改變抗原結(jié)合分子的血漿中滯留性和免疫原性的方法
【專利摘要】本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，通過(guò)將抗原結(jié)合分子的Fc區(qū)改變?yōu)樵趐H中性范圍條件下不形成包含兩分子的FcRn和活性型Fcγ受體這四者的異源復(fù)合體的Fc區(qū)，抗原結(jié)合分子的藥代動(dòng)力學(xué)得到改善、抗原結(jié)合分子的免疫應(yīng)答得到降低。此外，在發(fā)現(xiàn)具有上述性質(zhì)的抗原結(jié)合分子、其制造方法的同時(shí)，還成功地發(fā)現(xiàn)在給予含有這種抗原結(jié)合分子或由本發(fā)明的制造方法制造得到的抗原結(jié)合分子作為有效成分的藥物組合物時(shí)，與以往的抗原結(jié)合分子相比，具有藥代動(dòng)力學(xué)得到改善、被給予的機(jī)體的免疫應(yīng)答得到降低的更優(yōu)異特性。
【專利說(shuō)明】改變抗原結(jié)合分子的血漿中滯留性和免疫原性的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及通過(guò)改變包含抗原結(jié)合分子對(duì)抗原的結(jié)合活性根據(jù)離子濃度的條件發(fā)生變化的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域、與在pH中性范圍條件下具有FcRn結(jié)合活性的Fe區(qū)的抗原結(jié)合分子的Fe區(qū)，從而改善給予了抗原結(jié)合分子的機(jī)體的藥代動(dòng)力學(xué)的方法、或降低抗原結(jié)合分子的免疫應(yīng)答的方法。此外，本發(fā)明還涉及在給予機(jī)體時(shí)其藥代動(dòng)力學(xué)得到改善、或該機(jī)體的免疫應(yīng)答得到降低的抗原結(jié)合分子。進(jìn)而，本發(fā)明還涉及該抗原結(jié)合分子的制造方法、和含有該抗原結(jié)合分子作為有效成分的藥物組合物。
【背景技術(shù)】
[0002]抗體在血漿中的穩(wěn)定性高、副作用也少，因而作為醫(yī)藥品受到關(guān)注。其中，IgG型的抗體藥物有大量上市，現(xiàn)在也正在開(kāi)發(fā)著數(shù)量眾多的抗體藥物(非專利文獻(xiàn)I和非專利文獻(xiàn)2)。另一方面，作為能適用于第二代抗體藥物的技術(shù)，開(kāi)發(fā)有各種技術(shù)，報(bào)道了使效應(yīng)器功能、抗原結(jié)合能力、藥代動(dòng)力學(xué)、穩(wěn)定性提高的技術(shù)、或者使免疫原性風(fēng)險(xiǎn)降低的技術(shù)等(非專利文獻(xiàn)3)。通常，抗體藥物的給藥量非常高，因而作為課題可考慮到難以制作皮下給藥制劑，制造成本高等。作為降低抗體藥物的給藥量的方法，可考慮提高抗體的藥代動(dòng)力學(xué)的方法、和提高抗體與抗原的親和性的方法。
[0003]作為提高抗體的藥代動(dòng)力學(xué)的方法，報(bào)道有恒定區(qū)的人工氨基酸置換(非專利文獻(xiàn)4和5)。作為增強(qiáng)抗原結(jié)合能力、抗原中和能力的技術(shù)，報(bào)道有親和力成熟技術(shù)(非專利文獻(xiàn)6)，通過(guò)對(duì)可變區(qū)的CDR區(qū)等的氨基酸導(dǎo)入突變可以增強(qiáng)對(duì)抗原的結(jié)合活性。通過(guò)增強(qiáng)抗原結(jié)合能力，可以提高體外的生物活性，或者降低給藥量，進(jìn)而也可以提高體內(nèi)(機(jī)體內(nèi))的藥效(非專利文獻(xiàn)7)。
`[0004]另一方面，每一分子抗體能夠中和的抗原量依賴于親和性，可以通過(guò)增強(qiáng)親和性來(lái)以少的抗體量中和抗原，可以通過(guò)各種方法增強(qiáng)抗體的親和性(非專利文獻(xiàn)6)。進(jìn)而，只要可共價(jià)地與抗原結(jié)合，使親和性無(wú)限大，則可以用一分子的抗體來(lái)中和一分子的抗原(二價(jià)的情形為二抗原)。但是，迄今為止的方法中，限制是一分子抗體對(duì)一分子抗原(二價(jià)的情形是二抗原)的化學(xué)計(jì)量的中和反應(yīng)，不可能用抗原量以下的抗體量來(lái)完全中和抗原。即，在增強(qiáng)親和性的效果方面存在限制(非專利文獻(xiàn)9)。中和抗體的情形中，為了使其中和效果持續(xù)一定期間，需要給予機(jī)體內(nèi)在該期間產(chǎn)生的抗原量以上的抗體量，僅通過(guò)上述的抗體藥代動(dòng)力學(xué)提高、或者親和力成熟技術(shù)，在降低必要抗體給藥量方面存在限制。因此，為了用抗原量以下的抗體量來(lái)使抗原的中和效果持續(xù)目標(biāo)期間，需要用一個(gè)抗體來(lái)中和多個(gè)抗原。作為實(shí)現(xiàn)其的新方法，最近報(bào)道了 PH依賴性地與抗原結(jié)合的抗體(專利文獻(xiàn)I)。在血漿中的中性條件下與抗原強(qiáng)結(jié)合、在內(nèi)體內(nèi)的酸性條件下從抗原解離的pH依賴性抗原結(jié)合抗體可以在內(nèi)體內(nèi)從抗原解離。PH依賴性抗原結(jié)合抗體在將抗原解離后，若抗體通過(guò)FcRn被循環(huán)至血漿中，則可以再次與抗原結(jié)合，因而可以用一個(gè)pH依賴性抗原結(jié)合抗體反復(fù)與多個(gè)抗原結(jié)合。
[0005]另外，與結(jié)合至FcRn而被循環(huán)的抗體相比，抗原的血漿中滯留性非常短。這種血漿中滯留性長(zhǎng)的抗體與該抗原結(jié)合時(shí)，抗體抗原復(fù)合體的血漿中滯留性變得與抗體同樣地長(zhǎng)。因此，抗原通過(guò)與抗體結(jié)合，不僅血漿中滯留性變長(zhǎng)，而且血漿中抗原濃度上升。
[0006]IgG抗體通過(guò)與FcRn結(jié)合而具有長(zhǎng)的血漿中滯留性。IgG和FcRn的結(jié)合僅在酸性條件下(pH6.0)被觀察到，而在中性條件下(pH7.4)基本觀察不到其結(jié)合。IgG抗體被非特異性地?cái)z入細(xì)胞，但通過(guò)在內(nèi)體內(nèi)的酸性條件下與內(nèi)體內(nèi)的FcRn結(jié)合而返回到細(xì)胞表面上，在血漿中的中性條件下從FcRn解離。向IgG的Fe區(qū)導(dǎo)入突變而喪失在酸性條件下與FcRn的結(jié)合時(shí)，變得無(wú)法從內(nèi)體內(nèi)再循環(huán)至血漿中，因而抗體的血漿中滯留性顯著受損。作為改善IgG抗體的血漿中滯留性的方法，報(bào)道有提高酸性條件下對(duì)FcRn的結(jié)合的方法。通過(guò)向IgG抗體的Fe區(qū)導(dǎo)入氨基酸置換，使酸性條件下的對(duì)FcRn的結(jié)合提高，從內(nèi)體內(nèi)再循環(huán)至血漿中的效率提高，結(jié)果血漿中滯留性改善。導(dǎo)入氨基酸置換時(shí)重要的是不能提高中性條件下對(duì)FcRn的結(jié)合。若中性條件下與FcRn結(jié)合，則即使在內(nèi)體內(nèi)的酸性條件下與FcRn結(jié)合而返回到細(xì)胞表面上,在中性條件下的血衆(zhòng)中IgG抗體也不會(huì)從FcRn解離,此時(shí)IgG抗體未被再循環(huán)至血漿中，因而反而會(huì)損害血漿中滯留性。例如，將通過(guò)對(duì)IgGl導(dǎo)入氨基酸置換而在中性條件下(PH7.4)觀察到對(duì)小鼠FcRn的結(jié)合的抗體給予小鼠時(shí)，據(jù)報(bào)道抗體的血漿中滯留性變差(非專利文獻(xiàn)10)。此外，在對(duì)食蟹猴給予通過(guò)對(duì)IgGl導(dǎo)入氨基酸置換而使酸性條件下(pH6.0)的人FcRn的結(jié)合提高、但同時(shí)還觀察到中性條件下(pH7.4)對(duì)人FcRn的結(jié)合的抗體時(shí)，據(jù)報(bào)道抗體的血漿中滯留性沒(méi)有發(fā)生改善，血漿中滯留性未觀察到變化(非專利文獻(xiàn)10、11和12)。因此，提高抗體功能的抗體工程技術(shù)中，僅僅著眼于通過(guò)不使中性條件下(pH7.4)對(duì)人FcRn的結(jié)合增加而使酸性條件下對(duì)人FcRn的結(jié)合增加來(lái)改善抗體的血漿中滯留性，迄今為止尚未報(bào)道向IgG抗體的Fe區(qū)導(dǎo)入氨基酸置換以增加中性條件下(pH7.4WtAFcRn的結(jié)合的優(yōu)點(diǎn)。即使提高抗體對(duì)抗原的親和性，也不能促進(jìn)抗原從血漿中的消除。上述的PH依賴性抗原結(jié)合抗體據(jù)報(bào)道與通常的抗體相比，作為促進(jìn)抗原從血漿中消除的方法也是有效的(專利文獻(xiàn)I)。
[0007]如此，pH依賴性抗原結(jié)合抗體可以用I個(gè)抗體與多個(gè)抗原結(jié)合，與通常的抗體相t匕，能促進(jìn)抗原從血漿中的消除，因此具有通常的抗體所無(wú)法實(shí)現(xiàn)的作用。然而，迄今為止尚未報(bào)道有該P(yáng)H依賴性抗原結(jié)合抗體的可以反復(fù)與抗原結(jié)合的效果、以及使促進(jìn)抗原從血漿中消除的效果進(jìn)一步提高的抗體工程技術(shù)。
[0008]另一方面，抗體藥物的免疫原性在將抗體藥物對(duì)人給予時(shí)的血漿中滯留性、有效性、安全性方面非常重要。據(jù)報(bào)道，人的體內(nèi)若對(duì)所給予的抗體藥物產(chǎn)生抗體，則會(huì)引起抗體藥物在血漿中的消除加快、有效性降低、引起過(guò)敏反應(yīng)而影響安全性等不期望的事件(非專利文獻(xiàn)13)。[0009]在考慮抗體藥物的免疫原性的基礎(chǔ)上，需要對(duì)天然抗體原本在機(jī)體內(nèi)所起的功能進(jìn)行理解。首先，多數(shù)抗體藥物是屬于IgG類的抗體，但作為與IgG抗體的Fe區(qū)結(jié)合而起作用的Fe受體，已知有Fe Y受體(以下，也記載為Fe Y R)的存在。已知Fe Y R表達(dá)在樹(shù)突細(xì)胞或NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、脂肪細(xì)胞等的細(xì)胞膜上，通過(guò)IgG的Fe區(qū)的結(jié)合而對(duì)免疫細(xì)胞傳達(dá)活性型或抑制型的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)。作為人Fe Y R的蛋白家族，報(bào)道有Fe Y RIa,FcyRIIa, FcyRIIb, FcyRIIIa, FcyRIIIb的同型，也報(bào)道有各自的異型(非專利文獻(xiàn)14)。作為人 Fe Y RIIa 的異型，報(bào)道有 131 位為 Arg (hFc y RIIa(R))和 HisChFc y RIIa(H))的2種。另外，作為人Fe YRIIIa的異型，報(bào)道有158位為Val (hFc Y RIIIa(V))和Phe(hFc y RIIIa(F))的2種。此外，作為小? Fe y R的蛋白家族，報(bào)道有FcyRI, Fcy RIIb、FcyRIIKFcyRIV (非專利文獻(xiàn) 15)。
[0010]AFcyR 分類為作為活性型受體的 Fe Y RIa, Fe y RIIa, Fe y RIIIa, Fe y RIIIb,以及作為抑制性受體的Fe Y Rllb。同樣地，小鼠Fe Y R分類為作為活性型受體的Fe y R1、Fe Y RII1、Fe Y RIV、以及作為抑制性受體的Fe Y RIIb。
[0011]活性型Fe Y R若與免疫復(fù)合體交聯(lián)，則會(huì)引起細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域或作為相互作用對(duì)象的FcR common Y -鏈所含的免疫受體酪氨酸相關(guān)的活化基序(immunoreceptortyrosine-based activating motifs, ITAMs)的磷酸化，將信號(hào)傳遞物質(zhì)SYK活化,開(kāi)始活化信號(hào)級(jí)連，由此引起炎癥性免疫反應(yīng)(非專利文獻(xiàn)15)。
[0012]已表明，對(duì)于Fe區(qū)與Fe YR的結(jié)合，抗體的鉸鏈區(qū)以及CH2結(jié)構(gòu)域內(nèi)的數(shù)個(gè)氨基酸殘基以及與CH2結(jié)構(gòu)域結(jié)合的EU編號(hào)297位的Asn上所附加的糖鏈?zhǔn)侵匾?非專利文獻(xiàn)15、非專利文獻(xiàn)16、非專利文獻(xiàn)17)。圍繞向這些位置導(dǎo)入了突變的抗體,迄今為止研究了對(duì)各種Fe Y R具有結(jié)合特性的突變體，得到了對(duì)活性型Fe Y R具有更高親和性的Fe區(qū)突變體(專利文獻(xiàn)2、專利文獻(xiàn)3、專利文獻(xiàn)4、專利文獻(xiàn)5)。
[0013]另一方面，作為抑制型Fe Y R的Fe Y RIIb是表達(dá)于B細(xì)胞的唯一的Fe Y R(非專利文獻(xiàn)18)。據(jù)報(bào)道，通過(guò)抗體的Fe區(qū)對(duì)Fe Y RIIb的相互作用，B細(xì)胞的初次免疫得到抑制(非專利文獻(xiàn)19)。此外，據(jù)報(bào)道B細(xì)胞上的Fe Y RIIb和B細(xì)胞受體(B cell receptor:BCR)若經(jīng)由血中的免疫復(fù)合體交聯(lián) ，則B細(xì)胞的活化受到抑制，B細(xì)胞的抗體產(chǎn)生受到抑制(非專利文獻(xiàn)20)。該BCR和Fe Y RIIb介導(dǎo)的免疫抑制信號(hào)的傳導(dǎo)中需要包含在Fe y RIIb的細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域中的免疫受體酪氨酸相關(guān)的抑制性基序(immunoreceptor tyrosine-basedinhibitory motif, ITIM)(非專利文獻(xiàn)21、非專利文獻(xiàn)22)。該免疫抑制作用經(jīng)由Ι--Μ的磷酸化而發(fā)生。磷酸化的結(jié)果是含SH2的肌醇多磷酸5-磷酸酶(SH2-containing inositolpolyphosphate 5-phosphatase, SHIP)被補(bǔ)充，阻礙其它的活性型Fe Y R的信號(hào)級(jí)聯(lián)的傳導(dǎo)，抑制炎癥性免疫反應(yīng)(非專利文獻(xiàn)23)。
[0014]由于該性質(zhì)，因而Fe YRIIb被期待作為直接降低針對(duì)抗體藥物的免疫原性的方法。即使將在對(duì)小鼠來(lái)說(shuō)是異種蛋白的Exendin-4 (Ex4)中融合有小鼠IgGl的分子(Ex4/Fe)給予小鼠，也不會(huì)產(chǎn)生抗體，但是通過(guò)給予對(duì)Ex4/Fc加以修飾而形成的不會(huì)與B細(xì)胞上的Fe Y RIIb結(jié)合的分子(Ex4/Fc mut),卻會(huì)產(chǎn)生針對(duì)Ex4的抗體(非專利文獻(xiàn)24)。該結(jié)果暗示Ex4/Fc與B細(xì)胞上的Fe Y RIIb結(jié)合，從而抑制B細(xì)胞的針對(duì)Ex4的小鼠抗體的產(chǎn)生。
[0015]此外，F(xiàn)cYRIIb也表達(dá)于樹(shù)突細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、活化的嗜中性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、嗜堿細(xì)胞。在這些細(xì)胞中，F(xiàn)cYRIIb也妨礙吞噬作用和炎癥性細(xì)胞因子的釋放等活性型Fe YR的功能，抑制炎癥性免疫反應(yīng)(非專利文獻(xiàn)25)。
[0016]對(duì)于Fe YRIIb的免疫抑制功能的重要性，迄今為止通過(guò)使用了 Fe YRIIb敲除小鼠的研究進(jìn)行了說(shuō)明。據(jù)報(bào)道，F(xiàn)e YRIIb敲除小鼠中，體液免疫未受適當(dāng)控制(非專利文獻(xiàn)26)、對(duì)膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎(CIA)的敏感性增加(非專利文獻(xiàn)27)、呈狼瘡(lupus)樣的癥狀、或呈古德帕斯徹(Goodpasture)綜合征樣的癥狀(非專利文獻(xiàn)28)。
[0017]此外，據(jù)報(bào)道Fe Y RIIb的調(diào)節(jié)不全也與人的自體免疫疾病相關(guān)。例如，據(jù)報(bào)道FcyRIIb的啟動(dòng)子區(qū)或穿膜區(qū)的基因多態(tài)性與系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)的發(fā)病頻率相關(guān)(非專利文獻(xiàn)29、非專利文獻(xiàn)30、非專利文獻(xiàn)31、非專利文獻(xiàn)32、非專利文獻(xiàn)33)、或者SLE患者的B細(xì)胞表面的Fe Y RIIb的表達(dá)降低(非專利文獻(xiàn)34、非專利文獻(xiàn)35)。
[0018]這樣，根據(jù)小鼠模型和臨床上的發(fā)現(xiàn)，認(rèn)為Fe YRIIb主要通過(guò)與B細(xì)胞的相關(guān)而發(fā)揮控制自身免疫疾病、炎癥性疾病的功能，是有望用于控制自身免疫疾病、炎癥性疾病的目標(biāo)分子。
[0019]已知主要用作市售抗體藥物的IgGl不僅與Fe Y RIIb強(qiáng)結(jié)合，而且與活性型Fe Y R也強(qiáng)結(jié)合(非專利文獻(xiàn)36)。認(rèn)為通過(guò)利用增強(qiáng)了 Fe Y RIIb結(jié)合的Fe區(qū)、或者與活性型Fe Y R相比提高了 FcYRIIb結(jié)合的選擇性的Fe區(qū)，可以開(kāi)發(fā)出與IgGl相比具有免疫抑制性質(zhì)的抗體藥物。例如，暗示了通過(guò)利用具有與BCR結(jié)合的可變區(qū)、和增強(qiáng)了 Fe Y RIIb結(jié)合的Fe的抗體，可以抑制B細(xì)胞的活化的可能性(非專利文獻(xiàn)37)。
[0020]但是，已知Fe Y RIIb與作為活性型Fe Y R之一的Fe Y RIIa的胞外區(qū)的序列為93%一致，結(jié)構(gòu)極其類似。進(jìn)而，作為基因多態(tài)性，F(xiàn)e YRIIa中存在第二 Ig結(jié)構(gòu)域的131位的氨基酸為His的H型與作為Arg的R型，各自與抗體的相互作用不同(非專利文獻(xiàn)38)。因此，為了制造特異性地與FcYRIIb結(jié)合的Fe區(qū)，認(rèn)為最難的問(wèn)題是對(duì)抗體的Fe區(qū)賦予在不增加或減少對(duì)Fe Y RIIa的各基因多型的結(jié)合活性、同時(shí)增加Fe y RIIb結(jié)合活性的選擇性地提高Fe Y RIIb結(jié)合活性的性質(zhì)。
[0021]迄今為止報(bào)道了通過(guò)向Fe區(qū)導(dǎo)入氨基酸突變來(lái)使Fe Y RIIb結(jié)合的特異性提高的例子(非專利文獻(xiàn)39)。該文獻(xiàn)中，制作了與IgGl相比、較對(duì)兩基因多型的Fe YRIIa的結(jié)合更多地維持了對(duì)Fe Y RIIb的結(jié)合的突變體。但是，該文獻(xiàn)中報(bào)道的對(duì)Fe Y RIIb的特異性得到改善的任意突變體中，與天然型IgGl相比，對(duì)Fe YRIIb的結(jié)合減少。因此，認(rèn)為這些突變體實(shí)際上難以在IgGl以上的程度上引起Fe YRIIb介導(dǎo)的免疫抑制性反應(yīng)。
[0022]也增強(qiáng)了對(duì)Fe Y RIIb的結(jié)合的報(bào)道(非專利文獻(xiàn)37)。該文獻(xiàn)中，通過(guò)向抗體的Fe 區(qū)加以 S267E/L328F、G236D/S267E、S239D/S267E 等的突變來(lái)使對(duì) Fe Y RIIb 的結(jié)合增強(qiáng)。其中，導(dǎo)入了 S267E/L328F的突變的抗體最為強(qiáng)烈地與FCRIIb強(qiáng)結(jié)合，但該突變體對(duì)Fe Y RIa和Fe Y RIIa的H型的結(jié)合卻維持于和天然型IgGl相同程度。即使Fe Y RIIb結(jié)合與IgGl相比增強(qiáng)，對(duì)于不表達(dá)Fe Y RIIb而表達(dá)Fe y RIIa的血小板之類的細(xì)胞(非專利文獻(xiàn)25)，也并非Fe Y RIIb結(jié)合的增強(qiáng)，而僅是Fe y RIIa結(jié)合的增強(qiáng)效果有影響。例如有報(bào)道，在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中，血小板通過(guò)Fe Y RIIa依賴性機(jī)制活化,血小板的活化與重癥度相關(guān)(非專利文獻(xiàn)40)。進(jìn)而根據(jù)其它報(bào)道，該突變使得對(duì)Fe Y RIIa的R型的結(jié)合增強(qiáng)至對(duì)Fe Y RIIb的結(jié)合的同程度的數(shù)百倍，R型中，與Fe Y RIIa結(jié)合相比，F(xiàn)e y RIIb結(jié)合的選擇性并未提高(專利文獻(xiàn)17)。此外，相對(duì)于樹(shù)突細(xì)胞或巨噬細(xì)胞等表達(dá)Fe Y RIIa和Fe Y RIIb兩者的細(xì)胞種類，為了傳遞抑制性信號(hào)，需要相較于Fe Y RIIa的對(duì)Fe y RIIb的結(jié)合的選擇性，對(duì)于R型來(lái)說(shuō)，其無(wú)法實(shí)現(xiàn)。[0023]Fe Y RIIa的H型和R型在高加索人和非裔美國(guó)人中以大致相同程度的頻率被觀察到(非專利文獻(xiàn)41、非專利文獻(xiàn)42)。因此，認(rèn)為將對(duì)FcYRIIa R型的結(jié)合增強(qiáng)的抗體用于自身免疫疾病的治療具有一定的限制。即使Fe Y RIIb結(jié)合與活性型Fe Y R相比增強(qiáng)，從用作自身免疫疾病的治療藥的觀點(diǎn)出發(fā)，也不能忽視對(duì)Fe Y RIIa的任一基因多型的結(jié)合得到增強(qiáng)這一點(diǎn)。
[0024]在研制利用FcyRIIb的以自身免疫疾病治療為目的的抗體藥物時(shí)，重要的是，與天然型IgG相比，相對(duì)于Fe Y RIIa的任一基因多型，F(xiàn)e介導(dǎo)的結(jié)合均不增加、優(yōu)選減少、并且對(duì)Fe YRIIb的結(jié)合增強(qiáng)。但是，迄今為止尚無(wú)具有這種性質(zhì)的突變體的報(bào)道，其開(kāi)發(fā)受到需求。
[0025]應(yīng)予說(shuō)明，本發(fā)明的現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)如下所示。
[0026]現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn) 專利文獻(xiàn)
專利文獻(xiàn) 1:W02009/125825 專利文獻(xiàn) 2:W02000/042072 專利文獻(xiàn) 3:W02006/019447 專利文獻(xiàn) 4:W02004/099249 專利文獻(xiàn) 5:W02004/029207 非專利文獻(xiàn)
非專利文獻(xiàn) 1:Janice M Reichert, Clark J Rosensweigj Laura B Faden & MatthewC Dewitzj Monoclonal antibody successes in the clinic.，Nat.Biotechnol.(2005)23，1073 - 1078
非專利文獻(xiàn) 2:Pavlou AKj Belsey MJ.，The therapeutic antibodies market to2008.， Eur J Pharm Biopharm.(2005) 59 (3)， 389-396
非專利文獻(xiàn) 3:Kim SJj Park Y， Hong HJ.， Antibody engineering for thedevelopment of therapeutic antibodies.， Mol Cells.(2005) 20 (1)， 17-29
非專利文獻(xiàn)4 ；Hinton PR，Xiong JMj Johlfs MG，Tang MT，Keller S，TsurushitaN.，An engineered human IgGl antibody with longer serum half-life.，J.1mmunol.(2006) 176 (I), 346-356
非專利文獻(xiàn)5 ；Ghetie V，Popov S，Borvak J，Radu C，Matesoi D，Medesan C，OberRJj Ward ES.， Increasing the serum persistence of an IgG fragment by randommutagenesis.， Nat.Biotechnol.(1997) 15 (7)， 637-640
非專利文獻(xiàn) 6:Rajpal A，Beyaz N，Haber Lj Cappuccilli G，Yee H，Bhatt RRjTakeuchi T，Lerner RA, Crea R.，A general method for greatly improving theaffinity of antibodies by using combinatorial libraries.，Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.(2005) 102 (24)，8466-8471
非專利文獻(xiàn) 7:Wu Hj Pfarr DSj Johnson S，Brewah YAj Woods RMj Patel NKj WhiteWIj Young JFj Kiener PA.，Development of Motavizumabj an Ultra-potent Antibodyfor the Prevention of Respiratory Syncytial Virus Infection in the Upper andLower Respiratory Tract.，J.Mol.Biol.(2007) 368，652-665
非專利文獻(xiàn) 8:Hanson CVj Nishiyama Y，Paul S., Catalytic antibodies andtheir applications.， Curr Opin Biotechnol.(2005) 16 (6)， 631-636
非專利文獻(xiàn)9:Rathanaswami P，Roalstad S，Roskos Lj Su QJj Lackie S，BabcookJ.， Demonstration of an in vivo generated sub-picomolar affinity fully humanmonoclonal antibody to interleukin-8.，Biochem.Biophys.Res.Commun.(2005)334 (4), 1004-1013非專利文獻(xiàn) 10:Dall’Acqua WFj Woods RMj Ward ES，Palaszynski SR，Patel NKjBrewah YAj Wu H，Kiener PA，Langermann S.，Increasing the affinity of a humanIgGl for the neonatal Fe receptor: biological consequences., J.1mmunol.(2002)169 (9)， 5171-5180
非專利文獻(xiàn) 11:Yeung YAj Leabman MKj Marvin JSj Qiu J，Adams CWj Lien S，Starovasnik MAj Lowman HB.，Engineering human IgGl affinity to human neonatalFe receptor:1mpact of affinity improvement on pharmacokinetics in primates.,J.1mmunol.(2009) 182 (12)， 7663—7671
非專利文獻(xiàn) 12:Datta_Mannan A，Witcher DRj Tang Y，Watkins J，WroblewskiVJ.，Monoclonal antibody clearance.1mpact of modulating the interaction of IgGwith the neonatal Fe receptor., J.Biol.Chem.(2007) 282 (3)， 1709-1717
非專利文獻(xiàn) 13:Niebecker R，Kloft C.，Safety of therapeutic monoclonalantibodies.，Curr.Drug Saf.(2010) 5 (4)，275-286
非專利文獻(xiàn) 14:Jefferis R，Lund J.，Interaction sites on human IgG-Fc forFcgammaR: current models.，Immunol.Lett.(2002) 82，57-65
非專利文獻(xiàn) 15:Nimmer jahn F，Ravetch JV.，F(xiàn)cgamma receptors as regulators ofimmune responses., Nat.Rev.1mmunol.(2008) 8 (1)，34-47
非專利文獻(xiàn) 16:M.Clark, Antibody Engineering IgG Effector Mechanisms.,Chemical Immunology (1997)， 65， 88-110
非專利文獻(xiàn) 17 ；Greenwood J，Clark M，Waldmann H., Structural motifs involvedin human IgG antibody effector functions.， Eur.J.1mmunol.(1993) 23，1098-1104
非專利文獻(xiàn) 18:Amigorena S，Bonnerot C，Choquet D，F(xiàn)ridman WHj TeillaudJL，F(xiàn)e gamma RII expression in resting and activated B lymphocytes.，Eur.J.1mmunol.(1989) 19， 1379-1385
非專利文獻(xiàn) 19 !Nicholas R，Sinclair SC，Regulation of the immune response.1.Reduction in ability of specific antibody to inhibit long-lasting IgGimmunological priming after removal of the Fe fragment.，J.Exp.Med.(1969)129， 1183-1201
非專利文獻(xiàn) 20:Heyman B.，F(xiàn)eedback regulation by IgG antibodies.，Immunol.Lett.(2003) 88，157—161
非專利文獻(xiàn) 21:S Amigorenaj C Bonnerotj Drake, JRj D Choquetj W HunzikerjJG Guilletj P Webster, C Sautes, I Mellmanj and WH Fridman, Cytoplasmic domainheterogeneity and functions of IgG Fe receptors in B lymphocytes.， Science(1992) 256， 1808-1812
非專利文獻(xiàn) 22:Muta，Τ.，Kurosakij Τ.，Misulovinj Ζ.，Sanchez, Μ.，Nussenzweigj Μ.C.， and Ravetchj J.V., A 13-amino-acid motif in thecytoplasmic domain of Fe y RIIB modulates B—cell receptor signaling.，Nature(1994) 368， 70-73非專利文獻(xiàn)23:Ravetch JVj Lanier LL，Immune inhibitory receptors.，Science(2000) 290， 84-89
非專利文獻(xiàn) 24:Liang Y，Qiu H，Glinka Y，Lazarus AHj Ni H，Prudi homme GJjWang Q.，Immunity against a therapeutic xenoprotein/Fc construct delivered bygene transfer is reduced through binding to the inhibitory receptor Fe Y RIIb.,J.Gene Med.(2011) do1: 10.1002/jgm.1598
非專利文獻(xiàn) 25:Smith KGj Clatworthy MR.，F(xiàn)cgammaRIIB in autoimmunity andinfection: evolutionary and therapeutic implications.，Nat.Rev.1mmunol.(2010) 10， 328-343
非專利文獻(xiàn) 26:Wernersson S，Karlsson MCj Dahlstrom (o 上帶有兀音變音)Jj Mattsson R，Verbeek JSj Heyman B.， IgG—mediated enhancement of antibodyresponses is low in Fe receptor gamma chain-deficient mice and increased in Fegamma RI1-deficient mice.，J.1mmunol.(1999) 163，618-622
非專利文獻(xiàn)27:Joachim L Schultzej Sabine Michalak, Joel Lownej Adam Wong,Maria H.Gilleecej John G.Gribbenj and Lee M.Nadlerj Human Non-Germinal CenterB Cell Interleukin (IL)-12 Production Is Primarily Regulated by T Cell SignalsCD40 Ligand, Interferon Y, and IL-1O: Role of B Cells in the Maintenance of TCell Responses.，J.Exp.Med.(1999) 189，187-194
非專利文獻(xiàn) 28:Nakamura, A.，Yuasaj T.，Ujikej A.，Onoj M.，NukiwajT., Ravetchj J.V., Takaij T., Fe Y receptor IIB-deficient mice developGoodpasture’s syndrome upon immunization with type IV collagen: A novel murinemodel for autoimmune glomerular basement membrane disease.，J.Exp.Med.(2000)191， 899-906
非專利文獻(xiàn)29:Blank MCj Stefanescu RN，Masuda E，Marti F，King PD，RedechaPB，Wurzburger RJj Peterson MG，Tanaka S，Pricop L，Decreased transcriptionof the human FCGR2B gene mediated by the -343 G/C promoter polymorphism andassociation with systemic lupus erythematosus., Hum.Genet.(2005) 117，220-227
非專利文獻(xiàn)30:01feriev M，Masuda E，Tanaka S，Blank MCj Pricop L.，The Roleof Activating Protein I in the Transcriptional Regulation of the Human FCGR2BPromoter Mediated by the -343 G ->C Polymorphism Associated with Systemic LupusErythematosus.，J.Biol.Chem.(2007) 282，1738-1746
非專利文獻(xiàn) 31:Lv Jj Yang Y，Zhou X，Yu Lj Li R，Hou P，Zhang H.，F(xiàn)CGR3Bcopy number variation is not associated with lupus nephritis in a Chinesepopulation.，Arthritis Rheum.(2006) 54，3908-3917
非專利文獻(xiàn)32:Floto RA, Clatworthy MR, Heilbronn KR，Rosner DRj MacAry PA，Rankin A，Lehner PJj Ouwehand WHj Allen JMj Watkins NA，Smith KG.，Loss offunction of a lupus-associated FcgammaRIIb polymorphism through exclusion fromlipid rafts., Nat.Med.(2005) 11，1056-1058
【權(quán)利要求】
1.以下(a)或(b)中的任一方法，其包含:將包含抗原結(jié)合活性根據(jù)離子濃度的條件而發(fā)生變化的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域、和在PH中性范圍條件下具有FcRn結(jié)合活性的Fe區(qū)的抗原結(jié)合分子的Fe區(qū)改變?yōu)樵趐H中性范圍條件下不會(huì)形成含有兩分子的FcRn和一分子的活性型Fe Y受體的異源復(fù)合體的Fe區(qū)； (a)改善抗原結(jié)合分子的藥代動(dòng)力學(xué)的方法、或 (b)使抗原結(jié)合分子的免疫原性降低的方法。
2.權(quán)利要求1所述的方法，其中，改變?yōu)椴恍纬汕笆霎愒磸?fù)合體的Fe區(qū)包括:改變?yōu)镕e區(qū)的活性型Fe Y受體結(jié)合活性低于天然型人IgG的Fe區(qū)的該活性型Fe Y受體結(jié)合活性的Fe區(qū)。
3.權(quán)利要求1或2所述的方法，其中，前述活性型FeY受體是人Fe Y RIa、人Fe Y RIIa(R)、人 FcyRIIa (H)、人 FcyRIIIa (V)或人 FcyRIIIa (F)。
4.權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的方法，其包括對(duì)前述Fe區(qū)的氨基酸中以EU編號(hào)表示的235位、237位、238位、239位、270位、298位、325位和329位中的任意一個(gè)以上的氨基酸進(jìn)行置換。
5.權(quán)利要求4所述的方法,其包括前述Fe區(qū)的以EU編號(hào)表不的氨基酸的下述任一者以上的置換: 將 234 位的氨基酸置換為 Ala、Arg、Asn、Asp、Gin、Glu、Gly、His、Lys> Met、Phe> Pro、Ser、Thr或Trp中的任一者、 將 235 位的氛基酸置換為 Ala、Asn、Asp、Gin、Glu、Gly、His、lie、Lys> Met、Pro、Ser>Thr> Val或Arg中的任一者、 將 236 位的氨基酸置換為 Arg、Asn、Gln、His、Leu、Lys、Met、Phe、Pro 或 Tyr 中的任一者、 將 237 位的氛基酸置換為 Ala、Asn、Asp、Gin、Glu、His、lie、Leu、Lys> Met> Pro、Ser>Thr> Val、Tyr 或 Arg 中的任一者、 將 238 位的氨基酸置換為 Ala、Asn、Gin、Glu、Gly、His、lie、Lys、Thr、Trp 或 Arg 中的任一者、 將239位的氨基酸置換為Gin、His、Lys> Phe> Pro、Trp> Tyr或Arg中的任一者、 將 265 位的氛基酸置換為 Ala、Arg、Asn、Gin、Gly、His、lie、Leu、Lys> Met、Phe> Ser>Thr、Trp、Tyr 或 Val 中的任一者、 將 266 位的氨基酸置換為 Ala、Arg、Asn、Asp、Gin、Glu、Gly、His、Lys> Phe> Pro、Ser>Thr> Trp或Tyr中的任一者、 將267位的氨基酸置換為Arg、His、Lys、Phe、Pro、Trp或Tyr中的任一者、 將 269 位的氨基酸置換為 Ala、Arg、Asn、Gin、Gly、His、lie、Leu、Lys> Met、Phe> Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr 或 Val 中的任一者、 將 270 位的氨基酸置換為 Ala、Arg、Asn、Gin、Gly、His、lie、Leu、Lys> Met、Phe> Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr 或 Val 中的任一者、 將271位的氨基酸置換為Arg、His、Phe> Ser、Thr、Trp或Tyr中的任一者、 將295位的氨基酸置換為Arg、Asn、Asp、Gly、His、Phe、Ser、Trp或Tyr中的任一者、 將296位的氨基酸置換為Arg、Gly、Lys或Pro中的任一者、將297位的氨基酸置換為Ala、 將298位的氨基酸置換為Arg、Gly、Lys> Pro、Trp或Tyr中的任一者、 將300位的氨基酸置換為Arg、Lys或Pro中的任一者、 將324位的氨基酸置換為L(zhǎng)ys或Pro中的任一者、 將 325 位的氨基酸置換為 Ala、Arg、Gly、His、lie、Lys> Phe、Pro、Thr、TrpTyr、或 Val中的任一者、 將 327 位的氨基酸置換為 Arg、Gin、His、lie、Leu、Lys> Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp>Tyr或Val中的任一者、 將328位的氨基酸置換為Arg、Asn、Gly、His、Lys或Pro中的任一者、 將 329 位的氛基酸置換為 Asn、Asp、Gin、Glu、Gly、His、lie、Leu、Lys> Met、Phe、Ser>Thr> Trp、Tyr> Val 或 Arg 中的任一者、 將330位的氨基酸置換為Pro或Ser中的任一者、 將331位的氨基酸置換為Arg、Gly或Lys中的任一者、或 將332位的氨基酸置換為Arg、Lys或Pro中的任一者。
6.權(quán)利要求1所述的方法，其中，改變?yōu)椴恍纬汕笆霎愒磸?fù)合體的Fe區(qū)包括:改變?yōu)镕e區(qū)的抑制型Fe Y受體結(jié)合活性高于活性型Fe Y受體結(jié)合活性的Fe區(qū)。
7.權(quán)利要求6所述的方法，其中，前述抑制型FeY受體是人FcYRIIb。
8.權(quán)利要求6或7所述的方法，其中，前述活性型FeY受體是人Fe Y RIa、人Fe Y RIIa(R)、人 FcyRIIa (H)、人 FcyRIIIa (V)或人 FcyRIIIa (F)。
9.權(quán)利要求6至8中任一項(xiàng)所述的方法,其包括對(duì)以EU編號(hào)表不的238或328位的氨基酸進(jìn)行置換。
10.權(quán)利要求9所述的方法，其包括將以EU編號(hào)表示的238位的氨基酸置換為Asp，或?qū)?28位的氨基酸置換Glu。
11.權(quán)利要求9或10所述的方法，其包括以EU編號(hào)表示的氨基酸的下述任一者以上的置換: 將233位的氨基酸置換為Asp、 將234位的氨基酸置換為Trp、或Tyr中的任一者、 將237位的氨基酸置換為Ala、Asp、Glu、Leu、Met、Phe、Trp或Tyr中的任一者、 將239位的氨基酸置換為Asp、 將267位的氨基酸置換為Ala、Gln或Val中的任一者、 將268位的氨基酸置換為Asn、Asp、或Glu中的任一者、 將271位的氨基酸置換為Gly、 將326位的氨基酸置換為Ala、Asn、Asp、Gin、Glu、Leu、Met、Ser或Thr中的任一者、 將330位的氨基酸置換為Arg、Lys、或Met中的任一者、 將323位的氨基酸置換為lie、Leu、或Met中的任一者、 將296位的氨基酸置換為Asp。
12.權(quán)利要求1至11中任一項(xiàng)所述的方法，其中，前述Fe區(qū)是這樣的Fe區(qū)，其氨基酸中以 EU 編號(hào)表示的 237、248、250、252、254、255、256、257、258、265、286、289、297、298、303、`305、307、308、309、311、312、314、315、317、332、334、360、376、380、382、384、385、386、387、.389、424、428、433、434、和436中的任意一個(gè)以上的氨基酸包含與天然型Fe區(qū)的氨基酸不同的氨基酸。
13.權(quán)利要求12所述的方法，其中，前述Fe區(qū)的以EU編號(hào)表示的氨基酸是下述任一者以上的組合: .237位的氨基酸為Met、 .248位的氨基酸為He、 .250 位的氨基酸為 Ala、Phe、Ile、Met、Gln、Ser、Val、Trp、或 Tyr 中的任一者、 .252位的氨基酸為Phe、Trp、或Tyr中的任一者、 .254位的氨基酸為Thr、 .255位的氨基酸為Glu、 .256位的氨基酸為Asn、Asp、Glu、或Gln中的任一者、 .257 位的氨基酸為 Ala、Gly、lie、Leu、Met、Asn、Ser> Thr、或 Val 中的任一者、 .258位的氨基酸為His、 .265位的氨基酸為Ala、 .286位的氨基酸為Ala或Glu中的任一者、 .289位的氨基酸為His、 . 297位的氨基酸為Ala、 .298位的氨基酸為Gly、 .303位的氨基酸為Ala、 .305位的氨基酸為Ala、 .307位的氨基酸為 Ala、Asp、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser>Val、Trp、或Tyr中的任一者、 .308位的氨基酸為 Ala、Phe、lie、Leu、Met、Pro、Gin、或 Thr 中的任一者、 . 309位的氨基酸為Ala、Asp、Glu、Pro、或Arg中的任一者、 . 311位的氨基酸為Ala、His、或Ile中的任一者、 .312位的氨基酸為Ala或His中的任一者、 .314位的氨基酸為L(zhǎng)ys或Arg中的任一者、 .315位的氨基酸為Ala、Asp或His中的任一者、 .317位的氨基酸為Ala、 .332位的氨基酸為Val、 .334位的氨基酸為L(zhǎng)eu、 . 360位的氨基酸為His、 .376位的氨基酸為Ala、. .380位的氨基酸為Ala、 .382位的氨基酸為Ala、 .384位的氨基酸為Ala、 .385位的氨基酸為Asp或His中的任一者、 .386位的氨基酸為Pro、 .387位的氨基酸為Glu、.389位的氨基酸為Ala或Ser中的任一者、 .424位的氨基酸為Ala、 .428 位的氨基酸為 Ala、Asp、Phe、Gly、HiS、IIe、Lys、Leu、Asn、Pro、Gin、Ser、Thr、Val、Trp、或Tyr中的任一者、 .433位的氨基酸為L(zhǎng)ys、 .434位的氨基酸為Ala、Phe、His、Ser、Trp、或Tyr中的任一者、或 .436 位的氨基酸為 His、lie、Leu、Phe、Thr、或 Val。
14.權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)所述的方法，其中，前述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域是抗原結(jié)合活性根據(jù)鈣離子濃度條件而發(fā)生變化的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域。
15.權(quán)利要求14所述的方法，其中，前述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域是結(jié)合活性以低鈣離子濃度條件下的抗原結(jié)合活性低于高鈣離子濃度條件下的抗原結(jié)合活性的方式發(fā)生變化的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域。
16.權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)所述的方法，其中，前述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域是抗原結(jié)合活性根據(jù)pH條件而發(fā)生變化的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域。
17.權(quán)利要求16所述的方法，其中，前述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域是結(jié)合活性以pH酸性范圍下的抗原結(jié)合活性低于pH中性范圍條件下的抗原結(jié)合活性的方式發(fā)生變化的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域。
18.權(quán)利要求1至17中任一項(xiàng)所述的方法，其中，前述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域是抗體的可變區(qū)。
19.權(quán)利要求1至18中任一項(xiàng)所述的方法，其中，前述抗原結(jié)合分子是抗體。
20.權(quán)利要求1所述的方法，其中，改變?yōu)椴恍纬汕笆霎愒磸?fù)合體的Fe區(qū)包括:改變?yōu)闃?gòu)成Fe區(qū)的二個(gè)多肽的一者具有pH中性范圍條件下的FcRn結(jié)合活性、另一者不具有pH中性范圍條件下的FcRn結(jié)合活性的Fe區(qū)。
21.權(quán)利要求20所述的方法，其包括對(duì)構(gòu)成前述Fe區(qū)的二個(gè)多肽的一者的氨基酸序列中以 EU 編號(hào)表示的 237、248、250、252、254、255、256、257、258、265、286、289、297、298、303、305、307、308、309、311、312、314、315、317、332、334、360、376、380、382、384、385、386、387、389、424、428、433、434、和436中的任意一個(gè)以上的氨基酸進(jìn)行置換。
22.權(quán)利要求21所述的方法，其包括前述Fe區(qū)的以EU編號(hào)表示的氨基酸的下述任一者以上的置換: 將237位的氨基酸置換為Met、 將248位的氨基酸置換為lie、 將 250 位的氨基酸置換為 Ala、Phe、lie、Met、Gin、Ser、Val、Trp、或 Tyr> 將252位的氨基酸置換為Phe、Trp、或Tyr、 將254位的氨基酸置換為Thr、 將255位的氨基酸置換為Glu、 將256位的氨基酸置換為Asn、Asp、Glu、或Gin、 將 257 位的氨基酸置換為 Ala、Gly、lie、Leu、Met、Asn、Ser、Thr、或 Val、 將258位的氨基酸置換為His、 將265位的氨基酸置換為Ala、將286位的氨基酸置換為Ala或Glu、 將289位的氨基酸置換為His、 將297位的氨基酸置換為Ala、 將298位的氨基酸置換為Gly、 將303位的氨基酸置換為Ala、 將305位的氨基酸置換為Ala、 將 307 位的氛基酸置換為 Ala、Asp、Phe、Gly、His、lie、Lys> Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser、Val、Trp、或 Tyr> 將 308 位的氨基酸置換為 Ala、Phe、lie、Leu、Met、Pro、Gin、或 Thr、 將309位的氨基酸置換為Ala、Asp、Glu、Pro、或Arg、 將311位的氨基酸置換為Ala、His、或lie、 將312位的氨基酸置換為Ala或His、 將314位的氨基酸置換為L(zhǎng)ys或Arg、 將315位的氨基酸置換為Ala、Asp或His、 將317位的氨基酸置換為Ala、 將332位的氨基酸置換為Val、 將334位的氨基酸置換為L(zhǎng)eu、 將360位的氨基酸置換為His、 將376位的氨基酸置換為Ala、 將380位的氨基酸置換為Ala、 將382位的氨基酸置換為Ala、 將384位的氨基酸置換為Ala、 將385位的氨基酸置換為Asp或His、 將386位的氨基酸置換為Pro、 將387位的氨基酸置換為Glu、 將389位的氨基酸置換為Ala或Ser、 將424位的氨基酸置換為Ala、 將 428 位的氛基酸置換為 Ala、Asp、Phe、Gly、His、lie、Lys> Leu、Asn、Pro、Gin、Ser>Thr、Val、Trp、或 Tyr> 將433位的氨基酸置換為L(zhǎng)ys、 將434位的氨基酸置換為Ala、Phe、His、Ser、Trp、或Tyr、或 將436位的氨基酸置換為His、lie、Leu、Phe、Thr、或Val。
23.權(quán)利要求20至22中任一項(xiàng)所述的方法，其中，前述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域是抗原結(jié)合活性根據(jù)鈣離子濃度條件而發(fā)生變化的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域。
24.權(quán)利要求23所述的方法，其中，前述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域是結(jié)合活性以低鈣離子濃度條件下的抗原結(jié)合活性低于高鈣離子濃度條件下的抗原結(jié)合活性的方式發(fā)生變化的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域。
25.權(quán)利要求20至22中任一項(xiàng)所述的方法，其中，前述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域是抗原結(jié)合活性根據(jù)pH條件而發(fā)生變化的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域。
26.權(quán)利要求25所述的方法，其中，前述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域是結(jié)合活性以pH酸性范圍下的抗原結(jié)合活性低于pH中性范圍條件下的抗原結(jié)合活性的方式發(fā)生變化的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域。
27.權(quán)利要求20至26中任一項(xiàng)所述的方法，其中，前述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域是抗體的可變區(qū)。
28.權(quán)利要求20至27中任一項(xiàng)所述的方法，其中，前述抗原結(jié)合分子是抗體。
29.抗原結(jié)合分子，其包含抗原結(jié)合活性根據(jù)離子濃度的條件而發(fā)生變化的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域、以及在pH中性 范圍條件下具有FcRn結(jié)合活性的Fe區(qū),該Fe區(qū)包含選自下述中的任一者以上的氨基酸: 234位的氨基酸為Ala、 235位的氨基酸為Ala、Lys或Arg中的任一者、 236位的氨基酸為Arg、 238位的氨基酸為Arg、 239位的氨基酸為L(zhǎng)ys、 270位的氨基酸為Phe、 297位的氨基酸為Ala、 298位的氨基酸為Gly、 325位的氨基酸為Gly、 328位的氨基酸為Arg、或 329位的氨基酸為L(zhǎng)ys、或Arg 其中，所述氨基酸是以EU編號(hào)表示的氨基酸。
30.權(quán)利要求29所述的抗原結(jié)合分子，其包含選自下述中的任一者以上的氨基酸: 237位的氨基酸為L(zhǎng)ys或Arg中的任一者、 238位的氨基酸為L(zhǎng)ys 239位的氨基酸為Arg、或 329位的氨基酸為L(zhǎng)ys或Arg中的任一者， 其中，所述氨基酸是前述Fe區(qū)的以EU編號(hào)表示的氨基酸。
31.抗原結(jié)合分子，其包含:抗原結(jié)合活性根據(jù)離子濃度的條件而發(fā)生變化的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，以及構(gòu)成Fe區(qū)的二個(gè)多肽的一者具有pH中性范圍條件下的FcRn結(jié)合活性、另一者不具有pH中性范圍條件下的FcRn結(jié)合活性的Fe區(qū)。
32.權(quán)利要求29至31中任一項(xiàng)所述的抗原結(jié)合分子，其中，前述Fe區(qū)是這樣的Fe區(qū)，構(gòu)成其的二個(gè)多肽的一者的氨基酸序列中以EU編號(hào)表示的237、248、250、252、254、255、256、257、258、265、286、289、297、303、305、307、308、309、311、312、314、315、317、332、334、360、376、380、382、384、385、386、387、389、424、428、433、434、和 436 中的任意一個(gè)以上的氨基酸與天然型Fe區(qū)的氨基酸不同。
33.權(quán)利要求32所述的抗原結(jié)合分子，其中前述Fe區(qū)的以EU編號(hào)表示的氨基酸是下述任一者以上的組合: 237位的氨基酸為Met、 248位的氨基酸為He、.250 位的氨基酸為 Ala、Phe、lie、Met、Gin、Ser> Val、Trp、或 Tyr> . 252位的氨基酸為Phe、Trp、或Tyr、 . 254位的氨基酸為Thr、 .255位的氨基酸為Glu、 .256位的氨基酸為Asn、Asp、Glu、或Gin、 .257位的氨基酸為 Ala、Gly、lie、Leu、Met、Asn、Ser> Thr、或 Val、 .258位的氨基酸為His、 .265位的氨基酸為Ala、 .286位的氨基酸為Ala或Glu、 . 289位的氨基酸為His、 .297位的氨基酸為Ala、 .303位的氨基酸為Ala、 .305位的氨基酸為Ala、 .307位的氨基酸為 Ala、Asp、Phe、Gly、His、lie、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gin、Arg、Ser>Val、Trp、或 Tyr> .308位的氨基酸為 Ala、Phe、lie、Leu、Met、Pro、Gin、或 Thr、 .309位的氨基酸為 Ala、Asp、Glu、Pro、或 Arg、 .311位的氨基酸為Ala、His、或lie、 .312位的氨基酸為Ala或His、 .314位的氨基酸為L(zhǎng)ys或Arg、 .315位的氨基酸為Ala、Asp或His、 .317位的氨基酸為Ala、 .332位的氨基酸為Val、 .334位的氨基酸為L(zhǎng)eu、 .60位的氨基酸為His、 .376位的氨基酸為Ala、 . 380位的氨基酸為Ala、 .382位的氨基酸為Ala、 .384位的氨基酸為Ala、 .385位的氨基酸為Asp或His、 .386位的氨基酸為Pro、 . 387位的氨基酸為Glu、 . 389位的氨基酸為Ala或Ser、 .424位的氨基酸為Ala、 .428 位的氨基酸為 Ala、Asp、Phe、Gly、HiS、IIe、Lys、Leu、Asn、Pro、Gin、Ser、Thr、Val、Trp、或 Tyr> .433位的氨基酸為L(zhǎng)ys、 .434位的氨基酸為Ala、Phe、His、Ser、Trp、或Tyr、或者 .436 位的氨基酸為 His、lie、Leu、Phe、Thr、或 Val。
34.權(quán)利要求29至33中任一項(xiàng)所述的抗原結(jié)合分子，其中，前述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域是抗原結(jié)合活性根據(jù)鈣離子濃度條件而發(fā)生變化的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域。
35.權(quán)利要求34所述的抗原結(jié)合分子，其中，前述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域是結(jié)合活性以低鈣離子濃度條件下的抗原結(jié)合活性低于高鈣離子濃度條件下的抗原結(jié)合活性的方式發(fā)生變化的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域。
36.權(quán)利要求29至33中任一項(xiàng)所述的抗原結(jié)合分子，其中，前述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域是抗原結(jié)合活性根據(jù)pH條件而發(fā)生變化的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域。
37.權(quán)利要求36所述的抗原結(jié)合分子，其中，前述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域是結(jié)合活性以pH酸性范圍下的抗原結(jié)合活性低于PH中性范圍條件下的抗原結(jié)合活性的方式發(fā)生變化的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域。
38.權(quán)利要求29至37中任一項(xiàng)所述的抗原結(jié)合分子，其中，前述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域是抗體的可變區(qū)。
39.權(quán)利要求29至38中任一項(xiàng)所述的抗原結(jié)合分子，其中，前述抗原結(jié)合分子是抗體。
40.編碼權(quán)利要求29至39中任一項(xiàng)所述的抗原結(jié)合分子的多核苷酸。
41.可作用地連接有權(quán)利要求40所述的多核苷酸的載體。
42.導(dǎo)入有權(quán)利要求41所述的載體的細(xì)胞。
43.權(quán)利要求29至39中任一項(xiàng)所述的抗原結(jié)合分子的制造方法，其包括從權(quán)利要求42所述的細(xì)胞的培養(yǎng)液中回收抗原結(jié)合分子的步驟。
44.藥物組合物，其含有權(quán)利要求29至39中任一項(xiàng)所述的抗原結(jié)合分子、或由權(quán)利要求43所述的制造方法得到的抗原結(jié)合分子作為有效成分。
【文檔編號(hào)】A61K39/395GK103703129SQ201280026850
【公開(kāi)日】2014年4月2日 申請(qǐng)日期:2012年3月30日 優(yōu)先權(quán)日:2011年3月30日
【發(fā)明者】井川智之, 前田敦彥, 原谷健太, 巖柳有起, 橘達(dá)彥, 味元風(fēng)太, 倉(cāng)持太一, 堅(jiān)田仁, 門野正次郎 申請(qǐng)人:中外制藥株式會(huì)社