原位凝膠形成組合物的制作方法
【專利摘要】本申請?zhí)峁┝丝焖倌z化的可噴射透明質(zhì)酸基組合物、試劑盒、相關(guān)方法、前體制劑及其用途。
【專利說明】原位凝膠形成組合物
[0001]相關(guān)申請案的交叉引用
[0002]本申請要求2011年4月20日提交的美國臨時專利申請N0.61/477，563的優(yōu)先權(quán)益，其內(nèi)容通過引用整體并入本文。
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0003]本公開通常涉及原位凝膠形成組合物、相關(guān)試劑盒及除其它外，制備和使用此類組合物的方法。通常在適合在混合幾秒至一小時內(nèi)形成凝膠的條件下，通過混合乙烯基砜官能化透明質(zhì)酸、巰基官能化聚乙二醇和緩沖液制備原位凝膠形成組合物。所得生物相容性組合物可用作，例如供局部遞送生物活性劑的生物醫(yī)學(xué)粘合劑和封閉劑，除其它外，用作填充劑和填料。
[0004]發(fā)明背景
[0005]透明質(zhì)酸是在整個結(jié)締組織、上皮組織和神經(jīng)組織廣泛分布的自然發(fā)生、陰離子、非硫酸化糖胺聚糖。平均70kg(1541bs)的人在他/她的體內(nèi)大致具有15克透明質(zhì)酸，每天其中三分之一轉(zhuǎn)變(降解和合成)(Stern R.Eur J Cell Biol83(7):317 - 25，(2004))。因為透明質(zhì)酸天然存在于身體的許多組織中并且因此生物相容，所以被認為非常適合生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用。不幸的是，當(dāng)呈其自然發(fā)生形式施用和用作治療劑時，透明質(zhì)酸通常從體內(nèi)快速清除，使得必須頻繁施用。因此，保持了未改變的透明質(zhì)酸的益處，例如良好的生物相容性，但是克服了快速清除問題的透明質(zhì)酸制劑非常可取。此類制劑應(yīng)理想地具有良好的細胞相容性、有益的化學(xué)、流變學(xué)和其它性質(zhì)，并且易于施用。
[0006]先前已經(jīng)描述了經(jīng)改性形式的透明質(zhì)酸。例如，在國際專利公布N0.W02011/014432中描述了具有低程度取代的透明質(zhì)酸及其輕微交聯(lián)產(chǎn)物。本文描述的水凝膠和組合物具有非常低的促炎性，連同幾種其它有利特征，但是不傾向于經(jīng)歷快速凝膠化。`
[0007]快速凝膠化是原位形成凝膠的一般特征。原位形成水凝膠是在形成并應(yīng)用至治療部位后為液體，但是之后經(jīng)歷相變形成水凝膠的組合物。由于易于施用和在凝膠化時間方面的多功能性、粘著性好等，生物可降解的可注射原位形成凝膠代表同樣提供的水凝膠的有吸引力的替代物。
[0008]因此，形成具有國際專利公布N0.W02011/014432中描述的水凝膠的優(yōu)點，但是增加了具有呈原位形成凝膠形式的非?？扇〉囊嫣幍慕M合物將非常有利。
[0009]發(fā)明概述
[0010]本文提供了制備有效原位形成水凝膠的液體水凝膠前體組合物的材料。反應(yīng)性前體材料足夠溫和，以致可在原位，例如與組織直接接觸，在可能另外對凝膠形成部位的組織有害的條件或反應(yīng)物不存在的情況下，進行液體到固體的相變。所得水凝膠具有良好的機械強度并且可制備成具有不同凝膠化時間。
[0011]在第一個總體方面，本文提供了包含在混合并對治療部位應(yīng)用后導(dǎo)致水凝膠原位形成的組分的試劑盒。[0012]一般地，所述試劑盒包含(i)第一容器，其包含濃度為約10-300mg/mL的乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸(“HA-VS”)的水溶液，其中所述VS-HS的約2%-70%的羥基經(jīng)乙烯基砜取代，(?)第二容器，其包含具有2至8個巰基的巰基官能化聚乙二醇，和(iii)第三容器，其包含pH范圍約7-12的30-1000mM緩沖溶液以提供具有2_8% (w/v)的HA-VS濃度和2_8% (w/v)的巰基官能化聚乙二醇濃度的溶液，其中所述組分，當(dāng)合并時，在混合幾秒(例如5秒)至I小時內(nèi)有效形成凝膠。
[0013]另一方面，本文提供了由以下的組合形成的液體組合物:(i)濃度為約10_300mg/mL的乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸(“HA-VS”)的水溶液，其中所述VS-HS的約2%_70%的羥基經(jīng)乙烯基砜取代，(ii)具有2至8個巰基的巰基官能化聚乙二醇，和(iii)pH范圍約7-12的30-1000mM緩沖溶液，其中所述液體組合物中所述巰基官能化聚乙二醇的濃度范圍約4-300mg/mL或10-300mg/mL,在混合幾秒(例如5秒)至約I小時內(nèi)有效形成凝膠。
[0014]又一方面，本文提供了一種形成能夠原位形成凝膠的液體組合物的方法。所述方法包括:⑴將具有2至8個巰基，優(yōu)選呈粉末形式的巰基官能化聚乙二醇添加到濃度為約10-300mg/mL的乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸(“HA-VS”)的水溶液中，其中所述HA-VS的約2%-70%的羥基經(jīng)乙烯基砜取代，從而溶解所述巰基官能化聚乙二醇以形成含乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸-巰基官能化聚乙二醇的溶液，以及(ii)合并來自步驟(i)的所述溶液與PH范圍約7-12的30-1000mM緩沖溶液，從而形成具有2-8%(w/v)的HA-VS濃度和2-8%(w/v)的巰基官能化聚乙二醇濃度的液體組合物，其中所述液體組合物在合并幾秒至約I小時內(nèi)有效形成凝膠。
[0015]再一方面，本文提 供了一種形成能夠原位形成凝膠的液體組合物的替代方法。所述方法包括:(i)將一小部分，優(yōu)選呈粉末形式的巰基官能化聚乙二醇，例如約0.1重量％至約4重量％(重量/重量t巰基官能化PEG比HA-VS)添加到濃度為約10-300mg/mL的乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸(“HA-VS”)的水溶液中，其中所述VS-HS的約2%-70%的羥基經(jīng)乙烯基砜取代，從而形成溶液，(ii)任選為來自步驟(i)的所述溶液滅菌，(iii)向來自步驟(i)或步驟(ii)(若已進行)的所述溶液添加剩余量的優(yōu)選呈粉末形式的巰基官能化聚乙二醇，其中所述巰基官能化聚乙二醇具有2至8個巰基，并且所述巰基官能化聚乙二醇任選無菌，從而溶解剩余量的巰基官能化聚乙二醇粉末以形成含乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸-巰基官能化聚乙二醇的溶液，并且(iv)混合所述含乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸-巰基官能化聚乙二醇的溶液與PH范圍約7-12的30-1000mM緩沖溶液，從而形成具有2-8%(w/v)的HA-VS濃度和2-8%(w/v)的巰基官能化聚乙二醇濃度的液體組合物，從而形成在混合約幾秒至約I小時內(nèi)有效形成凝膠的液體組合物。
[0016]在上述方面和相關(guān)實施方案中，所述乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸(“HA-VS”)的水溶液、所述巰基官能化聚乙二醇或所述緩沖溶液中任一種或多種可無菌。
[0017]本文還提供了由所述試劑盒、所述液體組合物和上述方法產(chǎn)生的原位形成的水凝膠、對治療部位的應(yīng)用方法、使用方法等。
[0018]從以下描述、實施例和權(quán)利要求將顯而易見所述組合物、方法、試劑盒、用途等另外的實施方案。正如從前面和以下的描述中可以認識到，本文描述的每個特征和兩個或更多個此類特征的每種組合包括在本公開的范圍之內(nèi)，條件是包括在此類組合中的特征并不相互矛盾。另外，可明確地將任何特征或特征的組合排除在本發(fā)明的任何實施方案之外。在以下描述中，特別是當(dāng)結(jié)合所附實施例和圖考慮時，提出了本發(fā)明另外的方面和優(yōu)點。
[0019]附圖簡述
[0020]圖1示出了在堿存在下透明質(zhì)酸與二乙烯基砜形成乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸(HA-VS)的反應(yīng)。
[0021]圖2是如實施例1 (于D2O中)所述制備的乙烯基砜改性的透明質(zhì)酸(HA-VS)的1H NMR圖譜。基于NMR，確定透明質(zhì)酸每個二糖具有約11%的乙烯基砜取代水平。
[0022]圖3展示了如實施例5所述，用于測定破裂壓力的破裂壓力裝置。
[0023]發(fā)明詳述
[0024]現(xiàn)將在下文中更全面地描述本發(fā)明。然而，本發(fā)明可具體化為許多不同形式并且不得視為限于本文提出的實施方案；更確切地，提供這些實施方案是為使本公開全面且完整，并且將本發(fā)明的范圍完全傳達給本領(lǐng)域的技術(shù)人員。
[0025]除非另外指出，本文引用的所有出版物、專利和專利申請，無論是前面還是以下的，均通過引用據(jù)此整體并入。在通過引用并入本文的出版物、專利或?qū)＠暾埡捅竟_中均定義了相同術(shù)語的情況下，本公開中的定義代表控制性定義。對于參考其對特定類型的化合物、化學(xué)性質(zhì)等的描述的出版物、專利和專利申請而言，屬于此類化合物、化學(xué)性質(zhì)等的部分是通過引用并入本文的文件的部分。
[0026]定義
[0027]必須指出的是，除非上下文另有明確規(guī)定，如本說明書中所使用，單數(shù)形式“一個”、“一種”和“所述”包括復(fù)數(shù)個指示物。因此，例如，提到一種“聚合物”包括單一聚合物以及兩種或更多種相同或不同的聚合物。
[0028]除非另外特別注明，本文術(shù)語的定義是有機合成領(lǐng)域及聚合物和藥物科學(xué)中使用的標(biāo)準(zhǔn)定義。
[0029]在描述和要求本發(fā)明時，將依照下述定義使用以下術(shù)語。
[0030]“生物相容性聚合物”是具有與活組織相容的降解產(chǎn)物，或可具有有益生物學(xué)性質(zhì)的聚合物。生物相容性聚合物可本身生物相容，和/或可當(dāng)連同生物活性劑使用時協(xié)同生物相容。
[0031]術(shù)語“透明質(zhì)酸”意思是指未經(jīng)改性或非衍生化的透明質(zhì)酸。
[0032]術(shù)語“透明質(zhì)酸衍生物”或“衍生化透明質(zhì)酸”或“經(jīng)改性的透明質(zhì)酸”或“經(jīng)取代的透明質(zhì)酸”指已經(jīng)通過與(例如)一個或多個小化學(xué)部分例如二乙烯基砜等的反應(yīng)衍生化的透明質(zhì)酸。
[0033]術(shù)語“反應(yīng)性”指官能團(例如，存在于聚合物中)容易或以有機合成常規(guī)條件下的實用速率反應(yīng)。這與不反應(yīng)或為了反應(yīng)需要強催化劑或不切實際的反應(yīng)條件的那些基團(即，“不反應(yīng)”或“惰性”基團)相反。
[0034]如本文所使用，在水溶性聚合物例如透明質(zhì)酸的情況下，“分子質(zhì)量”或“分子量”指通過多角度光散射測定的聚合物的標(biāo)稱平均分子質(zhì)量。分子量可表示為數(shù)均分子量或重均分子量。除非另外指出，本文提到分子量全部指數(shù)均分子量。在分子量值不存在時，也可用其本征或固有粘度表征聚合物，這是測量分子量的粘度測定法。
[0035]術(shù)語“水凝膠”指含水的三維親水聚合物網(wǎng)絡(luò)或凝膠，其中水為連續(xù)相，例如其中水含量大于50% (w/w)。[0036]如本文所使用，術(shù)語“噴霧”指霧化的組合物。
[0037]用“凝膠化”意指材料形成凝膠狀態(tài)。
[0038]“無菌”組合物是使用USP無菌試驗測定，沒有活微生物的組合物。見“TheUnited States Pharmacopeia，，，第 30 次修訂本，The United States PharmacopeialConvention:2008。
[0039]如本文所使用，術(shù)語“海綿體”指多孔水凝膠結(jié)構(gòu)。
[0040]短語“可溶于水溶液”指組合物或化合物能夠在室溫下以至少0.lmg/mL的濃度溶解于含水緩沖液，例如磷酸鹽緩沖鹽水中。
[0041]如可交換使用的術(shù)語“藥物”或“藥物活性劑”或“生物活性劑”或“活性劑”指具有生物活性并且適合或用于治療目的的任何有機或無機化合物或物質(zhì)。在“藥物”更廣泛的定義下包括了蛋白質(zhì)、激素、抗癌劑、小分子化學(xué)化合物和模擬物、寡核苷酸、DNA、RNA和基因療法。如本文所使用，本文提到藥物以及提到其它化學(xué)化合物，意在包括呈其任何藥學(xué)上可接受的形式的化合物，包括異構(gòu)體(例如非對映異構(gòu)體和對映異構(gòu)體)、鹽、溶劑化物和多晶型，特別是結(jié)晶形式，以及在適用的情況下，本文所述化合物的外消旋混合物和純異構(gòu)體。
[0042]“水不溶性藥物”或“水難溶性藥物”是水溶性低于10mg/mL的藥物。
[0043]如本文所提供，術(shù)語組合物(或水凝膠或聚合物)的“有效量”或“藥學(xué)有效量”或“治療有效量”指組合物在受試者體內(nèi)提供所需反應(yīng)，例如防止、減少或消除疼痛的無毒但是足夠的量。所需確切量將根據(jù)受試者的種類、年齡和一般情況、治療病狀的嚴重程度、采用的特定藥物、組合物的特性、施用方法等，因受試者而變化。任何個案中的適當(dāng)“有效”量可由本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員使用常規(guī)實驗確定。
[0044]“任選”或“任選地”指隨后描述的情況可能發(fā)生或可能不發(fā)生，所以描述包括所述情況發(fā)生的情形和不發(fā)生的情形。
[0045]關(guān)于某種特征或?qū)嶓w的術(shù)語“基本上”指很大程度或幾乎完全(即，85%或更高的程度)關(guān)于所述特征或?qū)嶓w。
[0046]尤其關(guān)于給定量的術(shù)語“約”意在涵蓋+或-5%的偏差。
[0047]在以下的部分中也可找到另外的定義。
[0048]概沭
[0049]本發(fā)明至少部分基于發(fā)明人對原位形成凝膠的組合物的發(fā)現(xiàn)。本文提供的前體組合物展示出快速凝膠化以及有益的粘著性和良好的生物相容性。通過采用具有特定程度的聚合物改性、有效促進均勻溶液形成(即，溶解)和快速凝膠化的濃度以及特定PH條件的反應(yīng)物，發(fā)明人提供了，除其它外，下面將更詳細地描述的具有許多有益特征的方法、形成凝膠的液體前體組合物、試劑盒和所得水凝膠。
[0050]通常通過具有特定程度的乙烯基砜改性的透明質(zhì)酸與巰基官能化聚乙二醇的反應(yīng)形成本文所述的水凝膠。所得水凝膠在溫和條件下原位形成一無需引發(fā)劑、促進劑或其它有害添加劑?，F(xiàn)將在下 面更詳細地討論組合物的特征、相關(guān)方法、用途和試劑盒等。
[0051]制備有效原位形成凝膠的前體組合物的方法
[0052]反應(yīng)物/組分
[0053]經(jīng)乙烯基砜改性的透明質(zhì)酸[0054]在制備本原位形成凝膠時，采用的其中一種反應(yīng)物是通過與二乙烯基砜反應(yīng)經(jīng)改性的透明質(zhì)酸。見，例如，圖1，其提供了制備經(jīng)乙烯基砜改性的透明質(zhì)酸的總體反應(yīng)方案。透明質(zhì)酸(HA)是自然發(fā)生的直鏈多糖，其由交替β 1->3葡糖醛酸鍵和β 1->4葡糖胺鍵連接的N-乙酸基-D-匍糖胺和D-匍糖醒酸的交替二糖單兀構(gòu)成，所以重復(fù)單兀為(1->4)-β -D-GlcA-(1->3)-β -D-GlcNAc。用于制備一種或多種原位形成水凝膠的組合物的透明質(zhì)酸經(jīng)乙烯基砜衍生化。見，例如，實施例1、2和3，其分別描述了具有不同取代水平11%、14%和20%的經(jīng)乙烯基砜改性的透明質(zhì)酸的制備。在示例性衍生化反應(yīng)中，透明質(zhì)酸羥基通過在堿的存在下與二乙烯基砜反應(yīng)轉(zhuǎn)化為(2-(乙烯基砜基)乙氧基)基團。所得活化透明質(zhì)酸為(2-(乙烯基砜基)乙氧基)透明質(zhì)酸或HA-VS。為了方便起見，本文通常將材料稱為經(jīng)乙烯基砜改性的透明質(zhì)酸或簡單地“HA-VS”。為了制備這些快速凝膠化組合物，透明質(zhì)酸上的乙烯基砜取代程度可從2%至70%任意不等，盡管該范圍內(nèi)較低的聚合物改性水平通常是優(yōu)選的。示例性經(jīng)乙烯基砜改性的透明質(zhì)酸將具有范圍從7%至約35%，或更優(yōu)選從10%至25%的乙烯基砜取代水平。
[0055]2%改性或取代程度意思是，平均2%的透明質(zhì)酸二糖單元含乙烯基砜基團。特別地，在優(yōu)選實施方案中，透明質(zhì)酸具有約10%至約25%的通過與二乙烯基砜的加成反應(yīng)衍生化的羥基。透明質(zhì)酸羥基轉(zhuǎn)化為(2-(乙烯基砜基)乙氧基)基團。本文通常將所得活化透明質(zhì)酸稱為(2-(乙烯基砜基)乙氧基)透明質(zhì)酸或HA-VS。具體而言，透明質(zhì)酸的羥基向(2-(乙烯基砜基)乙氧基)基團的轉(zhuǎn)化程度可在介于前述任兩個百分比之間的范圍內(nèi):例如，10%-35%(例如，11%-35%或12-35%等等)。具體而言，透明質(zhì)酸的乙烯基砜取代程度可選自以下百分比:10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%和35%，連同由提供的整數(shù)的每個組合產(chǎn)生的范圍，例如10-15%、15-20%、20-25%等等。又一更特殊的實施方案中，透明質(zhì)酸的羥基向(2-(乙烯基砜基)乙 氧基)基團的轉(zhuǎn)化程度為每個二糖重復(fù)單元約10-25%。
[0056]可通過許多適合方法中的任一種，例如NMR、UV或IR分析或元素分析測定透明質(zhì)酸的取代/改性程度。計算聚合物例如透明質(zhì)酸的取代百分比的優(yōu)選方法為NMR，例如質(zhì)子NMR。見，例如實施例1，其中基于1H NMR圖譜中相應(yīng)于透明質(zhì)酸的乙烯基砜和乙酰胺甲基的相對峰面積的比例測定透明質(zhì)酸改性程度。
[0057]乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸通常將具有在約10，000至約2，000, 000道爾頓范圍內(nèi)的平均分子量。說明性分子量范圍從約15，000至1，000，000道爾頓，或從約20，000至200，000道爾頓。另外的合適分子量范圍包括從約30，000道爾頓至約100，000道爾頓，或從約40，000道爾頓至約80，000道爾頓。透明質(zhì)酸的分子量通常為平均分子質(zhì)量值，例如，可通過多角度激光散射排阻色譜法(MALLS-SEC)測定?；谄鋪碓?，透明質(zhì)酸可具有高達約3，或更優(yōu)選地，高達約2的多分散度(Mw/Mn)。一般地，透明質(zhì)酸原材料將具有相當(dāng)狹窄的分子量分布，值小于約2.5，更優(yōu)選小于約2。透明質(zhì)酸的示例性多分散度范圍從約1.02至約 2.5，其中原始透明質(zhì)酸可具有約 1.02,1.05,1.1、1.2,1.3,1.3,1.5,1.6,1.7,1.8,1.9、2，0,2.1,2.2,2.3,2.4或2.5或甚至更高的多分散度。
[0058]可選地，用于衍生化的合適透明質(zhì)酸原材料在水中與以上提供的任一個或多個平均分子量范圍相對應(yīng)的特定濃度下可具有通常按厘泊計的本征粘度。
[0059]具有上述特征(改性程度、分子量等)的任何組合的HA-VS適合用于本文提供的組合物、試劑盒、方法和用途中。
[0060]巰基官能化聚乙二醇(PEG)
[0061]用于形成原位凝膠的巰基官能化PEG可為直鏈、支鏈(具有兩個聚合物臂)或多臂型(例如，具有3、4、5、6、7、8個或更多個從中央核心伸出的聚合物臂)。多臂型PEG的說明性核心分子包括赤蘚醇、季戊四醇、三羥甲基丙烷、甘油、甘油二聚物(3，3’ -氧基二丙烷-1，2- 二醇)、甘油寡聚物、山梨糖醇、六聚甘油等。多臂PEG巰基化物，例如前述的具有從中央核心分子發(fā)出的聚乙二醇臂并且具有兩個或更多個末端巰基。巰基官能化PEG可通過衍生化市場上可買到的PEG原材料制備或可直接從供應(yīng)商，例如Pierce (Thermo FischerScientific) > Laysan Bio, Inc.(Arab, Alabama)、SunBio (PEG=SHOP, Korea)等購買。
[0062]疏基官能化PEG包含兩個或更多個疏基。此類疏基將與(例如)乙烯基諷衍生化透明質(zhì)酸中的乙烯基砜反應(yīng)。說明性巰基官能化PEG包括PEG- 二巰基(HS-PEG-SH或HS-CH2CH2-(OCH2CH2)nSH)、3_臂PEG-三巰基(甘油核心)、4_臂PEG-四巰基(季戊四醇核心)或8-臂PEG-八巰基(六甘油核心)。前述多臂PEG試劑也可并非所有臂都經(jīng)巰基官能化?？蓮?Laysan Bio (Arab, Alabama)和 SunBio (PEG-SHOP, Korea)獲得另外的具有作為中央分子的PEG的合適巰基試劑，以及芳族二巰基化物，例如可從NanoScience獲得的芳族二巰基化物。優(yōu)選的PEG-巰基將具有選自2、3、4、5、6、7和8的巰基數(shù)目。在聚乙二醇直鏈上具有2-8個經(jīng)取代的下垂巰基的聚乙二醇分子也合適。
[0063]PEG巰基化物的分子量通常小于經(jīng)乙烯基砜改性的透明質(zhì)酸的分子量。一般地，PEG巰基化物的分子量范圍從約200至約20，000道爾頓。PEG巰基交聯(lián)劑另外的示例性分子量從約 I, 000 至約 10，000 道爾頓(例如，具有約 lkD、2kD、3kD、4kD、5kD、6kD、7kD、8kD、9kD或IOkD的分子量，其中kD等于千道爾頓)或甚至從約1，000至5，000道爾頓。因此，分子量在介于前述任何分子量之間的范圍內(nèi)的PEG巰基化物適合用于形成當(dāng)前的水凝膠。例如，PEG巰基化物的分子量可介于約500至10，000道爾頓之間，或介于約1000與10，000道爾頓之間，或介于約2，000`與9，000道爾頓之間，或介于約3，000與8，0000道爾頓之間等。交聯(lián)劑例如PEG 二巰基或上述其它適合交聯(lián)劑的示例性分子量包括約3350、3400和5000道爾頓等。
[0064]具有例如上述特征的任何組合的PEG巰基化物(結(jié)構(gòu)(例如，直鏈或支鏈)、巰基的數(shù)量、分子量等)適合用于本文提供的組合物、試劑盒、方法和用途中。
[0065]牛物活件劑
[0066]本文提供的水凝膠、水凝膠前體和相關(guān)組合物和/或試劑盒可任選包含生物活性劑。生物活性劑包括小分子、蛋白質(zhì)、抗體、細胞、生長因子等，例如以下描述的那些。
[0067]本文提供的試劑盒、組合物和組合中可包括的生物活性劑包括抗菌劑、抗生素、鎮(zhèn)痛劑、抗生素、抗增殖/抗有絲分裂劑，包括天然產(chǎn)物例如長春花生物堿(vinca alkaloid)(例如長春堿(vinblastine)、長春新堿(vincristine)和長春瑞濱(vinorelbine))、紫杉醇(paclitaxel)、表鬼臼毒素(epidipodophyllotoxin)(例如依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(teniposide))、抗生素(更生霉素(dactinomycin)(放線菌素D(actinomycinD))、柔紅霉素(daunorubicin)、阿霉素(doxorubicin)和伊達比星(idarubicin))、蒽環(huán)霉素(anthracycline)、米托蒽醌(mitoxantrone)、博來霉素(bleomycin)、普卡霉素(plicamycin)(光神霉素(mithramycin))和絲裂霉素(mitomycin)、酶(L-天門冬酰胺酶）；抗增殖/抗有絲分裂燒化劑，例如氮芥（二氯甲二乙胺（mechlorethamine)、環(huán)磷酰 胺（cyclophosphamide)和類似物、美法侖（melphalan)、苯丁酸氣芥（chlorambucil))、乙 烯亞胺和甲基蜜胺（六甲蜜胺和噻替派（thiotepa))、燒基磺酸鹽-白消安（busulfan)、 亞硝基脲（卡莫司汀(carmustine) (BCNU)和類似物、鏈脲菌素（streptozocin))、三氮 烯-達卡巴嗪（trazenes-dacarbazinine) (DTIC);抗增殖/抗有絲分裂的抗代謝物，例 如葉酸類似物（甲氨蝶呤（methotrexate))、卩密唳類似物（氟尿卩密唳（fluorouracil)、氟 尿苷（floxuridine)和阿糖孢苷（cytarabine))、嘌呤類似物和相關(guān)抑制劑（巰基嘌呤 (mercaptopurine)、硫鳥嘌呤（thioguanine)、噴司他?。╬entostatin)和 2-氯脫氧腺苷 [克拉屈濱(cladribine)]);鉬配位絡(luò)合物（順鉬（cisplatin)、卡鉬（carboplatin))、甲 節(jié)肼（procarbazine)、輕基脲、米托坦（mitotane)、氨魯米特（aminoglutethimide);激素 (例如雌激素）；抗凝血劑（肝素、合成肝素鹽和凝血酶的其它抑制劑）；纖溶劑（例如組織 纖溶酶原激活物、鏈激酶（streptokinase)和尿激酶（urokinase))、阿斯匹林（aspirin)、 潘生?。╠ipyridamole)、噻氯匹定（ticlopidine)、氯卩比格雷（clopidogrel)、阿昔單抗 (abciximab);抗遷移劑；抗分泌劑（例如布雷菲德菌素A(brefeldin A));抗炎劑例如 腎上腺皮質(zhì)類固醇（氫化可的松（hydrocortisone)、醋酸氫化可的松（hydrocortisone acetate)、醋酸可的松（cortisone acetate)、特戍酸硫氫可的松（tixocortol pivalate)、強的松龍(prednisolone)、甲基強的松龍(methylprednisolone)、強的松 (prednisone)、曲安奈德（或曲安西龍的任何其它藥學(xué)上可接受的鹽)、曲安西龍醇、莫米 松（mometasone)、安西奈德（amcinonide)、布地奈德（budesonide)、地奈德（desonide)、醋 酸氟輕松（fluocinonide)、膚輕松（fluocinolone acetonide)、氯氟松（halcinonide)、倍 他米松（betamethasone)、倍他米松磷酸鈉、地塞米松（dexamethasone)、地塞米松磷酸鈉 和氟考龍（fluocortolone)、氫化可的松-17-丁酸酯、氫化可的松-17-戊酸酯、二丙酸別氯 地米松（aclometasone dipropionate)、戍酸倍他米松（betamethasone valerate)、二丙酸 倍他米松（betamethasone dipropionate)、潑尼卡酯（prednicarbate)、氯倍他松-17-丁 酸酯（clobetasone-17-butyrate)、氯倍他索-17-丙酸酯（clobetasol_17-propionate)、 己酸氟考龍（fluocortolone caproate)、特戍酸氟考龍（f luocortolone pivalate)和醋酸 氟潑尼定（fluprednidene acetate)。二丙酸倍他米松一水合物、氟尼縮松（flunisolide)、 丙酸氟替卡松（fluticasone propionate)、糠酸莫米松一水合物、曲安奈德、氟替卡松、糠 酸酯、非留族試劑（水楊酸衍生物，例如阿斯匹林）；對氨基苯酚衍生物，即對乙酰氨基酚； 11引哚和卻乙酸（消炎痛（indomethacin)、舒林酸（sulindac)和依托度酸（etodolac))、雜 芳基乙酸（托美汀(tolmetin)、雙氯芬酸(diclofenac)和酮咯酸（ketorolac))、芳基丙 酸（布洛芬（ibuprofen)及衍生物）、鄰氨基苯甲酸（甲滅酸（mefenamic acid)和甲氯滅 酸（meclofenamic acid))、烯醇酸（卩比羅昔康（piroxicam)、替諾昔康（tenoxicam)、保泰 松（phenylbutazone)和輕基保泰松（oxyphenthatrazone))、萘丁美酮（nabumetone)、金化 合物（金諾芬（auranofin)、金硫葡糖（aurothioglucose)、硫代蘋果酸金鈉（gold sodium thiomalate));免疫抑制劑（環(huán)孢霉素（cyclosporine)、他克莫司（tacrolimus) (FK-506)、 西羅莫司（sirolimus)(雷帕霉素（rapamycin))、硫唑嘌呤（azathioprine)、嗎替麥考酹酯 (mycophenolate mofetil));促有絲分裂或形態(tài)發(fā)生生長因子蛋白、肽或模擬物；血管內(nèi)皮 生長因子（VEGF)、成纖維細胞生長因子（FGF)、轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-P)超家族成員，包括TGF-β和骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)，例如BMP-2、3、4、5、6、7、8 ;胰島素和胰島素樣生長因子(IGF)、肝細胞生長因子(HGF)、表皮生長因子(EGF)、刺猬蛋白(SHH和IHH)、激活素、抑制素、脫礦質(zhì)骨(DBM)和血小板源生長因子(I3DGF)、造血生長因子(G-CSF、CSF-1、GM-CSF、促紅細胞生成素、細胞因子和淋巴因子，包括白細胞介素家族(IL-1至34))、干擾素、神經(jīng)生長因子(NGF)、中和劑、拮抗劑或激動劑抗體、生長因子受體激動劑或拮抗劑、一氧化氮供體；反義寡核苷酸、轉(zhuǎn)錄因子、信號級聯(lián)介體及其組合。
[0068]抗生素包括林可霉素(Iincomycin)家族的抗生素(指最初從林可鏈霉菌(streptomyces Iincolnensis)回收的一類抗生素試劑)；四環(huán)素(tetracycline)家族的抗生素(指最初從金素鏈霉菌(streptomyces aureofaciens)回收的一類抗生素試齊?);硫基抗生素，例如磺胺類藥物等。林可霉素家族的示例性抗生素包括林可霉素本身(6，8-雙脫氧-6-[[(1-甲基-4-丙基-2-吡咯烷基)-羰基]氨基_]-1-硫代-L-蘇式-D-半乳-辛批喃糖苷)、氯潔霉素(clindamycin),林可霉素的7-脫氧、7-氯衍生物(例如，7-氯-6，7，8-三脫氧-6-[[(l-甲基-4-丙基-2-吡咯烷基)羰基]氨基]_1_硫代-L-蘇式-D-半乳-辛吡喃糖苷)及其藥學(xué)上可接受的鹽和酯。四環(huán)素家族的示例性抗生素包括四環(huán)素本身4_( 二甲氨基)_1，4，4 α，5，5 α，6，11，12 α -八氫-3，6，12，12 α -五羥基-6-甲基-1, 11- 二氧代-2-并四苯甲酰胺)、氯四環(huán)素(chlortetracycline)、氧四環(huán)素(oxytetracycline)、四環(huán)素、地美環(huán)素(demeclocycline)、吡甲四環(huán)素(rolitetracycline)、甲烯土霉素(methacycline)和強力霉素(doxycycline)及其藥學(xué)上可接受的鹽和酯，特別是酸加成鹽例如鹽酸鹽。示例性硫基抗生素包括但不限于磺胺類藥物乙?；前?、苯酰磺胺、磺胺喃唳、磺胺多辛(sulfadoxine)、磺胺甲密唳(sulfamerazine)、橫胺二甲嘧 P定(sulfamethazine)、橫胺甲二唑(sulfamethizole)、石黃胺甲噁唑(sulfamethoxazole)及其藥學(xué)上可接受的鹽和酯，例如磺胺乙酰鈉。抗菌劑和/或抗生素進一步包括化合物，例如紅霉素(erythromycin)、桿菌肽(bacitracin)、新霉素(neomycin)、青霉素(penicillin)、多粘菌素B (polymyxin B)、四環(huán)素、紫霉素(viomycin)、氯霉素(chloromycetin)和鏈霉素(streptomycin)、頭抱唑林(cefazolin)、氨節(jié)青霉素(ampicillin)、氨曲南(azactam)、托普霉素(tobramycin)、氯潔霉素和慶大霉素(gentamycin)。`
[0069]鎮(zhèn)痛劑包括化合物，例如利多卡因(Iidocaine)、苯坐卡因(benzocaine)和麻卡因(marcaine)。
[0070]如本文所提供的水凝膠還可以包括活細胞。示例性活細胞包括干細胞、薄壁組織干細胞、血源細胞和骨髓細胞。
[0071]另外的生物活性劑包括但不限于抑制一個或一組過程的生物活性劑，包括但不限于細胞分裂、細胞分泌、細胞遷移、細胞粘著、細胞因子、趨化因子(或其它炎性活化劑)生成和/或釋放、血管發(fā)生和/或自由基形成和/或釋放和/或凝血級聯(lián)。具體而言，本文提供的組合物可提供(牽涉)在手術(shù)粘連的發(fā)展和/或維持中牽涉的細胞和/或非細胞過程的藥理學(xué)變化。另外，本組合物可提供在再狹窄的發(fā)展和/或維持中牽涉的細胞和/或非細胞過程的藥理學(xué)變化。因此，另外的生物活性劑包括但不限于抑制一個或一組過程的生物活性劑，包括但不限于細胞分裂、細胞分泌、細胞遷移、細胞粘著、細胞因子、趨化因子(或其它炎性活化劑)生成和/或釋放、血管發(fā)生和/或自由基形成和/或釋放。另外，用于本文的生物活性劑可抑制或影響瘢疤形成過程中牽涉的其它過程。本文提供的組合物也可有效產(chǎn)生增加纖維化發(fā)展的細胞和/或非細胞過程的藥理學(xué)變化。因此，生物活性劑進一步包括但不限于增強一個或一組過程的生物活性劑，包括但不限于細胞分裂、細胞分泌、細胞遷移、細胞粘著、細胞因子、趨化因子(或其它炎性活化劑)生成和/或釋放、血管發(fā)生和/或自由基形成和/或釋放。另外的生物活性劑可增強或影響瘢疤形成過程中牽涉的其它過程，以致本文提供的組合物可為止血劑和/或防粘劑，以致藥物的添加可實現(xiàn)纖維化的增加或減少，和/或根據(jù)藥物機制導(dǎo)致組織增大和/或手術(shù)粘連增加或減少。例如，預(yù)期減少纖維化的藥物將減少手術(shù)粘連。此外，載藥制劑可增強制劑的封閉劑和/或止血劑性質(zhì)，尤其是當(dāng)所述試劑起增加纖維化的作用時。另外，本文提供的組合物可提供在手術(shù)粘連或再狹窄的發(fā)展和/或維持中或在抑制纖維化中牽涉的一個或多個過程的更普遍方面中牽涉的細胞和/或非細胞過程的藥理學(xué)變化。因此，另外的藥理學(xué)試劑包括但不限于抑制一個或一組過程的藥理學(xué)試劑，例如細胞分裂、細胞分泌、細胞遷移、細胞粘著、細胞外基質(zhì)生成、細胞因子(例如，TNFa、IL-l、IL-6)或其它炎性活化劑，例如趨化因子(例如，MCP-1或IL-8)生成和/或釋放、血管發(fā)生和/或自由基形成和/或釋放。例如，在W02004/060346、W02005/051452.W02006/13547和W02007/089878中詳細公開了合適的纖維化、粘著或狹窄抑制劑，并且也易于基于體外和體內(nèi)(動物)模型，例如W02004/060346中提供的模型確定。就其中描述的活性劑而言，前述參考通過引用整體包括在本文中。
[0072]在其它實施方案內(nèi)，所述活性劑可為纖維化劑、纖維化誘導(dǎo)劑和/或粘著誘導(dǎo)劑，其代表性實例可在(不限于)國際公布N0.W02005/046746、W02005/046747和W02006/124021中找到，就此類化合物而言其全部內(nèi)容通過引用包括在本文中。
[0073]另外的適合使用的藥物包括在(例如)W02004/060346中詳細闡述的藥物。例如，示例性組合物可包含以下的任一種或多種:細胞周期抑制劑；紫杉醇；阿霉素；米托蒽醌；鬼臼毒素(podophyllotoxi n)(例如,依托泊苷)；免疫調(diào)節(jié)劑、依維莫司(everolimus);他克莫司；biolimus ;熱休克蛋白90拮抗劑；格爾德霉素(geldanamycin) ；HMG CoA還原酶抑制劑；辛伐他汀(simvastatin) ;IMPDH抑制劑；霉酌.酸(mycophenolic acid) ;1_α-25_二羥基維生素D3 ;抗霉菌劑例如硫康唑(sulconizole) ;P38MAP激酶抑制劑例如SB220025 ；細胞外基質(zhì)的組分例如纖連蛋白(fibronectin);膠原蛋白；纖維蛋白；纖維蛋白原；聚賴氨酸；殼聚糖；N-羧丁基殼聚糖；RGD蛋白；選自TGFb、PDGF, VEGF, bFGF、TNFa, NGF,GM-CSF, IGF-a、IL-U IL-8, IL-6和生長激素的炎性細胞因子；結(jié)締組織生長因子(CTGF)；選自BMP-2、BMP-3、BMP-4、BMP-5、BMP-6或BMP-7的骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP);博來霉素；博來霉素的類似物或衍生物；刺激細胞增殖的增殖劑；地塞米松及其類似物和衍生物；17_.β-雌二醇(estradiol)及其類似物和衍生物；雌二醇及其類似物和衍生物；己烯雌酚(diethylstibesterol)及其類似物和衍生物；環(huán)孢霉素A及其類似物和衍生物；全反式維甲酸(ATRA)及其類似物和衍生物。在 W02005/046746、W02005/046747、W02006/124021、W02004/060346、W02005/051452、W02006/13547 和 W02007/089878 中闡述了在本公開中可采用的另外的生物活性劑，就其中所述生物活性劑而言其通過引用整體并入本文。
[0074]具體而言，所述藥物可為一種或多種止血蛋白，包括但不限于凝血酶、纖維蛋白、纖維蛋白原、血液因子、凝血因子(例如，因子VIII和XIII)。
[0075]在一個優(yōu)選實施方案中，水凝膠前體組合物包含皮質(zhì)類固醇。合適皮質(zhì)類固醇的實例包括氫化可的松、醋酸氫化可的松、醋酸可的松、特戊酸硫氫可的松、強的松龍、甲基強的松龍、強的松、曲安西龍、曲安西龍鹽(例如曲安奈德、苯曲安奈德(triamcinolonebenetonide)、呋曲安奈德(triamcinolone furetonide)、己曲安奈德、雙醋酸曲安西龍(triamcinolone diacetate)、曲安西龍醇、莫米松、安西奈德、布地奈德、地奈德、醋酸氟輕松、膚輕松、氯氟松、倍他米松、倍他米松磷酸鈉、地塞米松、地塞米松磷酸鈉、氟考龍、氫化可的松-17-丁酸酯、氫化可的松-17-戊酸酯、二丙酸別氯地米松、戊酸倍他米松、二丙酸倍他米松、潑尼卡酯、氯倍他松-17- 丁酸酯、氯倍他索-17-丙酸酯、己酸氟考龍、特戊酸氟考龍、醋酸氟潑尼定、二丙酸倍他米松一水合物、氟尼縮松、丙酸氟替卡松、糠酸莫米松一水合物和糠酸氟替卡松(fluticasone furoate)。
[0076]用于如本文所提供的水凝膠制劑中的一種優(yōu)選化合物為曲安西龍(11 β，16 a )-9-氟-11，16，17,21-四羥基孕甾_1，4-二烯-3，20-二酮)或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯或溶劑化物。下面示出了曲安奈德的結(jié)構(gòu)。
[0077]
【權(quán)利要求】
1.一種試劑盒,包含: (i)第一容器，其包含濃度為約10-300mg/mL的乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸(“HA-VS”)的水溶液，其中所述HA-VS的約2%-70%的羥基經(jīng)乙烯基砜取代， (?)第二容器，其包含具有2至8個巰基的巰基官能化聚乙二醇，和 (iii)第三容器，其包含pH范圍約7-12，當(dāng)與所述第一和第二容器的內(nèi)容物混合時，有效提供具有2-8%(w/v)的HA-VS濃度和2-8%(w/v)的巰基官能化聚乙二醇濃度的溶液的量的30-1000mM緩沖溶液， 其中所述第一、第二和第三容器的組分合并時，在混合約5秒至I小時內(nèi)有效形成凝膠。
2.一種由以下的組合形成的液體組合物:⑴濃度為約10-300mg/mL的乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸(“HA-VS”)的水溶液，其中所述HA-VS的約2%-70%的羥基經(jīng)乙烯基砜取代，(ii)具有2至8個巰基的巰基官能化聚乙二醇，和(iii) pH范圍約7-12的30_1000mM緩沖溶液， 其中所述液體組合物中所述巰基官能化聚乙二醇的濃度范圍約4-300mg/mL，并且 所述液體組合物在混合組分(i)、(?)和(iii)約5秒至約I小時內(nèi)有效形成凝膠。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的試劑盒或液體組合物，其中所述乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸的約7%-35%或10%至25%的羥基經(jīng)乙烯基砜取代。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項所述的試劑盒或液體組合物，其中所述巰基官能化聚乙二醇的巰基數(shù)目選自2、3、4、5、6、7和8。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒或液體組合物，其中所述巰基官能化聚乙二醇的巰基數(shù)目選自2、3和4。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項所述的試劑盒或液體組合物，其中所述乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸的平均分子量范圍從約10，000至約2，000, 000道爾頓。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑盒或液體組合物，其中所述乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸的平均分子量范圍從約15，000至約1，000, 000道爾頓或從約20，000至約200，000道爾頓。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的試劑盒或液體組合物，其中所述乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸的平均分子量為約100，000道爾頓。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項所述的試劑盒或液體組合物，其中所述巰基官能化聚乙二醇為直鏈的。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項所述的試劑盒或液體組合物，其中所述巰基官能化聚乙二醇為支鏈的。
11.根據(jù)權(quán)利要求1-10中任一項所述的試劑盒或液體組合物，其中所述巰基官能化聚乙二醇的平均分子量從約1，000至約10，000道爾頓。
12.根據(jù)權(quán)利要求ι-ll中任一項所述的試劑盒或液體組合物，其中所述巰基官能化聚乙二醇的分子量小于所述乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸的分子量。
13.根據(jù)權(quán)利要求1-12中任一項所述的試劑盒或液體組合物，其中所述乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸(“HA-VS”)的水溶液的濃度范圍約20-200mg/mL。
14.根據(jù)權(quán)利要求1-13中任一項所述的試劑盒或液體組合物，其中所述巰基官能化聚乙二醇呈粉末形式。
15.根據(jù)權(quán)利要求1-14中任一項所述的試劑盒或液體組合物，其中所述巰基官能化聚乙二醇相對于乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸的量范圍從約1:1 (w/w)至約0.4:1 (w/w)。
16.根據(jù)權(quán)利要求1-15中任一項所述的試劑盒或液體組合物，其中所述緩沖溶液的pH范圍從約8.0至10.5。
17.根據(jù)權(quán)利要求1-16中任一項所述的試劑盒，其中所述第一、第二或第三容器的其中一個進一步包含生物活性劑。
18.根據(jù)權(quán)利要求1-16中任一項所述的試劑盒，進一步包含含生物活性劑的第四容器。
19.根據(jù)權(quán)利要求2-16中任一項所述的液體組合物，進一步包含生物活性劑。
20.根據(jù)權(quán)利要求17或權(quán)利要求18所述的試劑盒，或根據(jù)權(quán)利要求19所述的液體組合物，其中所述生物活性劑為皮質(zhì)類固醇。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的試劑盒或可噴射液體組合物，其中所述皮質(zhì)類固醇為曲安西龍、曲安奈德或己曲安奈德。
22.根據(jù)權(quán)利要求1-18或20-21中任一項所述的試劑盒，其中所述第一容器進一步包含相對于所述乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸(w/w)，約0.1重量％至約3.5重量％的巰基官能化聚乙二醇。
23.—種形成能夠原位形成凝膠的液體組合物的方法，包括: (i)將具有2至8個巰基的巰基官能化聚乙二醇添加到濃度為約4-300mg/mL的乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸(“HA-VS”)的水溶液中，其中所述HA-VS的約2%-70%的羥基經(jīng)乙烯基砜取代，從而溶解所述巰基官能化`聚乙二醇以形成含乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸-巰基官能化聚乙二醇的溶液，以及 (?)合并來自步驟(i)的所述溶液與PH范圍約7-12的30-100mM緩沖溶液，從而形成具有2-8%(w/v)的HA-VS濃度和2-8%(w/v)的巰基官能化聚乙二醇濃度的液體組合物， 其中所述液體組合物在合并約5秒至約I小時內(nèi)有效形成凝膠。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中所述巰基官能化聚乙二醇呈粉末形式。
25.根據(jù)權(quán)利要求23或權(quán)利要求24所述的方法，其中: (i)所述乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸的約7%至35%或10%至25%的羥基經(jīng)乙烯基砜取代；和/或 (?)所述乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸的平均分子量范圍從約10，000至約2，000, 000道爾頓；或從約15，000至約1，000, 000道爾頓，或從約20，000至約200，000道爾頓；或平均分子量為約100，000道爾頓，和/或 (iii)所述乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸(“HA-VS”)的水溶液的濃度范圍約20-200mg/mL ;和/或 (iv)所述巰基官能化聚乙二醇的分子量小于所述乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸的分子量；和/或 (v)巰基官能化聚乙二醇相對于乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸的量范圍從約l:l(w/w)至約 0.4:1 (w/w);和 / 或 (vi)所述緩沖溶液的pH范圍從約8.0至10.5。
26.根據(jù)權(quán)利要求23-25中任一項所述的方法，其中:(i)所述液體組合物中所述巰基官能化聚乙二醇的濃度范圍約10-300mg/mL，或約6-250mg/mL,或約8-200mg/mL ;和 / 或 (?)所述巰基官能化聚乙二醇的巰基數(shù)目選自2、3、4、5、6、7和8 ;或巰基數(shù)目選自2、3和4 ;和/或 (iii)所述巰基官能化聚乙二醇為直鏈的；和/或 (iv)所述巰基官能化聚乙二醇為支鏈的；和/或 (v)所述巰基官能化聚乙二醇的平均分子量從約1，OOO至約10，000道爾頓。
27.根據(jù)權(quán)利要求23-26中任一項所述的方法，進一步包括將生物活性劑添加到步驟(i)的所述含乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸-巰基官能化聚乙二醇的溶液中，或添加到來自步驟(ii)的所述合并之前的所述緩沖溶液中，或添加到步驟(ii)中形成的所述液體組合物中。
28.根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中所述生物活性劑為皮質(zhì)類固醇。
29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中所述皮質(zhì)類固醇為曲安西龍、曲安奈德或己曲安奈德。
30.一種形成能夠原位形成凝膠的液體組合物的方法，包括: (i)將總量的一部分的巰基官能化聚乙二醇添加到濃度為約10-300mg/mL的乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸(“HA-VS”)的水溶液中，其中所述HA-VS的約2%-70%的羥基經(jīng)乙烯基砜取代，從而形成溶液， (?)任選為來自步驟(i)的所述溶液滅菌， (iii)向來自步驟(i)或步驟(ii)(若已進行)的所述溶液添加剩余量的巰基官能化聚乙二醇，其中所述巰基官能化聚乙二醇具有2至8個巰基，從而溶解剩余量的巰基官能化聚乙二醇以形成含乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸-巰基官能化聚乙二醇的溶液，并且 (iv)混合所述含乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸-巰基官能化聚乙二醇的溶液與PH范圍約7-12的30-1000mM緩沖溶液， 從而形成具有2-8%(w/v)的HA-VS濃度和2-8%(w/v)的巰基官能化聚乙二醇濃度的液體組合物，從而形成在混合約5秒至約I小時內(nèi)有效形成凝膠的液體組合物。
31.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，其中步驟(i)中所述部分的巰基官能化聚乙二醇包含相對于所述乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸(w/w)，約0.1重量％至約3.5重量％的巰基官能化聚乙二醇。
32.根據(jù)權(quán)利要求30或權(quán)利要求31所述的方法，其中所述巰基官能化聚乙二醇呈粉末形式。
33.根據(jù)權(quán)利要求30-32中任一項所述的方法，其中: (i)所述乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸的約7%至35%或10%至25%的羥基經(jīng)乙烯基砜取代；和/或 (ii)所述乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸的平均分子量范圍從約10，000至約2，000,000道爾頓；或從約15，000至約1，000, 000道爾頓，或從約20，000至約200，000道爾頓；或平均分子量為約100，000道爾頓，和/或 (iii)步驟(i)中的所述乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸(“HA-VS”)的水溶液的濃度范圍約 20-200mg/mL ;和 / 或(iv)所述巰基官能化聚乙二醇的分子量小于所述乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸的分子量；和/或 (V)在最終的液體溶液中巰基官能化聚乙二醇相對于乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸的量范圍從約1:1 (w/w)至約0.4:1 (w/w);和/或 (vi)所述緩沖溶液的pH范圍從約8.0至10.5。
34.根據(jù)權(quán)利要求30-33中任一項所述的方法，其中: (i)在最終的液體組合物中所述巰基官能化聚乙二醇的濃度范圍約10-300mg/mL，或約 6-250mg/mL,或約 8-200mg/mL ;和 / 或 (?)所述巰基官能化聚乙二醇的巰基數(shù)目選自2、3、4、5、6、7和8 ;或巰基數(shù)目選自2、3和4 ;和/或 (iii)所述巰基官能化聚乙二醇為直鏈的；和/或 (iv)所述巰基官能化聚乙二醇為支鏈的；和/或 (v)所述巰基官能化聚乙二醇的平均分子量從約1，000至約10，000道爾頓。
35.根據(jù)權(quán)利要求30-34中任一項所述的方法，進一步包括將生物活性劑添加到步驟(i)的所述溶液中，或添加到來自步驟(iii)的所述含乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸-巰基官能化聚乙二醇的溶液中，或添加到來自步驟(iv)混合之前的所述緩沖溶液中，或添加到步驟(iv)中形成的所述液體組合物中。
36.根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其中所述生物活性劑為皮質(zhì)類固醇。
37.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中所述皮質(zhì)類固醇為曲安西龍、曲安奈德或己曲安奈德。
38.根據(jù)權(quán)利要求1-22中任一項所述的試劑盒或液體組合物，用于對身體部位的應(yīng)用中。
39.根據(jù)權(quán)利要求38所述的試劑盒或液體組合物，用于胚胎發(fā)育、組織構(gòu)造、傷口愈合、血管發(fā)生或腫瘤發(fā)生。
40.根據(jù)權(quán)利要求38所述的試劑盒或液體組合物，用于防止手術(shù)粘連或治療骨關(guān)節(jié)炎或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
41.根據(jù)權(quán)利要求1-18和20-22中任一項所述的試劑盒，其中所述乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸(“HA-VS”)的水溶液無菌。
42.根據(jù)權(quán)利要求1-18、20-22和41中任一項所述的試劑盒，其中所述巰基官能化聚乙二醇和所述緩沖溶液無菌。
43.根據(jù)權(quán)利要求2-16、19、20和21所述的液體組合物，其中所述乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸(“HA-VS”)的水溶液無菌。
44.根據(jù)權(quán)利要求2-16、19、20、21和43所述的液體組合物，其中所述巰基官能化聚乙二醇和所述緩沖溶液無 菌。
45.根據(jù)權(quán)利要求23-29中任一項所述的方法，其中所述乙烯基砜衍生化透明質(zhì)酸(“HA-VS”)的水溶液、所述巰基官能化聚乙二醇或所述緩沖溶液中任一種或多種無菌。
46.根據(jù)權(quán)利要求30-37中任一項所述的方法，包括(ii)為來自步驟⑴的所述溶液滅菌。
47.根據(jù)權(quán)利要求30-37和46中任一項所述的方法，其中來自步驟(iii)的所述巰基官能化聚乙二醇和所述緩沖溶液其中之一或二者均無菌。
48.一種由根據(jù)權(quán)利要求2-16、19-21、43和44中任一項所述的液體組合物形成的水凝膠。
49.根據(jù)權(quán)利要求38所述的試劑盒或液體組合物，用于關(guān)節(jié)鏡或開放性關(guān)節(jié)手術(shù)中以修復(fù)關(guān)節(jié)(即，軟骨)的組織。
50.根據(jù)權(quán)利要求38所述的試劑盒或液體組合物，用于組織封閉應(yīng)用中。
51.根據(jù)權(quán)利要求 38所述的試劑盒或液體組合物，用于實現(xiàn)止血。
【文檔編號】A61L27/20GK103732264SQ201280026876
【公開日】2014年4月16日 申請日期:2012年4月18日 優(yōu)先權(quán)日:2011年4月20日
【發(fā)明者】D·M·格雷維特, G·Y·丹尼洛夫, P·何 申請人:卡比蘭生物外科公司