聲處理。ZETA SIZER Nano-ZS (Malvern Instruments Ltd.)利用動(dòng)態(tài)光散射(DLS)來測(cè)量 ζ 電位
和顆粒直徑。
[0181]ΑΒΙ7500 實(shí)時(shí)系統(tǒng)(Applied Biosystems)用于實(shí)時(shí) PCR。
[0182]液體閃爍計(jì)數(shù)器TR1-CABB1600TR(PACKARD)用于測(cè)量β射線。
[0183]作為共聚焦激光掃描顯微鏡(CLSM)，使用Al (Nikon)、物鏡Plan Apo VC20X和60 X以及Ar激光和He/Ne激光的激光器。
[0184]PCR 熱循環(huán)儀 TP3000 (Takara Bio, Inc.)用于反轉(zhuǎn)錄。[0185]Docu-pH 計(jì)(Sartorius)用于測(cè)量 pH。
[0186]通過用適量EtOH進(jìn)行稀釋，以所需濃度(ImM至IOmM)制備所用的脂質(zhì)。
[0187]通過使用C0SM0SIL5C4-AR-300 (尺寸:10 X 250mm)的反相 HPLC 純化 Chol-GALA。將H20/0.1%TFA用作緩沖液A，并且將CH3CN/0.1%TFA用作緩沖液B。注射溶解在DMF中的Chol-GALA (純度:>71%) (4mg/mL,粗制物形式)，并且在25°C、以2.0mL/min流速應(yīng)用梯度，并且50%B=>95%B (20min)(下面描述詳情)。通過在215nm檢測(cè)吸光度來收集Chol-GALA，并且凍干。使用HPLC檢查純化的Chol-GALA的純度，然后，將純化的Chol-GALA分散為ImMEtOH溶液，并在_80°C貯存。
[0188]〈條件〉
[0189]注射量:25Oii L (4mg/mL 在 DMF 中)
[0190]流速:2mL/min
[0191]柱溫度:25°C
[0192]方案:
[0193]表1
[0194]
【權(quán)利要求】
1.由SEQID NO:1表示的GALA肽作為用于向肺部遞送目的物質(zhì)的載體的肺部遷移性要素的用途。
2.如權(quán)利要求1所述的用途，其中所述GALA肽與所述載體的組分結(jié)合。
3.如權(quán)利要求1或2所述的用途，其中所述載體包括脂質(zhì)和/或膽固醇，并且所述GALA肽與陽(yáng)離子脂質(zhì)和/或膽固醇結(jié)合。
4.如權(quán)利要求1或2所述的用途，其中所述載體包括陽(yáng)離子脂質(zhì)和/或膽固醇，并且所述GALA肽與陽(yáng)離子脂質(zhì)和/或膽固醇結(jié)合。
5.靶標(biāo)為肺部的物質(zhì)導(dǎo)入 劑，所述導(dǎo)入劑具有包封在載體內(nèi)的目的物質(zhì)，并且所述載體包括由SEQ ID NO:1表示的GALA肽。
6.如權(quán)利要求5所述的物質(zhì)導(dǎo)入劑，其中所述GALA肽與所述載體的組分結(jié)合。
7.如權(quán)利要求5或6所述的物質(zhì)導(dǎo)入劑，其中所述載體包括脂質(zhì)和/或膽固醇，并且所述GALA肽與陽(yáng)離子脂質(zhì)和/或膽固醇結(jié)合。
8.如權(quán)利要求5至7中任一權(quán)利要求所述的物質(zhì)導(dǎo)入劑，其中所述目的物質(zhì)選自藥物、核酸、肽、蛋白、糖及其復(fù)合物。
9.用于向肺部遞送目的物質(zhì)的載體,所述載體包括由SEQID N0:1表示的作為向肺部選擇性遞送物質(zhì)的要素的GALA肽。
10.如權(quán)利要求9所述的載體，其中所述載體包括脂質(zhì)和/或膽固醇，并且所述GALA肽與陽(yáng)離子脂質(zhì)和/或膽固醇結(jié)合。
11.如權(quán)利要求9或10所述的載體，其中所述載體包括陽(yáng)離子脂質(zhì)，并且所述陽(yáng)離子脂質(zhì)包括選自DOTMA、DSTAP和DODAP的至少一種類型。
12.如權(quán)利要求9至11中任一權(quán)利要求所述的載體，其中所述載體用親水性聚合物修飾，所述親水性聚合物選自:聚亞烷基二醇、葡聚糖、普魯蘭多糖、聚蔗糖、聚乙烯醇、苯乙烯-馬來酸酐交替共聚物、二乙烯醚-馬來酸酐交替共聚物、直鏈淀粉、支鏈淀粉、殼聚糖、甘露聚糖、環(huán)糊精、果膠和角叉菜膠。
13.如權(quán)利要求9至12中任一權(quán)利要求所述的載體，其還包括輔助脂質(zhì)(helperlipid)，并且所述輔助脂質(zhì)為EPC、DOPC, DOPE或S0PE。
14.如權(quán)利要求9所述的載體，其中: 所述載體為脂質(zhì)體，其包括作為脂質(zhì)膜的組分的DOTMA、Chol和EPC ； 關(guān)于DOTMA/Chol/EPC的所述脂質(zhì)體的脂質(zhì)組成(摩爾比)為10至50/20至50/20至70 ;以及 相對(duì)于DOTMA/Chol/EPC的總脂質(zhì)量，所述脂質(zhì)體還包括lmol%至15mol%的STR-PEG2000 以及 0.1mo 1% 至 5mol% 的 Chol-GALA。
15.用于向肺部導(dǎo)入目的物質(zhì)的方法，所述方法包括向哺乳動(dòng)物給予載體，所述載體具有包封于其內(nèi)的目的物質(zhì)并且具有與其結(jié)合的由SEQ ID NO:1表示的GALA肽。
【文檔編號(hào)】A61K47/34GK103561725SQ201280023256
【公開日】2014年2月5日 申請(qǐng)日期:2012年3月13日 優(yōu)先權(quán)日:2011年3月14日
【發(fā)明者】楠本憲司, 原島秀吉, 秋田英萬, 畠山浩人, 石塚太一 申請(qǐng)人:國(guó)立大學(xué)法人北海道大學(xué), 大鵬藥品工業(yè)株式會(huì)社